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一株源自传统大豆发酵食品中纳豆菌株的分离鉴定与分析徐林通;张冬鹤;侯进慧;李宁宁;谈晟含;文宇
【期刊名称】《农产品加工》
【年(卷),期】2024()4
【摘要】从我国传统大豆发酵食品中分离获得多株菌株,用划线纯培养法对其中1株纳豆激酶活性较高的菌株SD1进行生理生化和16S rDNA分析,并分析其纳豆激酶基因,推动新型纳豆菌开发。
结果表明,菌落呈现白色,表面干燥,边缘有褶皱,中心无突起,整体平滑,呈现出芽胞杆菌的菌落特征。
提取菌株SD1的基因组DNA作为模板,扩增其16S rDNA分子序列,利用凝胶电泳进行检验、测序。
对获得的序列进行BLAST分析显示,SD1菌株是枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),采用设计引物,可在该菌中扩增出特异性的纳豆激酶目的条带,结果符合预期。
将扩增条带寄送测序,获得序列长度为1174 bp,将对应的氨基酸序列在SWISS网站上在线分析其三维结构;在预测三维结构中,含有6个α-螺旋,12个β-折叠。
为新型纳豆菌的开发和利用提供基础。
【总页数】4页(P59-62)
【作者】徐林通;张冬鹤;侯进慧;李宁宁;谈晟含;文宇
【作者单位】徐州工程学院
【正文语种】中文
【中图分类】Q939
【相关文献】
1.一株酱香型白酒堆积发酵酒醅中Streptomyces flocculus菌株的分离与鉴定
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3.传统大豆发酵食品中纳豆芽孢杆菌的分离及纳豆发酵
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一株高产纳豆激酶菌株的鉴定与分析王雪妍;孙玉飞;冯菲;陈晓飞;李锋;周伏忠【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2016(000)001【摘要】The objective of this work is to identify an isolate Td of yielding high nattokinase, and to analyze the molecular characteristics of its nattokinase. The morphologic, biochemical and physiological characterizations, and molecular biological methods were used to identify the taxonomic position of isolate Td ;mass spectrometric determination and analysis of MALDI-TOF, SDS-PAGE and fibrinolytic activity were employed to measure the characteristics of nattokinase, and PCR method was adopted to clone the full length of nattokinase gene. The bacterial strain Td was identified as Bacillus subtilis subsp. subtilis according to the results of morphologic, biochemical and physiological characterizations, as well as 16S rDNA, the sequences of 16S rDNA gyrA, hybrid rate of DNA-DNA. The yield of nattokinase produced by strain Td reached 300 mg/L, accounted for over 40% of the total protein. Fibrinolytic activity was over 230 U/mL. Amino acid sequence of nattokinase produced by Td showed the highest similarity to the subtilisin E. and the full length of the gene was 1143 bp. Conclusively, as a high-yield and high-activity strain for nattokinase, B. subtilis subsp. subtilis Td is a promising candidate for industrial development and utilization.%鉴定高产纳豆激酶菌株 Td，分析纳豆激酶的分子特征。
纳豆激酶论文：纳豆激酶的优化、提取分离纯化及基因克隆【中文摘要】心脑血管性疾病,具有“发病率高、致残率高、死亡率高、并发症多”等特性。
2005年,世界卫生组织(WHO)调查表明,全世界每年约有1700万人死于心脑血管疾病。
并且随着人类生活水平的提高以及生活压力的增加,而呈现年轻化的趋势,而血栓又是心脑血管疾病中致死率最高的疾病。
所以,血栓的防治已是当务之急。
虽然传统药物在心脑血管及血栓栓塞性疾病防治上疗效显著,但毒副作用严重;而传统大豆发酵食品不仅效果显著且安全无毒,可作为一种具有开发和利用价值的功能性预防保健食品。
据文献记载,纳豆源于中国的豆豉,通过佛教由中国传入日本,日本人均寿命长的原因除了与较为优良的自然环境有关外,更重要的是其膳食结构中,发酵食品特别是消费量最大的纳豆,是日本人长寿的秘方,视为国宝级食品。
寺院喜食大豆是因为其蛋白质含量高达35.3%,而由纳豆菌产出的酶,能使50%的蛋白质变为水溶性,消化率可达80%。
还含氨基酸、维生素、植物性脂肪等。
据科学研究表明,纳豆食品不仅调整胃肠功能明显,还具有治疗感冒、痢疾、胀气、胃肠炎、消化不良、残便、便秘等功效,还有防治糖尿病,抑制血栓的生成和溶解血栓的作用,是一种延年益寿、健康的美容食品。
可以说纳豆是一种自然食品,是人类生活智慧的产物。
1987年日本的Sumi博士首次从日本传统食品纳豆中分离出一种具有强烈纤溶作用的碱性蛋白酶并命名纳豆激酶(nattokinase,NK)。
它不但能直接作用交联纤维蛋白,而且还可激活体内的纤溶酶原,从而表现出很强的溶血栓作用。
据报道其制品具有水解淀粉样蛋白,降低血浆纤维蛋白原的第七因子和第八因子,降低血液粘度、降血脂、降胆固醇,降血压,改善血液循环状态,维持血细胞的正常形态和功能,有利于神经损伤的再生,抑制骨质疏松症、抑制动脉粥样硬化等多种功能。
由于NK具有安全性好、成本低、经口服后可迅速入血,作用时间长,胃肠道稳定性好,可由细菌发酵生产、也可由基因工程菌生产等优点,有望被开发为新一代的口服抗血栓药物用于血栓性疾病的预防和治疗。
纳豆芽孢杆菌的分离鉴定及纳豆激酶高产菌株的筛选收稿日期：2009-07-01基金项目：“十一五”国家奶业科技支撑计划重大项目（2006BAD12B03）；动物营养学国家重点实验室基金（2004DA125184（团）0801）作者简介：奚晓琦（1983-），女，硕士，研究方向为反刍动物营养。
E-mail:xixiaoqi1214@*通讯作者：王加启，研究员，博士生导师，主要从事反刍动物营养与牛奶品质改良研究。
E-mail:wang-jia-qi@奚晓琦1,2，王加启1*，卜登攀1，孙妍1，周凌云1，魏宏阳1（1．中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养国家重点实验室，北京100094；2．东北农业大学动物科学技术学院，哈尔滨150030）摘要：分别从北京、大连和日本三个产地的纳豆食品中分离纯化得到了9个具有纳豆芽孢杆菌典型菌落特征的芽孢杆菌单菌落，与模式菌株纳豆芽孢杆菌N1株分别从菌落形态、个体形态和生理生化试验三方面进行对比鉴定，结果表明，其中5株芽孢杆菌为纳豆芽孢杆菌。
将这5株纳豆芽孢杆菌分别在酪素平板上划线初选，得到了298株具有蛋白酶活力的菌株，从中筛选出活性最高的5株命名为：NB 、NC 、ND 、NE 和NF ，测定各株发酵液的纳豆激酶酶活力，结果表明NB 、NC 和ND 3株具有较高纳豆激酶活性，酶活力分别达到了1041.37、1125.13和1804.64IU ·mL -1。
关键词：纳豆芽孢杆菌；纳豆激酶；鉴定；筛选中图分类号：Q939.97文献标识码：A文章编号：1005-9369（2009）11－0069－07Indentification and screening of high nattokinase activity producing str-ains of Bacillus subtilis Natto/XI Xiaoqi 1,2,WANG Jiaqi 1,BU Dengpan 1,SUN Yan 1,ZHOULingyun 1,WEI Hongyang 1(1.State Key Laboratory of Animal Nutrition,Institute of Animal Sci-ences ,Chinese Academy of Agricultural Sciences ,Beijing 100094,China ;2.College of Animal Sciences and Technology,Northeast Agricultural University,Harbin 150030,China )Abstract:Nine Bacillus subtilis strains were isolated from three Natto food produced in Beijing,Dalian and Japan,pared with model strain Bacillus subtilis Natto N1,five strains were identified as Bacillus subtilis Natto according to their morphological,physiological and biochemical characters.Five highest protease activity strains named NB,NC,ND,NE and NF were screened by casein-plate method from 298strains of protease-producing strains.Finally,NB,ND and NE were selected from the examined strains for their high level of nattokinase-producing activity.The nattokinase activity of these three strains were up to 1041.37,1125.13and 1804.64IU ·mL -1,respectively.Key words:Bacillus Subtilis Natto;nattokinase;identification;screening 纳豆是一种日本传统大豆发酵食品，它不仅风味独特、营养丰富、价格低廉,还能有效预防和辅助治疗心脑血管疾病。
纳豆激酶酶原基因的克隆、融合表达及活性测定余榕捷;谢秋玲;洪岸;汪炬;孙奋勇【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2003(019)006【摘要】目的:利用基因工程技术,构建表达具溶栓活性的纳豆激酶的大肠杆菌工程菌.方法:利用PCR方法扩增纳豆激酶酶原(pro-NK)基因,并克隆到表达载体pET3c 上,构建表达pro-NK和载体上22氨基酸短肽的融合蛋白的表达质粒pENK;表达质粒pENK分别转化溶源化宿主菌BL21(DE3)pLysS-和BL21(DE3)pLysS+,获得表达菌pENK-(DE3)pLysS-和pENK-(DE3)pLysS+.利用SDS-PAGE和纤维蛋白平板法检测目的蛋白的表达及活性.结果:SDS-PAGE显示两株菌株均表达42 kD的目的蛋白.纤维蛋白平板法显示表达产物具溶栓的活性.在pENK-(DE3)pLysS-中融合蛋白不需异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导就有基础表达,融合蛋白的表达使表达菌细胞溶解,菌落中空,表明表达产物具细胞毒作用.结论:本研究成功实现了在大肠杆菌表达具有溶栓活性的pro-NK融合蛋白,为开发纳豆激酶成为新一代溶栓药物的研究奠定基础.【总页数】5页(P757-761)【作者】余榕捷;谢秋玲;洪岸;汪炬;孙奋勇【作者单位】暨南大学生物工程研究所,广东,广州,510632;暨南大学生物工程研究所,广东,广州,510632;暨南大学生物工程研究所,广东,广州,510632;暨南大学生物工程研究所,广东,广州,510632;暨南大学生物工程研究所,广东,广州,510632【正文语种】中文【中图分类】Q786【相关文献】1.重组人干扰素α2a和GFE-1多肽融合基因的克隆、表达及活性测定 [J], 谷仲平;朱以芳;张涛;周勇安;杨晔2.纳豆激酶原基因的克隆及表达 [J], 谢秋玲;孙奋勇;廖美德;张玲;汪炬3.纳豆激酶原的基因克隆及在大肠杆菌中的表达 [J], 刘北域; 官孝群4.人纤溶酶原饼环区5基因的原核表达及活性测定 [J], 范彬;张英起;颜真;赵宁;陈长生;药立波;苏成芝5.纳豆激酶酶原基因和纳豆激酶基因的克隆及在大肠杆菌中表达 [J], 余榕捷;汪炬;谢秋玲;洪岸因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
纳豆激酶基因的克隆和高效表达
王伟;甘露;甘旭华;陈晓琳;倪敬田;唐欣昀
【期刊名称】《安徽农业大学学报》
【年(卷),期】2012(39)4
【摘要】为了克隆纳豆激酶(Nattokinase,NK)基因,实现纳豆激酶在大肠杆菌中的表达,并对其表达条件进行研究,首先以从枯草芽孢杆菌中提取的基因组DNA为模板,通过PCR扩增包括信号肽、前导肽、成熟肽序列的前纳豆激酶原基因,将其克隆到载体pET28a中,构建重组质粒pET28a-NK,成功转化大肠杆菌BL21(DE3);然后优化影响该基因表达的温度、时间和IPTG添加量等因素。
结果表明,重组菌株
BL21(DE3)-NK在20℃下培养、IPTG添加量为0.4 mmol·L-1、培养20 h时表达产物的纤溶活性最大,可达到81.73 U·mL-1,SDS-PAGE检测观察到1条38 kDa 的蛋白条带,与预期相符。
【总页数】4页(P556-559)
【作者】王伟;甘露;甘旭华;陈晓琳;倪敬田;唐欣昀
【作者单位】安徽农业大学生命科学学院
【正文语种】中文
【中图分类】Q785
【相关文献】
1.纳豆激酶基因的克隆及表达研究
2.纳豆激酶基因的克隆及其在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中的表达
3.纳豆激酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达
4.一种新型纳豆
激酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达5.纳豆激酶酶原基因和纳豆激酶基因的克隆及在大肠杆菌中表达
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