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微生物原始记录(金黄色葡萄球菌)

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微生物检验原始记录
受理编号检（）号第页/共页
检验依据GB15979—2002 《一次性使用卫生用品卫生标准》
一、实验器材
1. 试验菌株名称：金黄色葡萄球菌，菌株号：ATCC6538，培养代数
代，琼脂斜面培养基培养，培养条件：
2. 试剂及培养基配制、灭菌见《试剂及培养基配制记录C》：第1次；第2次；第3次。

3．二级生物安全柜：编号C 。

4.恒温水浴箱：编号。

5. 恒温培养箱：编号。

6.秒表：编号
7．样品名称：。

有效成份：，含量：，批号：。

二、方法
1. 操作步骤：按GB15979—2002 附录C4溶出性抗（抑）菌产品抑菌性能试验方法操作程序进行. 受理编号：检（）号第页/共页
2. 实验条件
三、结果
1. 第1次试验对金黄色葡萄球菌的抑菌效果
作用时间接种稀释倍数平皿生长菌数菌药管菌数抑菌率（min）（cfu/皿）（cfu/mL）（%） 2
5
10
20
阳性对照：接种稀释倍数：
平皿生长菌数： cfu/皿
菌液浓度： cfu/mL。

阴性对照：阴性对照：菌生长。

2. 第2次试验对金黄色葡萄球菌的抑菌效果
作用时间接种稀释倍数平皿生长菌数菌药管菌数抑菌率（min）（cfu/皿）（cfu/mL）（%） 2
5
10
20
阳性对照：接种稀释倍数：
平皿生长菌数： cfu/皿
菌液浓度： cfu/mL。

阴性对照：阴性对照：菌生长。

3. 第3次试验对金黄色葡萄球菌的抑菌效果
作用时间接种稀释倍数平皿生长菌数菌药管菌数抑菌率（min）（cfu/皿）（cfu/mL）（%） 2
5
10
20
阳性对照：接种稀释倍数：
平皿生长菌数： cfu/皿
菌液浓度： cfu/mL。

阴性对照：阴性对照：菌生长。

4. 结果处理： 三次试验平均结果
对金黄色葡萄球菌的抑菌效果
作用时间 菌药管菌数 抑菌率 （min ） （cfu/mL ） （%） 2
5
10
20
阳性对照：菌液浓度： cfu/mL 。

阴性对照： 菌生长。

5.计算公式：
（1）接种稀释倍数=(V1/V2)×A/B= (5.0/0.5)×A/0.5=20A
式中V1为接种管（PBS4.5mL+菌药混合液0.5mL ）液体体积；V2为接种管中菌药混合液体积（0.5mL ）；A 为接种前中和管液体稀释倍数；B 接种样液体积（0.5mL ）。

（2）菌药管菌数或阳性对照菌液浓度（cfu/mL ）=平皿平均生长菌数（cfu/皿）×接种稀释倍数
（3）
(1)100=-⨯菌药管菌数
抑菌率%阳性对照
（以下空白）
检验者： 复核者：。

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食品微生物学检验金黄色葡萄球菌

食品微生物学检验金黄色葡萄球菌


引用的作品
确保包含印刷和电子作品 来源并按字母顺序放置它们。

血浆凝固酶实验
血浆凝固酶试验：挑取、Baird-Parker平板或血平板上可疑菌落 1 个或以上，分别接种到5 mLBHI和营养琼脂小斜面，36 ±1℃培养18 h～24 h 。 取新鲜配置兔血浆0.5 mL ，放入小试管中，再加入BHI 培养物0.2mL～0.3mL ，振荡摇匀，置 36 ±1℃温箱或水浴箱内。 每半小时观察一次，观察 6 h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置 时，呈现凝块）或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。 同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为 对照。也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。 结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到 5 mL BHI，36±1℃培 养18 h～48h ，重复试验。
第二法金黄色葡萄球菌Baird-Parker平板计 数
结果
列出完成实验所使用的所有步骤。 切记要为步骤加编号。 添加实验照片。
第三法 金黄色葡萄球菌MPN计数
最大或然数(most probable number，MPN)计数又称稀释 培养计数，适用于测定在一个混杂的微生物群落中虽不占优 势，但却具有特殊生理功能的类群 其特点是利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆 脱其他微生物类群的干扰，并通过该生理功能的表现来判断 该类群微生物的存在和丰度。本法特别适合于测定土壤微生 物中的特定生理群（如氨化、硝化、纤维素分解、固氮、硫 化和反硫化细菌等。）的数量和检测污水、牛奶及其他食品 中特殊微生物类群（如大肠菌群）的数量，缺点是只适于进 行特殊生理类群的测定，结果也较粗放，只有在因某种原因 不能使用平板计数时才采用。 MPN法原理与局限C:\Users\华侃\Desktop\MPN法的原理与局 限性分析.pdf
9.8.188.食品微生物快速检测金黄色葡萄球菌定性检测

9.8.188.食品微生物快速检测金黄色葡萄球菌定性检测

葡萄球菌的 Nhomakorabea速检测方法
3M™ Petrifilm™ 金黄色葡萄球菌测试片(STX) ▪ 标准Baird-Parker培养基 ▪ 22-29小时确认结果 ▪ 提供确认反应片对可疑菌落作确认性判读
葡萄球菌的快速检测方法
▪ 选择性配方-抑制非目标 菌的 生长
▪ 金黄色葡萄球菌是唯一 能将 测试片中的指示剂 转化成紫 红色色素的细 菌。
▪ 可能出现黑色或蓝绿色菌落。 ▪ 先将紫红色菌落圈出，再加 确认
反应片，1–3h,粉 红色晕圈。
▪ 合理计数范围15-150。
粉红色晕圈
总结
思考题
1.金黄色葡萄球菌有哪些危害？ 2.如何利用金黄色葡萄球菌快速检测试纸进行定 性鉴定？ 3.金黄色葡萄球菌快速检测适合在那些领域使用？
谢谢观看
金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus )
Staphyle -“葡萄串”
Coccus—“浆果”
▪ 球菌科的一个属 ▪ 革兰氏阳性球菌 ▪ 直径0.5 - 1.5 微米 ▪ 单个, 成对, 不规则成群 ▪ 过氧化氢酶阳性 ▪ 非动力 ▪ 兼性厌氧
葡萄球菌的检测方法
36℃±1℃
18h~24h
血浆凝固酶试验
报告
金黄色葡萄球菌检测程序
葡萄球菌的检测方法
初步鉴定溶血情况，金黄色葡萄球菌在BP平板上呈圆形，表面光滑、凸起、 湿润、菌落直径在2~3mm，颜色呈灰黑色至黑色，有光泽，常有浅色（非 白色）的边缘，周围绕以不透明圈，外有清晰带。
葡萄球菌的检测方法
在血平板上，形成菌落较大，圆形，光滑凸起、湿润、金黄色，菌落周围可 见透明溶血圈。
食品中金黄色葡萄球菌的定性测定依据 GB 4789.10-2016 食品微生物学检验
食品卫生微生物学检验金黄色葡萄球菌检验

食品卫生微生物学检验金黄色葡萄球菌检验

食品卫生微生物学检验金黄色葡萄 球菌检验
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
＊＊＊当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较 多的食品，如牛奶和乳制品、肉、蛋等，在温度条 件适宜时，经过8～10小时即可产生相当数量的肠毒 素，肠毒素可耐受100℃煮沸30分钟而不被破坏。人 摄食该菌污染的食物2～3小时后可引起中毒症状， 它引起的食物中毒症状是呕吐和腹泻。
一、金黄色葡萄球菌的生物学特性
1、形态与染色：(staphylococcus aureus) 金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜。 典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8 mm左右，显
微镜下排列成葡萄串状。
革兰氏染色阳性。
附： 金黄色葡萄球菌的显微照片 金黄色葡萄球菌的染色照片 金黄色葡萄球菌的扫描电镜照片 金黄色葡萄球菌的透射电镜照片
食品卫生微生物学检验金黄色葡萄 球菌检验
血平板上金黄色葡萄球菌 菌落形态
金黄色葡萄球球菌的单个菌落在血 平板上呈金黄色，有时也为白色，大而 突出、圆形、不透明、表面光滑，周围 有溶血圈。
食品卫生微生物学检验金黄色葡萄 球菌检验
食品卫生微生物学检验金黄色葡萄 球菌检验
金黄色葡萄球菌 在BP平板上的菌落形态
食品卫生微生物学检验金黄色葡萄 球菌检验
食品卫生微生物学检验金黄色葡萄 球菌检验
金黄色葡萄球菌 在甘露醇盐平板上的菌落
Staphylococcus aureus on mannitol salts agar
食品卫生微生物学检验金黄色葡萄 球菌检验
3、血浆凝固酶试验：
吸取1:4新鲜兔血浆0.5 mL，放入小试 管中，再加入培养24 h的金黄色葡萄球菌 肉浸液肉汤培养物0.5 mL，振荡摇匀， 置 36±1℃温箱或水浴内，每半小时观察 一次，观察6 h，如呈现凝固,即将试管倒 置或 倾斜时，呈现凝块者，被认为阳性结 果。同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及 肉汤作为对照。
金黄色葡萄球菌

金黄色葡萄球菌

金黄色葡萄球菌简介葡萄球菌葡萄球菌属（Staphylococcus）至少包括有20个种。

其中金黄色葡萄球菌是人类的一种重要病原菌，引起许多严重感染。

典型的金黄色葡萄球菌为球形，直径0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。

金黄色葡萄球菌无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。

是一种不利于人体的细菌。

金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37℃，最适生长pH 7.4。

平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。

血平板菌落周围形成透明的溶血环。

金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10%-15%NaCl肉汤中生长。

可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。

甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。

许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。

在干燥环境中存活数月；空气中存在，但不繁殖。

耐热性强，加热70℃1h，80℃30min不被杀死；耐低温，在冷冻食品中不易死亡；耐高渗，在含有50%-66%蔗糖或15%以上食盐食品中才可被抑制，能在15%NaCl和40%胆汁中生长。

金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。

有金黄色葡萄球菌感染者，可选用：红霉素、新型青霉素、庆大霉素、万古霉素或先锋霉素Ⅵ治疗。

流行病学特点金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。

因此，食品受其污染的机会很多。

美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。

金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占45%，中国每年发生的此类中毒事件也非常多。

金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点：季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。

此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。