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血清中尿酸和尿素含量测定的超高效液相色谱–单四级杆质谱法国际比对

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化学分析计量CHEMICAL ANALYSIS AND METERAGE第26卷，第4期

2017年7月Vol. 26，No. 4

July 201785

doi：10.3969／j.issn.1008–6145.2017.03.022血清中尿酸和尿素含量测定的超高效液相色谱–单四级杆质谱法国际比对*

石莲花，金有训，何海红，全灿，徐蓓，李红梅(中国计量科学研究院，北京　100029)

摘要　基于单四极杆质谱建立了血清中尿酸、尿素含量准确测定的同位素稀释超高效液相色谱–质谱方法，并以该方法参加了国际物质量咨询委员会(CCQM)组织的“血清中尿酸尿素含量测定”的K、P国际比对。血清样品用乙腈除去蛋白质，分别采用C18反相柱和电喷雾(ESI)负离子模式检测尿酸、CN正相柱和ESI正离子模式检测尿素，

同位素稀释的单点校准法进行定量，用3种标准物质(GBW 09157，GBW 09169，NIST SRM 909c)进行方法验证，测量比对血清样品(Ⅰ，Ⅱ)获得国际等效一致性。该方法操作简单、快速准确，适用于血清中尿酸尿素的定量分析。关键词　单四级杆质谱；同位素稀释液相色谱–质谱法；尿酸；尿素；血清；国际比对中图分类号：O657.7 文献标识码：A 文章编号：1008–6145(2017)03–0085–04

Determination of Uric Acid and Urea in Serum by Ultra Performance LiquidChromatography–Single Quadrupole Mass Spectrometry for International ComparisonShi Lianhua, JinYouxun, He Haihong, Quan Can, Xu Bei, Li Hongmei(National Institute of Metrology, Beijing　100029, China)Abstract　The method to determine uric acid and urea in serum was established by single quadrupole–based isotope dilution ultra performance liquid chromatography–mass spectrometer, which was used for CCQM–K and P international comparison. Acetonitrile was added in the sample for protein precipitation, a C18 reversed-phase column and electrospray

ionization (ESI) negative ion mode was used to determine uric acid, and CN normal-phase column and ESI positive ion mode were used to determine urea, and a single point calibration method for quantitative isotope dilution. This method was verified with GBW 09157, GBW 09169 and NIST SRM 909c certified reference materials, and serum samples (Ⅰ，Ⅱ) were measured to obtain international equivalent consistency. The method is simple in operation, rapid and accurate, it is suitable for quantitative analysis of urea in serum uric acid.Keywords　single quadrupole mass spectrometry; isotope dilution high performance liquid chromatography–mass spectrometry; uric acid; urea; serum; international comparison

血清尿酸、尿素是医学临床检查肾功能的重要指标［1］。尿酸是嘌呤代谢物的最终产物，其在血清中的浓度若超过正常值则会引起痛风、肾结石、冠心病等疾病［2–4］；尿素是蛋白质代谢产物，是蛋白质代谢与尿毒症临床诊断的重要指标之一［5］。因此血清尿酸、尿素的准确定量对临床诊断及治疗具有重要意义。目前血清尿酸、尿素的测定方法［6–8］中，质谱技术因具有快速、准确、灵敏度高等优点而得以广泛应用，其中同位素稀释液相色谱–串联质谱联用(LC–IDMS／MS)［9–12］ 、气相色谱–质谱(GC–ID／ MS)［13–15］技术，是国际检验医学溯源联合委员会(JCTLM)认可的参考测量方法。近年来，质谱技术发展迅速，一级和二级质谱性能进一步提升，分辨率和灵敏度、特异性都有了显著提高。本研究结合同位素稀释技术，建立了操作简便、特异性强、灵敏度高的液相色谱–单四级杆质谱(LC–IDMS)法，可代替前处理繁琐的气相色谱–质谱法(GC–MS)和易被高浓度待测物污染的液相色谱–串联质谱法(LC–MS／MS)。用此方法参加国际物质量咨询委员会组织的K，P国际比对，使用中国计量科学研究院的纯物质标准物质和血清基体标准物质进行了校准和方法验证，使

*国家科技基础专项(2011FY130100)；国家重点研发计划项目(2016YFD0500800)；中国计量科学研究院比对专项(03-AJLSF15)联系人：石莲花；E-mail: shilh@nim.ac.cn收稿日期：2017–04–01 化学分析计量 2017年，第26卷，第4期86比对结果的量值溯源到中国计量科学研究院，保证了测量结果的准确、可靠，实现了我国与国际尿酸和尿素参考系统的互认。1　实验部分1.1　主要仪器与试剂液相色谱–质谱联用仪：ACQUITY™UPLC／ SQD型，美国Waters公司；

分析天平：XP10003S型(感量为1 mg)，XP205型(感量为0.01 mg)，XP26型(感量为0.001 mg)，瑞士梅特勒–托利多公司；混合器：VORTEX GENIE 2型，美国Scientific Industries公司；

多用途旋转摇床：ROTO–SHAKE GENIE型，美国SI公司；移液器：10～100 μL，20～200 μL，100～1 000 μL，0.5～5 mL，德国Eppendorf公司；氮吹仪：N–EVAP112型，美国OA–SYS公司；离心机：Sigma 3K15型，美国Sigma公司；过滤膜：0.22 µm，亲水性聚丙烯膜，美国Pall公司；

尿酸纯度标准物质：编号为GBW 09202，纯度为99.8%，中国计量科学研究院；尿酸同位素标记物：1，3-15N

2，纯度为98%，美

国剑桥同位素实验室；尿素纯度标准物质：编号为GBW 09201，纯度为99.8%，中国计量科学研究院；尿素同位素标记物：Urea-13C，15N

2，纯度不小于

98%，13C含量为99%，15N含量为98%，美国剑桥同

位素实验室；冰冻人血清中尿素标准物质：编号分别为GBW 09157，GBW 09169，中国计量科学研究院；

冰冻人血清中尿素标准物质：编号为NIST 909C，美国国家标准与技术研究院；

比对血清样品：编号分别为I和II，均为1 mL，于–70℃冰箱中保存，新加坡卫生科学局；乙酸铵：色谱纯，美国Sigma公司；氨水：色谱纯，中国阿拉丁公司；甲醇、乙腈：色谱纯，德国Merk公司；甲酸：色谱纯，德国Merk公司；实验用水为超纯水，由美国Mililpore公司超纯

水仪制得。1.2　仪器工作条件1.2.1　色谱条件(1)测定尿酸的色谱条件。

色谱柱：BEH C18柱(150 mm×2.1 mm，1.7

µm，美国Waters公司)；柱温：37℃；进样体积：5 µL；流动相：A为10 mmol／L 乙酰胺溶液(pH 4.6)，B为乙腈，梯度洗脱，0～4.5 min 100% A，4.5～5.5 min A由100%变化至20%，5.5～7.5 min保持20% A，7.5～8 min A由20%变化至100%且保持至12.5 min；流量：0.2 mL／min。(2)测定尿素的色谱条件。色谱柱：ZORBAX SB–CN柱(250 mm×4.6 mm，5 µm，美国安捷伦科技有限公司)；柱温：37℃；

进样体积：5 µL；流动相：0.1%甲酸水溶液–甲醇(体积比为1∶1)；等梯度洗脱。1.2.2　质谱条件(1)测定尿酸的质谱条件。采用电喷雾离子源(ESI)负离子模式；离子源

温度：150℃；脱溶液温度：450℃；脱溶剂：N2，流量

为550 L／h；锥孔气：N2，流量为50 L／h；毛细管

电压：2.2 kV；监测离子(m／z)：167.1，169.1。(2)测定尿素的质谱条件。

采用电喷雾离子源(ESI)正离子模式；离子源温度：150℃；脱溶液温度：450℃；脱溶剂：N2，流量

为550 L／h；锥孔气：N2，流量为50 L／h；毛细管

电压：3.0 kV；监测离子(m／z)：61.1，64.1。1.3　实验方法1.3.1　样品准备测定两份比对血清样品中尿酸、尿素的含量。测定时每瓶比对样品取0.2 mL，进行样品前处理。1.3.2　尿酸、尿素标准溶液配制与样品前处理

准确称取一定质量的尿酸纯度标准物质，用1 mmol／L 氨水溶液稀释至100 μg／g，制得尿酸标

准储备液，置于摇床混合仪中充分溶解。以同样步骤制备［15N

2］尿酸标记储备液(100 μg／g)。各取

一定量尿酸标准储备液、［15N

2］尿酸标记储备液，用

10 mol／L乙酰胺流动相溶液制备尿酸校准混合溶

液，其中尿酸和［15N

2］尿酸含量比约为1∶1，尿酸校

准混合溶液中尿酸的浓度尽量接近于血清尿酸含量。血清样品于室温下平衡2 h，取0.2 mL并精确称量，加入［15N

2］尿酸标记物使尿酸标记物含量

与血清尿酸含量比接近与1∶1，摇匀。然后加入约4倍体积的乙腈，振荡混匀，再置于4℃离心机中以8 000 r／min的转速离心15 min。取上清液，用45℃氮气吹干，加入流动相复溶至10 μg／g，用0.22

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超高效液相色谱-质谱法测定细胞中嘌呤核苷酸的方法探究

超高效液相色谱-质谱法测定细胞中嘌呤核苷酸的方法探究

超高效液相色谱-质谱法测定细胞中嘌呤核苷酸的方法探究姜丹丹;李伟;周怀彬;张婷;许芳;武佳;吕建新【摘要】建立了检测细胞中嘌呤核苷酸(ATP、ADP、AMP、NAD+和NADP+)的超高效液相色谱-质谱(UP-LC-MS)分析方法.采用KinetexTM HILIC柱(50 mm ×4.6 mm,2.1 μm)进行分离,对细胞样品的萃取方法、流动相组成及质谱参数进行优化.方法学确证表明:各待测物在1.0 ～ 100 μmol/L范围内线性关系良好,相关系数(r)均大于0.99,平均回收率为95.7％～101.1％,相对标准偏差为1.2％～6.1％.本方法的灵敏度高、简便快速、重复性好,可用于细胞中能量代谢的研究.【期刊名称】《分析测试学报》【年(卷),期】2013(032)010【总页数】5页(P1202-1206)【关键词】超高效液相色谱-质谱法;细胞;ATP;ADP;AMP;NAD+;NADP+【作者】姜丹丹;李伟;周怀彬;张婷;许芳;武佳;吕建新【作者单位】温州医学院检验医学院&生命科学学院检验医学教育部重点实验室,浙江温州325035;温州医学院检验医学院&生命科学学院检验医学教育部重点实验室,浙江温州325035;温州医学院检验医学院&生命科学学院检验医学教育部重点实验室,浙江温州325035;温州医学院检验医学院&生命科学学院检验医学教育部重点实验室,浙江温州325035;温州医学院检验医学院&生命科学学院检验医学教育部重点实验室,浙江温州325035;温州医学院检验医学院&生命科学学院检验医学教育部重点实验室,浙江温州325035;温州医学院检验医学院&生命科学学院检验医学教育部重点实验室,浙江温州325035【正文语种】中文【中图分类】O657.63;Q524嘌呤核苷酸是机体重要的能量物质。

其中三磷酸腺苷酸(ATP)作为细胞内能量传递的“分子通货”，是机体能量的直接来源，二磷酸腺苷酸(ADP)和一磷酸腺苷酸(AMP)可通过氧化磷酸化等转化为ATP供能，生物体中ATP－ADP－AMP系统的能量状态可通过能荷(EC)大小说明。

食品中那非类物质的测定(90种)

食品中那非类物质的测定(90种)

附件食品中那非类物质的测定（BJS 201805）1 范围本标准规定了食品（含保健食品）基质中90种那非类物质的超高效液相色谱-串联质谱测定方法。

标准中方法一超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法，适用于饮料、果冻、蛋白粉、牡蛎粉、饼干、糖果、酒类及咖啡等食品（含与上述基质相同的保健食品及片剂、胶囊、软胶囊等剂型）中90种那非类物质的定性和定量测定。

标准中方法二超高效液相色谱-串联高分辨质谱法，适用于饮料、果冻、蛋白粉、牡蛎粉、饼干、糖果、酒类及咖啡等食品（含与上述基质相同的保健食品及片剂、胶囊、软胶囊等剂型）中90种那非类物质的筛查和定性确证。

方法一超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法2原理试样经甲醇超声提取，过滤后，滤液供超高效液相色谱—三重四极杆串联质谱仪测定，外标法定量。

3试剂和材料注：水为GB/T 6682规定的一级水。

3.1 试剂3.1.1 甲醇（CH3OH）：质谱级。

3.1.2 甲酸（HCOOH）：质谱级。

3.1.3 乙酸乙酯（C4H8O2）：分析纯。

3.1.4 盐酸（HCl）：分析纯。

3.2 试剂配制3.2.1 0.1%甲酸水溶液：取甲酸1mL用水稀释至1000mL，用滤膜（4.3）过滤后备用。

3.2.2 盐酸甲醇溶液（1+99）：取盐酸1mL用甲醇稀释至100mL。

3.2.3 甲醇水溶液（1+1）：将甲醇与水等体积混合。

3.3 标准品西地那非等90种物质标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见附录A表A.1，纯度≥98%。

3.4 标准溶液配制—1 —3.4.1标准储备液（200 μg/mL）：分别精密称取Lodenafil carbonate（46罗地那非碳酸酯）、Sildenafil dimer impurity（63西地那非二聚体杂质）、Vardenafil dimer（69伐地那非二聚体）标准品（3.3）各10mg，用盐酸甲醇溶液（1+99）溶解并稀释至50mL，摇匀；分别精密称取其余87种标准品（3.3）各10 mg，用甲醇溶解并稀释至50mL，摇匀，制成浓度为200 μg/mL标准储备液。

QuEChERS-_超高效液相色谱串联质谱法测定鸡蛋中甲硝唑和地美硝唑药物残留量

QuEChERS-_超高效液相色谱串联质谱法测定鸡蛋中甲硝唑和地美硝唑药物残留量

QuEChERS-超高效液相色谱串联质谱法测定 鸡蛋中甲硝唑和地美硝唑药物残留量王　易（广东省惠州市质量计量监督检测所，广东惠州 516000）摘 要：建立了QuEChERS结合超高效液相色谱串联质谱法测定鸡蛋中甲硝唑和地美硝唑残留量的方法。

样品经乙腈提取，QuEChERS净化后，使用Agilent Eclipse Plus C18柱分离，以乙腈和0.1%甲酸水溶液为流动相进行洗脱，多反应监测模式下检测，外标法定量。

结果表明，甲硝唑和地美硝唑的质量浓度在0～50 ng·mL-1时线性关系良好（r2＞0.999），检出限分别为0.002 μg·kg-1、0.007 μg·kg-1；在低、中、高3个添加水平下甲硝唑和地美硝唑的加标回收率分别为95.79%～97.80%、95.66%～100.10%。

该方法前处理简单、重现性好、灵敏度高，适用于鸡蛋中甲硝唑、地美硝唑的测定。

关键词：鸡蛋；甲硝唑；地美硝唑；QuEChERS；超高效液相色谱串联质谱法Determination of Metronidazole and Dimetridazole Residues in Eggs by QuEChERS Combined with Ultra-High Performance Liquid Chromatography Tandem-Mass SpectrometryWANG Yi(Guangdong Huizhou Quality and Measuring Supervision Testing Institute, Huizhou 516000, China) Abstract: A QuEChERS combined with ultra-high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry method was established to determine the residues of metronidazole and dimetridazole in eggs. The sample was extracted with acetonitrile, purified with QuEChERS, and separated using an Agilent Eclipse Plus C18 column. The mobile phase was eluted with acetonitrile and 0.1% formic acid aqueous solution, and detected under multiple reaction monitoring mode. The external standard method was used for quantification. The results showed that the mass concentrations of metronidazole and dimetridazole were linear in the range of 0～50 ng·mL-1 (r2＞0.999), and the detection limits were 0.002 μg·kg-1 and 0.007 μg·kg-1; under low, medium and high addition levels, the recoveries were 95.79%～97.80%, 95.66%～100.10% respectively. The method is simple, reproducible and sensitive, and is suitable for the determination of metronidazole and dimetridazole in eggs.Keywords: eggs; metronidazole; dimetridazole; QuEChERS; ultra-high performance liquid chromatography tandem-mass spectrometry鸡蛋含有非常丰富的卵磷脂、脂肪、蛋白质、微生物、矿物质、微量元素等营养成分，被誉为“全营养”食品[1]，现已成为日常饮食中的重要组成部分。

超高效液相色谱-串联质谱筛查确证尿液中磺胺、喹诺酮与四环素抗生素

超高效液相色谱-串联质谱筛查确证尿液中磺胺、喹诺酮与四环素抗生素

第42 卷第 10 期2023 年10 月Vol.42 No.101343~1350分析测试学报FENXI CESHI XUEBAO（Journal of Instrumental Analysis）超高效液相色谱-串联质谱筛查确证尿液中磺胺、喹诺酮与四环素抗生素张楠1，唐增煦2，王莉莉1，孙开奇1，赵榕1*，范赛1*（1．北京市疾病预防控制中心，北京市预防医学研究中心，北京100013；2．中国疾病预防控制中心营养与健康所，北京100050）摘要：建立了超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）同时测定尿液中磺胺类、四环素类、喹诺酮类共45种抗生素的检测方法。

尿液样品经提取后，采用HLB固相萃取柱（200 mg/6 mL）净化，使用ThermoAccu⁃core RP-MS（100 mm×2.1 mm，2.6 µm）色谱柱进行分离，以乙腈-0.02%甲酸溶液为流动相梯度洗脱。

在正离子扫描模式下（ESI+），以选择反应监测模式（SRM）检测，外标法定量。

45种目标化合物在3个加标水平（2.0、5.0、10.0 µg/L）下的回收率为78.6%~114%，相对标准偏差为0.60%~18%；方法的检出限为0.1~0.5 µg/L，定量下限为0.3~1 µg/L。

将所建方法用于280个尿液样品中抗生素的检测，均未检测到抗生素残留。

所建方法的精密度和准确度高，操作简单便捷，为尿液中抗生素残留的筛查提供了方法支持。

关键词：抗生素；尿液；超高效液相色谱-串联质谱法；磺胺；喹诺酮；四环素中图分类号：O657.7；S816.73文献标识码：A 文章编号：1004-4957（2023）10-1343-08Study on the Method for the Identification of Sulfanilamide，Quino⁃lone and Tetracycline in Urine by Ultra-high Performance LiquidChromatography-Tandem Mass SpectrometryZHANG Nan1，TANG Zeng-xu2，WANG Li-li1，SUN Kai-qi1，ZHAO Rong1*，FAN Sai1*（1．Beijing Center for Disease Control and Prevention，Beijing Center for Preventive Medicine Research，Beijing　100013，China；2．Institute of Nutrition and Health，Chinese Center for Disease Control and Prevention，Beijing　100050，China）Abstract：A confirmatory test for the simultaneous determination of sulfonamides，tetracyclines，and quinolones in urine totalling 45 antibiotics by ultra-high performance liquid chromatography-tan⁃dem mass spectrometry（UPLC-MS/MS） was developed. The urine samples were extracted and then cleaned up by an HLB solid phase extraction column（200 mg/6 mL），and the separation of the target was performed on a ThermoAccucore RP-MS column（100 mm×2.1 mm，2.6 µm）using acetoni⁃trile-0.02%formic acid aqueous solution with gradient separation elution，detected in positive ion scanning mode（ESI+） in multiple selected reaction monitoring（SRM） and quantified by external stan⁃dard method. The recoveries of a total of 45 target compounds from three classes of antibiotics at three spiked levels（2.0，5.0 and 10.0 µg/L） were in the range of 78.6 %-114% with the RSDs in the range of 0.60%-18%，and the limits of detection（LODs） and the limits of quantification（LOQs） of the method were in the range of 0.1-0.5 µg/L and 0.3-1 µg/L，respectively. The developed meth⁃od was applied to 280 urine samples for the detection of antibiotics，none of which detected antibiot⁃ics residues in excess of limit. The results showed that the established method was highly precise and accurate，simple and convenient，and included commonly used antibiotic species，which can sup⁃port the screening antibiotic residues in urine.Key words：antibiotic；urine；ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spec⁃trometry；sulfonamides；quinolones；tetracyclines四环素类、磺胺类和喹诺酮类广谱抗生素是常见的既可治疗人类疾病，又可作为生长促进剂促进doi：10.19969/j.fxcsxb.23061602收稿日期：2023－06－16；修回日期：2023－07－22基金项目：国家重点研发计划（2017YFC160050002）∗通讯作者：赵　榕，主任技师，研究方向：食品安全，E-mail：lxyue@范　赛，博士，研究员，研究方向：食品安全，E-mail：fansai@第 42 卷分析测试学报动物生长的化学物质［1］，因此在医药卫生及动物养殖行业得到了广泛使用。