鱼类精子冷冻技术取得突破

超低温冷冻技术应用于鱼精子保存的研究进展
超低温冷冻技术是一种目前被广泛应用于生物材料保存的方法。

鱼精子的保存对于鱼
类的繁殖和种质资源保护至关重要。

本文将综述近年来超低温冷冻技术在鱼精子保存方面
的研究进展。

超低温冷冻技术是一种将生物材料保存在非常低温下的方法，其温度一般低于-150℃。

超低温冷冻技术在鱼精子保存方面的应用主要有两个方面：一是通过减缓代谢机制来延长
鱼精子的保存寿命；二是通过冷冻保存来保存鱼精子，并在需要时进行复苏。

超低温冷冻技术可以通过减缓代谢机制来延长鱼精子的保存寿命。

鱼精子在超低温下
的新陈代谢速度减慢，从而延缓了其老化和死亡进程。

超低温冷冻技术还可以抑制鱼精子
中的氧化过程，减少自由基的产生，从而进一步延长保存寿命。

超低温冷冻技术还可以通过冷冻保存来保存鱼精子，并在需要时进行复苏。

鱼精子在
超低温下可以长时间保存而不出现明显的损伤，这使得鱼类种质资源的保存和传播变得更
加容易。

超低温冷冻技术还可以有效地保存鱼精子的遗传信息，保持其种质特性。

超低温冷冻技术在鱼精子保存方面还存在一些挑战和问题。

超低温冷冻技术对鱼精子
的保存温度和冷冻速率要求非常高，这对保存设备和技术人员的要求也相应提高。

超低温
冷冻技术在鱼精子保存过程中可能会引起细胞结构和功能的改变，从而影响其后续应用。

超低温冷冻技术的保存成本较高，这也限制了其在实际应用中的推广和应用。

超低温冷冻技术应用于鱼精子保存的研究进展一、超低温冷冻技术的原理和特点超低温冷冻技术是一种将生物样本（如细胞、组织、精子等）在极低温条件下迅速冷冻，并存储在液氮罐中的技术。

其主要原理是通过将生物样本的温度降至极低温度（通常为零下196摄氏度），使生物样本处于一种叫做“玻璃态”的状态，从而避免了细胞内部结构和生物大分子的冻结破坏。

超低温冷冻技术在生物样本保存和维持其活力方面具有独特的优势，因此被广泛应用于细胞培养、生物医学研究等领域。

超低温冷冻技术具有以下特点：1. 低温保存稳定性好：超低温冷冻技术能够将生物样本保存在极低温度下，使其处于基本静止状态，从而实现长期稳定保存。

2. 保存有效性强：超低温冷冻技术在保存生物样本的活力和遗传信息方面具有独特的优势，保持样本的原貌和功能。

3. 保存成本低廉：相比于其他生物样本保存方法，超低温冷冻技术的保存成本较低，操作简单，易于推广应用。

二、超低温冷冻技术在鱼精子保存中的研究进展近年来，随着超低温冷冻技术的不断完善和推广，越来越多的研究者开始将其应用于鱼精子的保存。

通过对不同鱼种精子的冷冻保存实验，得出了一系列具有重要意义的研究成果，有效地推动了鱼类资源的保护和利用。

1. 鱼精子的冷冻保存条件的优化在超低温冷冻技术应用于鱼精子保存的研究中，首要的问题是确定最适宜的冷冻保存条件。

研究者在选择冷冻保存液体、添加保护剂、采用不同的冷冻速率等方面进行了大量的实验研究，最终确定了适用于不同鱼种精子的最佳冷冻保存条件。

这为鱼精子保存的实际应用提供了有力的科学依据。

2. 对冷冻保存鱼精子的质量评估研究为了评估冷冻保存鱼精子的质量，研究者们进行了大量的质量评估研究，包括鱼精子的存活率、活力、形态以及遗传物质的完整性等指标。

通过大量的实验数据和对比分析，研究人员明确了超低温冷冻技术对鱼精子保存质量的影响规律，并提出了改进措施。

3. 鱼精子保存技术的实际应用除了在实验室条件下进行研究外，超低温冷冻技术在鱼精子保存领域也已得到了一定的实际应用。

超低温冷冻技术应用于鱼精子保存的研究进展超低温冷冻技术是目前最先进的生物样本保存方法之一。

在鱼类繁殖研究中，超低温冷冻技术已广泛应用于鱼精子的保存和处理。

本文将从保存条件、鱼精子质量及保存时间等方面综述超低温冷冻技术在鱼精子保存中的应用研究进展。

一、保存条件超低温冷冻技术的保存温度一般为-80℃或更低，另外液态氮的温度为-196℃。

但不同鱼种、精液类型和处理方法对保存条件的要求有所不同。

比如对于大多数淡水鱼和近海鱼，保存于液态氮中的速冻精液质量更好。

而对于海水鱼则需进行渗透调节后保存于-80℃中；对于不同性质的精液，也有不同的处理方法，如加入不同的保护剂或采用冷冻干燥的方法等。

二、鱼精子质量超低温冷冻处理使鱼精子出现鲜明的形态和生理变化，进一步影响鱼精液的质量。

因此，研究鱼精子保存过程中的质量变化并探索其相关保护方法至关重要。

研究结果表明，鱼精子在超低温保存过程中，不同鱼种、鱼龄和保存条件下产生的损伤程度有所不同。

同时，保护剂可有效缓解和减轻冻存过程中精子的受损。

比如，葡萄糖、酵母抽提物、蛋白质组等保护剂可保护鱼精子的完整性和活力，发挥出一定的保护作用。

三、保存时间超低温冷冻处理是一种长期保存精子的方法，但随着保存时间的延长，鱼精子的保存质量将逐渐下降，传统冻存方式往往无法满足需求。

因此，通过研究不同的保存条件和变化情况，可以找到更好的方法来保护和延长鱼精子的保存时间及质量。

研究发现，多种保护剂、处理方法和保存温度均会影响鱼精子的保存时间和质量，如液氮保存下短时间内鱼精子活力下降较少，但长期保存仍需在-80℃中；而添加葡萄糖保护剂可有效地保护鱼精子被保存数月或数年后仍保持一定的生殖活力。

总结：超低温冷冻技术不仅是鱼类精液保存的有效方法之一，同时对实现鱼类品种改良和保护有重要意义。

因此，加强相关技术研究和推广应用，提高鱼精液保存质量及保存时间，越来越得到人们的重视。

鱼精子冷冻保存的优化策略鱼类在生殖过程中需要产生大量的精子和卵子进行受精作用，而冷冻保存鱼精子是为了保证鱼类的生育能力，也是种贸易和科研的需求。

然而，鱼精子在冷冻保存过程中容易受到各种因素的损害，从而影响其生育力和使用效果。

为了优化鱼精子冷冻保存策略，以下是几种可行的优化方法。

一、选择适合的保存温度和时间鱼精子的保存温度和时间是影响其生育能力和使用效果的重要因素。

一般来说，鱼精子的保存温度为-196℃。

同时，将鱼精子在液氮中保存时间控制在10年以内，可以有效维持鱼精子的活力和保存效果。

此外，在鱼精子冷冻保存过程中，还需要注意保存容器的选择和保存方式的调整，以确保鱼精子处在适宜的保存状态。

二、加入保护剂保护剂可以减少鱼精子在冷冻保存期间的氧化损伤和细胞膜破坏，从而增加鱼精子的生育能力和使用效果。

一般来说，添加5%蔗糖和0.1%的牛血清白蛋白等物质，可以有效地增强鱼精子的渗透压和保护细胞膜。

但是，添加的保护剂不能过多，否则会对鱼精子造成不良影响。

三、选用高质量鱼精子选用高质量的鱼精子对于优化鱼精子冷冻保存效果至关重要。

高质量的鱼精子表示其形态完整、大小均匀、活力充沛。

此外，需要对鱼精子进行筛选和分离，只选择能够进行受精作用的精子，以确保保存下来的精子质量良好。

四、利用最新技术近年来，科技的发展给鱼精子冷冻保存带来了很多创新。

例如，利用离子液体（Ionic liquids）、生物柔形材料（Bio-inspired soft materials）等新技术，可以增强鱼精子的生育能力和使用效果。

在实际应用中，研究人员可以结合实际情况，选择最新的技术手段来进行鱼精子冷冻保存的优化操作。

总之，鱼精子的冷冻保存是科研和工业领域的重要需求，同时也为鱼类的保育和生态环境的保护提供了技术支持。

优化鱼精子冷冻保存策略的方法多种多样，但其目的都是为了增强鱼精子的生育能力和使用效果，为水产产业的发展和自然生态环境的保护做出贡献。

第37卷第4期 水产科学Vol . 37 No . 42018 年 7 月F I S H E R I E S S C I E N C EJul . 2018DOI ：10. 16378/j . cnki . 1003-1111. 2018. 04. 008超低温冷冻保存中华鲟^精子授精方法研究舒德斌1>2，刘雪清1>2，张建明1>2，肖衍1>2，赵珣1>2，郭柏福w ,姜华杜合军〃(1.中国长江三峡集团有限公司中华锝研究所，湖北宜昌443100;2.三峡工程鱼类资源保护湖北省重点实验室，湖北宜昌443100 )摘要：利用超低温冷冻保存中华鍀子一代(朽）的精液，研究4种不同激活液、2种不同的授精方式及 5种不同冻精授精量对授精效果的影响。

结果表明，冷冻保存365 d 的中华鍀R 冻精，用养殖水激活 授精效果优于4种激活液，获得(15. 04±0. 58) %的受精率和（14. 6 ±0. 59) %的孵化率。

相同条件下， 试验1、试验2和试验3的湿法受精率和孵化率分别为（18. 3士 1. 45)%、（13. 57士0. 76)%、（18. 65士 0. 42)%和（16. 82±2. 01)%、（11. 03±0. 98)%、（15. 87±1. 25)%，湿法授精效果均优于干法授精。

用 10 m L 中华鍀卵与不同冻精授精量进行湿法授精，精子密度3. 82X 10s 个/mL ,稀释比1 : 2,冻精活力 (35. 45±5. 26)%，冻精用量0. 1〜0.6 mL ，随着冻精用量的加大，受精率和孵化率呈现上升趋势，0.6m L 时，受精率和孵化率达最高，分别为(16. 43±1. 57)%和（14. 58±1. 35)%，但随着冻精用量的继续加大，其受精率和孵化率随之下降。

关键词：中华鲟;冻精;激活液;授精方式中图分类号：S 965.199 文献标识码：A文章编号：1003-1111(2018)04-0484-05中华爵()隶属于爵形目、爵科、锝属，是典型的溯河生殖洄游性鱼类，主要分布 于我国东海、黄海和渤海大陆架水域及流人其中的大型河流中M ，是我国特有的大型古老鱼类，属国 家一级重点保护动物。

4．海水鱼类精子超低温保存技术及其应用
中国科学院海洋研究所于2003年建立了重要海水养殖动物冷冻精子库，保存有十几种海水经济鱼类的冷冻精子。

目前超低温冷冻精子已成功地应用于牙鲆与夏鲆、真鲷与黑鲷杂交育苗实验和生产；大菱鲆、牙鲆、漠斑牙鲆等的异源雌核发育诱导；牙鲆、夏鲆、条斑星鲽等鱼种的人工规模化苗种生产及遗传育种等方面。

可向研究院所、生产企业提供鱼类精子冷冻技术、库存冷冻精子，以及其它相关技术服务和材料支持。

技术指标：（1）保存方法：程序降温法、液氮容器分步冷冻法、大容量冷冻保存法、高浓度冷冻保存法等多种海水鱼类精子冷冻保存方法；
（2）保存种类：真鲷、大菱鲆、牙鲆、夏鲆、条斑星鲽、圆斑星鲽、星斑川鲽、大黄鱼、蓝点马鲛、条石鲷等十余种海水经济鱼类精子；
（3）检测方法：计算机辅助分析技术、单细胞凝胶电泳技术、流式细胞分析技术等鱼类精子质量检测技术；
（4）保存质量：冷冻精子复活率均在80％以上，受精率、孵化率均达到90％以上。

合作方式：技术转让、技术合作。

动物科学现代农业科技2015年第22期大泷六线鱼(Hexagrammos otakii )又名欧式六线鱼,俗称黄鱼、黄棒子等,隶属于鲉形目(Scorpaeniformes )、六线鱼科(Hexagrammidae )、六线鱼属(Hexagrammos )[1]。

大泷六线鱼属近海冷温性底层鱼类,在我国黄、渤海以及日本、朝鲜和俄罗斯远东诸海都有分布,其肉味鲜美,有“北方石斑”之称[2]。

该鱼具有很强的低温耐性,生长迅速,肉质鲜嫩,可以活鱼上市,适宜在北方进行网箱养殖,具有比极高的经济价值。

目前,国内对大泷六线鱼的研究主要包括体内组织细胞学研究[3-4]、人工育苗技术[5-6]及生物学变化[7-9]等方面。

然而,对其繁殖生理研究鲜有报道[10-11],但有关精液生理的研究尚未见报道。

随着经济飞速发展及海洋水环境变化,重要海水养殖优良品种种质保存已成为我国海水养殖业中亟待解决的问题。

无论是海水鱼类遗传多样性的保护,还是海水鱼类遗传改良和生物技术育种以及本文采用分步降温法冷冻保存了大泷六线鱼精液,通过该项研究尝试建立科学的大泷六线鱼精液冷冻保存方法,并为大泷六线鱼生殖调控与育种提供科学依据。

海水养殖业的可持续发展,对海水鱼类精子冷冻保存及种质库建立都有着迫切的需求。

1材料与方法1.1样品采集试验用鱼采购自青岛南山市场,采样时间为2014年11月至次年1月。

试验采用精巢发育良好的活体雄鱼,体重500~700g ,用手轻轻挤压腹部有精液流出。

试验时,将其置于干燥海绵上,蒸馏水冲洗生殖孔3次至无尿液、黏液残留,然后清水洗净,轻轻在腹部沿鱼头至鱼尾方向挤压,将未经污染的精液收集在2mL 离心管中。

用计算机辅助精子分析系统(CASA )检测精子运动率,选择运动率高于90%的样品进行冷冻保存。

1.2试验方法试验选取5种不同的抗冻保护剂:DMSO (二甲基亚砜)、PG (丙二醇)、GLY (甘油)、MET (甲醇)、EG (乙二醇),用HBSS稀释液(8g/L NaCl ,0.4g/L KCl ,1g/L 葡萄糖,60mg/L KH 2PO 4,47.5mg/L Na 2HPO 4,调节pH 值至7.2)进行稀释。