稀少精子冷冻技术

实验室常用猪精液的低温保存方法
一、冷冻保存
冷冻保存是猪精液最常见的保存方法之一。

在冷冻保存之前，需要对猪精液进行初步处理。

需要保持猪精液的干净和纯净，避免杂质的混入。

将处理好的猪精液放入专用的冷冻管中，然后将冷冻管放入冷冻盒中。

接着，将冷冻盒放入专用的冷冻机中，进行冷冻保存。

在冷冻保存的过程中，需要控制温度和湿度，避免冷冻温度过高或者过低，以免影响猪精液的质量。

冷冻保存方法能够长时间保存猪精液，并且保持猪精液的活力和质量，适用于长时间保存和远距离运输。

二、液氮保存
液氮保存方法能够更好地保持猪精液的质量和活力，可以长时间保存，并且适用于大规模的保存和长时间的保存需求。

液氮保存需要特殊的设备和条件，并且保存、运输和使用过程中需要更加小心谨慎，否则会影响猪精液的质量。

三、干冰保存
干冰保存是一种中等程度的低温保存方法。

在干冰保存之前，同样需要对猪精液进行初步处理。

然后将处理好的猪精液装入专用的干冰盒中，接着将干冰盒放入专用的冷冻设备中进行保存。

干冰保存方法能够较长时间地保存猪精液，并且适用于一般实验室的保存需求。

它比液氮保存更为便捷和易行，但是保存时间相对较短。

实验室常用猪精液的低温保存方法有冷冻保存、液氮保存和干冰保存等多种方式。

不同的保存方法适用于不同的实验需求和实际情况，实验室人员需要根据实际情况进行选择和使用。

在保存猪精液的过程中，需要注意保持猪精液的纯净和完整，控制保存温度和湿度，以及避免受到外界因素的影响，以确保保存的猪精液的质量和活力。

希望本文对实验室人员在猪精液保存方面有所帮助。

572023.6中，能够促使鸡蛋的蛋黄沉积并降低其病死率。

在獭兔日粮中分别添加0.1%、0.15%复合酸化剂，獭兔腹泻率和死亡率明显下降。

随剂量的增加，复合酸化剂对肉兔的生长性能和病死率的作用接近抗生素的效果。

3　复合酸化剂对猪生产性能的影响3.1　复合酸化剂对猪生长性能和腹泻率的影响在猪自由采食时，猪的采食量直接影响其生长性能的高低。

许多报道显示，复合酸化剂可以提升日粮的适口性，采食量增加。

研究者在断奶仔猪中添加0.15%酸化剂，其日增重有所增加，腹泻率下降22%。

研究人员在断奶仔猪饲料中添加不同酸化剂，显示酸化剂在提升生长性能和降低腹泻率方面有显著影响。

3.2　复合酸化剂对猪肠道微生物的影响在酸性条件下，致病菌的生长受到一定抑制，有益菌增殖速度较快。

有报道，将不同的有机酸添加至仔猪的日粮中，各组产气荚膜杆菌和大肠埃希菌的增殖均受到抑制。

饲喂酸化剂后，检测仔猪粪便，沙门氏菌和大肠埃希菌数量明显减少，乳酸菌含量约为复合抗生素组的2倍。

将0.2%山梨酸添加至母猪日粮中，对仔猪哺乳期窝重有促进作用。

产前7日在母猪日粮中添加丙酸、乙酸复合酸化剂，对哺乳期三元杂交母猪采食量无明显改善，但2000毫克/公斤组蛋白质消化率高于对照组3.43%。

3.3　复合酸化剂对猪免疫功能的影响猪血清中血清总蛋白、白蛋白和球蛋白可以反映蛋白质代谢水平与猪机体健康状况。

投喂复合酸化剂的仔猪，血清中白蛋白含量显著增加。

研究表明，仔猪日粮中添加0.1%复合酸化剂后，显著提高血清总蛋白和球蛋白水平。

研究显示，饲喂添加酸化剂后，仔猪血液IgG水平显著提升，但IgM含量无显著变化。

由柠檬酸、甲酸、苯甲酸、磷酸、富马酸、甘蔗糖蜜、乙酸和丙酸制成的复合酸化剂组与复合抗生素组相比，血清IgM含量提高34.8%，提升断奶仔猪的免疫功能。

3.4　复合酸化剂对母猪初乳品质的影响在新生仔猪的生长过程中，初乳的免疫作用极其重要。

新生仔猪体内能力储备量少，其应对环境的变化，需耗费大量能量，新生仔猪断奶前能量来源为母乳，母乳品质高低对仔猪成活率产生直接影响。

精液冷冻储藏技术掌握精液收集处理和储存的方法精液冷冻储藏技术是一项重要的生物技术，它可以帮助人们保存和储存精液。

无论是用于人类繁殖技术还是动物繁殖技术，精液冷冻储藏技术都发挥着重要的作用。

本文将介绍精液收集、处理和储存的方法。

一、精液收集方法精液的收集是精液冷冻储藏的第一步，它要求采用合适的方法来保证收集到高质量的精液样本。

1. 人类精液收集方法:人类精液的收集通常采用自慰法。

收集器宜选用干净的容器，确保不会对精液样本产生污染。

在收集的过程中，应保持良好的心态和放松的状态。

2. 动物精液收集方法：动物的精液收集可采用人工授精法、人工阴道法等多种方法。

具体方法需要根据不同动物的特点来确定。

二、精液处理方法精液的处理是为了去除其中的杂质，提高精液的质量。

1. 离心法：通过离心分离法，可以将精液中的不碳水化合物、细胞和其他杂质去除，提高精液的纯度。

离心的速度和时间需要根据精液的浓度和特性来确定。

2. 过滤法：通过过滤器过滤精液，使其中的颗粒和污染物被过滤掉，确保精液的干净和纯度。

三、精液储存方法精液储存是精液冷冻储藏技术的最后一步，它是为了确保精液的长期保存和保存质量。

1. 液氮储存：液氮储存是当前最常用的精液储存方法之一。

将处理好的精液样本放入液氮罐中，保持温度在零下196摄氏度，确保精液的长期保存。

2. 冷冻储存：冷冻储存是另一种常用的精液储存方法。

将处理好的精液样本放入冷冻管中，通过快速冷冻和在低温下保存，确保精液的保存质量。

总结：精液冷冻储藏技术是一项重要的生物技术，它可以帮助人们保存和储存精液，无论是用于人类繁殖技术还是动物繁殖技术。

在进行精液冷冻储藏之前，需要准确掌握精液收集、处理和储存的方法。

精液冷冻储藏技术的正确应用将对人类和动物的繁殖事业产生积极的影响。

实验十五精液的冷冻保存一.实验特点实验类型：综合型实验实验类别：专业基础课计划学时：2学时每组人数：3～4人二、实验目的要求精子具有受温度变化直接影响本身活动力和代谢能力力的生物学特性。

利用这一特性，将精液特殊处理后，保存在超低温下，精子代谢活动完全受到抑制，停止能量消耗，处于生命静止状态，长期保存下来。

一旦升温精子又能复苏并维持其原来的受精能力。

要求同学们了解精液冷冻保存的技术操作过程和精液冷冻保存原理，初步学会冷冻保存方法。

三．实验原理冰晶化是水在降温过程中的一定温度下，水分子重新按几何图形排列形成冰晶。

冰晶可造成精细胞（精子）内外的溶质浓度和渗透压增高，引起细胞内脱水、原生质变干、酸碱失去平衡、细胞膜和顶体以及整个组织和结构破坏等致死性伤害，最后导致精子发生不可逆的变化而死亡。

一般精液内含85%～95%的水分，精子内也含有及少量的水分，这些水分在降温过程中在-0.6～-60℃温度区内缓慢降温能形成冰晶。

降温速率越慢，所形成的冰晶越大，其中特别以-15～-25℃时冰晶形成最多。

在冷冻精液过程中只有避开这个有害温度区，才能得以长期保存。

快速升降温度的办法，难以达到完全玻璃化冻结条件。

为此，在制作冷冻精液的稀释液内，要加入一定量的甘油等抗冻害物质。

甘油具有极强的亲水性，可限制水分子形成冰晶而处于过冷状态，降低水形成冰晶的温度，即缩小精子的有害温度的上限。

此外甘油容易渗透精子内，可降低渗透压改变的不良影响及营养作用等，增强精子的抗冻害能力和无冻害生存环境。

精液在冷冻过程中不可避免地要形成冰晶，精子能否生存的关键在于冰晶的大小，冰晶越大对精液伤害越大，反之冰晶越小，伤害越小甚至无损伤。

因此，只要避免大冰晶形成，并使精子稳定在微晶的状态下，一旦升温精子又能复苏并维持其原来的受精能力。

四．实验材料和仪器精液、2.9%的柠檬酸钠溶液、50～100ml烧杯、滴管、10 ml试管、低温温度计、20～80目纱网、漏勺、灭菌纱布袋、液氮罐、液氮、载玻片、盖玻片、显微镜、保温箱。

冷冻精液技术的研究作者：刘新娥来源：《农业开发与装备》 2012年第6期刘新娥（新疆阜康市职业中等专业学校，新疆阜康 831500）摘要：品种改良必须有良法，俗话说“母畜好，好一线，公畜好，好一坡”，这充分说明了公畜在繁殖改良中的重要作用。

冷冻精液和人工授精（AI）的推广，就可以大大提高优良种畜的使用价值。

在我国20世纪30年代就开展了人工授精技术，70年代中期进行了冷冻精液的研究。

家畜冷冻精液研究的成功，使人工授精技术又有了新的发展。

冷冻精液不受时间、空间和种畜寿命的限制，可以最大限度地发挥优良种畜的作用。

因此，人工受精技术就成了一门全新科学技术，冷冻精液技术就至关重要。

关键词：精液品质；稀释液；冷冻精液1 精液品质的鉴定1.1 鲜精质量评定1.1.1 肉眼。

从射精量、稠度、颜色、气味、异物等方面进行评定精子。

1.1.2 显微镜。

（1）精子活率：直线向前运动精子百分率一般在0.7～0.8左右，不低于0.6。

（2）精子密度：A、估测法，粗略分为“密”“中”“稀”三级，但有赖于检查者经验有一定的主观性，误差较大。

B、血细胞计计数法，使用血细胞板，可准确的测定每单位容积精液中精子数。

1.2 冻精质量评定在某一天冷冻精液，要在冷冻当天和冷冻后第14天解冻检评。

抽检两次仍低于标准，整批冻精将被弃去。

冻精出售还要进行最后一次检评。

冻精活力按国际标准不得低于0.3，每份冻精有效精子数不得少于1200万。

另外，对顶体完整率和细菌指标都有严格的规定。

2 精液稀释和稀释度目前牛冷冻精液所用稀释液，有70%的国家使用20%卵黄一三基缓冲液；20%是牛奶卵黄稀释液；10%卵黄—乳糖液制作颗粒。

2.1 精液稀释目的1）扩大精液容量；2）通过降低精液能量消耗，补充适量营养和保护物质，延长精子的寿命；3）便于精子保存和运输.2.2 精液稀释液的主要成分及其作用2.2.1 稀释剂。

主要用来扩大精液容量。

因此，此种物质的剂量，必须与精液有相同的或相似渗透压。

精子的简易保存方法
精子的保存方法可以分为两种：长期保存和短期保存。

短期保存方法：
1. 使用特制的精子保存液：在实验室或生育技术中心，精子可以使用特制的精子保存液进行短期保存，如液氮冷冻保存液。

2. 阴囊内保存：男性可以将精液保存在阴囊内，阴囊的温度比体温低一些，有助于延缓精子的新陈代谢，但此方法只适用于短期保存，不能超过数小时。

长期保存方法：
1. 冷冻保存：精子可以被冷冻并存放在液氮罐中，通常使用特殊的冷冻保存液保护精子的质量。

这种方法能够长期保存精子，但需要專業的冷凍保存设备和技术。

2. 冷冻干燥保存：精子可以冷冻干燥并封装在密封容器中，以在较长时间内保持稳定。

这种方法也需要专业的设备和技术。

无论使用哪种方法，精子保存前需要经过初步的处理，如去除其他液体和不健康的精子，以保持保存的精子的质量和活力。

精子保存的有效期根据保存方法的不同可以从数小时到数十年不等，建议咨询专业的医生或生殖技术专家获得更详细的指导。

鸡精液冷冻技术规程1范围本文件规定了鸡精液冷冻的器具清洗与消毒，精液采集、稀释（I液）与质量检测，冷冻保护液（11液）添加与细管精液制作，细管冷冻，细管解冻及活力检测，离心去甘油（11I液、IV液），输精和冷冻精液受精率检测，细管冷冻精液的保存等内容。

本文件适用于长期超低温冷冻保存的鸡精液细管精液制作。

2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。

其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

牛冷冻精液包装、标签、储存和运输GB/T30396牛冷冻精液生产技术规程NY/T1234家禽精液品质检测方法NY/T40473术语和定义下列术语和定义适用于本文件。

4器具清洗与消毒重复使用的器皿，使用后立即用清水浸泡，其它操作按NY/T1234的规定执行。

5精液采集、稀释（I液）与质量检测5.1提前2h将用到的稀释液，从冷冻室置入冷藏室。

5.2采用背腹部联合按摩双人或单人采精法，手握预热含有0.2mL左右第一步稀释液（简称“液”）的5mL离心管采集单只公鸡精液，轻轻混匀后，置于2°C~5°C冷藏箱中（可以用冰水混合物）。

依次采集完所有公鸡精液后，立即运输到实验室。

5.3将稀释后精液转移至2C~5°C冷藏箱，从第一步稀释后冷藏计时约30min。

同时取10μL精液在32℃视屏恒温显微镜下观察，活力≥0∙7（评定依据见附录C）,密度≥1.5χl0t7mL用于精液冷冻，眼观密度评定见附录C。

一般稀释比例为原精与稀释液1：1,如果密度太高则再利用等温I液进行适当稀释。

5.4如果远距离运输原精制作冻精，用I液等比稀释后存放于2C~5C冷藏箱，应在4h内进行冻精制作。

6冷冻保护液（11液）添加与细管精液制作6.1将已预冷或现配的第二步稀释液即冷冻保护液（简称“II”液），按精液与稀释液比例1：1（含甘油浓度为12%）或者1：0.5（含甘油浓度为18%）,加入到第一次稀释平衡后的精液中，甘油终浓度为6%,并在2C~5C条件下平衡IOmin。