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食品大肠埃希氏菌标准一、什么是大肠埃希氏菌？大肠埃希氏菌（Escherichia coli，简称E. coli）是一种常见的革兰氏阴性菌，广泛存在于环境中，同时也是人类和动物肠道中的重要共生菌。
大肠埃希氏菌的某些菌株可引起人类食物中毒和感染，造成严重的健康问题。
二、食品大肠埃希氏菌标准的重要性食品安全是人民群众关心的重要问题之一，而大肠埃希氏菌是食品中最为常见的致病菌之一。
制定和执行食品大肠埃希氏菌标准对于保护消费者的生命健康具有重要意义。
1. 食品大肠埃希氏菌标准的目的食品大肠埃希氏菌标准的目的是规范生产和加工环节中对大肠埃希氏菌的控制要求，最终保障食品的安全性和卫生质量。
2. 食品大肠埃希氏菌标准的依据制定食品大肠埃希氏菌标准的依据主要包括国内外相关法律法规和科学研究成果，例如食品安全法、食品卫生法、食品安全国家标准等。
三、食品大肠埃希氏菌标准的内容要求1. 食品大肠埃希氏菌指标食品大肠埃希氏菌标准中会规定食品中大肠埃希氏菌的允许限量，不同食品的指标可能存在差异。
例如，在生肉类食品中，大肠埃希氏菌数目必须小于某个特定值才能合格。
2. 检测方法和要求食品大肠埃希氏菌标准中还包括了针对大肠埃希氏菌的检测方法和要求。
这些方法需要科学准确，并且易于操作。
常用的检测方法包括传统培养法、PCR法等。
3. 食品贮藏和运输要求食品大肠埃希氏菌标准还规定了食品的贮藏和运输要求，以确保在食品生产、储存和运输过程中不发生大肠埃希氏菌的污染和繁殖。
4. 生产企业的责任与义务食品大肠埃希氏菌标准还明确了食品生产企业的责任与义务。
企业必须建立健全的质量管理体系，保证生产过程符合相关标准要求，并对产品进行严格的自检、抽检和监督检验。
四、食品大肠埃希氏菌标准的执行与监督1. 监督机构和责任部门食品大肠埃希氏菌标准的执行和监督是食品安全监管部门的职责，他们承担着对食品生产企业的日常监督、抽样检测和追溯调查等工作。
2. 处罚措施对于违反食品大肠埃希氏菌标准的生产企业，监督机构将会采取相应的处罚措施，例如责令召回不合格产品、暂停生产许可证、罚款等。
牛肉样品中产志贺毒素大肠埃希氏菌和肠致病性大肠埃希氏菌的分离鉴定朱应飞，聂 翔，熊丽霞，吴学平，占忠旭，匡佩琳（江西省检验检测认证总院食品检验检测研究院，江西南昌 330000）摘 要：于2018年9月—2019年3月，每个月从超市和农贸市场中抽取20个样本，共抽取140个牛肉及制品样本，在qPCR初筛时stx阳性率为45.8%，eae的阳性率为52.2%。
每月的stx初筛阳性率分别为65%、60%、80%、5%、25%、45%和40%；eae初筛阳性率分别为70%、70%、65%、0%、40%、65%和55%。
检出携带stx基因的产类志贺毒素大肠埃希氏菌样本4份，样本阳性菌株检出率为2.9%；检出携带eae基因的肠致病性大肠埃希氏菌样本12份，样本阳性菌株检出率为8.6%。
关键词：产志贺毒素大肠埃希氏菌；肠致病性大肠埃希氏菌；分离；鉴定Isolation and Identification of Shiga Toxin Producing Escherichia coli and Enteropathogenic Escherichia coli in BeefSamplesZHU Yingfei, NIE Xiang, XIONG Lixia, WU Xueping, ZHAN Zhongxu, KUANG Peilin (Jiangxi General Institute of Testing and Certification Food Testing Institute, Nanchang 330000, China)Abstract: From September 2018 to March 2019, 20 samples were taken from supermarkets and farmers’ markets every month, with a total of 140 beef and product samples taken. the positive rate of stx was 45.8%, and the positive rate of eae was 52.2%. The monthly positive rates of stx initial screening positive rates of 65%, 60%, 80%, 5%, 25%, 45%, and 40%, respectively; The positive rates of eae initial screening were 70%, 70%, 65%, 0%, 40%, 65%, and 55%, respectively. Four Shiga toxin producing Escherichia coli samples carrying the stx gene were detected, with a positive strain detection rate of 2.9%; From September 2018 to March 2019, 12 samples of enteropathogenic Escherichia coli carrying the eae gene were detected, with a positive strain detection rate of 8.6%.Keywords: Shiga toxin producing Escherichia coli; enterogenic Escherichi coli; separation; appraisal产志贺菌毒素的大肠杆菌（Shiga Toxin Producing Escherichia coli，STEC）和肠致病性埃希氏菌（Enterogenic Escherichi coli，EPEC）是世界上最重要的食源性病原体之一。
食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验1 范围本标准规定了食品中大肠埃希氏菌O157:H7/NM（Escherichia coli O157:H7/NM）的检验方法。
本标准适用于食品中大肠埃希氏菌O157:H7/NM的检验。
2 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：a）恒温培养箱：36 ℃±1 ℃；b）冰箱：2 ℃～5 ℃；c）恒温水浴箱：46℃± 1 ℃；d）天平：感量0.1 g、0.01g；e）均质器；f）显微镜：10×～100×；g）无菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL刻度）或移液器及吸头；h）无菌均质杯或无菌均质袋：容量500 mL；i）无菌培养皿：直径90 mm；j）pH计或精密pH试纸；k）长波紫外光灯：366nm，功率≤6W；l）微量离心管：1.5 mL/2.0 mL；m）磁板、磁板架、样品混合器；n）全自动微生物生化鉴定系统。
3 培养基和试剂3.1 改良EC肉汤（mEC+n）：见附录A中A.1。
3.2 改良山梨醇麦康凯琼脂（CT-SMAC）：见附录A中A.2。
3.3三糖铁琼脂（TSI）：见附录A中A.3。
3.4半固体琼脂：见附录A中A.4。
3.5月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-MUG（MUG-LST）：见附录A中A.5。
3.6氧化酶试剂：见附录A中A.6。
3.7革兰氏染色液：见附录A中A.7。
3.8 PBS-Tween20洗液：见附录A中A.8。
3.9亚碲酸钾（AR级）。
3.10头孢克肟（Cefixime）。
3.11 4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷（MUG）。
3.12大肠埃希氏菌O157显色培养基。
3.13大肠埃希氏菌O157和H7诊断血清或O157乳胶凝集试剂。
3.14生化鉴定试剂盒。
3.15抗-E.coli O157免疫磁珠。
第一法常规培养法4 检验程序大肠埃希氏菌O157:H7/NM常规培养法检验程序见图1。
埃希氏大肠菌及检验一、定义：大肠埃希氏菌更习惯称为大肠杆菌，分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属，并且大肠杆菌株ATCC 11775是该属的模式菌种。
大肠杆菌的不同菌株间DNA相关性为80%，而与同科的志贺氏菌属（除鲍氏志贺氏菌外）的DNA相关性可达80-87%。
与人类疾病有关的大肠杆菌，统称为致泻性大肠杆菌（此名称不易与致病性大肠杆菌相混淆），一般包括五种：即肠毒素性大肠杆菌（ETEC）、致病性大肠杆菌（EPEC）、出血性大肠杆菌（EHEC）、侵袭性大肠杆菌（EIEC）和粘附性大肠杆菌（EAEC）。
文献报道还有几种，象：凝集性大肠杆菌、即产VT毒素又具有侵袭性的大肠杆菌等，但目前尚未达成统一共识。
二、生物学特性：基本形态特征：此菌为两端钝圆的短小杆菌，一般大小约0.5μ-0.8μm*1.0μm-3.0μm,因生长条件不同，个别菌体可呈近似球状或长丝状。
此菌多单独存在或成双，但不呈长链状排列。
约有50%左右的菌株具有周生鞭毛而能运动，但多数菌体只有1-4根，一般不超过10根，故菌体动力弱；多数菌株生长有比鞭毛细、短、直且数量多的菌毛，有的菌株具有荚膜或微荚膜；不形成芽胞，对普通碱性染料着色良好，革兰氏染色阴性。
培养特征：由于此菌合成代谢能力强，在含无机盐、胺盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。
最适生长温度为37℃，在42-44℃条件下仍能生长，生长温度范围为15-46℃。
在普通营养琼脂上生长表现3种菌落形态：（1）光滑型：菌落边缘整齐，表面有光泽、湿润、光滑、呈灰色，在生理盐水中容易分散。
（2）粗糙型：菌落扁平、干涩、边缘不整齐，易在生理盐水中自凝。
（3）粘液型：常为含有荚膜的菌株。
此菌兼性厌氧，在有氧条件下生长良好，最适生长pH为6.8-8.0，所用培养基pH为7.0-7.5,若pH值低于6.0或高于8.0则生长缓慢。
生化反应与血清学反应大肠杆菌属于卫生学意义的大肠菌群和粪大肠菌群的范畴，因此，必须符合大肠菌群和粪大肠菌群的有关定义，在检测大肠菌群、粪大肠菌群的基础上，可以应用I（吲哚）、M（甲基红）、Vi（3羟基-2-丁酮）、C（柠檬酸）即IMViC 生化试验对大肠杆菌作进一步鉴定，其IMViC结果为++--或-+--。
致泻大肠埃希氏菌检验标准
1. 范围
本标准规定了致泻大肠埃希氏菌检验的术语和定义、通用要求、样品采集与处理、实验室基本要求、检验程序、结果报告、记录和档案管理等要求。
本标准适用于食品、水源等样品的致泻大肠埃希氏菌检验。
2. 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB 4789.4 食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数
GB 4789.16 食品安全国家标准食品微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验
3. 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1 致泻大肠埃希氏菌Escherichia coli causing diarrhea
能够引起人类腹泻症状的大肠埃希氏菌。
4. 通用要求
4.1 实验室应建立完善的生物安全制度，保证工作人员的安全和防护。
4.2 实验室应配备相应的仪器设备和试剂，保证检验的准确性和可靠性。
4.3 实验室应按照相关规定做好废弃物的处理和消毒工作，防止污染环境和危害人员健康。
5. 样品采集与处理
5.1 样品采集
5.1.1 食品样品：采集具有代表性的食品样品，包括原材料、半成品、成品等。
5.1.2 水源样品：采集具有代表性的水源样品，包括自来水、饮用水、地表水等。
5.2 样品处理
5.2.1 食品样品：将样品无菌包装或以其他方式保证无菌操作，避免交叉污染。
《微生物与实验技术》食品中大肠埃希菌的检验实验一、实验目的1.熟悉大肠埃希菌的检验原理2.熟悉大肠埃希菌检验的基本操作二、实验原理1.大肠杆菌，又叫大肠埃希氏菌是条件致病菌，在一定条件下可以引起人和多种动物发生胃肠道感染或尿道等多种局部组织器官感染。
因此，检查食品中是否存在治病大肠埃希氏菌具有实际意义。
2. 在TSI琼脂中,典型菌株为斜面与底层均呈黄色，产气或不产气，不产生硫化氢(H2S)。
置MUG-LST肉汤管于长波紫外灯下观察,MUG阳性的大肠埃希氏菌株应有荧光产生,MUG阴性的应无荧光产生，大肠埃希氏菌O157:H7/NM为MUG试验阴性,无荧光。
三、试剂及器材1 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤：2 EC肉汤（E.coli broth）：3 蛋白胨水：4磷酸盐缓冲液：5伊红美蓝（EMB）琼脂：6 营养琼脂斜面：7结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）：8革兰氏染色液：9无菌1mol/LNaOH：10无菌1mol/LHCl：四、操作方法样品的稀释1. 固体和半固体样品：称取25g样品，放入盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌均质杯内，8000r/min~10000r/min均质1min~2min，制成1:10的样品匀液或放入盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min~2min制成1:10的样品匀液。
2.液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1.10的样品匀液。
3. 样品匀液的pH值应在6.5~7.5之间，必要时分别用1mol/LNaOH或1mol/LHCl 调节。
4 .用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入9mL 磷酸盐缓冲液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面）振摇试管或换用1支1mL无菌吸管或吸头反复吹打，使其混合均匀，制成1：100的样品匀液。
食品大肠埃希氏菌标准大肠杆菌是一种普遍存在于动植物肠道中的常见细菌，它们通常对人体没有危害。
然而，某些品种的大肠杆菌，例如大肠埃希氏菌（E. coli），可能会导致食品中毒。
为了保障消费者的健康，许多国家都制定了严格的食品大肠埃希氏菌标准。
本文将介绍食品大肠埃希氏菌标准的相关信息。
一、什么是食品大肠埃希氏菌？大肠埃希氏菌是一种存在于动物和人类肠道中的细菌。
它一般对人体无害，但某些品种的大肠埃希氏菌可导致食物中毒。
二、食品大肠埃希氏菌标准许多国家都制定了食品大肠埃希氏菌标准，以保障公众的健康。
以下是一些常见的标准：1.欧盟大肠杆菌标准欧盟食品安全局（EFSA）规定，食品中不得检出E. coli O157：H7、O26、O104：H4等品种的大肠埃希氏菌。
2.美国大肠杆菌标准美国食品药品监督管理局（FDA）规定，未经处理的生肉中大肠杆菌含量不得高于每克100个。
对加工过的肉制品，大肠埃希氏菌的检测结果应为阴性。
3.中国大肠杆菌标准中国国家卫生计生委规定，以餐饮为主要销售方式的食品中大肠杆菌含量不能超过每100克的230个。
三、大肠埃希氏菌的影响大肠埃希氏菌感染会引起胃肠道疾病，症状包括腹泻、腹痛、呕吐和发热等。
在严重的情况下，大肠埃希氏菌还可能导致血尿症候群、溶血性尿毒症等严重疾病。
四、预防大肠埃希氏菌感染的方法为了避免感染大肠埃希氏菌，可以采取以下预防措施：1.彻底清洗手部和食品材料。
2.确保肉类等食品烹饪至充分 cooked 熟。
3.将肉类产品和其他生鲜食品放在不同的容器中，并使用不同的烹调工具。
4.避免生食食品，尤其是肉类。
五、结论食品大肠埃希氏菌标准在保障消费者健康方面发挥了重要作用。
相关标准的制定和执行，可以降低大肠埃希氏菌导致的食品中毒风险。
预防措施的采取也能有效降低感染大肠埃希氏菌的风险。
食品致泻大肠埃希氏菌检验原始记录
样品编号：检验开始时间：年月日
样品名称：检验完成时间：年月日检测项目：致泻大肠埃希氏菌检测依据：GB4789.6-2016
无菌操作称（量）取固体或半固体样品25g加入225ml营养肉汤均质杯中；液体量取25mL 装入225mL营养肉汤的无菌锥形瓶中（可加适量玻璃珠），36±1℃培养6h；取10μL接种于肠道增菌肉汤管内，于42±1℃培养18h。
将增菌液划线接种于MAC和EMB营养琼脂平板，于36±1℃培养18~24h
观察菌落形态，挑取可疑菌落在做生化鉴定及PCR确认试验。
注：+生长或有可疑菌落；-未生长或无可疑菌落。
电子天平编号：使用状况试验前：试验后：培养箱编号：使用状况试验前：试验后：检测人：校核人：审核人：。
大肠埃希氏菌（Escherichia coli）是一种常见的细菌，其中某些菌株可能引起食物中毒或感染。
大肠埃希氏菌的检测标准可以根据不同的应用领域和目的而有所不同。
以下是一般食品安全和公共卫生领域中常见的大肠埃希氏菌检测标准：
食品中的大肠埃希氏菌检测：
检测方法：常用的检测方法包括培养法、分子生物学方法（如PCR）和免疫学方法（如ELISA）等。
培养法是最常用的方法，通过培养食物样品中的细菌并进行鉴定和计数。
标准数量限制：食品中大肠埃希氏菌的数量通常以菌落形成单位（CFU）来表示。
不同国家和地区可能有不同的标准限制，通常要求食品样品中大肠埃希氏菌数量低于一定的阈值。
饮用水中的大肠埃希氏菌检测：
检测方法：常用的检测方法包括多管发酵法、膜过滤法和分子生物学方法等。
多管发酵法和膜过滤法通过将水样进行培养并进行鉴定和计数。
分子生物学方法可以通过检测特定的基因序列来识别大肠埃希氏菌。
标准数量限制：饮用水中大肠埃希氏菌的数量通常以菌落形成单位（CFU）或基因检测结果来表示。
不同国家和地区可能有不同的标准限制，通常要求饮用水中大肠埃希氏菌数量低于一定的阈值。
致病性大肠埃希菌Ｏ44Ｋ74（Ｌ）引起食物中毒的调查标签：致病性大肠埃希菌O44K74（L）；食物中毒；调查2005年4月25日，某院校发生一起学生食物中毒事件。
经流行病学调查及实验室检查，确认引起这次食物中毒的病原为致病性大肠埃希菌O44K74（L），调查分析结果如下：1 流行病学调查2005年4月25日，某院校二食堂午餐学生281例，餐后1 h出现首例中毒患者，随后又出现轻重程度不同的患者，共104例，其中62例先后于4月25日18∶00~4月26日16∶00收住院治疗。
本次就餐例数281例，发病104例，发病率为37%。
住院62例，其中，男性51例，女性11例，年龄最小19岁，最大24岁，平均22.5岁。
最早1例发病时间为餐后1 h，最晚1例发病时间为餐后28 h，平均潜伏期为8 h，发病高峰为餐后4~10 h。
午餐主食为馒头、米饭，副食共有炒菜6种，包括羊肉、猪肉、鸡肉、鱼肉、油菜等。
临床表现为腹痛、腹泻、头昏、恶心、呕吐、发热并伴有寒颤。
腹泻最多者16次，最少者3次，平均8.5次，大便均呈稀水样。
呕吐最多者11次，最少者1次，平均3.5次。
发热可高达39.0~40.0℃，多数在37.0~38.0℃。
根据药敏结果，选用敏感抗生素环丙沙星、头孢噻肟、诺氟沙星等对症抗感染治疗，所有患者全部治愈，无一例死亡。
2 卫生学调查调查发现，该食堂卫生状况较差，操作流程混乱，初加工、洗碗间、保洁柜等功能分区不明确，生熟食品混放，生熟菜刀、菜板不分，部分菜与食品直接落地，有些从业人员无健康证上岗。
3实验室检查3.1标本来源在现场无菌操作下采集菜刀2份、菜板2份、盛菜盆2份、洗菜筐2份、剩余生油菜2份、其他剩余食物2份及住院患者粪便62份。
3.2病原的分离按中华人民共和国标准《食品卫生微生物学检验》（GB/T4789-2003）方法进行。
3.3 细菌鉴定在伊红美兰琼脂平板上挑取紫黑色、有金属光泽、光滑、湿润、中等大小的菌落，接种于克氏双糖铁斜面培养基，进行系统鉴定。
实验九食品中病原性大肠艾希氏菌的检验第一篇：实验九食品中病原性大肠艾希氏菌的检验实验九食品中病原性大肠艾希氏菌的检验目的1.1 了解病原性大肠艾希氏菌的种类于非病原性大肠艾希氏菌的区别。
1.2 掌握病原性大肠艾希氏菌检验的原理和方法。
原理正常情况下，大肠艾希氏菌不致病，而且还能合成维生素B和K，生产大肠菌素，对机体有利。
但当机体抵抗力下降或大肠艾希氏菌侵入肠外组织或器官时，可作为条件性致病菌而引起肠道外感染。
有些血清型可引起肠道感染，已知的引起致病性大肠艾希氏菌有四类，即产肠毒素大肠艾希氏菌、出血性大肠艾希氏菌、肠道侵袭性大肠艾希氏菌和肠道致病性大肠艾希氏菌，后者主要引起新生儿的腹泻。
带菌的牛和猪是传播本菌引起食物中毒的重要原因，人的带菌亦可污染食品，引起中毒。
材料3.1 菌种和食品检样产不耐热肠毒素（LT）和产耐热肠毒素（ST）大肠艾希氏菌标准菌株、食品检样。
3.2 试剂和培养基多粘菌素B纸片；0.1％硫椰汞溶液；2％伊文思蓝溶液；革兰氏染色液。
乳糖胆盐发酵管；营养肉汤；肠道茵增菌肉汤；麦康凯琼脂；伊红美蓝琼脂(EMB)；三糖铁琼脂(TSI)；克氏双糖铁琼脂(KI)；糖发形管(乳糖、鼠李糖、木糖和甘露醇)；赖氨酸脱羧酶试验培养基；尿素琼脂(pH7．2)；氰化钾培养基；蛋白陈水、靛基质试剂；半固体琼脂；Honda氏产毒肉汤；E1ek氏培养基；氧化酶试剂。
3.3 动物和血清小白鼠：1日龄一4日龄；致病性大肠艾希氏茵诊断血清；侵袭性大肠艾希氏菌诊断血清；产肠毒素大肠艾希氏菌诊断血清；出血性大肠艾希氏茵诊断血清；产肠毒素大肠艾希氏茵LT和ST酶标诊断试剂盒；抗LT抗毒素。
3.3 设备与材料天平；均质器或乳钵；温箱(36土1)℃、42℃；水浴：显微镜；离心机；酶标仪；细菌浓度比浊管；灭菌广口瓶；灭菌三角烧瓶；灭菌平皿；灭菌试管；灭菌吸管；橡胶乳头；载玻片；酒精灯；灭茵金属匙或玻璃棒；接种棒、镍铬丝；)接种棒、镍铬丝；试管架、试管篓；冰箱；注射器；灭菌的刀子、剪子、镊子；硝酸纤维素滤膜。
