微生物实验实验一显微镜使用及微生物形态观察

实验一微生物形态观察一、实验目的1．巩固显微镜的使用方法，重点练习油镜的使用；2．认识细菌、放线菌和霉菌的基本形态特征和特殊结构；3．练习手绘微生物图片。

二、实验原理1．细菌基本形态细菌是单细胞生物，一个细胞就是一个个体。

细菌的基本形态有3种：球状，杆状和螺旋状，分别称为球菌、杆菌、螺旋菌。

球菌根据细胞分裂后排列方式的不同分为单球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、链球菌、葡萄球菌等。

杆菌分为单杆菌、双杆菌、链杆菌等，是细菌中种类最多的。

螺旋菌分为弧菌和螺菌。

除此之外，还有一些特殊形态的细菌。

2．细菌特殊结构细菌的特殊结构包括荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等。

荚膜是某些细菌向细胞壁表面分泌的一层厚度不定的胶状物质，具有抗干燥、抗吞噬和附着作用。

鞭毛是某些细菌表面着生的1至数根由细胞内伸出的细长、波曲的丝状体，具有运动功能，在菌体上的着生位置、数目因菌种而异。

菌毛（又称纤毛）是在细菌体表的比鞭毛更细、更短、直硬，且数量较多的丝状体，与细菌吸附或性结合有关。

芽孢又称内生孢子，是某些细菌生长到一定阶段，在菌体内部产生的圆形、椭圆形或圆柱形休眠体，具有极强的抗热、抗辐射、抗化学药物和抗静水压等特性。

3．真菌的结构特征菌丝是构成真菌营养体的基本单位，是一种管状细丝。

可伸长并产生许多分枝，许多分枝的菌丝相互交织在一起，就叫菌丝体。

根据菌丝中是否存在隔膜可分为无隔膜菌丝和有隔膜菌丝。

为适应不同的环境条件和更有效地摄取营养满足生长发育地需要，许多真菌的菌丝可以分化成一些特殊的形态，这些特化的形态称为菌丝变态。

比如吸器、假根、子实体。

4．放线菌的结构特征放线菌的形态比细菌复杂些，但仍属于单细胞生物。

链霉菌是典型的放线菌，其细胞呈丝状分枝，菌丝直径很小，在营养生长阶段，菌丝内无隔，故一般呈多核的细胞状态。

当其孢子落在固体基质表面并发芽后，就不断伸长、分支并以放射状向基质表面和内层扩展，形成大量色浅、较细的具有吸收营养和排泄代谢废物功能的基内菌丝，同时在其上又不断向空间方向分化出颜色较深、直径较粗的分枝菌丝，这就是气生菌丝。

实验一微生物制片及形态观察一、显微镜油镜的使用显微技术是微生物检验技术中最常用的技术之一。

显微镜的种类很多，在实验室中常用的有：普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。

1. 结构光学显微镜是由光学放大系统和机械装置两部分组成。

光学系统一般包括目镜、物镜、聚光器、光源等；机械系统一般包括镜筒、物镜转换器、镜台、镜臂和底座等（图1－1）。

图1－1 光学显微镜结构图标本的放大主要由物镜完成，物镜放大倍数越大，它的焦距越短。

焦距越小，物镜的透镜和玻片间距离（工作距离）也小。

油镜的工作距离很短，使用时需格外注意。

目镜只起放大作用，不能提高分辨率，标准目镜的放大倍数是十倍。

聚光镜能使光线照射标本后进入物镜，形成一个大角度的锥形光柱，因而对提高物镜分辨率是很重要的。

聚光镜可以上下移动，以调节光的明暗，可变光栏可以调节入射光束的大小。

显微镜用光源，自然光和灯光都可以，以灯光较好，因光色和强度都容易控制。

一般的显微镜可用普通的灯光，质量高的显微镜要用显微镜灯，才能充分发挥其性能。

有些需要很强照明，如暗视野照明、摄影等，常常使用卤素灯作为光源。

2. 原理显微镜的放大效能（分辨率）是由所用光波长短和物镜数值口径决定，缩短使用的光波波长或增加数值口径可以提高分辨率，可见光的光波幅度比较窄，紫外光波长短可以提高分辨率，但不能用肉眼直接观察。

所以利用减小光波长来提高光学显微镜分辨率是有限的，提高数值口径是提高分辨率的理想措施。

要增加数值口径，可以提高介质折射率，当空气为介质时折射率为1，而香柏油的折射率为1.51，和载片玻璃的折射率（1.52）相近，这样光线可以不发生折射而直接通过载片、香柏油进入物镜，从而提高分辨率。

显微镜总的放大倍数是目镜和物镜放大倍数的乘积，而物镜的放大倍数越高，分辨率越高。

3. 使用方法1）低倍镜观察先将低倍物镜的位置固定好，然后放置标本片，转动反光镜，调好光线，将物镜提高，向下调至看到标本，再用细调对准焦距进行观察。

实验一光学显微镜的操作及微生物形态观察一、实验目的与要求1、了解普通光学显微镜的构造与功能，学习与掌握显微镜观察微生物的方法。

2、观察根霉、毛霉、草履虫等真核微生物的个体形态，学会绘制微生物的形态结构图。

二、显微镜的基本结构：机械部分和光学部分。

1、机械部分：镜座、镜筒、转换器、载物台、移动尺、粗动螺旋、微动螺旋等。

2、光学部分：目镜、物镜、聚光器、内置光源或反光镜、光圈等。

三、显微镜的性能1、数值孔径：也叫做镜口率（或开口率），简写为N.A，数值孔径是物镜和聚光器的主要参数，也是判断它们性能的最重要指标。

NA=n·sinα/2，n—物镜与标本之间的介质析射率；α—物镜的镜口角2、分辨率：D可用下式表示：D=0.61·λ/NA，可通过减低波长、增大折射率、增大镜口角来提高分辨率。

物镜分辨力的高低与物象的清晰度密切相关，目镜没有这种性能。

3、放大倍数：目镜放大倍数与物镜放大倍数之积。

四、显微镜的操作及微生物形态观察1、显微镜的拿取：一手握镜臂，一手托镜座，平稳拿取。

2、对光：转换器上的槽孔与弹簧片吻合即表示物镜正对通光孔。

3、视野亮度的调节：调光旋钮（或反光镜的平面与凹面）、聚光镜、光圈。

4、低倍镜观察：低倍镜视野较大，易于发现目标。

在载物台上放置装片，用压片装置固定，调节移动尺，使被观察的标本处在物镜正下方，从侧面观察，上升载物台，使物镜接近装片，用目镜观察并同时下降载物台，直至物像出现，再用细调节旋钮使物像清晰为止。

用推动器移动标本片，找到合适的目的像并将它移到视野中央进行观察。

5、高倍镜观察换上高倍镜后从目镜观察，调节光照，使亮度适中，缓慢调节细调节旋钮调至物像清晰为止，找到需观察的部位，并移至视野中央进行观察。

6、将各部分还原，物镜头不与通光孔相对，而是成八字形，将载物台下降至最低，降下聚光器，将内置光源调至最低亮度后关灯或将反光镜与聚光器垂直。

最后用柔软纱布清洁载物台等机械部分，然后将显微镜放回柜内或镜箱中。

实验一光学显微镜的使用及微生物个体形态的观察一、实验目的和要求1）了解显微镜的构造及成像原理。

2）掌握显微镜的使用方法和保养方法。

二、显微镜的构造（一）机械裝置部分：1）镜座：是显微镜的支架，由底座和镜臂组成。

2）载物台：又称镜台，用于安放载玻片，其上安有玻片夹和玻片移动器，调节移动器上的螺旋可使载玻片前后左右移动。

镜台中央有一孔，称通光孔，可使反光镜上的光反射到物镜中来。

3）镜筒：其上端连接目镜，下端连接转换器。

4）转换器：其上安装三个物镜，镜检时旋转转换器即可换物镜头。

注意转换物镜时。

必须用手按住园盘旋转，勿用手指直接推动物镜，以免使物镜与转换器之间的螺纹松脱而损坏显微镜。

5）调焦裝置：包括粗细调焦旋钮，是调节镜筒上下移动的裝置。

（二）光学系统部分：1）物镜：又称为镜头。

有三个物镜头，二个干燥系物镜，一个油系物镜。

物镜上标有主要参数，其含意是：例如：上排100/1.25是放大倍数为100，数值口径为1.25，下排160/0.17是指镜筒长为160毫米，盖玻片的厚度小于0.17毫米。

它是显微镜的最重要的部分。

普通显微镜接物镜的工作原理2）目镜：供眼睛观察物像用的，它将物镜放大的物像再放大，配有三个目镜，其上标有放大倍数。

显微镜的总放大倍数是目镜放大倍数与物镜放大倍数的乘积.3）聚光器：起聚集光线的作用，它可上下移动以调节最适光度。

其下方安装有可变光圈,用以调节光的强度。

4）反光镜：安装在镜座上。

它是一个有平凹两个面的双面镜。

其作用是采集外来光线，并且送入聚光器，一般采集自然光时用平面镜，采集人工光源时用凹面镜。

三、实验材料和器材双目显微镜、二甲苯、苯酚、擦镜纸、固定片等四、实验操作步骤（一）显微镜的使用方法：1.准备工作：取出显微镜时，应一手握镜臂,一手托镜座，轻拿轻放，切忌碰撞和猛震。

显微镜应放在离桌边60毫米左右的位置。

再将登子的高低调节好，不得将显微镜倾斜。

2.采光：将低倍镜与镜筒调节成一条直线，用双眼向下看，同时调节反光镜寻找光源。

实验一光学显微镜的使用与微生物观察第一节普通光学显微镜的使用一、实验目的1、了解普通光学显微镜的基本构造和工作原理。

2、学习并掌握普通光学显微镜，重点是油镜的使用技术和维护知识。

3、在油镜下观察微生物的几种基本形态。

二、基本原理（一）普通光学显微镜的构造普通光学显微镜由机械系统和光学系统两部分组成（图1-1）。

1、机械系统机械系统包括镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、调节器等。

（1）镜座：它是显微镜的基座，可使显微镜平稳地放置在平台上。

（2）镜臂：用以支持镜筒，也是移动显微镜时手握的部位。

（3）镜筒：它是连接接目镜（简称目镜）和接物镜（简称物镜）的金属圆筒。

镜筒上端插入目镜，下端与物镜转换器相接。

镜筒长度一般固定，通常是160mm。

有些显微镜的镜筒长度可以调节。

（4）物镜转换器：它是一个用于安装物镜的圆盘，位于镜筒下端，其上装有3～5个不同放大倍数的物镜。

为了使用方便，物镜一般按由低倍到高倍的顺序安装。

转动物镜转换器可以选用合适的物镜。

转换物镜时，必须用手旋转圆盘，切勿用手推动物镜，以免松脱物镜而招致损坏。

（5）载物台：载物台又称镜台，是放置标本的地方，呈方形或圆形。

载物台上装有压片夹，可以固定被检标本；有标本移动器，转动螺旋可以使标本前后和左右移动。

有些标本移动器上刻有标尺，可指示标本的位置，便于重复观察。

（6）调节器：调节器又称调焦装置，由粗调螺旋和细调螺旋组成，用于调节物镜与标本间的距离，使物像更清晰。

粗调螺旋转动一圈可使镜筒升降约10mm，细调螺旋转动一圈可使镜筒升降约0.1mm。

图1-1 普通光学显微镜的构造1. 镜座2. 镜臂3. 镜筒4. 转换器5. 载物台6. 压片夹7. 标本移动器8. 粗调螺旋9. 细调螺旋10. 目镜11. 物镜12. 虹彩光阑（光圈） 13. 聚光器 14. 反光镜2、光学系统光学系统包括目镜、物镜、聚光器、反光镜等。

（1）目镜：它的功能是把物镜放大的物像再次放大。

实验一显微镜的使用和微生物形态的观察一、目的要求1、熟悉普通光学显微镜的构造及其使用方法。

2、了解油镜的原理，并掌握其使用方法。

3、观察各种染色标本，认识微生物的基本形态和特殊结构。

二、基本原理显微镜包括普通光学显微镜、相差显微镜、暗视野显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。

微生物个体微小，难于用肉眼观察形态结构，只有借助显微镜，才能对其进行研究和利用。

普通光学显微镜是一种精密的光学仪器，是观察微生物最常用的工具。

细菌等原核细胞型微生物个体微小，一般需要使用油镜观察其形态结构。

而油镜头晶片极小，投入光线少，从载玻片透过光线，又被空气折射（空气折光广率1.00、玻璃折光率为1.52），更不易射入镜头内，致使光线较弱物像不清。

当在镜头和载玻片之间滴加香柏油后，由于香柏油折光率为1.515，与玻璃相近，可消除光线通过玻璃与物镜间空气时发生折射现象，避免光线损失，使亮度和清晰度都得到了提高，几乎可以看清所有细菌。

三、实验材料及仪器（1）标本及试剂：微生物标本片、香柏油、二甲苯。

（2）仪器及其他用具：普通光学显微镜、擦镜纸等。

四、实验步骤1.普通光学显微镜的构造及使用方法。

1）普通光学显微镜的构造。

普通光学显微镜有机械部分和光学部分组成。

A．显微镜的机械部分。

包括镜座、镜臂、镜筒、转换器、载物台、推动器、粗调节器（粗调螺旋）和细调节器（微调螺旋）等部件（图1-1）普通光学显微镜机械部分各部件的构造与功能见表1-1B．显微镜的光学系统。

由反光镜、聚光镜、物镜、目镜、虹彩光圈等组成，光学系统使标本物像放大，形成倒立的放大物像。

表1-2普通光学显微镜光学系统的构造与功能2）普通显微镜的使用①取镜。

从镜箱中取镜时，一手握镜臂，一手托镜座，保持镜体直立，以防反光镜及目镜脱落被摔坏，将显微镜放置于平稳的实验台上。

端正坐姿，镜检时两眼同时睁开，单目显微镜一般用左眼观察，用右眼帮助绘图或做记录。

双目显微镜用双眼观察。

②使低倍镜与镜筒呈一直线，调节反光镜，让光线均匀照射在反光镜上，电光源显微镜打开照明光源，并使整个视野都有均匀的照明。

实验一：显微镜的使用及菌体形态观察一、实验目的1、掌握光学显微镜的结构、原理，学习光学显微镜的操作方法和保养。

2、观察细菌、放线菌、真核微生物的个体形态及真菌孢子类型，学习生物图的绘制。

3、学习用压滴法制作标本片。

二、实验仪器和材料显微镜、载玻片、盖玻片，75%二甲苯、吸管、烧杯，香柏油，擦镜纸、吸水纸、浮游生物网示范片：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、放线菌、酵母菌、青霉、曲霉、根霉、梨头霉、毛霉。

三、实验原理（一）显微镜的结构和光学原理显微镜分机械装置和光学系统两部分。

1、机械装置（1）镜筒：镜筒上端装目镜，下端接转换器。

镜筒有单筒和双筒两种。

单筒有直立式和后倾斜式（倾角为45o）。

双筒都是倾斜式的，并有屈光度调节装置，以备视力不同者调节使用。

两筒之间可调距离，以适应两眼宽度不同者调节使用。

（2）转换器：转换器装在镜筒的下方，其上有三个孔或四个孔。

不同规格的物镜旋转安装在各孔上，在显微镜不使用时，旋下物镜，用护盖盖住。

（3）载物台：载物台为方形（多数）或圆形的平台，中间有一光孔，孔的两侧各装一个夹片，右端夹片固定，左端夹片可旋转，载物台上还有移动器（其上有刻度标尺，用以标记玻片的位置），可纵向和横向移动，移动器的作用是夹住和移动标本片。

（4）镜臂：镜臂支撑镜筒、载物台、聚光器和调节器。

镜臂有固定式和活动式（可改变倾斜度）两种。

有弧形和折形两种。

移动显微镜时用手握住镜臂进行移动。

（5）镜座：镜座为马蹄形和方形，具有一定的质量，支撑整台显微镜，马蹄形的镜座在其上有一可旋转的反光镜。

（6）调节器：调节器包括粗螺旋调节器和细螺旋调节器。

可调节物镜与所需观察的物体之间的距离。

2、光学系统及其光学原理显微镜的总放大倍数为物镜的放大倍数和目镜放大倍数的乘积。

（1）目镜目镜一般有10×、16×两种，高级的显微镜还有5×和20×。

目镜上标有：N.A.1.25、100×、“OI”、160/0.17、0.16等字样，其中：N.A.1.25为数值孔径，100×为放大倍数，“OI”（即Oil immersion ）表示油镜、160表示镜筒长，0.17表示要求盖波片的厚度，0.16为工作距离。

实验一显微镜油镜的使用和细菌形态的观察本次实验主要介绍了显微镜油镜的使用以及细菌形态的观察。

显微镜是生物科学中最基本最必要的仪器，也被称为生命科学研究的窗口。

而观察细菌形态则是微生物学重要的研究内容之一，对于深入了解微生物的特性和分类十分关键。

一、显微镜油镜的使用1、准备工作在使用显微镜前，需要对仪器做一些准备工作，具体如下：（1）检查显微镜是否清洁干净。

使用棉花棒和无水酒精擦拭镜头和接口。

（2）插入镜片，拧紧螺丝。

注意，平光镜的凹面朝上。

（3）透镜的高度应调整至最高点，油镜周围涂上润滑油。

（4）在准备好玻片后，使用无菌针将样本划到玻片上。

2、操作步骤（1）将玻片插入载置物台。

调整光源，使其在镜片下方成圆形状。

（2）使用低倍放大的物镜，在载置物台下调整样本位置，然后转动焦点，调整到最清晰的位置。

（3）切换到高倍物镜。

在不移动载置物台的情况下，调整焦距直至视野内的细胞详细可见。

（4）将油镜轻轻接触载置物台上的镜片，调节光源以得到最佳观察效果。

（5）旋转调节管，使细胞从上到下等比例进入视野，观察细菌的形态、大小、数量等。

二、细菌形态的观察1、细菌分类根据细菌的细胞形态、大小、结构和移动方式等特征，可以将细菌分为不同的分类。

细菌形态既包含单细胞长条状物、圆球体等基本形态，又包括复杂的细胞、菌株组成的群体等。

常见的细菌形态有以下几种：（1）球菌（cocci）：球形或椭圆形的细胞。

（2）杆菌（bacilli）：棒状或柱状的细胞。

在实验过程中，使用显微镜观察样本，发现细菌形态上虽然存在一定的差异，但一般表现为以下情况：（1）球菌或细圆菌：呈球形，直径一般在0.5-2μm之间。

（3）螺旋菌：呈螺旋形，长度几乎无限制，直径0.5-1μm左右。

然而，即使细菌大小、形态有所不同，它们的细微结构也存在着明显的相似性，这种结构相似性在分类学上具有相当的意义。

细菌形态的观察是微生物学中非常重要的基础工作，通过观察细菌的形态、大小、数量等，能够更好地了解微生物的生长繁殖规律，对于深入研究微生物的特性、分类以及对环境的影响等方面具有非常重要的价值。

实验一显微镜的使用及微生物显微特征的观察--------------------------------------------------------------------------------一、目的要求1、了解显微镜的构造，掌握显微镜的使用方法；2、了解细菌的光学显微特征。

二、基本构造普通光学显微镜构造主要分为三部分:机械部分照明部分光学部分。

1.机械部分（1）镜座：是显微镜的底座，用以支持整个镜体。

（2）镜柱：是镜座上面直立的部分，用以连接镜座和镜臂。

（3）镜臂：一端连于镜柱,一端连于镜筒。

（4）镜筒：连在镜臂的前上方，镜筒上端装有目镜，下端装有物镜转换器。

（5）物镜转换器：接于棱镜壳的下方，可自由转动，盘上有3－4个圆孔，是安装物镜部位，转动转换器，可以调换不同倍数的物镜。

（6）载物台：在镜筒下方，形状有方、圆两种，用以放置玻片标本，中央有一通光孔，我们所用的显微镜其镜台上装有玻片标本推进器，推进器左侧有弹簧夹，用以夹持玻片标本，镜台下有推进器调节轮，可使玻片标本作左右、前后方向的移动。

（7）焦距调节轮：是装在镜柱上的大小两种螺旋，可使镜台作上下方向的移动以调节观察焦距。

2．照明部分装在镜台下方，包括反光镜，集光器。

（1）反光镜：装在镜座上面，可向任意方向转动，它有平、凹两面，其作用是将光源光线反射到聚光器上，再经通光孔照明标本，凹面镜聚光作用强，适于光线较弱的时候使用，平面镜聚光作用弱，适于光线较强时使用。

（2）集光器位于镜台下方的集光器架上，由聚光镜和光圈组成，其作用是把光线集中到所要观察的标本上。

①聚光镜：由一片或数片透镜组成，起汇聚光线的作用，加强对标本的照明，并使光线射入物镜内，镜柱旁有一调节螺旋，转动它可升降聚光器，以调节视野中光亮度的强弱。

②光圈：在聚光镜下方，由十几张金属薄片组成，其外侧伸出一柄，推动它可调节其开孔的大小，以调节光量。

3.光学部分（1）目镜：装在镜筒的上端，通常备有2－3个，上面刻有5×、10×或15×符号以表示其放大倍数，一般装的是10×的目镜。