乌药中异喹啉生物碱去甲异波尔定的含量测定
- 格式：pdf
- 大小：217.11 KB
- 文档页数：3
溶剂 ( 015%盐酸溶液 、1%盐酸溶液 、甲醇 、不同比 例的甲醇和 015%盐酸溶液的混合液 、氯仿和醋酸 乙酯 ) 、不同 的提 取方 法 (超声 法 、回 流 法 和 浸 渍 法 ) 、提取时间 ( 30, 60, 120, 180 m in) 、提取次数 ( 1 次 、2次和 3次 ) ,结果表明 ,以甲醇和 015%盐酸溶 液混合液 ( 2 ∶1)为溶剂 , 50倍量 ,回流提取 1 次 ,每 次 60 m in,为最佳提取方法 。
美国安捷伦 HP1100 系列高效液相色谱仪 (包 括四元泵 ,自动进样器 ,二极管阵列检测器 。去甲异 波尔定对照品由上海中药标准化研究中心提供 (纯 度大于 98% ) ,乙腈为色谱纯 (美国 Fisher公司 ) ,甲 酸和三乙胺为色谱纯 (美国 Tedia公司 ) ,水为重蒸 水 ,其余溶剂为分析纯 。
/m g
21460 2 21426 5 21458 2 21393 8 21468 1 21422 5 21462 1 21428 5 21416 6
/m g
11980 11980 11980 21463 21463 21463 21960 21960 21960
/m g
41474 9 41432 1 41441 2 41821 5 41881 7 41823 1 51407 4 51385 8 51363 9
第 34卷第 21期
2009年 11月
Vol. 34, Issue 21
November, 2009
对照品适量 ,加甲醇 2015%衡盐酸的混合溶液 (2∶1) 制成每 1 mL 中含去甲异波尔定 012 mg,摇匀 ,即 得。
2. 3 供试品溶液的制备 取本品粉末 (过 3号筛 ) 015 g,精密称定 ,置 250 mL 圆底烧瓶中 ,精密加入 甲醇 2稀盐酸 (015% )的混合液 ( 2∶1) 25 mL ,称定质 量 ,加热回流并保持微沸 1 h,放冷 ,再称定质量 ,用 甲醇 2稀盐酸 (015% )的混合液 ( 2 ∶1)补足减失的质 量 ,摇匀 ,静止 ,取上清夜 , 0145μm 滤膜过滤即得 。 2. 4 检测限与定量限 以信噪比为 3 ∶1 确定检测 限为 11509 ng; 以 信 噪 比 为 10 ∶1 确 定 定 量 限 为 31018 ng, RSD 117%。 2. 5 线性关系 取去甲异波尔定对照品 15 mg,精 密称定 ,置 50 mL 量瓶中 ,加混合溶剂甲醇 2稀盐酸 (015% )溶液 (2∶1)稀释至刻度 ,摇匀 。精密吸取该 溶液 011, 2, 4, 6, 8, 10 mL 转移至 10 mL 量瓶中 ,加 混合溶剂甲醇 2015%盐酸溶液 ( 2 ∶1)至刻度 ,摇匀 , 分别制成浓度为 01003 0, 01060 4, 01120 7, 01181 1, 01241 5, 01301 8 g·L - 1的对照品溶液 。准确吸 取上述对照品溶液 5μL ,按上述确定的色谱条件进 行测定 ,以浓度为横坐标 ,峰面积为纵坐标 ,回归方 程为 Y = 8 56914X - 131303, r = 01999 9。 2. 6 精密度试验 准确吸取同一供试品溶液 5 μL ,连续 6次 ,分别测定去甲异波尔定的峰面积 ,结 果 RSD 0138%。 2. 7 重复性试验 取同一样品 (四川成都 ) 6份 ,精 密称定 ,按“供试品溶液制备 ”项下操作 ,在上述色 谱条件下进行进样测定 ,测得去甲异波尔定的平均 含量为 01990% , RSD 0138%。 2. 8 稳定性试验 准确吸取同一供试品溶液 5 μL ,分别在 0, 4, 12, 24, 48, 72 h进行测定 ,以去甲异 波尔定 的 峰 面 积 进 行 考 察 , 进 样 6 次 , 测 得 RSD 0193%。表明样品至少在 72 h内稳定 。 2. 9 加样回收率试验 取已知去甲异波尔定含量 的乌药样品粉末 0125 g,精密称定 9份 ,每 3份加入 相同量 (分别为已知含量的 80% , 100% , 120% )的 去甲异波尔定对照品 ,按“供试品溶液制备 ”项下方 法操 作 , 测 定 。 9 次 平 均 回 收 率 为 99158% , RSD 114%。结果见表 1。 2. 10 样品测定 按照本方法的测定条件 ,分别测定 20批次的乌药样品 ,每个批次平行 2份 ,每份样品平 行进样 2次 ,以外标法计算样品中去甲异波尔定的含
《中国药典 》2005 年版一部中乌药的薄层鉴别 和含量测定的指标成分都是乌药醚内酯 。乌药醚内 酯为倍半萜类成分 ,是乌药的特征性成分 ,专属性 强 ,作为乌药的真伪鉴别指标较为适宜 。但乌药醚 内酯为脂溶性成分 ,在水煎液中的煎出率较低 ,且含 量也较低 ,作为含量测定的指标不是最佳的选择 。 乌药含有多种异喹啉类生物碱 [ 8 ] ,且具有良好的生 物活性 ,试验表明乌药总碱具有抗类风湿关节炎的 活性 ,口服给药能显著抑制大鼠佐剂关节炎 、小鼠胶 原关节炎 ,并能显著抑制 Con A (刀豆蛋白 A )引起 的小鼠脾淋巴细胞增殖 , LPS (脂多糖 )所致小鼠腹 腔巨噬细胞释放 NO (一氧化氮 )和 IL 21 (白细胞介 素 21) [ 9211 ] ,去甲异波尔定是其中的主要成分 。最新 研究报道 ,乌药中异喹啉类生物碱的含量测定方法
在耐受性实验中 ,还分别考察了不同的色谱柱 、 不同流速 、不同的柱温和不同流动相 pH 等 ,结果表 明 ,色谱条件的微小变化对测定结果影响不大 ( RSD 均小于 2% ) ,说明本方法的耐用性好 。
各批 样 品 中 去 甲 异 波 尔 定 的 质 量 分 数 在 01214% ～11265% ,不同产地之间的含量相差比较 大 ,即使同一产地的各个批间 ,也差异较大 。其中从 重庆石柱收集的样品为伪品 ,未能检出去甲异波尔,这 不利于中医的临床用药 。因此 ,本文报道乌药中去 甲异波尔定的含量测定方法 ,简单 、可靠和重复性 好 ,可用于中药乌药的质量控制研究 ,对于提高其质 量 、保证临床疗效具有重要意义 。
[参考文献 ] [ 1 ] 中国药典. 一部 [ S ]. 2005: 53. [ 2 ] 李广勋. 中药药理毒理与临床 [M ]. 天津 :天津科技翻译出版
产地
浙江 浙江 浙江 浙江 浙江 浙江 浙江 浙江 浙江 浙江 广东 广东 福建 江西 湖北 重庆 不详 不详 不详 不详
去甲异波尔定
01214 01265 01383 01484 01646 01656 01690 01758 11079 11265 01315 01966 01520 01736 01733 01000 01610 01985 01989 11082
A. 对照品 ; B. 样品 ; 1. 去甲异波尔定 。 图 1 去甲异波尔定对照品及样品 HPLC图
·2775·
第 34卷第 21期
2009年 11月
Vol. 34, Issue 21
November, 2009
3 讨论 在供试品溶液制备中 ,分别考察了不同的提取
量 ,结果见表 2。样品和对照品 HPLC图见图 1。
表 1 去甲异波尔定加样回收率 ( n = 9)
称样量 样品中量 加入量 测得量 回收率 平均值 RSD
/g
01248 5 01245 1 01248 3 01241 8 01249 3 01244 7 01248 7 01245 3 01244 1
/%
101176 101129 100115 98157 98100 97147 99150 99191 99157
/% /%
99158 1143
表 2 20批次不同来源乌药中去甲异波尔定的
质量分数 ( n = 2)
%
收集地
安徽亳州 浙江天台 上海浦东新区 浙江天台 江西玉山 河北安国 河北安国 黑龙江哈尔滨 河南中原 安徽亳州 广东广州 四川成都 陕西西安 广东普宁 湖北 重庆石柱 贵州威宁 贵州贵阳 四川内江 四川威远
[收稿日期 ] 2009203224 [通信作者 ] 3 王峥涛 , Tel/ Fax: ( 021 ) 51322507, E2mail: wangzht@ hotmail. com
·2774·
有高效液相色谱法 ( HPLC ) 和超高效液相色谱法 (UPLC)两种 , 测定的指标成分有波尔定 、降波尔 定 、网状香荔枝碱和 L inderegatine[ 12213 ] 。综上所述 , 本实验选择去甲异波尔定作为含量测定的指标 ,采 用高效液相色谱法进行含量测定 ,为提升乌药的质 量标准提供方法依据 。 1 仪器与试药
3. 上海中药标准化研究中心 , 上海 201210)
[摘要 ] 目的 :建立乌药中去甲异波尔定的含量测定方法 。方法 :采用高效液相色谱法测定去甲异波尔定 ( norisoboldi2 ne)的含量 ,以 Phenomenex Gem ini C18柱为固定相 ,乙腈 2015%甲酸 (加三乙胺调节 pH至 2125)为流动相 ,梯度洗脱 ,检测波长 为 280 nm ,柱温 25 ℃。结果 :去甲异波尔定在 01015 ～11509 μg峰面积与进样量呈良好的线性 , r = 01999 9;平均回收率为 99158% ,相对标准偏差为 114%。结论 :通过对 20批不同来源的乌药样品中去甲异波尔定的测定 ,结果表明方法简单 ,准确 可靠 ,重复性好 ,可为提升乌药的质量标准提供依据 。
20批乌药样品分别收集于安徽 、河北 、河南 、四 川 、哈尔滨 、贵州 、江西 、浙江等地和市售乌药 ,均由 上海中医药大学吴立宏博士鉴定 ,除了一批为伪品 以外 ,其余的均为樟科山胡椒属植物乌药 L. eag2 g rega ta。 2 方法与结果 2. 1 色 谱 条 件 Phenomenex Gem ini C18 色 谱 柱 (416 mm ×250 mm , 5 μm ) ; 流动相 ,乙腈为 A 相 , 015%甲酸 (用三乙胺调节 pH 至 2125 )为 B 相 ,梯 度洗脱 , 0～13 m in, 10% ～22% A; 13～22 m in, 22% A。柱温 25 ℃; 流速 1 mL ·m in- 1 , 检测波长 280 nm ,进样量 5μL。 2. 2 对照品溶液的制备 精密称取去甲异波尔定
美国安捷伦 HP1100 系列高效液相色谱仪 (包 括四元泵 ,自动进样器 ,二极管阵列检测器 。去甲异 波尔定对照品由上海中药标准化研究中心提供 (纯 度大于 98% ) ,乙腈为色谱纯 (美国 Fisher公司 ) ,甲 酸和三乙胺为色谱纯 (美国 Tedia公司 ) ,水为重蒸 水 ,其余溶剂为分析纯 。
/m g
21460 2 21426 5 21458 2 21393 8 21468 1 21422 5 21462 1 21428 5 21416 6
/m g
11980 11980 11980 21463 21463 21463 21960 21960 21960
/m g
41474 9 41432 1 41441 2 41821 5 41881 7 41823 1 51407 4 51385 8 51363 9
第 34卷第 21期
2009年 11月
Vol. 34, Issue 21
November, 2009
对照品适量 ,加甲醇 2015%衡盐酸的混合溶液 (2∶1) 制成每 1 mL 中含去甲异波尔定 012 mg,摇匀 ,即 得。
2. 3 供试品溶液的制备 取本品粉末 (过 3号筛 ) 015 g,精密称定 ,置 250 mL 圆底烧瓶中 ,精密加入 甲醇 2稀盐酸 (015% )的混合液 ( 2∶1) 25 mL ,称定质 量 ,加热回流并保持微沸 1 h,放冷 ,再称定质量 ,用 甲醇 2稀盐酸 (015% )的混合液 ( 2 ∶1)补足减失的质 量 ,摇匀 ,静止 ,取上清夜 , 0145μm 滤膜过滤即得 。 2. 4 检测限与定量限 以信噪比为 3 ∶1 确定检测 限为 11509 ng; 以 信 噪 比 为 10 ∶1 确 定 定 量 限 为 31018 ng, RSD 117%。 2. 5 线性关系 取去甲异波尔定对照品 15 mg,精 密称定 ,置 50 mL 量瓶中 ,加混合溶剂甲醇 2稀盐酸 (015% )溶液 (2∶1)稀释至刻度 ,摇匀 。精密吸取该 溶液 011, 2, 4, 6, 8, 10 mL 转移至 10 mL 量瓶中 ,加 混合溶剂甲醇 2015%盐酸溶液 ( 2 ∶1)至刻度 ,摇匀 , 分别制成浓度为 01003 0, 01060 4, 01120 7, 01181 1, 01241 5, 01301 8 g·L - 1的对照品溶液 。准确吸 取上述对照品溶液 5μL ,按上述确定的色谱条件进 行测定 ,以浓度为横坐标 ,峰面积为纵坐标 ,回归方 程为 Y = 8 56914X - 131303, r = 01999 9。 2. 6 精密度试验 准确吸取同一供试品溶液 5 μL ,连续 6次 ,分别测定去甲异波尔定的峰面积 ,结 果 RSD 0138%。 2. 7 重复性试验 取同一样品 (四川成都 ) 6份 ,精 密称定 ,按“供试品溶液制备 ”项下操作 ,在上述色 谱条件下进行进样测定 ,测得去甲异波尔定的平均 含量为 01990% , RSD 0138%。 2. 8 稳定性试验 准确吸取同一供试品溶液 5 μL ,分别在 0, 4, 12, 24, 48, 72 h进行测定 ,以去甲异 波尔定 的 峰 面 积 进 行 考 察 , 进 样 6 次 , 测 得 RSD 0193%。表明样品至少在 72 h内稳定 。 2. 9 加样回收率试验 取已知去甲异波尔定含量 的乌药样品粉末 0125 g,精密称定 9份 ,每 3份加入 相同量 (分别为已知含量的 80% , 100% , 120% )的 去甲异波尔定对照品 ,按“供试品溶液制备 ”项下方 法操 作 , 测 定 。 9 次 平 均 回 收 率 为 99158% , RSD 114%。结果见表 1。 2. 10 样品测定 按照本方法的测定条件 ,分别测定 20批次的乌药样品 ,每个批次平行 2份 ,每份样品平 行进样 2次 ,以外标法计算样品中去甲异波尔定的含
《中国药典 》2005 年版一部中乌药的薄层鉴别 和含量测定的指标成分都是乌药醚内酯 。乌药醚内 酯为倍半萜类成分 ,是乌药的特征性成分 ,专属性 强 ,作为乌药的真伪鉴别指标较为适宜 。但乌药醚 内酯为脂溶性成分 ,在水煎液中的煎出率较低 ,且含 量也较低 ,作为含量测定的指标不是最佳的选择 。 乌药含有多种异喹啉类生物碱 [ 8 ] ,且具有良好的生 物活性 ,试验表明乌药总碱具有抗类风湿关节炎的 活性 ,口服给药能显著抑制大鼠佐剂关节炎 、小鼠胶 原关节炎 ,并能显著抑制 Con A (刀豆蛋白 A )引起 的小鼠脾淋巴细胞增殖 , LPS (脂多糖 )所致小鼠腹 腔巨噬细胞释放 NO (一氧化氮 )和 IL 21 (白细胞介 素 21) [ 9211 ] ,去甲异波尔定是其中的主要成分 。最新 研究报道 ,乌药中异喹啉类生物碱的含量测定方法
在耐受性实验中 ,还分别考察了不同的色谱柱 、 不同流速 、不同的柱温和不同流动相 pH 等 ,结果表 明 ,色谱条件的微小变化对测定结果影响不大 ( RSD 均小于 2% ) ,说明本方法的耐用性好 。
各批 样 品 中 去 甲 异 波 尔 定 的 质 量 分 数 在 01214% ～11265% ,不同产地之间的含量相差比较 大 ,即使同一产地的各个批间 ,也差异较大 。其中从 重庆石柱收集的样品为伪品 ,未能检出去甲异波尔,这 不利于中医的临床用药 。因此 ,本文报道乌药中去 甲异波尔定的含量测定方法 ,简单 、可靠和重复性 好 ,可用于中药乌药的质量控制研究 ,对于提高其质 量 、保证临床疗效具有重要意义 。
[参考文献 ] [ 1 ] 中国药典. 一部 [ S ]. 2005: 53. [ 2 ] 李广勋. 中药药理毒理与临床 [M ]. 天津 :天津科技翻译出版
产地
浙江 浙江 浙江 浙江 浙江 浙江 浙江 浙江 浙江 浙江 广东 广东 福建 江西 湖北 重庆 不详 不详 不详 不详
去甲异波尔定
01214 01265 01383 01484 01646 01656 01690 01758 11079 11265 01315 01966 01520 01736 01733 01000 01610 01985 01989 11082
A. 对照品 ; B. 样品 ; 1. 去甲异波尔定 。 图 1 去甲异波尔定对照品及样品 HPLC图
·2775·
第 34卷第 21期
2009年 11月
Vol. 34, Issue 21
November, 2009
3 讨论 在供试品溶液制备中 ,分别考察了不同的提取
量 ,结果见表 2。样品和对照品 HPLC图见图 1。
表 1 去甲异波尔定加样回收率 ( n = 9)
称样量 样品中量 加入量 测得量 回收率 平均值 RSD
/g
01248 5 01245 1 01248 3 01241 8 01249 3 01244 7 01248 7 01245 3 01244 1
/%
101176 101129 100115 98157 98100 97147 99150 99191 99157
/% /%
99158 1143
表 2 20批次不同来源乌药中去甲异波尔定的
质量分数 ( n = 2)
%
收集地
安徽亳州 浙江天台 上海浦东新区 浙江天台 江西玉山 河北安国 河北安国 黑龙江哈尔滨 河南中原 安徽亳州 广东广州 四川成都 陕西西安 广东普宁 湖北 重庆石柱 贵州威宁 贵州贵阳 四川内江 四川威远
[收稿日期 ] 2009203224 [通信作者 ] 3 王峥涛 , Tel/ Fax: ( 021 ) 51322507, E2mail: wangzht@ hotmail. com
·2774·
有高效液相色谱法 ( HPLC ) 和超高效液相色谱法 (UPLC)两种 , 测定的指标成分有波尔定 、降波尔 定 、网状香荔枝碱和 L inderegatine[ 12213 ] 。综上所述 , 本实验选择去甲异波尔定作为含量测定的指标 ,采 用高效液相色谱法进行含量测定 ,为提升乌药的质 量标准提供方法依据 。 1 仪器与试药
3. 上海中药标准化研究中心 , 上海 201210)
[摘要 ] 目的 :建立乌药中去甲异波尔定的含量测定方法 。方法 :采用高效液相色谱法测定去甲异波尔定 ( norisoboldi2 ne)的含量 ,以 Phenomenex Gem ini C18柱为固定相 ,乙腈 2015%甲酸 (加三乙胺调节 pH至 2125)为流动相 ,梯度洗脱 ,检测波长 为 280 nm ,柱温 25 ℃。结果 :去甲异波尔定在 01015 ～11509 μg峰面积与进样量呈良好的线性 , r = 01999 9;平均回收率为 99158% ,相对标准偏差为 114%。结论 :通过对 20批不同来源的乌药样品中去甲异波尔定的测定 ,结果表明方法简单 ,准确 可靠 ,重复性好 ,可为提升乌药的质量标准提供依据 。
20批乌药样品分别收集于安徽 、河北 、河南 、四 川 、哈尔滨 、贵州 、江西 、浙江等地和市售乌药 ,均由 上海中医药大学吴立宏博士鉴定 ,除了一批为伪品 以外 ,其余的均为樟科山胡椒属植物乌药 L. eag2 g rega ta。 2 方法与结果 2. 1 色 谱 条 件 Phenomenex Gem ini C18 色 谱 柱 (416 mm ×250 mm , 5 μm ) ; 流动相 ,乙腈为 A 相 , 015%甲酸 (用三乙胺调节 pH 至 2125 )为 B 相 ,梯 度洗脱 , 0～13 m in, 10% ～22% A; 13～22 m in, 22% A。柱温 25 ℃; 流速 1 mL ·m in- 1 , 检测波长 280 nm ,进样量 5μL。 2. 2 对照品溶液的制备 精密称取去甲异波尔定
