项目7显微镜油镜使用与微生物形态观察ppt(精)

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(10). 实验成果旳记录： 规定在用显微镜观测 （左眼观测）旳同步在实验记录本上画下你所观 测到旳细菌旳形态。
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本实验每人做一张。 实验报告中要画图表达成果。
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思考题
1.涂片为什么要固定？固定加热时间过长会如何 2.分析影响革兰氏染色成果旳因素。
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（四）芽胞染色
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根据革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌之间细胞壁旳构 造差别来达到染色旳目旳旳。
先用结晶紫初染，所有旳细菌都被染成初染料旳蓝 紫色；
然后用碘媒染，它与结晶紫结合成结晶紫—碘复合 物，从而增强了染料与细菌旳结合力。
然后再用乙醇脱色解决
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由于革兰氏阳性菌细胞壁重要由肽聚糖形成网状构造、 壁厚、类脂质含量低，脱色时网孔收缩，结晶紫—碘 不易被洗脱而保存在细胞内，复染时仍保持蓝紫色。
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2.机械部分:镜座、镜 臂、镜筒、物镜转换 器、载物台、载物台 转移器、粗调节器、 细调节器等部件.它 起着支持、调节、 固定等作用.
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倒立旳虚像
图1-1-2 光学显微镜旳成像原理
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显微镜旳放大倍数和辨别率
1.放大倍数：物镜放大倍数×目镜放大倍 数 2. 显微镜旳辨别率:是表达显微镜辨析两 点之间距离旳能力。可用公式表达为：
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三、芽孢染色法环节
(1)取37℃培养24h ～36h旳枯草芽孢杆菌作涂片，并干燥，固定。 (2)于载片上滴入3～5滴5％孔雀绿水溶液。 (3)用试管夹夹住载玻片在火焰上用微火加热，自载玻片上浮现蒸
汽时，开始计算时间约4～5min。加热过程中切勿使染料蒸干， 必要时可添加少量染料。 (4)倾去染液，待玻片冷却后，用自来水冲洗至孔雀绿不再褪色为 止。 (5)用0.5％沙黄水溶液(或0.05％碱性复红)复染1min，水洗。 (6)制片干燥后用油镜观测。芽孢呈绿色，菌体红色。

（二）、 革兰氏染色的工作原理
• 革兰氏染色法是细菌学中重要的鉴别染色法。有芽 孢的杆菌和绝大多数球菌以及所有的放线菌和真菌 都呈革兰氏阳性反应；弧菌，螺旋体和大多数致病 性的无芽孢杆菌都呈现阴性反应。
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• 根据革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌之间细胞壁的结构 差异来达到染色的目的的。
• 先用结晶紫初染，所有的细菌都被染成初染料的蓝紫色 ；
• 然后用碘媒染，它与结晶紫结合成结晶紫—碘复合物 ，从而增强了染料与细菌的结合力。
• 然后再用乙醇脱色处理
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经典法，四步法 （p.30-32）
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• 由于革兰氏阳性菌细胞壁主要由肽聚糖形成网状结构、 壁厚、类脂质含量低，脱色时网孔收缩，结晶紫—碘不
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显微镜的放大倍数和分辨率
1.放大倍数=接物镜放大倍数×接目 镜放大倍数
2. 显微镜的分辨率 是表示显微镜辨
析物体（两端）两点之间距离的能 力，可用公式表示为：
D=0.61λ/n·Sinα/2
式中D：物镜分辨出物体两点间的 最短距离。
：可见光的波长（平均0.55m)
n: 物镜和被检标本间介质的折射
注意：革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是整个操 作的关键环节，脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌， 脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。
染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应甩去细胞上 的残水，以免染色液被稀释。
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（7）复染：用番红液染1—2min,水洗。
（8）镜检：干燥后（室温下晾干），置油镜观察（先在低倍镜 ，然后在油镜下观察菌体细胞的形态）。革兰氏阴性菌呈红 色，革兰氏阳性菌呈紫色。
（1）涂片：先在载玻片上滴一滴生理盐水，再在菌平板上取一

①Fe+H2SO4 ②Fe+CuSO4
FeSO4+H2↑ FeSO4+Cu
其中①反应使铁棒质量减少，②反应使铁棒质量
增加，两者的代数和为0.24 g
①Fe+H2SO4 FeSO4+H2↑ Δm1
56 g 1 mol
56 g
0.01 mol 0.56 g
Δm2-Δm1=0.24 g,Δm2=Δm1+0.24 g=0.56 g+ 0.24 g=0.8 g
“理论差量”。这种差量可以是质量、物质的量、气态物
质的体积和压强、反应过程中的热量等。用差量法解题
是先把化学方程式中的对应差量(理论差量)跟差量（实
际差量）列成比例，然后求解。如:
2C(s)+O2(g) 2CO(g) ΔH=-221 kJ/mol Δm(固)，Δn(气)，ΔV（气）
2 mol 1 mol 2 mol
设CuO的物质的量为x，则CuSO4的物质的量也 为x,
实验程序Ⅲ （显微镜的保养）
显微镜保养和使用中的注意事项：
4.观察时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯， 以免眼睛疲劳，并且能够在左眼观察时，右眼注视绘 图。 5.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不 可单手拿，更不可倾斜拿。 6.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而 腐蚀镜片。
221 kJ
24 g
1 mol 22.4 L（标况）
（2）使用差量法的注意事项
①所选用差值要与有关物质的数值成正比例或反比例
关系。
②有关物质的物理量及其单位都要正确地使用。
（3
质量差法
【典例导析1】 取一定量的CuO粉末与0.5 L稀 硫酸充分反应后,将一根50 g铁棒插入上述溶液 中，至铁棒质量不再变化时，铁棒增重0.24 g， 并收集到224 mL气体（标准状况）。求此CuO 粉末的质量。 解析 由题意可知，CuO粉末与稀硫酸充分反 应后，硫酸过量。引起铁棒质量变化时涉及下

央→换高倍或移开低倍，滴油→换油镜→侧视，
油浸镜头→调光、调焦，找目标→教师评分→
清洁→还镜→填使用登记表→教师检查→ 显
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微镜放回镜箱。
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5.实训方法
旋动调光旋钮 打开虹彩光圈 调节聚光器
找目标 移中央
结果记录 教师评分 擦镜纸擦拭
镜头3～4次 载玻片清洁
取 镜
调 光
夹 片
低 高倍 记 清 倍 或 镜 油镜 录 洁
还 镜
教师 检查
右手握臂 菌面朝上放 先加油 学生填使用表 左手托座 直角对齐 后换镜 教师检查签名 目标置中央 镜身水平 油浸镜 放回镜箱
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【小结】 普通光学显微镜由机械部分和光学部分构
成。光学部分的主要部件有物镜和目镜镜头，
显微镜放大倍数＝目镜倍数×物镜倍数。
显微镜使用的主要步骤：取镜→检查对光→
夹片→低倍物镜→调光、调焦→找目标，移中
普通光学显微镜的 使用及其细菌的形 态观察
1.基本工具：显微镜：普通光学显微镜 电子显微镜
不染色
2.处理方法
染色
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3.显微镜种类
光学显微镜：
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
①以可见光为光源 ②种类： 普通光学显微镜 偏光显微镜 倒置显微镜 暗视野显微镜 相差显微镜 荧光显微镜
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载物台
目镜
物镜
调焦螺旋 推进器
调光螺旋
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