埃希氏大肠菌及检验
一、定义：
大肠埃希氏菌更习惯称为大肠杆菌，分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属，并且大肠杆菌株ATCC 11775是该属的模式菌种。大肠杆菌的不同菌株间DNA相关性为80%，而与同科的志贺氏菌属（除鲍氏志贺氏菌外）的DNA相关性可达80-87%。与人类疾病有关的大肠杆菌，统称为致泻性大肠杆菌（此名称不易与致病性大肠杆菌相混淆），一般包括五种：即肠毒素性大肠杆菌（ETEC）、致病性大肠杆菌（EPEC）、出血性大肠杆菌（EHEC）、侵袭性大肠杆菌（EIEC）和粘附性大肠杆菌（EAEC）。文献报道还有几种，象：凝集性大肠杆菌、即产VT毒素又具有侵袭性的大肠杆菌等，但目前尚未达成统一共识。
二、生物学特性：
基本形态特征：
此菌为两端钝圆的短小杆菌，一般大小约0.5μ-0.8μm*1.0μm-3.0μm,因生长条件不同，个别菌体可呈近似球状或长丝状。此菌多单独存在或成双，但不呈长链状排列。约有50%左右的菌株具有周生鞭毛而能运动，但多数菌体只有1-4根，一般不超过10根，故菌体动力弱；多数菌株生长有比鞭毛细、短、直且数量多的菌毛，有的菌株具有荚膜或微荚膜；不形成芽胞，对普通碱性染料着色良好，革兰氏染色阴性。
培养特征：
由于此菌合成代谢能力强，在含无机盐、胺盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。最适生长温度为37℃，在42-44℃条件下仍能生长，生长温度范围为15-46℃。在普通营养琼脂上生长表现3种菌落形态：（1）光滑型： 菌落边缘整齐，表面有光泽、湿润、光滑、呈灰色，在生理盐水中容易分散。（2）粗糙型：菌落扁平、干涩、边缘不整齐，易在生理盐水中自凝。（3）粘液型：常为含有荚膜的菌株。此菌兼性厌氧，在有氧条件下生长良好，最适生长pH为6.8-8.0，所用培养基pH为7.0-7.5,若pH值低于6.0或高于8.0则生长缓慢。
生化反应与血清学反应
大肠杆菌属于卫生学意义的大肠菌群和粪大肠菌群的范畴，因此，必须符合大肠菌群和粪大肠菌群的有关定义，在检测大肠菌群、粪大肠菌群的基础上，可以应用I（吲哚）、M（甲基红）、Vi（3羟基-2-丁酮）、C（柠檬酸）即IMViC生化试验对大肠杆菌作进一步鉴定，其IMViC结果为++--或-+--。生化反应是鉴定大肠杆菌的主要方法之一，然而，大肠杆菌之间生化反应的差异非常常见，象：许多菌种非/迟发酵乳糖，但并不说明它们遗传上有明显不同，生化反应非典型的大肠杆菌菌株与典型菌株的DNA相关性在85%-100%。附表1为大肠杆菌生化反应特性表。其中H2S、脲酶、阿糖酸、吲哚、ONPG试验常为首选生化反应，其余为进一步的生化试验。大肠杆菌在赖氨酸脱羧酶、粘质酸盐、醋酸盐生化试验中，有一项或多项试验阳性，且厌氧性生长弱，有动力和吲哚试验阳性可与志贺氏菌相鉴别。
口服液药品中控制菌大肠埃希菌的检查
生物工程学院 11生物5.2 作者：王千牵
绪论：
大肠菌群系指一群在37℃、24h能发酵乳糖产酸、产气，需氧和兼性厌氧菌的革兰氏阴性无芽胞杆菌。大肠菌群主要来自人或温血动物粪便，药品中检测出大肠菌群则说明药品受到了人或动物粪便的污染，大肠菌群数量越多则表明粪便污染越严重，由此推测该药品在肠道致病菌污染的可能性，潜伏者药品中毒和流行病的威胁。故以此作为大肠菌群污染指标来评测药品的卫生质量，具有广泛的卫生学意义。
微生物营养需求是微生物维持其生命和增长所需求的营养物质。营养物对微生物作用有：提供合成细胞质需要的物质（CO2、、HCO3-、有机化合物及微量元素和生长素）；作为细胞增长和生物合成反应的能源（有机化合物、无机化合物、能源）；充当产能反应所释放的电子受体（O2、有机化合物、无机化合物中的化合氧）。按所需碳源形式的不同，微生物可分为为：自养型(即用CO2、或HCO3-作为唯一的碳源)和异养型（即需要摄取存在于相对复杂的还原态有机化合物中的碳）。按所需能源不同，微生物可分为：光营养型和化能营养型（即利用氧化-还原反应提供能源）。
微生物代谢是指微生物吸收营养物质维持生命和增殖并降解基质的一系列化学反应过程，包括有机物的降解和微生物的增殖。在分解代谢中，有机物在微生物作用下，发生氧化、放热和酶降解过程，使结构复杂的大分子降解；合成代谢中，微生物利用营养物及分解代谢中释放的能量，发生还原吸热及酶的合成过程，使微生物生长增殖。内源呼吸是细胞质进行自身氧化并放出能量的过程，当有机物充足时，细胞质得到大量合成，而内源呼吸则并不显著；当缺乏营养时，则只能通过内源呼吸吸收氧化自身的细胞物质而获得微生物生命活动所需的能量。
药品中检验微生物的原则：对试剂的要求：有效性和无毒性。检验方法的选择：尽量选择操作简便，快捷及避免损伤供试品中污染的微生物的方法。对照培养基的说明：由中检测所研制计分发。 无法消除供试品的抑菌作用时，可根据供试品应符合的微生物限度标准和菌数报告规则选择更高稀释级实验。控制菌的进一步确认应选择已被确认可的菌种鉴定方法。药品的生产、贮藏、销售及新药标准制定、进口药品标准复核、考察药品质量、仲裁中，除品种或制剂通则项下另有规定外，其微生物限度均以药典的“药品微生物限度标准”为依据。
大肠埃希氏菌生化鉴定结果
大肠埃希氏菌（Escherichia coli）是一种常见的细菌，可以引起多种感染性疾病，包括腹泻、尿路感染和食物中毒等。鉴定大肠埃希氏菌的生化特征可以帮助确定病原菌的身份以及其潜在的耐药性和毒力因子。
本次实验目的是对一株致病性大肠埃希氏菌样本进行生化鉴定，以确认其菌株的性质和特征。首先，我们进行了气体产生实验。在Triple Sugar Iron Agar（TSI）培养基中，观察到菌落周围发生了气体产生，此结果表明该菌株具有产气性。产气性通常意味着大肠杆菌等需要葡萄糖产生酸，进而分解产生气体的细菌。
其次，我们进行了甲烷发酵试验。在Methyl Red（MR）试剂中，当菌液发酵产酸时，溶液颜色由黄色变成红色。然而，该菌株在MR试剂中没有产生红色反应，这表明它无法通过甲烷发酵产酸。这一结果与典型的大肠杆菌不同，因为大肠杆菌通常可以通过此途径产酸。
进一步，我们进行了亮氨酸脱氨酶试验。使用亮氨酸脱氨酶（LDC）培养基，如果菌株具有亮氨酸脱氨酶活性，菌液会变色。然而，我们观察到该菌株在培养基中没有出现任何颜色变化，这表明它不具备亮氨酸脱氨酶活性。亮氨酸脱氨酶活性通常是大肠杆菌的典型特征之一。
此外，我们还进行了尿素酶试验。使用尿素平板培养基，如果菌株具有尿素酶活性，培养基颜色将由黄色变为粉红色。然而，我们观察到该菌株在培养基上未显示出任何颜色变化。这暗示着该菌株可能缺乏尿素酶活性，与大肠杆菌的典型特征不同。
最后，我们进行了青霉素酶试验。使用青霉素酶试纸进行反应检测，在试纸上出现蓝色点状斑点表示菌株具有青霉素酶活性。而对于这个菌株，我们观察到在试纸上没有出现蓝色斑点。这意味着该菌株可能对青霉素类药物敏感，这对于抗生素选择治疗提供了重要信息。
综上所述，通过对致病性大肠埃希氏菌样本进行生化鉴定，我们发现该菌株具有产气性，但与典型的大肠杆菌不同，它不表现出甲烷发酵、亮氨酸脱氨酶和尿素酶活性。此外，该菌株对青霉素类药物可能具有敏感性。这些结果为进一步研究病原性、耐药性和毒力因子提供了线索，有助于制定针对该菌株的治疗策略。我们继续进行了培养基敏感性试验，以评估该菌株对不同抗生素的敏感性。通过在Mueller-Hinton（MH）琼脂培养基上进行纸片扩散法试验，我们发现该菌株对氨苄西林、头孢呋辛和庆大霉素等青霉素类和头孢菌素类抗生素敏感，这与之前的青霉素酶试验结果一致。在氯霉素和四环素等广谱抗生素方面，该菌株表现出抗药性。这项试验结果对于选择合适的抗生素进行治疗至关重要，以确保有效控制感染并避免耐药性的进一步发展。
宠物人兽共患病大肠埃希菌病的诊治要点
大肠埃希氏菌(Escherichiacoli)俗称大肠埃希菌，由德国科学家Escherich于1885年首次从婴儿粪便中分离。自然界中大肠埃希菌种类很多，其中绝大多数是人类和大多数温血动物肠道中的正常菌群的主要成员，对肠道正常生理功能的维持具有积极意义；但是在特定条件下有些特殊血清型具有致病性，可以引起人或动物的腹泻、泌尿道感染、肺炎、败血症、心内膜炎、幼儿脑炎等病症。大肠埃希菌病是由致病性大肠埃希菌引起的多种动物不同疾病或病型的统称，各种动物大肠埃希菌病的表现形式有所不同，但多发生于幼龄动物。按照大肠埃希菌致病力的大小将其分为致病性菌株、条件致病性菌株和非致病性菌株三大类。非致病性大肠埃希菌在水和食品中的出现是食品卫生好坏的重要标志，而致病性大肠埃希菌的出现则会对人和动物的健康造成威胁。由致病性大肠埃希菌所引起的疾病的暴发流行可影响成千上万人，能对某个国家，甚至在国际上产生重大影响。
一、病原
(一)分类地位
大肠埃希菌属于肠埃希菌科(Enterobacteriaceae)埃希氏菌属(ESCheriChia)的成员。大肠埃希菌种类很多，主要通过大肠埃希菌菌体抗原(0)、荚膜抗原(K)和鞭毛抗原（三）分型，它们也是大肠埃希菌血清型鉴定的物质基础。迄今已确定的大肠埃希菌0-抗原有180种，K-抗原有80种，H-抗原有56种。H-抗原大部分是单相的，也有个别菌株为多相。根据热对凝集反应的影响及抗原性和反应原性,大肠埃希菌的K-抗原最初被分为3类：L,A和B。而现在K-抗原则指酸性多糖荚膜抗原。大肠埃希菌K-抗原可以分为两组，I和11（表3-1）,基本上和以往的A和L抗原相对应。大肠埃希菌主要分类依据包括培养特性（如溶血性）、生化反应、抗原结构、毒力因子、致病作用以及噬菌体裂解等。大肠埃希菌可分为产肠毒素大肠埃希菌（ETEC）、肠致病性大肠埃希菌（EPEC）.肠出血性大肠埃希菌（EHEC）.Vero细胞毒性大肠埃希菌（VTEC）、肠侵袭性大肠埃希菌（ElEC）、败血性大肠埃希菌（SEPEC）及尿道致病性大肠埃希菌（UPEC）、肠集聚性大肠埃希菌（EAggEC）、吸脱型大肠埃希菌（AEEC）等。不同类大肠埃希菌又分成很多亚型，每种亚型所含毒力因子不同，产生的毒性强度及作用机理也会不同。
