一氧化氮与内皮素在冠心康胶囊对实验性急性心肌缺血大鼠心肌损伤保护中的作用

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收稿日期:2006205209; 修订日期:2007201212基金项目:黑龙江省科学技术厅资助项目(No .G B01C10702)作者简介:潘 志(19722),男(汉族),吉林长春人,现任北京大学化学与分子工程学院讲师,博士学位,主要从事天然药物研发工作.一氧化氮与内皮素在冠心康胶囊对实验性急性心肌缺血大鼠心肌损伤保护中的作用潘 志1,段富津2,魏雄辉1(1.北京大学化学与分子工程学院,北京 100871;2.黑龙江中医药大学,黑龙江哈尔滨 150040)摘要:目的探讨一氧化氮(NO )和内皮素(ET )在冠心康胶囊保护大鼠心肌损伤中的作用。

方法将30只雄性W istar大鼠随机分为正常对照组、急性心肌缺血大鼠心肌损伤模型组和冠心康胶囊治疗组,每组10只。

实验中监测各组大鼠心电、心肌酶(CK,CK 2MB ,LDH )变化,同时观察血清和心肌组织匀浆中NO 和ET 水平的改变。

结果冠心康胶囊治疗组可显著降低心肌缺血大鼠心电图ST -T 段变化值,治疗组的心肌酶(CK,CK 2MB ,LDH )水平较模型组明显降低(P <0.01);血清和心肌组织匀浆中NO 明显升高,而血清和心肌组织匀浆中ET 含量明显降低(均P <0.05)。

结论冠心康胶囊能明显减轻急性心肌缺血心肌损害,能提高血清及心肌组织的NO 水平,并降低ET 的水平;NO 和ET 的变化可能是其防治心肌损伤的重要机制之一。

关键词:一氧化氮; 内皮素; 冠心康胶囊; 急性心肌缺血; 心肌损伤中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:100820805(2007)0621296202Effects of Guanx i n kang Capsules on N itr i c O x i de and Endotheli n i n M yocard i um Dam 2aged Ra ts I nduced by Acute M yocard i a l Ischem i aP AN Z hi 1,DUAN F u 2jin 2,W E I X i ong 2hui1(1.D epart m ent of A pplied Che m istry,College of Che m istry and M olecular Engineering,Peking U niversity,B ei 2jing 100871,China;2.Heilong jiang U niversity of Ch inese M edicine and M ateria M edica,Harbin 150040,Chi 2na )Abstract:O bjecti ve To evaluate the r ole of nitric oxide (NO )and endothelin (ET )in the p r otective effect of GuanxinkangCap sules in myocardiu m da maged rats .M ethods 30male wistar rats were random ly divided int o 3gr oup s,contr ol gr oup (n =10),acute myocardial ische m ia gr oup (n =10)and Guanxinkang Cap sules gr oup (n =10).During the experi m ent ,elec 2tr ocardi ography and seru m CK,CK 2MB and LDH were compared a mong the 3gr oup s .The levels of NO and ET in seru m ,myocar 2diu m were als o measured .Results The rising degree of ST 2T obvi ously decreased in acute myocardial ische m ia rats treated with Guanxinkang Cap sules .The levels of seru m CK,CK 2MB and LDH ,all decreased compared with model gr oup (P <0.01).I n ad 2diti on ,the NO levels in seru m and myocardiu m increased significantly ,while the ET level in myocardiu m markedly decreased compared with model gr oup (P <0.05).Conclusi on Guanxinkang Cap sules can effectively a meli orate the myocardiu m injury induced by acute myocardial ische m ia increase NO and decrease ET .The changes of NO and ET may p lay a r ole in the pathogene 2sis and p r ogress of myocardial injury .Key words:N itric oxide; Endothelin; Guanxinkang Cap sules; Acute Myocardial Ische m ia; M yocardiu m injury 人参皂苷是人参的主要有效成分,其中人参皂苷Rg2,Rb1,Re 等具有保护心肌、改善心脏功能、扩张冠状动脉、增加冠脉流量、抗心肌缺血、改善心肌梗塞等作用[1~3]。

山楂叶中所含的黄酮成分具有多种药理作用,能使冠状动脉扩张,有降血脂、降血压和强心作用,能改善心脏活力和兴奋中枢神经系统的作用,且具有抗氧化自由基对血管内皮细胞(VEC )伤害的作用[4,5]。

二者是冠心康胶囊的主要组成药物。

本研究进一步探讨该复方对心肌缺血的治疗作用,以探讨其对心肌保护作用的可能机制。

1 材料和方法1.1 动物及分组健康雄性W istar 大鼠,体重(200±20)g,由黑龙江中医药大学实验动物中心提供,适应性喂养1周后随机分成3组,即正常对照组、模型组、治疗组。

1.2 药物与仪器冠心康胶囊悬液:按处方比例称取中药材,按制备工艺制药[6],用蒸馏水配成悬液(2g 生药/m l );盐酸异丙肾上腺素注射液(I S O,上海禾丰制药有限公司提供,批号010901);乌拉坦(沪Q /HG222771/68,批号010205,临用时用生理盐水配成20%注射液);磷酸肌酸激酶(CK )试剂盒、磷酸肌酸激酶同功酶(CK 2MB )试剂盒、乳酸脱氢酶(LDH )试剂盒(北京中生北控生物科技股份有限公司提供);NO 试剂盒(南京建成生物工程研究所提供);内皮素(ET )试剂盒(中国人民解放军总医院科技开发中心放免所提供);心电图机[(心电图(ECG )26511型,上海光电医用电子仪器有限公司)];L isa300型全自动生化分析仪;台式高速离心机(TG L 216G );722型光栅分光光度计(山东高密分析仪器厂)。

1.3 方法1.3.1 心电图检测实验用药前将各组大鼠先作心电图检查,弃去ST 段、T 波有异常改变者和心律失常者[7,8],分组,每组10只,继则开始按人与大鼠体表面积换算给药量,每天分别灌胃给药,冠心康胶囊悬液(10.35g 生药/kg ),模型组与正常对照组每天给以等体积蒸馏水灌胃。

连续给药14d,并且于给药第13天和14天各组动物分别以20%乌拉坦麻醉,仰位固定,皮下多点注射盐酸异丙肾上腺素。

于第2次注射盐酸异丙肾上腺素后,连接心电图机,走纸速度50mm /s,标准电压10mm /mv,记录II 导联心・6921・时珍国医国药2007年第18卷第6期L I SH I ZHEN MED I C I N E AND MATER I A MED I CA RESEARCH 2007VOL.18NO.6 电图。

1.3.2 血清CK,CK2MB,LDH检测采用颈静脉取血方法,将血液迅速装试管中,静置后,4℃3000r/m in离心10m in,分离血清,按试剂盒说明进行测定血清CK,CK2MB,LDH活性。

1.3.3 NO检测采用硝酸还原酶法测定血清中NO含量。

血清NO测定:实验结束时从下腔静脉采血,分离血清,测定NO。

心肌组织NO测定:动物处死后迅速取出心脏,洗净残血,剪碎,取心肌组织100mg置于玻璃匀浆器中加入0.01mol/L P BS 1m l,冰浴下匀浆,然后4℃,4000r/m in离心15m in,取上清,按试剂盒说明进行测定NO水平。

1.3.4 ET检测动物处死后,摘取心脏,立即用预冷的生理盐水冲洗,除去血液,切取大鼠心尖部心肌组织,称重,取100mg,迅速放入0.1mol/L HAC1m l略做研磨,然后在100℃水浴中煮沸10m in,再次研磨制成匀浆,在4℃,3000r/m in离心15m in,取上清测定ET水平。

1.4 统计学处理所有数据经SPSS软件处理,采用单因素方差分析,用 x±s表示。

2 结果2.1 实验大鼠心电62ST(mv)指标变化情况大鼠注射I S O后S2T段均明显抬高,模型组与正常组比较差异显著(P<0.05),提示造模成功;且治疗组在各不同时间段可改善心肌缺血引起的S2T段抬高,与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。

结果见表1。

表1 实验大鼠S2T段变化情况( x±s)组别5m in10m in15m in20m in30m in正常0.05±0.020.05±0.010.06±0.010.05±0.020.04±0.02模型0.32±0.12△0.33±0.05△0.34±0.05△0.29±0.05△0.20±0.06△治疗0.14±0.0230.21±0.0530.18±0.0630.17±0.0330.14±0.053 与模型组比较,3P<0.05;与正常组比较,△P<0.05;n=102.2 实验大鼠心肌酶学指标变化情况大鼠造成心肌缺血模型后,血清中CK,CK2MB,LDH含量较正常组显著升高(P< 0.05)。