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【实验题目】小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察【实验目的】1、掌握线粒体的超活染色原理及方法。
2、观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。
【实验材料与用品】1.试剂：0.02%的詹纳绿B染液、Ringer试剂2.器具：解剖盘、镊子、剪刀、双凹片、小烧杯、载玻片、盖玻片、胶头滴管、显微镜等3.材料：小鼠【实验原理】I.线粒体线粒体是一种存在于大多数细胞中的由两层膜包裹的细胞器，直径在0.5-10微米左右；线粒体是细胞内氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷的主要场所，为细胞的活动提供了能量，有“细胞动力工厂”之称。
线粒体在代谢活动旺盛的细胞，如肌肉细胞，肝细胞，神经细胞等中大量存在；线粒体的数量差异巨大，如在肝脏细胞中有1000-2000个线粒体，而有些细胞只有一个线粒体，如酵母菌细胞的大型分支线粒体，大多数哺乳动物成熟红细胞不具有线粒体。
线粒体分布方向与微管一致，通常分布在细胞功能旺盛的区域：如在肾脏细胞中靠近微血管，呈平行或栅状排列；在肠表皮细胞中呈两极分布，集中在顶端和基端，在精子中分布在鞭毛中区。
II.超活染色实验原理超活染色也称活体染色，是指对生命有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法；超活染色的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞死亡。
应用活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理病理状态。
活体染色根据染色剂的性质和染色方法不同分为：体内活染（注入、固定、堆积）、体外活染（分离、浸染、固定）1）体内活染：是以胶体状的染料溶液注入动植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的作用。
2）体外活染：又称超活染色，它是由活的动植物分离出的细胞或组织小块，以染料溶液浸染，燃料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
活体染色之所以能固定，堆积在细胞内某些特殊部分，主要是染料的“电化学”特性起到重要作用；碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染液的胶粒表面带阴离子，被染的部分本身也是具有阳离子或阴离子，这样它们彼此之间就发生了吸引作用，从而使样品着色。
线粒体的超活染色一）实验目的：1.观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。
2.学习一些细胞器的超活染色技术。
二）实验原理：活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。
它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。
活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类，体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。
体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学“特性起重要作用。
碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。
但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用；一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。
詹纳斯绿B(Janus green B)和中性红(neutral red)两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。
三）实验用品：一、器材显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、载玻片、凹面载玻片、盖玻片、表面皿，吸管、牙签、吸水纸。
二、试剂1、Ringer溶液2、1％、1／5 000詹纳斯绿B溶液四）实验步骤：1、用脊椎脱臼法处死小白鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，取小白鼠肝边缘较薄的肝组织一小块，放入表面皿内。
用吸管吸取Ringer液，反复浸泡冲洗肝脏，洗去血液。
线粒体及液泡系的活体染色一、实验目的掌握动、植物细胞活体染色的原理和技术。
掌握各种染料的染色原理。
使我们对细胞中的线粒体及液泡系有一定的了解。
二、实验原理a)活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害或毒性很小的一种染色方法。
它的目的是在保持细胞活性的前提下，显示细胞内的某些特定结构。
b)线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随物种、组织器官和生理状态的不同而发生变化。
健纳绿可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。
c)中性红为弱碱性染料，对液泡系的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。
d)亮焦油紫可用于活体染色，中性红用于染液泡系，健纳绿用于线粒体染色，次甲基蓝可用于染神经组织，尼罗蓝可用于染原生动物的大核。
三、实验试剂及器材a)实验试剂i.0.04%中性红生理盐水溶液：先配成1%中性红水溶液，再用0.65%氯化钠溶液将1%中性红水溶液稀释成0.04%溶液，盛于棕色瓶中，暗处保存。
ii.0.02%健纳绿生理盐水溶液：先配成1%健纳绿水溶液，再用0.9%氯化钠将1%健纳绿水溶液稀释成0.02%溶液，盛于棕色瓶中，暗处保存。
b)实验器材青菜叶、人口腔黏膜上皮细胞、载玻片、盖玻片、牙签、普通光学显微镜、刀片四、实验步骤a)口腔黏膜上皮细胞线粒体的染色观察i.取清洁载玻片，滴2滴0.02%健纳绿生理盐水溶液。
ii.用牙签宽头在自己口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的粘液状物放大载玻片的染液滴中，搅匀。
（注意事项：应稍用力刮取口腔颊粘膜处上皮细胞，否则无活细胞染色不能成功。
）iii.染色10－l5min(注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液)。
iv.盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察，拍照。
液泡的活体染色与观察实验报告线粒体和液泡系的超活染色与观察实验报告海南师范大学生命科学学院实验报告（2012——1013学年度第一学期）生物科学系2010 级一班姓名：学号：科目：细胞及遗传学实验实验项目：线粒体和液泡系的超活染色与观察一、实验目的：（1）观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。
（2）学习一些细胞器的超活染色技术。
二、实验原理：线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。
詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。
三、实验用品：1、材料：人口腔上皮细胞。
2、试剂：1%，1/5000詹纳斯绿B溶液四、实验方法：1、取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液。
2、实验者用牙签宽头在自己口腔颊黏膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的黏液状物放入载玻片的染液滴中，染色10-15分钟（注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液），盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。
五、实验结果：1、在显微镜下观察，可以看到口腔上皮细胞一个个分散的被染成淡蓝色的细胞在细胞中可以看到在核周围有被染成深蓝色的颗粒状结构，即是线粒体。
六、实验结果分析：因为特定的活体染色剂特异地针对某种细胞器的生理生化特点起作用。
例如詹纳斯绿B只对线粒体具有专一性；而中性红则只对液泡系具有专一性。
因此，只用一种活性染色剂很难同时观察到多种细胞器。
用詹纳斯绿B就可以观察到线粒体了。
篇二：实验五：线粒体与液泡系的超活染色与观察实验五：线粒体与液泡系的超活染色与观察一、实验目的：1、观察动物、植物活细胞内的线粒体、液泡系的形态、数量与分布。
2、了解细胞的超活染色技术。
细胞生物学实验线粒体的超活染色与观察一、实验目的1. 观察动、植物活细胞内线粒体的形态、数量与分布。
2. 学习一些细胞器的超活染色技术。
二、实验原理活体染色是指对生活有机体的细胞或组织某些结构能着色但又不影响细胞的生命活动和产生任何物理化学变化以致引起细胞的死亡的一种染色方法。
因此活染技术通常可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。
体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。
体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
詹纳斯绿B 是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。
三、实验用品（一）材料肝细胞、人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎内表皮细胞（二）器材显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。
（三）试剂1．Ringer 溶液氯化钠 0.85g氯化钾 0.25g氯化钙 0.03g蒸馏水 100ml2. 1%詹纳斯绿B 溶液（原液）称取50mg 詹纳斯绿B 溶于5ml Ringer，稍加微热(30～40℃)，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。
3. 詹纳斯绿B 溶液（应用液）取1%原液1ml 加入49ml Ringer 溶液, 混匀即可。
现用现配。
四、实验操作1. 人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察(1) 取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2 滴詹纳斯绿B 应用染液。
(2) 实验者用牙签宽头在自己口腔粘膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中，染色10～15min(注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液)，盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。
小鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察班级：临七四班姓名：潘长瑜学号：201100230111【实验目的】1．掌握线粒体的超活染色原理及方法。
2．观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。
【实验原理】活体染色是指对生活有机体的细胞或组织某些结构能着色但又不影响细胞的生命活动和产生任何物理化学变化以致引起细胞的死亡的一种染色方法。
因此活染技术通常可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。
体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。
体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
詹纳斯绿B 是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。
【实验材料】1.器材：小白鼠，解剖盘，镊子，剪刀，载玻片，盖玻片，滴管，双凹片，小烧杯，显微镜；2.试剂1/500詹纳绿B染液；Ringer试剂【操作步骤】1．用断头法处死小白鼠，置于解剖盘中。
剪开腹腔，取出肝脏，选取边缘较薄的肝组织0.5cm3，放入小烧杯中，用Ringer液冲洗去血污。
2．滴加1/500詹纳绿B溶液于双凹片的凹穴中，再将上述洗净的肝组织移入染液中，染色20—30min。
要使组织块上面部分半露在染液外。
3．吸去染液，将肝组织重置小烧杯中，滴加Ringer溶液0.5ml，用剪刀将组织充分剪碎制成悬液。
4．取上述细胞悬液滴片，加上盖玻片，在高倍镜下观察。
【实验结果】线粒体。
实验三 液泡系和线粒体的活体染色
1实验目的与原理
1.1实验目的：观察植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布； 掌握一些细胞活体染色的原理和技术。
1.2实验原理：活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。
它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。
活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
詹纳斯绿B 是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。
中性红为弱碱性染料，对液泡系的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。
2 实验材料与方法
2.1实验材料：洋葱鳞茎内表皮
2.2洋葱鳞茎细胞液泡的活体染色：
撕取洋葱鳞茎内表皮→1/3000中性红溶液染色5~10min →吸去染液，滴加Ringer 液→盖上载玻片，显微镜观察。
2.3洋葱鳞茎细胞线粒体的活体染色：
撕取洋葱鳞茎内表皮→1/5000詹纳斯绿B 溶液染色10min →吸去染液，滴加Ringer 液→盖上载玻片，显微镜观察。
3 实验结果
图1中性红染色洋葱内表皮细胞 图2詹纳斯绿染色洋葱内表皮 (X100) (X100)
在图1中性红染色的洋葱鳞茎内表皮细胞中可见表皮细胞中央液泡所占据被染至砖红色，细胞核被挤至旁边
图2是经詹纳斯绿B 染色的洋葱鳞茎内表皮细胞，图中细胞被染成蓝色可以看见有许多蓝色颗粒状物体，这就是经染色的线粒体。
线粒体活体染色及观察小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察一、实验目的掌握动物细胞活体染色的原理和相关的技术。
二、实验原理活体染色是指对生活有机体的细胞或组织着色但又无害的一种染色法。
它的目的是显示生活细胞内某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。
詹纳斯绿B（Janus green B）是毒性较小的碱性染料，可专一的对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。
三、实验用品1.材料：小白鼠肝脏2.试剂：Ringer溶液：NaCl 0.85g + KCl 0.25g + CaCl2 0.03g + 蒸馏水100ml1%、1/5000詹纳斯绿B溶液：称取50mg詹纳斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，30-40℃加热，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。
取1%原液1ml加入49ml Ringer溶液，即为1/5000工作液装入棕色瓶中备用。
3.器材：显微镜、解剖盘、剪刀、吸管、载玻片、盖玻片、擦镜纸四、实验步骤1.用断头法处死小白鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，取出肝脏，选取边缘较薄的肝组织0.5cm2，放入小烧杯中，用Ringer液冲洗去血污。
2.滴加1/5000詹纳斯绿B溶液于双凹片的凹穴中，再将上述洗净肝组织移入染液，染色20-30分钟，以细胞块边缘被染成蓝绿色为准。
（注意：染色时要使组织块上面部分半露在染液外，不可完全淹没，以便使线粒体酶系得到氧化）3.吸去染液，将肝组织重置小烧杯中，滴加Ringer溶液0.5ml，用剪刀将组织充分剪碎制悬液。
4.取上述细胞悬液滴片，加盖玻片，高倍镜下观察。
五、实验结果在高倍镜下观察到了小鼠肝细胞，每个细胞中都有一些被染成蓝绿色的球状结构，为线粒体。
如下页图所示：高倍镜下线粒体超活染色图六、分析与讨论1.在取肝脏时要注意大小，大概为指甲盖的1/3左右为宜，且不宜太厚，防止里面的线粒体不宜被染色，影响实验结果的观察。
实验一线粒体和液泡系的超活染色[实验目的]1、学习一些细胞的超活染色技术。
2、通过超活染色观察活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。
[实验原理]活体染色是指对生活有机体的细胞或的某些结构组织能着色但又无毒害的一种染色方法。
它的目的是显示生活细胞内的某些结构。
而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。
活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。
一般是以碱性染料最为适用，可能因为它们具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。
站那思虑B和中性红两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。
[仪器、材料与试剂]1、仪器：显微镜、恒温水浴锅2、材料：洋葱鳞茎内表皮细胞、黄豆幼根根尖、载玻片、盖玻片、10ml量筒、吸管、吸水纸黄豆幼根根尖培养方法：将黄豆种子用温水泡胀后，培养在培养皿内多层润湿的滤纸上（水稍淹住黄豆为宜），30℃使其发芽，3~4天后，胚根伸长到1cm以上。
3、试剂：⑴ Ringer溶液（装入滴瓶）氯化钠 0.85g氯化钾 0.25g氯化钙 0.03g蒸馏水 100ml⑵ 1%、1/3000中性红溶液（装入棕色滴瓶）称取0.5g中性红溶于50ml Ringer液，稍加热（30~40℃）使之很快溶解，用滤纸过滤，装于棕色瓶于暗处保存，否则易氧化沉淀，失去染色能力。
临用前，取已配制好的1%中性红溶液1ml，加入29ml Ringer溶液混匀，制成1/3000中性红液装入棕色瓶备用。
⑶ 1%、1/5000詹纳斯绿B溶液（装入棕色滴瓶）称取0.05g詹纳斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，稍加热（30~40℃），使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。
取1%原液1ml加入49ml Ringer溶液，即成1/5000工作液，装入瓶中备用。
Ⅱ人口腔黏膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察
一、实验目的:观察活细胞内线粒体的形态、数量与分布。
二、实验原理:
线粒体是细胞进行呼吸作用的场所,其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同生理状态而发生改变。
詹纳斯绿 B 是一种毒性较小的碱性染料,可专一性的对线粒体进行超活染色, 这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用,使染料始终保持氧化状态(即有色状态 ,呈蓝绿色; 而线粒体周围的细胞质中,这些染料被还原为无色的色基(即无色状态。
三、实验步骤:
1、取清洁载玻片,用牙签宽头在口腔颊黏膜处稍用力刮取上皮细胞,将刮下的黏液状物涂在载玻片上;
2、滴 1滴 0.02%詹纳斯绿 B 染液,染色 10-15 min; (作用,染液不可干燥,必要时加滴染液 ;
3、盖上盖玻片,置显微镜下观察。
4、实验结果:
在低倍镜下, 选择平展的口腔上皮细胞, 换高倍镜观察, 可见扁平状上皮细胞内, 核周围的胞质中, 分布着一些被染成蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构, 即为线粒体。
姓名系年级13级生科3班组别同组者科目细胞生物学实验题目线粒体的超活染色与观察学号【实验目的】掌握动物细胞活体染色的原理和相关的技术。
【实验原理】活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。
它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。
活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。
体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。
体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部位，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。
碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子的，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。
但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。
一般是以碱性染料最为适用，可能因为它们具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。
詹纳斯绿B（Janus green B）和中性红（neutral red）两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。
线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。
詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。
【实验用品】1、材料：小白鼠肝脏、睾丸2、试剂：Ringer溶液：NaCl 0.85g + KCl 0.25g + CaCl2 0.03g + 蒸馏水100ml；1%、1/5000詹纳斯绿B溶液：称取50mg詹纳斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，30-40℃加热，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。
