1、天然药物化学合集2018

天然药物化学 实验指导 循环使用 请勿带走 目 录

实验一 槐花M中芦丁的提取 实验二 芦丁水解液的纸色谱鉴定 实验三大黄中大黄素的提取 实验四大黄中大黄素的柱色谱提纯 实验五苦参生物碱的薄层鉴定 实验六茶叶中咖啡因的提取 实验一 槐花M中芦丁的提取 芦丁烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花M的花蕾）和荞麦中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料。

槐花M为豆科植物槐花的未开放花蕾。味苦性凉，具清热、凉血、止血之功。槐花的主要化学成分为芦丁，又名芸香甙，含量可达12-16%。

芦丁是由槲皮素针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174~178℃，无水物188~190℃。溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。

芦丁具有维生素P的作用。可降低毛细管前壁的脆性和调节渗透性，有助于保持及恢复毛细血管的正常弹性，临床上用作毛细管脆性引起的出血症，并常用作防治高血压病的辅助治疗剂。现在国处也常用芦丁作食品及饮料的染色剂。

一、实验目的 1．通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。 2．掌握黄酮类化合物的主要性质。 二、实验原理 芦丁属黄酮类化合物，分子中有较多酚羟基，具弱酸性，易溶于热碱中，酸化后又析出，因此可以用碱溶酸沉的方法提取芦丁，又利用芦丁在冷水和热水中溶解度相差较大的特性进行重结晶精制。

三、实验材料 槐M、石灰乳、0.4％硼砂水溶液、浓盐酸、广泛pH试纸、棉花等。 四、实验内容 称取槐M30g，在乳钵中研碎后，投入300ml0.4％硼砂溶液的沸水溶液中煮沸2-3分钟，在搅拌下加入石灰乳调pH9，煮沸40分钟pH8~9），趁热倾出上清液，用棉花过滤。残渣加100ml水，加石灰乳调pH9，煮沸30分钟，趁热用棉花过滤，二次滤液合并。滤液保持在60℃，加浓HCl，调pH2-3，放置过夜，则析出芦丁沉淀。

五、实验说明及注意事项 1、加入饱和石灰水溶液既可达到碱溶液提取芦丁的目的，又可除去槐花M中大量多糖粘液质，更容易过滤。也可直接加入150mL水和1g氢氧化钙粉末，而不必配成饱和溶液。 2、pH值过低会使芦丁形成烊盐而增加了水溶性，降低收率。 六、思考题 1．本实验提取过程中应注意哪些问题？ 2、根据这个实验，请总结出用酸碱调节法提取中药活性成分的适用条件及一般原理。

实验二 芦丁水解液的纸色谱鉴定

一、实验目的 1．掌握纸色谱方法。 2．掌握黄酮类化合物的色谱特点。 二、实验原理 芦丁可被稀酸水解，生成槲皮素及葡萄糖、李糖，并能通过纸层析鉴定。 三、实验材料 槐M、石灰乳、0.4％硼砂水溶液、2％的硫酸溶液、浓盐酸、正丁醇、醋酸、氨水、1％的氢氧化钠溶液、1％的三氯化铝乙醇溶液、1％的葡萄糖溶液、1％的鼠李糖溶液、1％芸香苷乙醇溶液、1％槲皮素乙醇溶液、95％乙醇、碳酸钡、广泛pH试纸、中速层析滤纸等。

四、实验内容 取芦丁1g，研碎，加2％硫酸水溶液80ml，小火加热，微沸回流30-60min，并及时补充蒸发掉的水分。在加热过程中，开始时溶液呈浑浊状态，约10min后，溶液由浑浊转为澄清，逐渐析出黄色小针状结晶，即水解产物槲皮素，继续加热至结晶物不再增加时为止。抽滤，保留滤液20ml，以检查滤液中的单糖。

取上述水解母液10ml小心用Ba(OH>2中和至中性，过滤出生成的BaSO4沉淀，滤液用热水浴小心浓缩至小体积1ml备用。取1张圆形滤纸, 用铅笔画出通过圆心的三条直线将滤纸等分为6份，对角点样法两次将样品、葡萄糖、鼠李糖标准品点于距圆心一定<>0.5mm）处, 并将用其它滤纸卷成的滤纸芯通过圆滤纸的圆心，借助滤纸芯的毛细作用用正丁醇-乙酸-水<4：1：5）上层溶液作径向展开。 支持剂：新华层析滤纸样品：水解浓缩液 对照品：a. 葡萄糖标准品水溶液b. 鼠李糖标准品水溶液 展开剂：正丁醇：冰醋酸：水<4：1：5上层） 显色：a. 喷苯胺-邻苯二甲酸试剂，于105℃加热10min，显棕色或棕红色斑点 b.喷氨性硝酸银试剂，于100℃左右加热，呈棕褐色斑点。 五、思考题 1、芦丁酸水解时有何现象，如何解释？ 2、槲皮素和芦丁纸色谱鉴定时，用BAW<4：1：5）上层和下层展开后，解释两者的相对比移值大小关系？

3、葡萄糖和鼠李糖的纸层析鉴定时，用BAW<4：1：5）上层展开后，何者相对比移值较大，为什么？

实验三 大黄中大黄素的提取

一、实验目的 <1）熟悉蒽醌类成分的提取分离方法<2）掌握PH梯度提取法的原理和操作技术 二、实验原理 大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。其主要有效成分为大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚等蒽醌类化合物 ,其中大部分为结合的蒽醌,少量为游离的蒽醌。结合的蒽醌类化合物由于其苷元具有酚羟基,故呈弱酸性,能溶于水、乙醇、碳酸氢钠溶液,但在有机溶剂中的溶解度很小。游离的蒽醌易溶于氯仿、乙醚等有机溶剂而不溶于水。其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。

本实验主要用薄层层析法分离纯化大黄素，其Rf值由大到小分别为大黄酚和大黄素甲醚、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸。

大黄酸：黄色针状结晶mp.321—322℃溶液，微溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚。 大黄素：橙黄色针状结晶，mp.256—257℃四氯化碳0.01%、氯仿0.07%、二硫化碳0.009%、乙醚0.14%、苯0.041%。易溶于乙醇，可溶于稀氨水、碳酸钠水溶液，几乎不溶于水。

大黄酸 R1=H R2=COOH大黄素 R1=CH3 R2=OH芦荟大黄素 R1=CH2OH R2=H大黄素甲醚 R1=CH3 R2=OCH3大黄酚 R1=CH3 R2=H

三、实验器材 试药：大黄粗粉、20%硫酸溶液、5%碳酸氢钠溶液、5%碳酸钠溶液、盐酸、丙酮、乙酸乙酯、硅胶CMC-Na板、石油醚、大黄素标准品等

仪器：回流装置一套、烧杯、层析槽、试管、梨形分液漏斗、水浴锅、电热套、旋转蒸发仪循环水式多用真空泵、抽滤瓶、铁架台等

四、实验内容 大黄素的提取、分离流程图 大黄粗粉30g 20%H2SO4 150ml 加热1h,抽滤、干燥 滤饼 乙酸乙酯回流提取1h 乙酸乙酯层 5%NaHCO3萃取

水层 5%Na2CO3

OOOH

OH

R1R2水层HCl 黄色沉淀水洗至中性，丙酮溶解，分离纯化 大黄素结晶 五、具体操作步骤： 1.游离蒽醌的提取 称取大黄粗粉30g，加20%H2SO4水溶液150mL，加热1小时，放冷，抽滤，同时滤饼水洗至近中性提取1小时，得到乙酸乙酯提取液。

2.PH梯度萃取分离 <1）将乙酸乙酯提取液加入分液漏斗中，用 5% NaHCO3水溶液萃取三次，经观察乙酸乙酯层颜色变浅及无气泡产生为止。

<2）经5% NaHCO3水溶液萃取后的乙酸乙酯层，继以5% Na2CO3水溶液萃取三次，乙酸乙酯层经薄层检查(标准大黄素作对照>，得知已提尽大黄素后，合并三次Na2CO3萃取液，并用HCl酸化，得大黄素沉淀。

六、注意事项： 1、游离蒽醌的提取要控制温度，不宜太高 2、PH梯度萃取分离时，要检查是否萃取完全 3、注意碱液浓度及萃取时的静置时间对实验结果的影响。 五、思考题 pH梯度萃取法的原理是什么？如何利用该方法分离大黄中的5种游离羟基蒽醌化合物？ 实验四大黄中大黄素的柱色谱提纯

一、实验目的 1、学习硅胶柱色谱的分离原理。 2、学习大黄素柱色谱的操作方法。 二、实验原理 利用混合物中各组分对固定相的吸附能力不同可将大黄素分离出来。 三、实验方法 <1）装柱：取一玻璃层析柱，垂直固定在铁架台上，在管的下端垫入少量棉花，装入100～200目硅胶

<2）上样：将样品置于小蒸发皿中，用少量石油醚分散，另加用3倍量硅胶拌和均匀，并于水浴上缓缓蒸去溶剂。然后将含有样品的硅胶装入色谱柱的上端，并盖一圆形滤纸。

<3）洗脱：将色谱柱活塞打开，洗脱剂为石油醚混合液。

<4）收集：洗脱液25ml一份，分别收集，用硅胶薄层板跟踪检查次序为：大黄酚和大黄素甲醚、大黄素、芦荟大黄素等）。合并大黄素部分，回收溶剂至小体积，放置，即可析出结晶，过滤，即得纯品大黄素。

薄层板：硅胶CMC-Na板 样品液：自制大黄素溶液 对照品：标准大黄素溶液 展开剂：石油醚-乙酸乙酯<7：3） 显色：观察斑点颜色 四、思考题 大黄中5种游离羟基蒽醌化合物的极性与结构的关系如何？薄层鉴别时常用何类吸附剂？Rf值顺序如何？