PTEN表达载体的构建及转染食管鳞癌细胞系EC

PTEN基因真核荧光表达载体的构建及其在喉癌细胞株中的表达陈鸥;李野;赵明;金春顺;金玲;姜艳芳【期刊名称】《吉林大学学报（医学版）》【年(卷),期】2009(35)5【摘要】目的:构建人PTEN基因的真核荧光表达载体并在Hep-2喉癌细胞中高效表达,阐明PTEN基因在喉癌细胞株中的抑癌效果并为喉癌的基因治疗奠定基础.方法:从人喉黏膜组织中提取总RNA,经逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)得到PTEN 全基因.克隆入PGEM-T easy载体上,经过PCR和酶切鉴定为阳性的克隆,进行测序分析.将所获得的基因定向克隆入Pegfp-C1载体中构建PTEN真核荧光表达载体,并将其转入Hep-2细胞中进行表达,Western blotting检测其表达.结果:反转录PCR扩增后的产物,在约1 400 bp处可观察到特异性条带,序列分析表明与GenBank中的PTEN基因序列相同.PCI-PTEN真核载体转染Hep-2细胞后的Western Blotting表明表达产物与抗人PTEN单克隆抗体有特异性免疫反应.结论:成功构建出PTEN真核荧光表达载体,诱导产生蛋白经检测证实为PTEN蛋白.【总页数】4页(P817-820)【作者】陈鸥;李野;赵明;金春顺;金玲;姜艳芳【作者单位】吉林大学第二医院耳鼻咽喉科,吉林,长春,130041;吉林大学第二医院耳鼻咽喉科,吉林,长春,130041;吉林大学第二医院耳鼻咽喉科,吉林,长春,130041;吉林大学第二医院耳鼻咽喉科,吉林,长春,130041;吉林大学中日联谊医院检验科,吉林,长春,130033;吉林大学第一医院感染症科,吉林,长春,130021【正文语种】中文【中图分类】R734;Q784【相关文献】1.PTEN基因真核表达载体的构建及在COS-7细胞株中的表达 [J], 陈鸥;李野;金春顺;姜艳芳;韩岚;朴美兰2.survivin基因启动子调控的HSV-tk真核表达载体的构建及在人喉癌细胞中的特异性表达 [J], 卞卡;张惠中;高萍;王燕;成诗银3.PTEN基因真核表达载体的构建及在MG63中表达 [J], 徐生林;胡勇;金问森;王明明;王京;王娟4.人PTEN基因表达载体的构建及其在U251细胞株中的表达 [J], 徐寿水;徐冬梅;赵文阁;金丽5.survivin基因shRNA真核表达载体的构建及其对人胃癌细胞株中survivin表达的影响 [J], 陈敏;刁振宇;张松;邹晓平;徐肇敏;李运红因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

食管鳞癌组织中PTEN的表达及其临床意义【摘要】目的观察PTEN在食管鳞癌组织当中的表达,探讨其与食管鳞癌发生的联系及其临床意义。

方法应用免疫组化S - P 法检测食管鳞癌组织、癌旁正常食管组织中PTEN的蛋白表达情况。

结果PTEN 在正常食管黏膜和食管癌中阳性率分别为96.4% , 65.5%。

PTEN表达与食管癌的分化程度高低、浸润深度、是否有淋巴结转移和临床分期关系密切( P＜0. 05) ,与患者年龄、性别无关( P ＞0. 05) 。

结论PTEN 蛋白异常表达在食管鳞癌发生发展过程中有重要作用。

【Abstract】Objective To investigate the protein expression and its significance of tumor suppressor gene PTENin esophageal squamous cell carcinoma ( ESCC) . Methods Immunohistochemical staining S - P method was used to determine the expression of PTENin ESCC and the normal esophageal tissues ( NET) which were adjacent to the carcinoma. Results The positive rate ofexpression of PTEN p rotein in NET and ESCC were 96.4% and 65.5%. Expression of PTEN in ESCC was related with expression of lymph node matastais , differention , TNM stage , tumor invasion ( P＜0. 05) , and no relationship with the patients’age andgender( P＞0. 05). Conclusion It is suggested that PTEN can be an objective marker for its pathological and biological behaviors of esophageal squamous cell carcinoma.【Key words】Esophageal squamous cell carcinoma; PTEN; Protein expression PTEN ( Phosphates and Tension homolog deleted on chromosome Ten) /MMAC1 (Mutated in Multip le Advanced Cancer 1 ) /TEP1 ( TGFβ regulated and ep ithelial cell enriched phosphates 1)基因现简称为PTEN, 是Li等[1]1997年从原发性乳腺癌、前列腺癌以及胶质母细胞瘤细胞株克隆得到的位于染色10q23.3的一种具有双特异性磷酸酶活性的新型抑癌因。

siRNA对人食管癌EC9706细胞中Smo、Glil表达
影响的研究的开题报告
一、选题背景
食管癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，人们对其引起的关注度和研究热度也越来越高。

Smo和Glil作为Wnt/β-catenin通路的关键分子，已被证实在多种癌症中发挥了重要作用。

近年来，研究人员也开始探究它们在食管癌中的作用。

二、研究目的
本研究旨在探究siRNA对人食管癌EC9706细胞中Smo、Glil表达的影响，进一步了解它们在食管癌中的作用，为临床治疗提供可能的新思路。

三、研究内容
1. 构建干扰Smo、Glil基因的siRNA序列；
2. 制备Smo、Glil-siRNA纳米颗粒；
3. 对EC9706细胞进行靶向转染；
4. 检测Smo、Glil基因表达水平的改变；
5. 分析Smo、Glil-siRNA对细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭能力的影响。

四、研究意义
本研究可探明siRNA对Smo、Glil基因的干扰是否能够抑制EC9706细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭能力，从而揭示Smo、Glil在食管癌中的作用机制，为未来的临床治疗提供新思路。

下调miR-21表达抑制食管鳞癌EC9706细胞中K-
ras表达的研究的开题报告
研究背景：
食管鳞癌是一种高度侵袭性的肿瘤，对人体健康造成很大的危害。

miRNAs是一种非编码小分子RNA，能够通过结合靶基因的3'非翻译区，调节靶基因的表达。

miR-21作为一种普遍表达于多种癌症中的miRNA，在食管鳞癌中的表达水平也显著升高，并且与肿瘤的发生、发展密切相关。

K-ras是一个可激活多种信号通路的重要蛋白质，其在食管鳞癌中的异常表达也被广泛研究。

本研究旨在探究下调miR-21表达对食管鳞癌EC9706细胞中K-ras表达的影响。

研究内容：
在本研究中，将通过构建miR-21下调表达的EC9706细胞模型，利用PCR检测细胞中K-ras mRNA的表达量，并进行Western blot和免疫荧光染色检测K-ras蛋白的表达水平。

此外，将采用MTT法检测细胞增殖情况及Transwell法检测细胞迁移能力的变化。

预期成果：
本研究预计可以得出下调miR-21表达抑制EC9706细胞中K-ras表达及细胞增殖、迁移的结论。

这将有助于深入理解miR-21对食管鳞癌的重要性，并拓宽食管鳞癌治疗的研究方向。

第37卷第6期2020年12月实验动物科学LABORATORY ANIMAL SCIENCEVol.37 No.6December 2020令研究报告令南蛇藤醇介导的P T E N过表达增强顺铂对食管癌细胞的化学敏感性并抑制裸鼠成瘤能力*高元喜1张炜1王玉霞1严佳丽1刘新宇2(1.宜昌市中医医院肿瘤科，宜昌443000) (2.武汉科技大学附属医学肿瘤科，武汉430064〉摘要：目的探究南蛇藤醇介导的PTEN过表达对食管癌细胞化学敏感性的影响。

方法构建食管癌肿瘤模型小鼠，使用南蛇藤醇（1、5 mg/kg)和顺铂（5 mg/kg)单独或联合对其进行瘤内治疗，观察其肿瘤体积变化和检测30 d 时肿瘤质量；免疫组化检测Ki67，V E G F和Caspase 3的表达情况。

用不同剂量的南蛇藤醇（0.5、1、2.5、5、10、20、50、80、100 pmol/L)处理人食管上皮细胞系（HET-1A)24 h，CCK8分析检测细胞存活率。

顺铂（4 pg/mL)预处理EC109/DDP细胞后分别用不同剂量的南蛇藤醇（1、2.5、5 pmol/L)处理EC109/D D P细胞，对照组用P B S代替顺 铂，CCK8检测细胞存活率；Tmnswell检测细胞的侵袭情况，Western blot检测细胞中EM T相关蛋白以及凋亡相关蛋 白表达情况，Hoechst染色检测细胞调亡情况。

结果南蛇藤醇1m g/k g和5 mg/k g处理后的食管癌肿瘤模型小鼠 体内肿瘤质量和体积均显著降低（尸<〇.〇5) ;P T E N蛋白表达水平显著升高（尸<0.05) ;Ki67，V E G F和Caspase 3阳性细胞数均显著减少（P<〇.〇5)。

用南蛇藤醇（1、2.5、5 m^t io I/L)处理后，与对照组比较，EC109细胞存活率和侵袭 力均显著降低（尸<〇•05);Ki67、PCNA、N-cadherin 和Vimentin 蛋白表达水平显著降低（尸<0. 05 );E-cadherin、cleaved P A R P和cleaved caspase 3蛋白表达水平以及细胞凋亡率显著升高（P<0. 05);干扰P T E N后细胞存活率以及侵袭 力显著升高（P<〇.05);凋亡率显著降低（P<a05)。

食管癌细胞系中TIMP3、E-cadherin基因甲基化的
研究的开题报告
引言：
食管癌是一种恶性肿瘤，其发病率在我国居高不下。

该疾病的治疗效果十分不理想，晚期患者的五年生存率不高，因此防治食管癌具有重要意义。

研究表明，食管癌的发生与基因表达异常、基因突变等有密切关系，而DNA甲基化是其中重要的基因表达调控机制之一。

本研究旨在研究食管癌细胞系中TIMP3、E-cadherin基因甲基化状态及其与食管癌发生的关系。

方法：
通过实验室培养的人食管癌EC109细胞系，采用甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)和双脱氧核糖核酸(DNA)测序技术，检测EC109细胞中TIMP3、E-cadherin基因的甲基化状态。

另外，通过实时荧光定量PCR 技术检测EC109细胞中TIMP3、E-cadherin mRNA的表达水平。

预期结果：
预计将发现在EC109细胞中，TIMP3、E-cadherin基因都存在甲基化现象，并且甲基化程度可能与该基因的表达水平呈负相关。

此外，我们希望研究不同甲基化状态的EC109细胞在肿瘤增殖、侵袭、转移等方面的差异，以阐明甲基化现象与食管癌发生的关系。

结论：
本研究将揭示食管癌细胞系中TIMP3、E-cadherin基因甲基化状态及其在食管癌发生中的作用，有助于拓展食管癌发病机制的认识，为寻找新型食管癌预防、治疗方法提供理论依据。

一、实验背景食道鳞癌是常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率在全球范围内呈上升趋势。

为了深入探讨食道鳞癌的生物学特性，本研究采用细胞培养、流式细胞术、免疫组化等技术，对食道鳞癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭等特性进行系统研究。

二、实验材料与方法1. 实验材料：人食道鳞癌细胞系（HNE1）、人正常食管上皮细胞（GES-1）、DMEM 培养基、胎牛血清、PI染液、Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒、Matrigel侵袭基质等。

2. 实验方法：（1）细胞培养：将HNE1和GES-1细胞分别接种于培养瓶中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。

（2）细胞增殖实验：采用CCK-8法检测细胞增殖情况。

（3）细胞凋亡实验：采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况。

（4）细胞迁移实验：采用Transwell小室法检测细胞迁移能力。

（5）细胞侵袭实验：采用Transwell小室法检测细胞侵袭能力。

（6）免疫组化：采用SP法检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、Vimentin等蛋白的表达。

三、实验结果1. 细胞增殖：与GES-1细胞相比，HNE1细胞增殖速度明显加快，呈剂量依赖性。

2. 细胞凋亡：Annexin V-FITC/PI双染法检测结果显示，HNE1细胞凋亡率低于GES-1细胞。

3. 细胞迁移：Transwell小室法检测结果显示，HNE1细胞迁移能力显著高于GES-1细胞。

4. 细胞侵袭：Transwell小室法检测结果显示，HNE1细胞侵袭能力显著高于GES-1细胞。

5. 免疫组化：免疫组化结果显示，HNE1细胞中E-cadherin表达降低，N-cadherin和Vimentin表达升高。

四、讨论与分析本研究通过细胞培养、流式细胞术、免疫组化等技术，对食道鳞癌细胞的生物学特性进行了系统研究。

结果表明，与正常食管上皮细胞相比，食道鳞癌细胞具有以下特点：1. 细胞增殖能力增强：食道鳞癌细胞在体外培养过程中，增殖速度明显加快，呈剂量依赖性。