杂草抗药性检测技术
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25%环吡·异丙隆可分散油悬浮剂防除麦田抗性罔草药效试验1. 引言1.1 研究背景麦田抗性罔草是一种常见的杂草,对小麦田的生长产生严重威胁,严重影响小麦的产量和质量。
传统的除草方法往往效果有限,而且容易导致抗药性的产生,使得杂草的控制变得更加困难。
因此,寻求一种高效、低毒、对环境友好的除草方法显得尤为重要。
目前,环吡·异丙隆可分散油悬浮剂被广泛应用于杂草除草领域,其具有独特的除草机制,可以有效控制各种抗性杂草的生长。
然而,对于麦田抗性罔草的防治效果尚未有系统的研究报道。
因此,本研究旨在通过对环吡·异丙隆可分散油悬浮剂在麦田抗性罔草上的药效试验,评估其在小麦田中的应用效果,为小麦田的杂草防治提供科学依据。
1.2 研究目的本试验的目的是评估25%环吡·异丙隆可分散油悬浮剂在防除麦田抗性罔草方面的药效。
随着农药使用量的增加,麦田抗性罔草对常规除草剂的抗药性不断增强,给麦田的管理和农作物的生长带来了严重威胁。
因此,寻找高效、低毒、环保的除草剂对于麦田抗性罔草的防治至关重要。
本研究旨在通过对25%环吡·异丙隆可分散油悬浮剂的试验,探索其在防除麦田抗性罔草中的效果和可行性,为解决麦田抗性罔草问题提供科学依据和技术支持。
希望通过本次研究的实验结果,为农业生产提供更加有效的除草方案,保障农作物的健康生长,增加农民的收入,促进农业的可持续发展。
2. 正文2.1 试验设计试验设计是本次研究的关键部分,其设计的科学性和合理性对于研究结果的可信度和有效性至关重要。
本次试验设计主要包括草田抗性罔草的选择、试验区域的确定、试验方案的制定以及数据收集和分析方法的确定等几个方面。
草田抗性罔草的选择是本次试验设计的第一步。
在选择草田抗性罔草时,需要考虑其生长环境、抗性程度以及与所选药剂的适配性等因素,以确保试验结果的可靠性和代表性。
确定试验区域是另一个重要的步骤。
试验区域的选择需要考虑当地的土壤条件、气候特点以及麦田抗性罔草的分布情况,以确保试验的代表性和可比性。
牛筋草对百草枯、草甘膦和草铵膦的抗药性水平测定胡芳;董慧荣;沈雪峰;刘俊;魏吉平;陈勇【摘要】[目的]本文通过比较分析牛筋草对百草枯、草甘膦和草铵膦的抗药性指数,旨在筛选出对3种除草剂产生多抗性的牛筋草种群,为杂草抗药性机制的深入研究及其合理治理奠定基础.[方法]以采集于广东省不同地区的13个牛筋草种群为材料,采用整株生物测定法对牛筋草种群进行百草枯和草铵膦抗药性水平测定,并采用培养皿法和莽草酸含量法对牛筋草种群进行草甘膦抗药性水平测定.[结果]①采集的13个样品对这3种除草剂均存在不同程度的抗药性,其中CZ、PY06、QY01、QY05、MZ02和NX种群存在对百草枯和草甘膦产生多抗性的可能;②C Z和PY06种群存在对草甘膦和草铵膦产生多抗性的可能;③CZ、PY06和ZQ02种群存在对百草枯和草铵膦产生多抗性的可能;④CZ和PY06种群存在对百草枯、草甘膦和草铵膦产生多抗性的可能.[结论]发现了对百草桔、草甘膦和草铵膦均产生抗药性的牛筋草种群.%[Objective] This study was to select out the multiple resistance Eleusine indica populations to paraquat,glyphosate and glufosinate by investigating the resistance level of E.indica to the three kinds of herbicides,laying a foundation for the research of weed resistance mechanism and the reasonable management.[Method] The resistance level of 13 E.indica populations in different areas of Guangdong prov ince were investigated by using the method of whole-plant bioassay for paraquat and glufosinate,seed bioassay and shikimic acid content for glyphosate.[Result] (i) CZ,PY06,QY01,QY05,MZ02 and NX populations had the potential of multiple resistance to paraquat and glyphosate;(ii) CZ and PY06 populations had the potential of multiple resistance to glyphosateand glufosinate;(iii) CZ,PY06 and ZQ02 populations had the potential of multiple resistance to paraquat and glufosinate;(iv)However,CZ and PY06 populations had the potential of multiple resistance toparaquat,glyphosate and glufosinate.[Conclution] It was found that the Eleusine indica populations had the potential of multiple resistance to paraquat,glyphosate and glufosinate.【期刊名称】《西南农业学报》【年(卷),期】2018(031)002【总页数】7页(P335-341)【关键词】牛筋草;百草枯;草甘膦;草铵膦;抗药性【作者】胡芳;董慧荣;沈雪峰;刘俊;魏吉平;陈勇【作者单位】华南农业大学农学院,广东广州510642;华南农业大学农学院,广东广州510642;华南农业大学农学院,广东广州510642;华南农业大学农学院,广东广州510642;华南农业大学农学院,广东广州510642;华南农业大学农学院,广东广州510642【正文语种】中文【中图分类】S451;S482.4【研究意义】牛筋草(Eleusine indica L.)是禾本科单子叶植物,多生长于旱生作物田、果园或路边,生命力较强,表现出极大的竞争优势,已被列为世界十大恶性杂草之一[1-2]。
《转基因抗虫抗除草剂棉花生存竞争能力检测技术评价指标》转基因技术是现代生物技术的重要组成部分,通过对植物基因进行改造,使其具有抗虫抗除草能力。
随着转基因棉花的广泛种植和应用,对其竞争能力的检测成为了研究的热点。
本文将讨论转基因棉花的竞争能力评价指标,并介绍其技术评价方法。
首先,转基因棉花的竞争能力是指其在与其他植物共生生长的过程中,能够更好地抢占资源、生长更旺盛以及获得更高的产量。
因此,评价转基因棉花的竞争能力,需要考虑以下几个指标:1.抗虫能力:转基因棉花通过外源基因的插入,使其具有抗虫能力,能够有效抵御常见的害虫。
抗虫能力的评估可以通过对棉花种植地的害虫密度、受虫害程度、药剂使用量等进行监测和统计。
与传统棉花相比,抗虫基因插入的转基因棉花不需要频繁地喷洒农药,可以减少农药对环境的污染,并提高棉花的竞争能力。
2.抗除草能力:转基因棉花不仅具有抗虫能力,还可通过植入抗除草基因,使棉花对一些常见的除草剂具有耐受性。
抗除草基因的插入使得转基因棉花不仅能够抵御虫害,还能有效抑制杂草生长,提高棉花的竞争力。
抗除草能力的评估可以通过对棉田中杂草发生率、杂草的生长程度等进行监测和统计。
3.生长速度和产量:转基因棉花还可通过植入生长促进基因,使其生长速度更快,从而增加产量。
生长速度和产量是衡量棉花竞争能力的重要指标。
可以通过对棉花生长周期、高度、株高等进行监测和统计,来评估转基因棉花的生长速度和产量。
技术评价指标的选择应该根据实际情况和研究目的进行确定。
可以通过实验设计和数据分析来评价转基因棉花的竞争能力。
例如,可以设计野外田间试验,将转基因棉花与传统棉花进行对比,观察其抗虫抗除草效果、生长速度和产量等指标。
同时,还可以选择一些经典的指标,如相对竞争力指数(RCI)、生长指数等来评估转基因棉花的竞争能力。
总之,转基因棉花的竞争能力是通过对其抗虫抗除草能力、生长速度和产量等指标进行评估来确定的。
通过选择合适的技术评价指标和方法,可以对转基因棉花的竞争能力进行科学客观的评估。
才直紛依步 2021,47(1):233 -240Plant Protection技术与应用Technology & Application玉米田两种阔叶杂草蔡及苍耳对草甘麟的敏感性测定贾芳,崔海兰,李香菊,于惠林**收稿日期:2019 - 11 -01 修订日期:2019-12-03基金项目:转基因生物新品种培育重大专项(2016ZX08012004)* 通信作者 E-mail : hlyu@ippcaas. cn(中国农业科学院植物保护研究所,北京100193)摘要苍耳Xanthium strumarium J- Chenopodium, album 是常见的两种阔叶杂草,其在玉米田发生严重,影响了 玉米的生长和产量。
本文利用整株生物测定法对我国东北及黄淮海玉米产区采集到的苍耳及藜种群对草甘瞬的敏感性进行了测定。
种子室内培养至5〜6叶期,喷施草甘瞬后14 d 称量鲜重,计算抑制杂草种群50%个体生长的草 甘瞬剂量(GRso).草甘瞬对10个苍耳种群GRso 在54. 87-249. 75 g/hm 2,平均值为(111. 53±20. 02)g/hm 2,均低于450 g/hm 2 (1/2倍推荐剂量),表明10个苍耳种群均对草甘瞬敏感;草甘瞬对33个藜种群GR 。
范围在97. 05~920. 86 g/hm 2,平均值为(313. 88+24. 70)g/hm 2,93%的种群GRso 低于450 g/hm 2,表明绝大多数藜种群对草甘瞬比较敏感,仅发现一个藜种群GRs 。
大于900 g/hm 2(田间推荐剂量),表明其对草甘瞬具有一定耐受性。
关键词杂草;玉米;草甘瞬;敏感性中图分类号:S 451. 22 文献标识码:B DOI : 10.16688/j. zwbh. 2019596Sensitivity of two broadleaf weeds Xanthium strumarium and Chenopodium album to glyphosate in corn fieldsJIA Fang, CUI Hailan, LI Xiangju, YU Huilin *{Institute of Plant Protection , Chinese Academy of A gricultural Sciences , Beijing 100193, China )Abstract Xanthium strumarium and Chenopodium album are two common broad-leaf weeds, and theiroccurrence seriously affected corn growth and reduce yield in corn fields. In our study the whole plant bioassay was used to determine the sensitivity to glyphosate of ten populations of X, strumarium and 33 populations ofC. album collected from two major corn producing areas, Northern China and Huanghuaihai. The seeds of twoweeds were sowed in greenhouse, and the glyphosate was applied at the 5-6 leaf stage of the weeds. 14 days afterglyphosate application, fresh weight of plants was weighted and GRso values were calculated, respectively. GRso values of glyphosate to ten populations of X. strumarium ranged from 54. 87 to 249. 75 g/hm 2 with the averagevalue of (111. 53±20.02)g/hm 2, which were lower than 450 g/hm 2 (1/2 recommended dose), showing that all populations of X. strumarium were sensitive to glyphosate. Among C. album populations, GRso values rangedfrom 97.05 to 920.86 g/hm 2 and its average value was (313.88+24.70)g/hm 2. The GRsovalues of 93% C. albumpopulations were less than 450 g/hm 2, indicated that the vast majority of C. album populations were sensitive toglyphosate. And only one population of C. album showed a GRso value of above 900 g/hm 2 (recommended dose),indicating that it had a certain degree of tolerance to glyphosate.Key words weed ; corn ; glyphosate ; sensitivity玉米是重要的粮食、经济和饲料作物,在我国 生与危害是制约玉米高产的重要因素玉米田农业生产和国民经济中占据重要地位。
全国农业有害生物抗药性监测报告全国农技中心联合科研、教学系统有关单位,继续组织北京、河北、山西等25个省(区、市)的100个抗药性监测点,分别对稻飞虱、水稻二化螟、麦蚜、小麦赤霉病、烟粉虱、稻(麦)田杂草等7种一类病虫害、14种二类病虫害的抗药性进行了监测。
本年度系统测定田间常用51个农药品种(监测对象、涉及农药品种及抗药性分级标准分别见表1—表3),有关病虫草种类及其涉及的农药品种抗药性评估结果如下。
表1全国农业有害生物抗药性监测对象、农药品种及监测方法表2害虫抗药性水平的分级标准表3杂草抗药性水平的分级标准1 水稻有害生物的抗药性状况1.1 褐飞虱1.1.1 监测结果1.1.1.1 对烟碱型乙酰胆碱受体调节剂抗性目前监测地区褐飞虱种群对第一代新烟碱类药剂吡虫啉处于高水平抗性(抗性倍数大于2000倍),对烯啶虫胺处于低至中等水平抗性(抗性倍数5.1—23倍),对第二代新烟碱类药剂噻虫嗪处于高水平抗性(抗性倍数大于700倍),对第三代新烟碱类药剂呋虫胺处于中等至高水平抗性(抗性倍数47—178倍)。
对砜亚胺类药剂氟啶虫胺腈处于低至中等水平抗性(抗性倍数6.6—32倍),对介离子类药剂三氟苯嘧啶处于敏感至中等水平抗性(抗性倍数2.1—13倍),其中监测到江苏宿迁种群对三氟苯嘧啶产生中等水平抗性,抗性倍数为13倍。
与2020年监测结果相比,褐飞虱对三氟苯嘧啶抗性呈上升趋势,首次监测到有中等水平抗性种群,但对其他新烟碱类药剂抗性倍数总体变化不大。
1.1.1.2 对昆虫生长调节剂类药剂抗性目前监测地区褐飞虱种群对昆虫生长调节剂类药剂噻嗪酮处于高水平抗性(抗性倍数大于1000倍)。
与2020年监测结果相比,褐飞虱对噻嗪酮抗性倍数总体变化不大。
1.1.1.3 对有机磷类药剂抗性目前监测地区褐飞虱种群对有机磷类药剂毒死蜱处于中等水平抗性(抗性倍数21—89倍)。
与2020年监测结果相比,褐飞虱对毒死蜱抗性倍数总体变化不大。
几种杂草对硝磺草酮和莠去津敏感性测定发布时间:2021-05-21T07:45:13.655Z 来源:《中国科技人才》2021年第8期作者:李振明[导读] 玉米田杂草有22科38属43种,其中粒状杂草主要有蟹草,鹅草,草,狗尾草,野生高粱等。
山东滨农科技有限公司山东滨州 256600摘要:[目的]确定全省不同地区春玉米田中白麻草,麸皮草和Communina communis对硝磺草酮和莠去津的敏感性水平,为敏感性水平的确定和合理使用提供参考。
[方法]采用全株生物学试验方法,测定春玉米田中苘麻,麸皮草和天花对硝磺草酮和莠去津的敏感性。
[结果]苘麻,麸皮草和鸭跖草对硝磺草酮的抗性指数范围为2.7?10.0、1.7-12.8、2.4-3.9,其中10个种群中绒毛9个种群,麸皮草7个种群和Commelina 9个种群社区对硝磺草酮不敏感,最不敏感的是从特定村庄收集的KJ-9种群,抵抗指数为12.8。
糠稷草和白花草对阿特拉津的阿巴西雷酮抗性指数分别为1.7至4.0、2.1至4.1和2.5至5.5。
在10个种群中,马兜铃6种群,杂草9种群和软草9种群。
鸭跖草人口对阿特拉津不敏感,从一个特定村庄收集的YZC-10人口最不敏感,抵抗指数为5.5。
[结论]苘麻,麸皮草和鸭跖草对硝磺草酮和莠去津的敏感性差异较大,且大多数已产生抗药性。
util鱼的抵抗力处于中低水平,而糠壳则处于低水平。
在较高的抗性水平下,鸭跖草的抗性水平较低。
引言玉米田杂草有22科38属43种,其中粒状杂草主要有蟹草,鹅草,草,狗尾草,野生高粱等。
阔叶杂草主要包括马齿苋和反向分支,iron 菜,藜麦,多边形,苘麻,鸡尾酒,野西瓜,开花植物等。
由于全国各地的地理环境和气候影响差异很大,因此玉米田中杂草的种类和分布也有所不同。
在相关报道中,我国的玉米田杂草分为六个区域:北部春玉米区,黄淮海夏季玉米区,长江流域玉米区和华南地区。
苘麻,谷壳和日常花是北部玉米田的常见杂草。
百草枯抗性杂草的田间监测试验研究王敏;袁震;石磊;周建平;周益民【摘要】为了解宜兴地区杂草对百草枯抗性的发生情况,提高抗性治理水平,特进行了杂草对百草枯抗性田间监测试验,结果表明,200 g/L百草枯水剂仍然是防除田埂、路边和茶园一年生和多年生杂草较为理想的除草剂.防除以一年生为主的杂草,以每667 m2用200 g/L百草枯水剂200mL为宜;防除以多年生为主的杂草,以每667m2用200 g/L百草枯水剂250 mL为好.掌握在杂草生长旺盛期用药,每667m2对水30 kg均匀喷雾.【期刊名称】《上海农业科技》【年(卷),期】2011(000)003【总页数】2页(P130-131)【关键词】百草枯;抗性;杂草【作者】王敏;袁震;石磊;周建平;周益民【作者单位】江苏省宜兴市农林局,214200;江苏省宜兴市农林局,214200;江苏省宜兴市农林局,214200;江苏省宜兴市农林局,214200;江苏省宜兴市农林局,214200【正文语种】中文按省药检所要求,用江苏红太阳集团研制和开发的百草枯灭生性除草剂进行田间药效小区试验,本试验以田埂、路边和茶园杂草为防除基本目标,进行杂草对百草枯抗性监测,旨在调查本地区杂草对百草枯抗性的发生情况,以期通过试验和监测,明确其抗性水平,提高抗性治理措施,为该除草剂的推广应用提供技术依据。
1 材料与方法1.1 试验地域及对象试验地域为茶园、田埂、路边。
供试靶标为一年生杂草、多年生杂草。
试验药剂为200g/升百草枯水剂(江苏红太阳集团)。
1.2 试验地概况试验选择在宜兴市芳桥镇金兰村(市病虫观察点)和丁蜀镇兰剑茶场实施。
金兰村土质为黄泥土、pH值6.1,路边田埂主要杂草有早熟禾、棒头草、狗芽根、繁缕、一年蓬、野胡萝卜、野燕麦、菵草、牛筋草、泽漆、四叶草、小巢菜、野老鹤草、猪殃殃、婆婆纳等,施药时杂草高度为10cm左右,个别杂草高度达20cm,杂草平均覆盖度为95%左右。
杂草抗(耐)药性检测技术1. 1 整株水平测定整株植物测定法。
一般所使用的方法为Ryan法(1970) , 该法简便易行。
具体方法为: 首先从怀疑有抗药性杂草生物型和从未使用过除草剂的田块采集杂草种子, 按小区大田播种或温室盆栽, 在播后芽前或苗后进行常规施药处理。
药剂设置不同浓度梯度,通过测定不同剂量下杂草的出苗率、死亡率、叶面积、鲜重、干重等指标, 与对照比较, 以确定抗药性水平。
盆栽试验能够提供杂草交互抗性或多抗性方面的信息, 可以指导轮换用药,但是这种方法无法确定抗药性产生的原因和机理等问题, 且费时长, 但技术简单易行, 大批量植株可同时进行, 且重复性较好, 因而是抗药性检测的常用方法。
幼苗检测法。
具体方法是: 在玻璃试管中放置湿润的滤纸, 把种子摆放在滤纸上, 然后将试管放到盛有营养液( 不含药剂) 的培养皿中, 通过滤纸吸取营养液, 种子在滤纸上发芽,一段时间后, 把带根(长3~5mm) 的种子转移到封闭的瓶中滤纸上, 将不同浓度的药剂溶液加到瓶中, 在一定条件下培养, 通过测量芽长或胚芽鞘的长度测定杂草的抗药性水平。
1. 2 器官或组织水平测定根据杂草对除草剂产生的局部反应, 抗药性杂草往往会在组织或器官的形态结构上表现出差异性, 测定这种差异便可以鉴定抗药性。
培养皿种子检测法。
这种方法是把催芽的杂草种子放在加入药剂的琼脂平面或浸药的滤纸上培养, 通过测定发芽率、主根长、鲜重或干重等指标鉴定抗药性。
此法相对快速、廉价、可靠, 尤其是对大量杂草种群的常规抗药性检测非常重要。
如, Letouze A等( 1997) 、MossSR等( 1999) 建立的用以检测禾本科杂草抗药性的方法。
分蘖检测法。
把种子种植在粗沙和泥炭( 体积之比1︰3) 的混合物中, 在温室内培养。
选取3叶期( 第3叶未充分展开) 正生长的分蘖,小心地除去根, 把分蘖放在高浓度的药剂溶液中, 一段时间后, 通过比较第3叶坏死程度来评价杂草的抗药性水平。
叶圆片浸渍技术测定法。
首先将健康的叶片用打孔器打取相同面积的叶圆片, 将叶圆片浸渍在含有一定浓度除草剂的磷酸缓冲溶液的试管中, 抽真空, 小圆片下沉至试管底部, 解除真空, 加入少量NaHCO3溶液, 照光, 对除草剂不敏感或产生抗药性的生物型, 光合作用未被抑制, 组织间产生足够多的O2, 叶圆片上浮;而对除草剂敏感的生物型, 光合作用受抑制,不能产生足够多的O2, 圆片仍沉在试管底部。
此法可鉴定对抑制光合作用的除草剂产生抗性的生物型。
花粉粒萌发法。
按分蘖检测法所示种植杂草。
剪取具花药的刚从颖片抽出的穗,转移到盛水的烧杯中, 放在距冷光20cm的地方,诱导释放花粉, 把花粉震落到0.25%含系列浓度药剂的固体琼脂培养基上。
一定条件下培养一段时间后, 用显微镜(200倍) 观察花粉萌发情况。
萌发花粉计数以花粉管长度至少达半个花粉粒长度为准。
该法可对田间正在生长的杂草实现快速抗药性检测。
茎切面再生苗测定法。
温室或者大田常规处理, 一般采用盆栽法, 当杂草生长至3叶1心期, 用一定剂量的除草剂茎叶处理, 一定时间后( 视除草剂吸收情况) 沿第2叶部位切除上部植株, 通过测定再生的茎段长度检测杂草抗药性。
此法可用于禾本科杂草对内吸传导型除草剂的抗性检测鉴定。
此外, 切片、压片技术结合电镜技术, 通过观察形态学变化亦可检测鉴定除草剂抗性生物型, 常用组织的石蜡切片、根尖、茎尖、花粉母细胞的压片等。
1. 3 细胞或细胞器水平测定叶片叶绿素荧光测定法。
荧光反应被称为光合作用的探针。
当用光合作用抑制剂, 如取代脲类、三氮苯类或脲嘧啶类, 处理植物叶片时, 光合作用抑制剂阻断电子由QA到QB的传递, 光系统II的还原端被中断, 捕获的光能不能往下传递, 叶绿素a处于激发态, 以荧光的方式释放能量, 通过测定叶绿素a发射荧光的强弱可以检测抗药性。
方法有Tucruet、Gasguea 氏法和Ahrens 法。
Tucruet、Gasguea氏法是在清晨采取植物幼叶, 黑暗条件下浸于除草剂水溶液中, 2h后取出, 用短波光照射叶片背面, 测定叶片发出的荧光强度;Ahrens法是从清晨采取的幼叶上切取叶圆片, 光照的条件下悬浮于去离子水20~60min, 取出并吸干上面的水, 正面朝上放在黑布上, 黑暗条件下测定其荧光强度, 后将叶圆片面朝下, 放入含有表面活性剂和除草剂的溶液中, 照光后测定荧光强度。
离体叶绿体测定技术。
光合作用抑制剂抗性生物型的类囊体膜上的光系统II 组分发生了改变, 导致电子传递的变化, 从而造成叶绿体的光还原反应能力下降, 通过测定希尔反应或荧光反应, 可以检测杂草的抗药性。
酶解法提取叶绿体。
希尔反应测定技术是将提取的叶绿体放入含有氧化剂( DCPIC) 的希尔反应介质中,叶绿体在光照下放出氧气, 并将氧化剂还原。
荧光反应测定技术是通过测定叶片中荧光强度来鉴定光系统II的功能。
叶绿体荧光测定须在黑暗中进行。
用蓝色闪光照射叶绿体悬浮液, 叶绿素发射荧光, 用光电极管测定发射的荧光。
此外, 还可以通过测定叶绿素含量的变化检测抗药性。
光合速率测定法。
光合作用抑制剂杂草抗性生物型在处理后其光合速率变化不大, 而敏感生物型的则受到严重抑制。
通过测定光合速率的诱导变化研究光合作用抑制剂对植物或叶片的影响, 可以检测鉴定杂草抗药性, 主要方法有: 红外线CO2测定法、氧电极测定法、pH比色法、气流测定法、改进的干重测定法和半叶法等。
呼吸速率测定法。
抑制呼吸作用的除草剂不多, 如五氯酚钠、二硝酚、二乐酚、碘苯腈、溴苯腈、敌稗、氯苯胺等。
测定方法可参照光合速率测定法。
1. 4 分子水平测定对于作用靶标已明确的除草剂, 可通过测定靶标酶或与靶标酶催化的反应存在密切关联的酶的活性差异或某些代谢物质量的差异判断杂草抗药性; 对于已经获知编码基因的除草剂靶标酶, 可使用DNA分析技术判断杂草的抗药性。
通过测定ALS ( 乙酰乳酸合成酶) 的活性判断杂草对ALS抑制剂的抗性, 测定ACCase ( 乙酰辅酶A羧化酶) 的活性判断杂草对ACCase抑制剂的抗性, 内野彰根建立了通过测定ALS蓄积量判断母草属等水田杂草对磺酰脲类除草剂抗性的快速鉴定方法。
叶圆片亚硝酸还原酶活性测定法。
抑制光合作用的除草剂能导致植物绿色组织中亚硝酸还原酶的活性下降, 亚硝酸浓度增加, 同时还使光系统II中的电子载体部位受到抑制, 根据组织中亚硝酸还原酶的活性可鉴定抑制光合作用的除草剂抗性生物型。
酶联免疫测定( ELISA) 法和DNA分析技术。
酶联免疫法酶联免疫法( enzyme -linked immunosorbent assay,ELISA) 始于20 世纪70年代,是把抗原或抗体在不损坏其免疫活性的条件下预先结合到某种固相载体表面。
测定时,将受检样品和酶标抗原或抗体按一定程序与结合在固相载体上的抗原或抗体起反应形成抗原或抗体复合物。
反应终止时,固相载体上酶标抗原或抗体被结合,其量与标本中待检抗体或抗原的量成一定比例。
经洗涤去除反应液中其他物质,加入酶反应底物后,底物被固相载体上的酶催化变为有色产物,最后通过定性或定量分析有色产物量即可确定样品中待测物质含量。
2002 年Reade 等建立了田间酶联免疫测定看麦娘谷胱甘肽-S -转移酶( GSTs) 丰度检测看麦娘对绿麦隆、异丙隆和精口恶唑禾草灵抗药性的技术。
1.4.2 DNA( 或RNA) 分析法对于已经获知编码基因的除草剂靶标酶,可使用DNA( 或RNA) 分析方法判断杂草的抗药性。
该法通常先提取基因组总DNA( 或RNA) ,再进行PCR 扩增,然后对克隆的PCR 产物进行测序,通过序列同源性分析便可检测杂草的抗药性。
2008 年Corbett 等利用PCR -RFLP方法成功鉴定了抗性苋属杂草体内乙酰羟基酸合成酶( AHAS) 的 4 处突变位点。
2009 年卢宗志等采用PCR 技术,分别对抗药性和敏感性雨久花生物型的ALS 基因片段进行扩增和基因克隆,并对获得的DNA 序列片断进行测序比对,与敏感性雨久花生物型ALS 相比,抗药性雨久花生物型的ALS 基因共有 3 处发生突变。
运用ELISA法制备与杂草抗药性有关的某些关键酶的单克隆抗体, 通过酶的级联放大作用,可以专一、灵敏、微量、简便、快速地检测杂草的抗药性。
运用RAPD指纹图谱的变化检测杂草的抗药性变异体。
随着杂草抗药性机理研究的不断深入, 这些技术已越来越多地应用于快速检测体系中。
趋势:一套抗药性快速检测鉴定体系是发展的趋势。
培养皿种子检测法的改进。
A Cirujeda等(2001) 建立的通过在琼脂培养基中加入赤霉酸GA3打破种子休眠快速检测鉴定虞美人对苯磺隆抗性的方法。
高通量检测鉴定。
高效活体鉴定法:在多孔板的每个微孔中注入琼脂糖培养基( 含某一剂量药剂) , 将杂草种子放入微孔中。
测试板封好放入生化培养箱, 在合适的条件下培养7d,然后对植物的化学损伤和症状进行评价。
离体细胞悬浮培养鉴定:检测时, 药剂溶于丙酮后注入试管中, 再加入对数期的细胞悬液, 试管放在400r/min摇床上于25℃黑暗中培养8d, 然后用微电极测培养基的电导率, 电导率的减少与细胞生长量的增加成反比, 结果以相对于对照组的生长抑制率表示。
离体酶鉴定法: 目前发现的除草剂靶标酶主要有乙酰乳酸合成酶(Acetolactatesynthase,AIS)、乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl-CoAcarboxylase,ACCase)、原卟啉原氧化酶(Protox)、谷氨酰胺合成酶(Glutamine Synthase.GS)、5- 烯醇丙酮酸莽草酸-3- 磷酸合成酶(EPSPS) 等十几种。
基于这些靶标酶建立起各种特异的鉴定模型, 利用比色法、放射性标记法等检测手段评价测试系统的反应。
免疫鉴定法: 这种方法最早开始于20世纪60年代, 其原理是利用了活的生物体对外来物质的自然反应, 即抗原- 抗体反应。
有些杂草抗药性是由靶标酶编码基因的点突变引起的, 检测这些突变位点就可以检测杂草的抗药性, 结合PCR技术可以实现大批量杂草的快速抗药性检测。
这方面的方法有: 专一性等位基因PCR扩增、PCR—单链构象多态性、固相微测序反应、限制性片段长度多态性、PCR—寡核苷酸探针斑点杂交、随机扩增多态性DNA、Northern斑点杂交、固定化人工膜—高效液相色谱等。
抗草甘膦杂草的鉴定方法2.1整株水平测定2.1.1整株植物测定法整株植物测定法简单易行,重复性好,是检测杂草对除草剂是否产生抗性最为普遍的方法。
将疑似对草甘膦产生抗性的杂草种子盆栽,在温室设置适宜杂草生长的条件培养。
禾本科杂草一般培养到3叶期,阔叶及莎草科杂草根据杂草本身条件而定,培养到适合称取生物量为宜。