与志贺菌和大肠埃希菌诊断血清呈交叉凝集反应细菌的分离和鉴定
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与志贺菌和大肠埃希菌诊断血清呈交叉凝集反应细菌的分离和鉴定
[摘要] 目的了解食品中能与志贺菌、大肠埃希菌O157发生交叉凝集的细菌, 为防止误诊提供参考。
方法采用染色形态鉴别、血清学及生化等方法进行检测。
结果对食品风险监测205件样品中检出2种( 3株)肠道杆菌能与志贺菌、大肠埃希菌O157诊断血清交叉凝集。
结论肠杆菌科、弧菌科某些种属细菌可携带与志贺菌、大肠埃希菌O157相同或相关抗原，故在鉴定这些杆菌时除依血清学外, 还应加用生化试验等检测作出最后判定。
为建立食品安全预警体系，制定更有效的食品安全标准，实施食品风险监测意义重大。
南充市疾病控制中心从2011-01/2012-06参与食品风险监测微生物检验部分，完成检品205件。
其中对肠道致病菌：志贺菌、大肠埃希菌O157的监测中，发现2种（3株）细菌与之有抗原交叉凝集的现象，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 菌株来源来自2011-01/2012-06南充市食品风险监测微生物监测样品。
1.2 培养基及诊断试剂干燥粉剂试剂购自青岛海博科技生物技术公司。
革兰阴性细菌鉴定卡（VITEK2 GN Test Kit）购自美国bioMerieux inc 。
大肠埃希菌O157诊断血清、志贺菌多价诊断血清购自宁波天润生物药业有限公司。
常规培养基由本实验室自配。
1.3检验方法按照《2011、2012年四川省食品风险监测——微生物监测部分工作手册》执行。
1.3.1 志贺菌取检样25g至225mlGN增菌液中，36℃培养18h，取增菌液划线接种XLD 和MAC琼脂平板，36℃培养24h，挑取平板上可疑菌落接种TSI琼脂，36℃培养24h，再接种至普通营养琼脂平板，并做志贺多价血清凝集实验。
最后用VITEK2全自动细菌生化鉴定仪作生化鉴定。
1.3.2 大肠埃希菌O157 取检样25g至225ml改良EC肉汤（mEC-n），36℃培养24h，分别划线接种于山梨醇麦康凯（CT-SMAC）平板和改良CHROMAagarO157显色琼脂平板，36℃培养24h，挑取可疑菌落接种TSI琼脂，36℃培养24h，再接种至普通营养琼脂平板，并作大肠埃希菌O157诊断血清凝集实验，最后用VITEK2全自动细菌生化鉴定仪作生化鉴定。
2 结果
2.1 菌落形态及染色结果
2.1.1 志贺菌样品NC2011031在XLD琼脂平板上无色，半透明，湿润，圆形；在MAC 琼脂平板上无色，半透明，光滑湿润。
革兰染色均为革兰阴性杆菌，无芽孢（表1）。
2.1.2 大肠埃希菌O157 样品NC2011042、NC2012015在CT-SMAC琼脂平板上为不发酵山梨醇的圆形、光滑、较小无色菌落；在改良CHROMAagarO157显色琼脂平板上为圆形、较小菌落，中心呈淡紫色。
革兰染色均革兰阴性杆菌，无芽孢（表1）。
2.2 血清学实验挑取NC2011031营养琼脂平板上菌落用志贺氏菌多价血清做玻片凝集实验，同时做生理盐水对照实验。
结果++++，同时盐水不凝集。
挑取NC2011042、NC2012015营养琼脂平板菌落用大肠埃希菌O157诊断血清做玻片凝集，同时做生理盐水对照实验，结果++++，同时生理盐水不凝集（表2）。
2.3 生化结果全自动生化鉴定结果见表2。
2.4 挑取NC2011031、NC2012015营养琼脂平板上单个菌落制成0.6比浊浓度的菌液上VITEK2全自动细菌生化鉴定仪。
结果显示：NC2011031 98.5%泛菌属；NC2012015 99%泛菌属；NC2011042 97.5%气单胞菌属。
3 讨论
志贺菌、大肠埃希菌O157是肠道致病菌中很重要的2种。
作为重要的监测对象之一，对这种特定血清型致病菌的检测, 首先必须通过血清学试验测定其细胞表面的菌体抗原，但在监
测中亦发现部分肠道菌与上述细菌的诊断血清存在交叉凝集现象，Lior 等报导[ 1~3]O157大肠杆菌与赫曼氏埃希菌、小肠结肠炎耶菌( O9血清型) 、N群沙门菌, 以及有些种的布鲁菌之间存在抗原交叉。
这些交叉反应在上述细菌感染人和动物的血清诊断中可能具有重要意义[ 4]。
在工作中亦发现泛菌属同时与志贺菌、大肠埃希菌O157在鉴别培养基上菌落形态相近，而且同时都有血清交叉凝集现象；而气单胞菌属则与大肠埃希菌O157在鉴别培养基上菌落形态相近，同时有血清交叉凝集现象。
泛菌属又名成团肠杆菌或草生欧文菌，细胞呈直杆状，大多数菌株产生黄色素，兼性厌氧，具有代谢和发酵类型的化能异养菌；可分离自植物表面、种子、土壤和水，也可从动物和人的伤口、血和尿中分离到[5]；是人的条件致病菌。
检测发现菌株NC2011031在形态学上和志贺菌一致并且和志贺菌诊断血清强凝集，但是全自动生化鉴定却是泛菌属；同样菌株NC2012015在形态学上和大肠埃希菌O157一致并且和大肠埃希菌O157诊断血清强凝集，但是全自动生化鉴定却是泛菌属；这在同类文献中少有报道，也就是说同1种细菌泛菌属可以和不同的肠道致病菌有交叉凝集现象，这在今后的工作中要足够重视。
气单胞菌属是革兰阴性、无芽孢、兼性厌氧杆菌，属弧菌科，这些细菌与肠杆菌科菌有很多相似之处；该属细菌又分为2群，仅由1个种组成的嗜冷无动力产气单胞菌群以及专性鱼病原菌杀鲑气单胞菌群。
检测发现其与大肠埃希菌O157诊断血清有交叉凝集现象；这在其他文献中也有报道[6]。
因此，综合其他文献报告[7~9]，认为肠杆菌科细菌属种繁多，其不同属种间细菌抗原有部分相同，甚至少数种完全相同，属间抗原的关联常与该抗原的相似或相同的糖类组成有关。
因此，细菌与诊断血清间交叉凝集反应现象甚为普遍[10]。
所以在日常鉴定工作中一定要注意这种现象，应用正确的方法鉴定肠杆菌科细菌尤为重要,对于肠道病原菌的报告一定要认真仔细．要严格按照鉴定程序进行，因肠杆菌科不同属种细菌间抗原存在常见的交叉关系, 单纯依赖形态学和血清学凝集反应就做出诊断极易产生错误的结论。
生化反应是鉴定肠道细菌不可缺少的步骤，血清鉴定结论必须有生化结果支持，而不能只通过形态和血清凝集试验形成结论。
当生化结果和血清凝集都不能确定结果时，甚至要通过PCR来确定细菌种类。
