人类免疫缺陷病毒抗体检测
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新加坡MP生物医学亚太有限公司生产的HIV-1+2抗体免疫印迹试剂(HIVBLOT 2.2)1)原理wB是将HIV蛋白经SDS-PAGE,由于蛋白分子大小不同而分离开来,然后再把这些已分离的不同蛋白带转移到硝化纤维膜上,以后用不同的方式,包括非常敏感的免疫酶法,检测HIV抗体。
每一条硝化纤维膜上均含有经电泳分离过的HIV抗原。
若有相应抗体就会与硝化纤维膜条上的抗原带相结合。
然后与抗人的IgG酶结合物反应。
在底物作用下,硝化纤维膜条带上呈现紫色,表示阳性反应。
2)基本检测程序(1)准备试剂:配制稀释洗涤液、印迹缓冲液、工作酶结合溶液。
(2)湿润膜条:用镊子从塑料管中小心取出所需的硝化纤维膜条,其中包括3条对照(强阳性、弱阳性、阴性对照各1条),并且将有编号的膜面向上放入分析槽中,随后加人2 ml 已经稀释好的洗液,室温(22~28℃)振荡浸泡至少5 min,然后吸干槽内液体。
(3)加样:每槽中加入2 ml印迹缓冲液和20ul待检标本或对照血清(每个标本都需换新的移液头)。
(4)孵育:盖上盖子,室温振荡1 h(也可采用室温振荡16~18 h)。
(5)洗涤:小心打开盖子,吸干槽内液体,避免标本交叉污染。
加入2 ml已经稀释的洗涤液,室温浸泡振荡5 min,再吸干槽内液体。
如此反复洗涤3次。
(6)酶结合:加入2 ml工作酶结合溶液,盖上盖子,室温振荡1 h(如果在6步骤中采用室温振荡16~18 h的,则此步酶反应步骤中室温振荡30 min)。
(7)洗涤:吸干槽内液体,再洗涤3次。
(8)显色:加入2 ml底物溶液,室温振荡15 min。
(9)终止:吸干槽内液体,加入蒸馏水终止反应,反复3次,随后用镊子小心取出膜片于滤纸巾上,并开始读膜片结果。
(10)结果判定标准:每次实验须设立对照血清,如阳性对照必须全部条谱带均出现;弱阳性对照可以谱带不全,但必须够判定阳性的结果;阴性对照则无反应谱带。
如果对照血清的结果未出现正确的谱带,则此次实验无效,须重做。
全国人类免疫缺陷病毒检测技术规范(2023年修订版)引言本文档是全国人类免疫缺陷病毒(HIV)检测技术规范的修订版,旨在规范全国范围内HIV检测的质量和准确性,以提高HIV 感染者的早期发现和治疗。
1. 范围本技术规范适用于全国范围内所有医疗机构、疾病预防控制中心、实验室等单位进行HIV检测。
2. 术语定义- HIV:Human Immunodeficiency Virus,人类免疫缺陷病毒。
- HIV抗体:人体对HIV感染产生的免疫反应所产生的抗体。
- HIV抗原:HIV感染人体内HIV病毒产生的抗原。
- HIV核酸:HIV病毒的遗传物质(RNA)。
3. 检测方法3.1 HIV抗体检测- 检测方法应使用经国家药品监督管理部门批准的HIV抗体检测试剂盒。
- 检测过程应严格按照检测试剂盒说明书进行操作。
- 检测结果应根据检测试剂盒说明书的判断标准进行解读。
3.2 HIV抗原检测- HIV抗原检测可作为HIV感染早期诊断的辅助方法。
- 检测方法应使用经国家药品监督管理部门批准的HIV抗原检测试剂盒。
- 检测过程应严格按照检测试剂盒说明书进行操作。
- 检测结果应根据检测试剂盒说明书的判断标准进行解读。
3.3 HIV核酸检测- HIV核酸检测可作为HIV感染确认和病毒负载监测的方法。
- 检测方法应使用经国家药品监督管理部门批准的HIV核酸检测试剂盒。
- 检测过程应严格按照检测试剂盒说明书进行操作。
- 检测结果应根据检测试剂盒说明书的判断标准进行解读。
4. 质量控制4.1 检测设备- 检测设备应符合国家标准和相关法规的要求。
- 设备应定期进行校准和维护,确保其准确性和稳定性。
4.2 检测人员- 检测人员应具备相关专业知识和技能,经过专业培训并持有相关资质证书。
- 检测人员应定期参加质量控制和技术培训,保持技术能力和水平。
4.3 质量控制物质- 检测过程中应使用经国家质量控制中心认证的质控物质,以保证检测结果的准确性和可靠性。
人类免疫缺陷病毒抗体定量测定作业指导书一、目的:规范人类免疫缺陷病毒抗体测定的标准操作程序,确保人类免疫缺陷病毒抗体测定的结果准确有效。
二、适用范围:在AutoLumo A2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的人类免疫缺陷病毒抗体。
三、临床意义人类免疫缺陷病毒(俗称艾滋病病毒,英文名称是Human Immunodeficiency Virus,缩写为HIV)是一种能生存于人的血液中并攻击人体免疫系统的病毒。
HIV侵入人体后主要攻击的是一种带有CD4表面抗原的淋巴细胞(T4淋巴细胞),这种细胞是免疫系统的基本组成部分,HIV通过大量、不断地复制与释放,导致T4淋巴细胞大量死亡,使人体内T4淋巴细胞明显减少,感染者免疫功能遭到严重破坏,造成免疫缺陷,降低或失去对各种致病因素的抵抗能力,临床表现为各种机会性感染与肿瘤[1]。
有的发生神经系统病变或症状,可能与神经系统的机会性感染(弓形虫病、新隐球菌感染等)有关,同时可能是亲神经型HIV毒株的直接作用造成的。
最终,病人通常死于严重的感染和肿瘤[2]。
四、方法原理本试剂盒采用双抗原夹心法原理进行检测。
以HIV 抗原包被磁微粒,辣根过氧化物酶标记HIV抗原制备酶结合物,通过免疫反应形成抗原-抗体-酶标记抗原复合物,该复合物催化发光底物发出光子,发光强度与HIV抗体的含量成正比。
五、标本的采集与处理5.1.采用正确医用技术收集血清样本(详见标准血液标本前处理流程)。
5. 2.样本中勿添加叠氮钠作为防腐剂。
5.3.样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果,应离心除去,并确定样本未变质方可使用。
5.4.样本处理、收集后在室温放置不可超过8小时;如果不在8小时内检测需将样本放置在2~8℃的冰箱中;若需48小时以上保存或运输,则应冻存于-20℃以下,避免反复冻融。
使用前恢复到室温,轻轻摇动混匀。
六、标本拒收标准1)严重溶血、脂血 2)标本标识不明七、仪器与材料7.1.仪器:适用于Lucy2、Lumo、AutoLumoA2000化学发光检测仪。
HIV抗体检测解读HIV(人类免疫缺陷病毒)是一种通过感染人体免疫系统而导致艾滋病的病毒。
HIV抗体检测是一种常用的方法,用于检测人体是否感染了HIV病毒。
在本篇文章中,我们将解读HIV抗体检测的结果以及如何正确理解这些结果。
一、HIV抗体检测的原理HIV抗体检测的原理是通过检测人体血液样本中是否存在特定的HIV抗体,来判断一个人是否感染了HIV病毒。
这些抗体是人体免疫系统产生的,用于抵御HIV病毒入侵。
如果检测结果呈阳性,表示人体产生了针对HIV的抗体,即感染了HIV病毒。
反之,如果检测结果呈阴性,表示人体没有产生这些特定的抗体,即没有感染HIV病毒。
二、HIV抗体检测方法1. 首次筛查:常用的HIV抗体检测方法是酶联免疫吸附试验(ELISA)或免疫膜层析法(Immunochromatographic assay)。
这些方法能够快速、准确地筛查出是否感染了HIV病毒。
2. 确认诊断:如果首次筛查呈阳性,需要进行进一步的确认诊断。
确认诊断通常采用Western blot或免疫荧光抗体法(Immunofluorescence assay),以验证是否确实感染了HIV病毒。
三、HIV抗体检测结果的解读1. 阴性结果:如果HIV抗体检测结果是阴性,说明在检测时未发现HIV病毒相关抗体。
但需注意,阴性结果并不代表完全没有感染HIV病毒的风险。
在感染初期,尤其是病毒进入人体后的数周内,抗体水平可能还不足以被检测出来。
因此,如果曾有可能感染HIV病毒的风险行为,建议定期检测以确保结果的准确性。
2. 假阳性结果:HIV抗体检测可能会出现假阳性结果,即检测结果呈阳性,但实际上并未感染HIV病毒。
常见的原因包括免疫系统异常、患有其他疾病等。
如果初步检测结果呈阳性,需进一步进行确认诊断以确定感染情况。
3. 真阳性结果:HIV抗体检测结果呈阳性,意味着人体产生了特定的HIV抗体,感染了HIV病毒。
在确认感染情况后,应及时寻求专业医疗机构的帮助,接受综合治疗和护理。
人类免疫缺陷病毒抗体的操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成,希望大家下载以后,能够帮助大家解决实际的问题。
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HIV抗体检测解读HIV(人类免疫缺陷病毒)是一种引起艾滋病的病毒。
艾滋病已经成为全球性的公共健康问题,严重威胁着人们的健康和生命安全。
为了及早发现和控制艾滋病的传播,HIV抗体检测成为了预防与治疗该病的重要方法之一。
在本文中,我们将详细了解HIV抗体检测及其结果的解读。
HIV抗体检测是通过检测血液中的抗体来确定是否感染了HIV病毒。
通常情况下,HIV抗体检测分为两个阶段,即筛查试验和确诊试验。
筛查试验是最常用的HIV抗体检测方法。
它主要依靠血样中是否存在HIV抗体来确定感染情况。
筛查试验通常采用ELISA(酶联免疫吸附试验)或免疫层析法进行。
这些试验相对简单、快速且经济实惠,可以同时检测多个样本。
如果筛查试验结果为阳性,意味着检测出可能的HIV感染,需要进一步进行确诊试验。
确诊试验通常采用Western blot或Immunofluorescence assay等方法来确认HIV感染。
这些试验更加敏感和特异,可以减少假阳性结果。
如果确诊试验结果呈阳性,那么可以确定感染者已经感染HIV病毒。
在解读HIV抗体检测结果时,有几个关键的要点需要注意。
首先,HIV抗体检测有一个窗口期,在感染后的几周到几个月内,抗体可能不会被检测出来。
因此,如果曾经有感染HIV的风险行为,但是检测结果为阴性,需要在窗口期结束后再次进行检测以确认结果。
其次,假阳性和假阴性结果是可能发生的。
假阳性结果是指未感染HIV病毒的人被检测出阳性结果。
这可能是由于其他疾病、自身免疫反应或不准确的试验引起的。
假阴性结果是指已确诊感染HIV病毒的人被检测出阴性结果。
这可能是由于窗口期内的抗体未被检测到、补体干扰或检测方法的限制等原因造成的。
最后,HIV抗体检测只能用于检测感染者是否已经携带抗体,无法确定病毒的感染程度和病情发展。
因此,如果检测结果为阳性,需要进一步进行病毒载量检测和CD4细胞检测等,以确定病情和制定合理的治疗方案。
在解读HIV抗体检测结果时,我们应该信任专业的医疗机构和专业的医生。
HIV抗体检测及检测要点HIV(人类免疫缺陷病毒)是一种导致艾滋病的病原体。
为了及早发现感染者并采取相应的预防和治疗措施,HIV抗体检测成为了至关重要的手段。
本文将讨论HIV抗体检测的原理、方法以及检测要点。
一、HIV抗体检测的原理HIV抗体检测是利用抗体与抗原之间的特异性反应进行的。
一般情况下,人体在感染HIV后会产生针对该病毒的特异性抗体。
通过检测这些抗体的存在与否,可以确定个体是否感染了HIV。
二、HIV抗体检测的方法1. 酶联免疫吸附法(ELISA)酶联免疫吸附法是目前常用的HIV抗体检测方法之一。
该方法通过将HIV抗体和酶标记物反应,并利用酶的底物产生可见的颜色变化,从而确定抗体的存在与否。
2. 免疫荧光法(IFA)免疫荧光法是一种检测HIV抗体的高特异性方法。
它利用荧光标记的试剂与HIV抗体结合,并通过荧光显微镜观察荧光信号的存在与否。
3. 免疫层析法(IC)免疫层析法是一种便捷的HIV抗体检测方法。
该方法利用试纸条或膜片对样本中的抗体进行特异性的分离和检测。
三、HIV抗体检测的要点1. 检测时机HIV感染后,人体需要一定时间来产生抗体。
因此,在感染后的早期阶段进行抗体检测可能会得到假阴性结果。
通常建议在疑似感染HIV后的窗口期结束后再进行抗体检测,以确保结果的准确性。
2. 检测方法选择根据实际情况,可以选择不同的HIV抗体检测方法。
ELISA方法对大规模筛查和初筛适用,而IFA和IC方法则更适合用于确认检测结果。
3. 检测机构选择在进行HIV抗体检测时,选择正规、有资质的医疗机构或检测点进行更加可靠和准确的结果。
4. 遵循检测原则在进行HIV抗体检测时,应遵循检测的基本原则,包括保护个人隐私、知情同意和防止结果泄露等。
5. 配合其他检测方法HIV抗体检测虽然是常用的方法,但并不能独立诊断HIV感染。
如果初次检测结果呈阳性,应进一步进行其他确认性检测,如核酸检测等,以确保结果的准确性。
1、 检验申请单独检验项目申请:人类免疫缺陷病毒抗体{缩写抗HIV (1+2)]测定。
临床医生根据需要提出检验申请。
2、 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml ,不抗凝,置普通试管中,或采用含分离胶的真空采血管。
也可采集血浆,用肝素、EDTA 或枸橼酸盐抗凝。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本采集后,在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态,对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足:少于0.3ml 的全血标本,或少于0.1ml 的血清或血浆。
2.1.5.2对检测结果可能有干扰的标本,包括严重溶血、严重浑浊的标本。
2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在置1-2h 后将标本离心分离出血清或血浆,避免溶血。
离心必须达到3000rpm 15min ,离心后的血清中不能含有颗粒物和微量纤维蛋白。
2.2.2标本保存时间:室温(15-25℃)下可稳定48h ,普通冰箱中(2-8℃)稳定7d ,在-20℃最多可保存4周。
避免反复冻融。
不可使用热灭活的标本。
2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号,置4-8℃冰箱内保存7d 。
2.3标本采集的注意事项采血前使受检者保持平静、松弛,避免剧烈活动。
医院检验科免疫室 体诊断试剂盒(酶联免疫法)标准操作规程 生效日期: 年 月 日版本:第1版第 页,共 页3.方法原理本实验采用HIV 特异性抗原gp160和gp36等包被微孔反应板,用gp36、gp41标记辣根过氧化物酶。
当待测标本中存在HIV 抗体时,该抗体和固化的抗原结合于反应板上,并进一步与酶结合物相结合,在TMB 底物参与反应的情况下,产生显色反应。
人类免疫缺陷病毒(HIV1/2)抗体检测试剂盒(乳胶法)说明书【检测原理】人类免疫缺陷病毒(HIV1/2)抗体检测盒(乳胶法)采用了高度特异性的抗体抗原反应及免疫层析乳胶标记技术原理。
试剂上含有事先固定在膜上检测区(T)的重组HIV-1和HIV-2型抗原。
检测时,将样本滴入试剂的加样孔中,样本中的HIV-1,2型抗体与预包被在膜上的重组抗原--乳胶颗粒标记结合物反应,然后,混合物在毛细效应下向上层析,在检测区(T)与固定在膜上的重组HIV-1和HIV-2型抗原反应。
如果样本中含有HIV抗体,在检测区内(T)会出现红色条带,检测区内出现红色线条表明是阳性结果。
如果在检测区内(T)没有出现红色条带,则样本中不含有HIV抗体,表明的是阴性结果。
无论抗HIV抗体是否存在于样本中,混合物都会继续向上层析至质控区(C),出现一条红色的条带。
质控区内(c)所显示的红色条带是判定层析过程中是否正常的标准,同时也是检测试剂的内控标准。
【主要组成成份】本试剂主要原材料包括:包被用重组HIV1型、包被用重组HIV2型抗原、标记用重组HIV1型、标记用重组HIV2型抗原、链霉亲和素结合物、生物素、乳胶颗粒、硝酸纤维塑膜、聚酯纤维塑膜。
检测需要已提供的材料注意:不同批号试剂中各组份不可互相使用,以免产生错误结果。
检测时另需准备样本收集容器和计时器。
【样本要求】静脉采血后离心获得血清/血浆样本,不同的抗凝剂如柠檬酸钠,肝素钠,EDTA,草酸钠,枸橼酸钠的血浆标本均可。
在2—8℃条件下可保存一周,长期保存需-20℃冷冻,以避免反复冻融。
发臭、溶血等异常样本请勿使用。
【检验方法】在进行检验前必须先完整阅读使用说明书,并将试剂、样本、和缓冲液恢复至室温(20℃-30℃)。
1.从原包装铝箔袋中取出试剂。
2.将试剂放在干净的平台上,用一次性塑料管吸取1滴血清/血浆(25μl)于加样孔(S)中,随后加入1滴缓冲液(约40μl),开始计时。
人类免疫缺陷病毒抗体检测
一、标本收集及处理:人血清或血浆类标本。
二、测定原理:用基因工程(含HIV-1gp160、gp41、p24,HIV-2gp36)包被反应板,当待测标本中存在抗-HIV抗体时,该抗体与固相化的抗原结合于反应板上,然后用酶标记的抗人IgG 与抗原结合的抗体反应,最后加入底物显色。
三、试剂来源:上海荣盛生物药业有限公司
四、试验器材:
(一)、试验试剂:
1. 预包被反应条1袋7.显色剂B (TMB) 1瓶
2. 酶结合物1瓶8.终止液1瓶
3. 阳性对照1瓶9.封胶纸1片
4. 阴性对照1瓶10.说明书1份
5. 浓缩洗涤液1瓶11.自封袋1只
6. 显色剂A(TMB)1瓶
(二)、试验仪器:
1.洗板仪:
2.酶标仪:
五、试剂制备:
1、洗涤液使用前按要求用蒸馏水作1: 20稀释。
2、其他试剂按说明可直接使用。
六、操作程序:
1、每次试验设阴性、阳性对照各两孔,分别加入阴性、阳性对照血清1^1,再设一孔空白对
照,其余孔加入1^ 1被测样本,置37C孵育30分钟。
2、洗板:1)手工洗板:弃去反应板条孔内液体,拍干;用洗涤液注满每孔,静置5-10
秒,弃去孔内洗涤液拍干,如此反复5次,拍干。
2)洗板机洗板:选择洗涤5次的程序洗板,最后拍干。
3、每孔加酶结合物1^1 (空白对照孔不加),置37.。
孵育30分钟,同上法洗反应板5次。
4、每孔加显色剂A液、B液各50^1,轻轻振荡后,37C避光静置15分钟。
七、结果判断:
1.终止反应:每孔加入终止液50微升,混匀。
2.测定:用酶标仪读数,可选择单波长450 nm (以空白孔校零)或双波长450/630 nm,读
取各孔OD值。
3.若阴性对照读数小于0.05时,按0.05计算。
4.临界值(Cut off value)=阴性对照平均值+0.10.
测试标本的计算值小于Cut off value则为HIV抗体阴性。
测试标本的计算值等于或大于Cut off value则为HIV抗体阳性。
(注意:初试阳性标本应重新取样进行双孔复试,复试阳性者应按“全国艾滋病检测管理规范”送HIV确证实验室进行确证实验)。
八、质控要求:每次每块反应板应做质控、阴性对照、阳性对照和空白对照。
九、失控处理:实验设计要求阳性对照平均值大于1.20,阴性对照平均值小于0.10,阳性、阴性对照OD值之差应大于1.20,否则本次实验无效。
十、参考范围:正常应为阴性。
十一、临床意义:
HBsAg在HBV感染早期出现于患者血循环中,可持续数月、数年乃至终生,是诊断HBV感染最常用的指标。
但在所谓HBV感染的“窗期”,HBsAg可以阴性,而抗HBc等其他HBV血清标志物则可阳性。
十二、注意事项
1、本试剂的使用单位必须是经当地卫生行政部门批准的HIV初筛实验室。
2、整个HIV检测必须符合《全国艾滋病检测工作规范》,严格防止交叉感染。
操作时必须戴
手套、穿工作衣,严格健全和执行消毒隔离制度。
3、HIV抗体测定结果的判定必须以酶标仪读数为准。
4、洗涤时各孔均需加满液体,防止孔有游离酶不能洗净。
使用洗板孔洗涤应设定30秒浸泡时
间。
5、微孔板条从冷藏环境中取出时应在室温中平衡至潮气干尽方可使用,未用完者须放入有干
燥剂的密封袋中置28C保存,且不超过2周。
6、用于检测的样品应保持新鲜。
7、剩余样品及废弃物应经121C高压蒸汽灭菌30分钟,或用5. 0g/L次氯酸钠等消毒剂处理
30分钟后废弃。
8、不同批号试剂组分不得混用。
十三、参考文献:
1.《全国临床检验操作规程(第三版)》。
2.《实用医学检验学》。
十四、工作人员:
科室主任:
十五、修改日期:。