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汉坦病毒(Hantavirus)研究进展
姚智慧
【期刊名称】《中国人兽共患病杂志》
【年(卷),期】1999(15)5
【总页数】5页(P75-79)
【关键词】汉坦病毒;传播途径;抗原性;致病性
【作者】姚智慧
【作者单位】中国药品生物制品检定所
【正文语种】中文
【中图分类】R373.32
【相关文献】
1.肾综合征出血热(HFRS)、汉坦病毒肺综合征(HPS)和汉坦病毒(HV)研究进展——记第八届国际HFRS/HPS和HV学术会议 [J], 李金林;凌佳馨;杨占秋
2.汉坦病毒和汉坦病毒感染研究进展 [J], 白雪帆;潘蕾
3.汉坦病毒感染致机体凝血反应相关分子变化的研究进展 [J], 陈文静; 杜虹; 王晓艳; 李璟; 连建奇; 陈延平; 王平忠
4.汉坦病毒的致病性和免疫应答以及抗病毒和疫苗研究进展——第四届汉坦病毒国际会议部份内容介绍 [J], 董关木;宋干
5.汉坦病毒及其相关疾病研究进展——第四届国际HFRS和汉坦病毒会议资料综述 [J], 张永华;陈化新
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汉坦病毒核蛋白核心区域高效表达及产物鉴定汉坦病毒是引起肾综合征出血热（HFRS）的主要病毒,汉坦病毒的基因由L、M、S 三个片段构成,分别编码病毒RNA聚合酶, 囊膜核蛋白G1和G2及核衣壳蛋白(简称核蛋白,Nucleocapsid Protein, NP)。
血清学研究表明,汉坦病毒核蛋白具有很强的抗原性和免疫原性,同时NP抗原可以与汉坦病毒内的多种血清型病毒的免疫血清产生交叉反应,表明汉坦病毒的NP具有共同的抗原决定族。
有鉴于此,我们对核蛋白的核心区域进行表达和纯化, 并用SDS-PAGE和Western-Blotting 对重组核蛋白进行鉴定，为其应用于诊断抗原提供技术依据。
1材料与方法1.1质粒与菌种汉坦病毒76-118株由本室保存, 表达质粒pGEX-4T-1,菌株BL21从上海申友公司购买。
1.2单克隆抗体和血清单克隆抗体由北京病毒所杭长寿教授和安徽医科大学倪大石教授惠赠；病人血清由上海市南汇区传染病医院提供。
1.3引物的设计与合成上游：GAC CAG GAA TTC GCC CAT GAG GGT CAA TTA G ；下游：TCT GAA CTC GAG GAT GAT GCT CAG CCA GTC T。
其PCR产物长度为334 bp,产物上游酶切位点为EcoRI;下游酶切位点为XhoI。
1.4模板制备从HTNV 76-118株感染的Vero-E6细胞中提取总RNA作为模板。
用引物扩增出汉坦病毒S片段核心区域334 bp的片段,通过PCR反应获得目的片段,反应步骤如下：每10 D引物溶于200 μL水中,模板取1μL溶于10 μL水中, 加样：模板 1 μL, 10X Buffer 5 μL, Mg2Cl (25mM) 3 μL,4dNTP (10 mM)1 μL,Primer-UP 1 μL, Primer-Down1 μL, Taq (5 U/μL)0.5 μL, 加水至50 μL。
大鼠汉坦病毒(HVELISA试剂盒技术研究大鼠汉坦病毒(HVELISA试剂盒技术研究大鼠汉坦病毒(HVELISA试剂盒实验原理大鼠汉坦病毒(HVELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被大鼠汉坦病毒(HV捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的大鼠汉坦病毒(HV呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样本处理及要求1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。
将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。
推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。
为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。
最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
需要而未提供的试剂盒器材1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱4.蒸馏水或去离子水1、标准品浓度依次为：详见说明书；2、经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。
收稿日期:2004203211;修回日期:2004206217 作者简介:罗保君(19692),女,博士,助理研究员,主要从事病毒分子生物学研究。
汉坦病毒结构蛋白表位研究进展罗保君综述;周育森审校(军事医学科学院微生物流行病研究所,北京 100071)摘 要:汉坦病毒主要引起人类的两种疾病:肾综合征出血热和汉坦病毒肺综合征,汉坦病毒基因组由L 、M 、和S 三个片段组成,分别编码病毒的RNA 聚合酶、囊膜糖蛋白G1、G2和核衣壳蛋白NP 。
本文综述了核衣壳蛋白、囊膜蛋白G1和G2的B 细胞表位和CT L 表位的研究进展。
关键词:汉坦病毒;结构蛋白;表位研究中图分类号:R373.3+2 文献标识码:A 文章编号:100525673(2005)0120055203 汉坦病毒(Han tavirus ,HV )主要引起人类的两种疾病:肾综合征出血热(He m orrhag ic Fever w ithR ena l S ynd ro m e ,HFRS )和汉坦病毒肺综合征(Han tavirus Pu l m ona ry S ynd ro m ,HPS )。
HFRS 是一类以发烧、出血和肾功能损害为特征的急性传染病,病死率介于0.1%～10%;1993年首次报道的HPS,主要引起呼吸衰竭,病死率高达40%～60%。
依据血清学方法,将与人类疾病有关的汉坦病毒属病毒分为几个抗原性明显不同的血清型,即汉滩病毒(Han taan virus,HT NV )、汉城病毒(S eou l virus ,SE OV )、普马拉病毒(Pumm a la virus ,P UUV )、希望山病毒(P rospect H ill virus ,PHV )、多布拉伐病毒(D obrava virus ,DOBV )、泰国病毒(Tha iland V irus ,Thai )、新诺柏病毒(S in N o m bre virus ,S NV )和A ndes virus (ANDV )等几个血清型。
