实验一 显微镜的使用及微生物形态的观察

实验一微生物制片及形态观察一、显微镜油镜的使用显微技术是微生物检验技术中最常用的技术之一。

显微镜的种类很多，在实验室中常用的有：普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。

1. 结构光学显微镜是由光学放大系统和机械装置两部分组成。

光学系统一般包括目镜、物镜、聚光器、光源等；机械系统一般包括镜筒、物镜转换器、镜台、镜臂和底座等（图1－1）。

图1－1 光学显微镜结构图标本的放大主要由物镜完成，物镜放大倍数越大，它的焦距越短。

焦距越小，物镜的透镜和玻片间距离（工作距离）也小。

油镜的工作距离很短，使用时需格外注意。

目镜只起放大作用，不能提高分辨率，标准目镜的放大倍数是十倍。

聚光镜能使光线照射标本后进入物镜，形成一个大角度的锥形光柱，因而对提高物镜分辨率是很重要的。

聚光镜可以上下移动，以调节光的明暗，可变光栏可以调节入射光束的大小。

显微镜用光源，自然光和灯光都可以，以灯光较好，因光色和强度都容易控制。

一般的显微镜可用普通的灯光，质量高的显微镜要用显微镜灯，才能充分发挥其性能。

有些需要很强照明，如暗视野照明、摄影等，常常使用卤素灯作为光源。

2. 原理显微镜的放大效能（分辨率）是由所用光波长短和物镜数值口径决定，缩短使用的光波波长或增加数值口径可以提高分辨率，可见光的光波幅度比较窄，紫外光波长短可以提高分辨率，但不能用肉眼直接观察。

所以利用减小光波长来提高光学显微镜分辨率是有限的，提高数值口径是提高分辨率的理想措施。

要增加数值口径，可以提高介质折射率，当空气为介质时折射率为1，而香柏油的折射率为1.51，和载片玻璃的折射率（1.52）相近，这样光线可以不发生折射而直接通过载片、香柏油进入物镜，从而提高分辨率。

显微镜总的放大倍数是目镜和物镜放大倍数的乘积，而物镜的放大倍数越高，分辨率越高。

3. 使用方法1）低倍镜观察先将低倍物镜的位置固定好，然后放置标本片，转动反光镜，调好光线，将物镜提高，向下调至看到标本，再用细调对准焦距进行观察。

实训1普通光学显微镜的使用微生物形态学普通光学显微镜是一种常见的显微镜，常用于观察微生物的形态学。

在微生物形态学研究中，可以利用普通光学显微镜观察微生物的形态、结构和组织等特征，从而对微生物的分类、形态变化、生活习性以及疾病诊断等方面进行研究。

使用普通光学显微镜观察微生物形态的过程需要注意以下几个步骤。

首先，将需要观察的样品制备成薄片。

在制备样品时，可以选择将微生物直接涂布在载玻片上或者将微生物培养液滴在载玻片上，然后再覆盖一张盖玻片，使得样品薄而均匀。

之后可以用染色法对微生物进行染色增强对比度，便于观察。

接下来，将载玻片放置在显微镜的载物台上，并逐渐转动调整光源。

适当调整光源可以提高图像的清晰度。

可以使用孔光阑和光源亮度调节装置来调整光线的强度和均匀度，以便获得清晰的图像。

在观察时，需要正确调整镜头的焦距。

首先用低倍镜观察确定感兴趣区域的位置，然后再调整为高倍镜进行观察。

在调整焦距时，可以用粗调控制大范围的焦距变化，然后再用细调进行微小的调整，以获得清晰的图像。

观察过程中，可以通过调整机械臂和旋钮来移动载物台，以便于观察样品不同区域的微生物形态。

可以通过连续观察多个视野来全面了解微生物的形态和结构。

在观察过程中，需要将目镜对准自己的眼睛，并通过调整聚合度和检览度来获得舒适的观察体验。

同时，还需要注意保持目镜和物镜的清洁，以避免灰尘影响观察效果。

观察结束后，应当将载玻片等清理干净，并将显微镜关闭。

同时，需要将观察结果记录下来，并进行进一步的分析和研究。

总之，普通光学显微镜在微生物形态学中的应用是非常重要的。

通过合理的调整显微镜的参数，可以观察到微生物的形态、结构和组织等特征，进而对微生物进行分类和研究。

掌握普通光学显微镜的使用技巧，对于微生物形态学研究具有重要的意义。

实验一光学显微镜的使用及微生物个体形态的观察一、实验目的和要求1）了解显微镜的构造及成像原理。

2）掌握显微镜的使用方法和保养方法。

二、显微镜的构造（一）机械裝置部分：1）镜座：是显微镜的支架，由底座和镜臂组成。

2）载物台：又称镜台，用于安放载玻片，其上安有玻片夹和玻片移动器，调节移动器上的螺旋可使载玻片前后左右移动。

镜台中央有一孔，称通光孔，可使反光镜上的光反射到物镜中来。

3）镜筒：其上端连接目镜，下端连接转换器。

4）转换器：其上安装三个物镜，镜检时旋转转换器即可换物镜头。

注意转换物镜时。

必须用手按住园盘旋转，勿用手指直接推动物镜，以免使物镜与转换器之间的螺纹松脱而损坏显微镜。

5）调焦裝置：包括粗细调焦旋钮，是调节镜筒上下移动的裝置。

（二）光学系统部分：1）物镜：又称为镜头。

有三个物镜头，二个干燥系物镜，一个油系物镜。

物镜上标有主要参数，其含意是：例如：上排100/1.25是放大倍数为100，数值口径为1.25，下排160/0.17是指镜筒长为160毫米，盖玻片的厚度小于0.17毫米。

它是显微镜的最重要的部分。

普通显微镜接物镜的工作原理2）目镜：供眼睛观察物像用的，它将物镜放大的物像再放大，配有三个目镜，其上标有放大倍数。

显微镜的总放大倍数是目镜放大倍数与物镜放大倍数的乘积.3）聚光器：起聚集光线的作用，它可上下移动以调节最适光度。

其下方安装有可变光圈,用以调节光的强度。

4）反光镜：安装在镜座上。

它是一个有平凹两个面的双面镜。

其作用是采集外来光线，并且送入聚光器，一般采集自然光时用平面镜，采集人工光源时用凹面镜。

三、实验材料和器材双目显微镜、二甲苯、苯酚、擦镜纸、固定片等四、实验操作步骤（一）显微镜的使用方法：1.准备工作：取出显微镜时，应一手握镜臂,一手托镜座，轻拿轻放，切忌碰撞和猛震。

显微镜应放在离桌边60毫米左右的位置。

再将登子的高低调节好，不得将显微镜倾斜。

2.采光：将低倍镜与镜筒调节成一条直线，用双眼向下看，同时调节反光镜寻找光源。

实验一光学显微镜的使用与微生物观察第一节普通光学显微镜的使用一、实验目的1、了解普通光学显微镜的基本构造和工作原理。

2、学习并掌握普通光学显微镜，重点是油镜的使用技术和维护知识。

3、在油镜下观察微生物的几种基本形态。

二、基本原理（一）普通光学显微镜的构造普通光学显微镜由机械系统和光学系统两部分组成（图1-1）。

1、机械系统机械系统包括镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、调节器等。

（1）镜座：它是显微镜的基座，可使显微镜平稳地放置在平台上。

（2）镜臂：用以支持镜筒，也是移动显微镜时手握的部位。

（3）镜筒：它是连接接目镜（简称目镜）和接物镜（简称物镜）的金属圆筒。

镜筒上端插入目镜，下端与物镜转换器相接。

镜筒长度一般固定，通常是160mm。

有些显微镜的镜筒长度可以调节。

（4）物镜转换器：它是一个用于安装物镜的圆盘，位于镜筒下端，其上装有3～5个不同放大倍数的物镜。

为了使用方便，物镜一般按由低倍到高倍的顺序安装。

转动物镜转换器可以选用合适的物镜。

转换物镜时，必须用手旋转圆盘，切勿用手推动物镜，以免松脱物镜而招致损坏。

（5）载物台：载物台又称镜台，是放置标本的地方，呈方形或圆形。

载物台上装有压片夹，可以固定被检标本；有标本移动器，转动螺旋可以使标本前后和左右移动。

有些标本移动器上刻有标尺，可指示标本的位置，便于重复观察。

（6）调节器：调节器又称调焦装置，由粗调螺旋和细调螺旋组成，用于调节物镜与标本间的距离，使物像更清晰。

粗调螺旋转动一圈可使镜筒升降约10mm，细调螺旋转动一圈可使镜筒升降约0.1mm。

图1-1 普通光学显微镜的构造1. 镜座2. 镜臂3. 镜筒4. 转换器5. 载物台6. 压片夹7. 标本移动器8. 粗调螺旋9. 细调螺旋10. 目镜11. 物镜12. 虹彩光阑（光圈） 13. 聚光器 14. 反光镜2、光学系统光学系统包括目镜、物镜、聚光器、反光镜等。

（1）目镜：它的功能是把物镜放大的物像再次放大。

实验一显微镜的使用和微生物形态的观察一、目的要求1、熟悉普通光学显微镜的构造及其使用方法。

2、了解油镜的原理，并掌握其使用方法。

3、观察各种染色标本，认识微生物的基本形态和特殊结构。

二、基本原理显微镜包括普通光学显微镜、相差显微镜、暗视野显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。

微生物个体微小，难于用肉眼观察形态结构，只有借助显微镜，才能对其进行研究和利用。

普通光学显微镜是一种精密的光学仪器，是观察微生物最常用的工具。

细菌等原核细胞型微生物个体微小，一般需要使用油镜观察其形态结构。

而油镜头晶片极小，投入光线少，从载玻片透过光线，又被空气折射（空气折光广率1.00、玻璃折光率为1.52），更不易射入镜头内，致使光线较弱物像不清。

当在镜头和载玻片之间滴加香柏油后，由于香柏油折光率为1.515，与玻璃相近，可消除光线通过玻璃与物镜间空气时发生折射现象，避免光线损失，使亮度和清晰度都得到了提高，几乎可以看清所有细菌。

三、实验材料及仪器（1）标本及试剂：微生物标本片、香柏油、二甲苯。

（2）仪器及其他用具：普通光学显微镜、擦镜纸等。

四、实验步骤1.普通光学显微镜的构造及使用方法。

1）普通光学显微镜的构造。

普通光学显微镜有机械部分和光学部分组成。

A．显微镜的机械部分。

包括镜座、镜臂、镜筒、转换器、载物台、推动器、粗调节器（粗调螺旋）和细调节器（微调螺旋）等部件（图1-1）普通光学显微镜机械部分各部件的构造与功能见表1-1B．显微镜的光学系统。

由反光镜、聚光镜、物镜、目镜、虹彩光圈等组成，光学系统使标本物像放大，形成倒立的放大物像。

表1-2普通光学显微镜光学系统的构造与功能2）普通显微镜的使用①取镜。

从镜箱中取镜时，一手握镜臂，一手托镜座，保持镜体直立，以防反光镜及目镜脱落被摔坏，将显微镜放置于平稳的实验台上。

端正坐姿，镜检时两眼同时睁开，单目显微镜一般用左眼观察，用右眼帮助绘图或做记录。

双目显微镜用双眼观察。

②使低倍镜与镜筒呈一直线，调节反光镜，让光线均匀照射在反光镜上，电光源显微镜打开照明光源，并使整个视野都有均匀的照明。

实验一：显微镜的使用及菌体形态观察一、实验目的1、掌握光学显微镜的结构、原理，学习光学显微镜的操作方法和保养。

2、观察细菌、放线菌、真核微生物的个体形态及真菌孢子类型，学习生物图的绘制。

3、学习用压滴法制作标本片。

二、实验仪器和材料显微镜、载玻片、盖玻片，75%二甲苯、吸管、烧杯，香柏油，擦镜纸、吸水纸、浮游生物网示范片：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、放线菌、酵母菌、青霉、曲霉、根霉、梨头霉、毛霉。

三、实验原理（一）显微镜的结构和光学原理显微镜分机械装置和光学系统两部分。

1、机械装置（1）镜筒：镜筒上端装目镜，下端接转换器。

镜筒有单筒和双筒两种。

单筒有直立式和后倾斜式（倾角为45o）。

双筒都是倾斜式的，并有屈光度调节装置，以备视力不同者调节使用。

两筒之间可调距离，以适应两眼宽度不同者调节使用。

（2）转换器：转换器装在镜筒的下方，其上有三个孔或四个孔。

不同规格的物镜旋转安装在各孔上，在显微镜不使用时，旋下物镜，用护盖盖住。

（3）载物台：载物台为方形（多数）或圆形的平台，中间有一光孔，孔的两侧各装一个夹片，右端夹片固定，左端夹片可旋转，载物台上还有移动器（其上有刻度标尺，用以标记玻片的位置），可纵向和横向移动，移动器的作用是夹住和移动标本片。

（4）镜臂：镜臂支撑镜筒、载物台、聚光器和调节器。

镜臂有固定式和活动式（可改变倾斜度）两种。

有弧形和折形两种。

移动显微镜时用手握住镜臂进行移动。

（5）镜座：镜座为马蹄形和方形，具有一定的质量，支撑整台显微镜，马蹄形的镜座在其上有一可旋转的反光镜。

（6）调节器：调节器包括粗螺旋调节器和细螺旋调节器。

可调节物镜与所需观察的物体之间的距离。

2、光学系统及其光学原理显微镜的总放大倍数为物镜的放大倍数和目镜放大倍数的乘积。

（1）目镜目镜一般有10×、16×两种，高级的显微镜还有5×和20×。

目镜上标有：N.A.1.25、100×、“OI”、160/0.17、0.16等字样，其中：N.A.1.25为数值孔径，100×为放大倍数，“OI”（即Oil immersion ）表示油镜、160表示镜筒长，0.17表示要求盖波片的厚度，0.16为工作距离。

实验一显微镜油镜的使用和细菌形态的观察本次实验主要介绍了显微镜油镜的使用以及细菌形态的观察。

显微镜是生物科学中最基本最必要的仪器，也被称为生命科学研究的窗口。

而观察细菌形态则是微生物学重要的研究内容之一，对于深入了解微生物的特性和分类十分关键。

一、显微镜油镜的使用1、准备工作在使用显微镜前，需要对仪器做一些准备工作，具体如下：（1）检查显微镜是否清洁干净。

使用棉花棒和无水酒精擦拭镜头和接口。

（2）插入镜片，拧紧螺丝。

注意，平光镜的凹面朝上。

（3）透镜的高度应调整至最高点，油镜周围涂上润滑油。

（4）在准备好玻片后，使用无菌针将样本划到玻片上。

2、操作步骤（1）将玻片插入载置物台。

调整光源，使其在镜片下方成圆形状。

（2）使用低倍放大的物镜，在载置物台下调整样本位置，然后转动焦点，调整到最清晰的位置。

（3）切换到高倍物镜。

在不移动载置物台的情况下，调整焦距直至视野内的细胞详细可见。

（4）将油镜轻轻接触载置物台上的镜片，调节光源以得到最佳观察效果。

（5）旋转调节管，使细胞从上到下等比例进入视野，观察细菌的形态、大小、数量等。

二、细菌形态的观察1、细菌分类根据细菌的细胞形态、大小、结构和移动方式等特征，可以将细菌分为不同的分类。

细菌形态既包含单细胞长条状物、圆球体等基本形态，又包括复杂的细胞、菌株组成的群体等。

常见的细菌形态有以下几种：（1）球菌（cocci）：球形或椭圆形的细胞。

（2）杆菌（bacilli）：棒状或柱状的细胞。

在实验过程中，使用显微镜观察样本，发现细菌形态上虽然存在一定的差异，但一般表现为以下情况：（1）球菌或细圆菌：呈球形，直径一般在0.5-2μm之间。

（3）螺旋菌：呈螺旋形，长度几乎无限制，直径0.5-1μm左右。

然而，即使细菌大小、形态有所不同，它们的细微结构也存在着明显的相似性，这种结构相似性在分类学上具有相当的意义。

细菌形态的观察是微生物学中非常重要的基础工作，通过观察细菌的形态、大小、数量等，能够更好地了解微生物的生长繁殖规律，对于深入研究微生物的特性、分类以及对环境的影响等方面具有非常重要的价值。