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大鼠汉坦病毒(HV）ELISA试剂盒操作说明大鼠汉坦病毒(HV）ELISA试剂盒操作说明大鼠汉坦病毒(HV）ELISA试剂盒实验原理大鼠汉坦病毒(HV）ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被大鼠汉坦病毒(HV）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的大鼠汉坦病毒(HV）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样本处理及要求1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。
将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。
推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。
为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。
最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
需要而未提供的试剂盒器材1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱4.蒸馏水或去离子水1、标准品浓度依次为：详见说明书；2、经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。
宠物人兽共患病汉坦病毒的诊治要点汉坦病毒是布尼亚病毒科中的一属病毒，在全球分布广泛，主要以啮齿动物和食虫动物为宿主。
人感染汉坦病毒后导致疾病和其临床症状具有多样，主要引起2种严重的疾病：肾综合征出血热(HFRS)和汉坦病毒性肺综合征(HPS),主要流行于欧亚大陆和美洲大陆。
目前，人感染汉坦病毒引起发病的情况时有发生。
1976年，韩国李镐汪教授等首先从疫区的黑线姬鼠肺组织中分离到引起HFRS的汉坦病毒，1993年在美国西南部新墨西哥、科罗拉多、犹他和亚利桑那4个州交界的四角地区首次暴发汉坦病毒肺综合征。
近年来随着各国科学家的研究,相继从不同宿主动物中分离出汉坦病毒，已发现的汉坦病毒至少有30个血清型或基因型。
我国是受该病危害最严重的国家，近年来年发病数在1万人左右，除新疆、西藏、台湾和海南外，均有病例报告，有数据显示全球90%以上的HFRS病例发生在我国。
一、病原(一)分类地位汉坦病毒为布尼亚病毒科(BUnyaViridae)汉坦病毒属(hantavirus),该属是布尼亚病毒科中唯一由非节肢动物传播的病原。
该属病毒种类很多，包括：汉坦病毒(Hanta-anvirus),又名肾综合征出血热病毒(HRSV),于1978年从黑线姬鼠体内分离得到；辛农卜来病毒(SinNombrevirus),1993年在美国和加拿大等地发现,可引起人的急性呼吸道综合征即汉坦病毒肺综合征(HPS);多布拉伐病毒(Dobravavirus);汉城病毒(Seoulvirus);普马拉病毒(Puumalavirus);纽约病毒(NewYorkvirus);贝尤病毒(Bayouvirus);黑河沟病毒(BlackGreekCanalvirus);安德斯病毒(AndeSVirUS)等。
随着研究的进一步深入，一些新的汉坦病毒仍在不断被发现，并带来新的潜在威胁。
(二)形态学及基本特征病毒粒子为球形或椭圆形，直径为75〜21Onm(平均为122nm),基因组为单股负链RNA,病毒外层是双层脂质包膜，表面有由糖蛋白Gl 和G2组成的刺突。
汉坦病毒实验活动风险评估报告一、生物学特性(一)种类与病毒分型汉坦病毒(Hantavirus)系分类于布尼亚病毒科(Bunyaviridae)、汉坦病毒属得RNA病毒。
该病毒得名称来自汉坦病毒属得原型病毒汉滩病毒(Hantaan virus)。
汉坦病毒属依血清型与基因型区分为22个病毒种。
汉坦病毒在临床上主要引起两种急性传染病:一种就是以发热、出血、急性肾功能损害与免疫功能紊乱为突出表现得肾综合征出血热(Hemorrhagic fever with renal syndrome, HFRS),又称流行性出血热(Epidemic hemorrhagic fever, EHF);另一种就是以肺浸润及肺间质水肿迅速发展为呼吸窘迫、衰竭为特征得汉坦病毒肺综合征(Hantavirus pulmonary syndrome,HPS)。
我国尚未见HPS得病例报道。
以下主要介绍HFRS得有关内容。
(二)来源1976年,韩国学者李镐汪等首次成功地用间接疫苗荧光法在黑线姬鼠得肺组织中发现了汉坦病毒抗原,随后又用A549与VeroE―6细胞分离到汉坦病毒得毒株(78―116株)。
因为该毒株就是在韩国汉坦河附近得肾综合症出血疫区分离到得,因此,被命名为汉滩病毒,并成为汉坦病毒得代表毒株。
(三)传染性HFRS就是一种多宿主性得自然疫源性疾病,其主要宿主动物与传染源为啮齿动物,在啮齿动物中又主要就是鼠科中得姬鼠属家鼠属与仓鼠科中得白足鼠属。
目前,已从世界各地得啮齿动物(小鼠、大鼠、田鼠)中分离出汉坦病毒。
(四)传播途径HFRS得传播途径尚未完全确定,目前认为有可能得途径有3类5种,即动物源性传播(包括通过呼吸道、消化道与伤口途径),垂直(胎盘)途径与虫媒(螨媒)传播。
其中动物源性传播就是主要得传播途径,即携带病毒得动物通过唾液、尿、粪等排出病毒从而污染环境,人或动物通过呼吸道,消化道摄入或直接接触感染动物受到感染,感染病毒得孕妇有可能经胎盘将病毒传给胎儿,带毒孕鼠亦可将病毒传给胎鼠,虽然能够从HFRS患者得血、尿中分离出病毒,但人―人之间水平传播HFRS得报道很少,仅最近有一群病例中发现人际之间传播得证据。
随着医学的进步，人类的生存能力得到了大幅度的提升，但是这并不意味着人类就此失去天敌，成为地球的主宰。
事实上，在病毒面前，人类依然是脆弱的。
病毒能够轻易地让人类虚弱患病，一些厉害的病毒甚至能快速夺人性命，那么世界上最强的十大病毒都是哪些呢，我们一起来看一看。
世界上最强的十大病毒排行榜1.天花病毒⒉埃博拉病毒3.狂犬病病毒4.非典病毒(Sars)5.HIV病毒(艾滋病)6.马尔堡病毒7.甲型H1N1流感病毒8.汉坦病毒9.肝炎病毒10.登革热病毒1、天花病毒说到天花病毒很多人不以为然，因为现代社会很少有人患上天花，几乎所有人从小就接种了天花疫苗，因此根本不怕天花，但这并不能说明天花病毒没有危险性。
世界十大恐怖病毒之一天花病毒一旦患上就会出现严重毒血症，治疗难度非常高，只能预防为主，据说天花病毒传播初期没有控制措施，美洲大陆在一百年间人口从一亿减少为一千万，由此可见天花之毒!2、埃博拉病毒世界上最强的十大病毒之二埃博拉病毒，天花病毒已经有了疫苗，从小接种就能彻底防范，但是埃博拉病毒至今都是人类的噩梦，因为它根本没有有效的预防措施和治疗方法，可以说它就是当代的天花。
3、狂犬病病毒狂犬病病毒大家都不陌生了，任何被动物咬伤的情形都有可能感染狂犬病病毒，所以许多人都打过狂犬疫苗。
虽然疫苗可以让人类正面迎战狂犬病病毒，但是如果在初期无法及时治疗，后期狂犬病病毒的致死率几乎是百分之百，所以位列世界上最强的十大病毒第三名绝对是实至名归。
4、非典病毒(Sars)非典病毒离大家并不遥远，它也曾在中国肆虐，在2002到2003年，由非典引起的全中国甚至是全球防疫行动，给很多人留下了深刻的印象，尤其是90后。
5、HIV病毒(艾滋病)艾滋病本身并不会造成人类病症，问题是它直接摧毁人类的免疫系统，一旦患上，就连小感冒都有可能出问题，换上艾滋病就相当于接受所有病毒的挑战，要说危险性，绝对无法忽视。
6、马尔堡病毒马尔堡病毒和埃博拉病毒类似，致命性非常高，有不少关于防疫的电影都有它的出现。
汉坦病毒临床有哪些发病症状？汉坦病毒是具有潜伏期的，大约潜伏期在2到3周左右，患者的发病顺序是先从发热开始，最后再变成低血压，最后再进入恢复起，所以这样的一个过程是对病情从发病到治疗慢慢控制的，患者大多数都是由于水的感染，食物的感染，空气的传播，这些都有可能会导致此病的发生，刚开始发病的时候第一个症状是发烧，身体的温度开始频繁的升高，用药效果非常缓慢，而且没有办法用药物完全退烧，退烧后也会再次发作，患者还会表现出呼吸窘迫，严重的会引起休克，为了防止该细菌会发生，日常的家庭护理上要做好。
★临床病状汉他病毒出血热:潜伏期约2-3周。
发热期→低血压期→寡尿期→利尿期→恢复期汉他病毒肺病症:发烧、呼吸窘迫、休克。
传播媒介及感染途径老鼠→排泄物(粪便、尿液、唾液)★1.污染→饮水、食物→感染人类 2.空气干燥→飞沬核→感染人类直接鼠咬→感染人类★预防措施★1. 毒鼠。
★2. 减少馊水。
★3. 修补住屋墙角破损处，以避免鼠只进入屋内。
★4. 清理屋外环境，以免鼠只栖息。
野外露宿防护★1. 避免接近鼠只及鼠穴。
★2. 不要扎营于鼠只出没频繁之处。
★3. 避免直接睡在地上。
★4. 食物须储存於密封容器内，勿饮用生水。
★5. 垃圾须经掩埋，焚烧或置於密封之垃圾筒。
★防护措施★1. 加强进港船舶防鼠盾检查。
★2. 加强船舶卫生检查，鼠迹检查。
★3. 港区全面灭鼠。
自从花莲吴姓夫妇的病理检验报告被证实罹患汉他病毒以来，全台湾已经陷入了一股汉他病毒恐慌症，卫生署所发布新闻稿中特别提到老鼠是传播汉他出血热的媒介，而在吴姓夫妇的家中所发现的老鼠中，对于汉他病毒的抗体抗原反应也呈现阳性，因此全台湾的老鼠已经被卫生机关列入清查的对象。
到底汉他病毒是何方神圣?为什么死亡率如此的高？世界上又有哪些可怕的病毒与汉他病毒类似？如何有效的预防这种可怕的病毒呢？请看下面的深入报导。
汉他病毒(Hantaan virus)属于布尼亚病毒科(Bunyaviridae)的汉他病毒属(Hantavirus)。
汉坦病毒肺综合征怎样治疗？*导读：本文向您详细介绍汉坦病毒肺综合征的治疗方法，治疗汉坦病毒肺综合征常用的西医疗法和中医疗法。
汉坦病毒肺综合征应该吃什么药。
*汉坦病毒肺综合征怎么治疗？*一、西医新近Crowleg等报告，对3例伴有严重心肺功能衰竭的患者，进行体外模式人工氧合法(extracorporeal membrane oxygenation，ECMO)治疗。
此3例患者至少符合很难存活标准中的两项，同时是应用最佳常规治疗失败的患者。
第1例是在心跳停止时应用ECMO治疗，结果死亡。
另2例接受ECMO治疗后存活，没有并发症发生。
认为ECMO是对汉坦病毒肺综合征极期患者的一种有效治疗手段。
有条件的单位，可以试用。
由于本病在阿根廷暴发流行时，流行病学研究曾提示存在着人与人之间传播，因此患者应严密隔离。
鉴于本病起病后病情进展迅速，病死率极高，因此对临床拟诊病例，应仔细监护，认真观察呼吸、心率和血压等情况。
发病后应早期卧床休息，适当补充水分，可静脉滴注平衡盐注射液和葡萄糖盐水，高热患者以物理降温为主，亦可给予糖皮质激素静脉滴注。
治疗：鉴于汉坦病毒HTNV和SEOV型感染的肾综合征出血热，早期应用利巴韦林抗感染治疗有效，因此美国CDC批准本病早期亦可以试用利巴韦林。
新近美国利巴韦林研究组总结了1993年6月～1994年9月利巴韦林治疗HPS效果，30病确诊HPS患者病死率为47%(14/30)，与同期未进入研究的34例HPS患者相对比，不能提示利巴韦林有明显效果。
因而认为需要一种随机、安慰剂作对照的试验来评价利巴韦林治疗HPS的效果。
其次是对症治疗：1、临床上出现呼吸困难或低血氧时，应及时给氧，可用鼻管或面罩吸氧。
2、患者烦躁时给予镇静药。
若病情加重或吸氧无效，动脉血氧持续低于8.0 kPa(60mmHg)以下，应及时改用机械通气。
应用人工呼吸机进行呼气末正压呼吸，直到临床症状好转。
此外主张应用大剂量糖皮质激素，其作用是降低肺毛细血管通透性，缓解支气管痉挛，刺激Ⅱ型肺泡细胞合成和分泌肺表面活性物质，减轻肺泡萎缩。
垦处匡堂：亟盘堡芏篮鎏瘗堂坌堡垫鳗生１２旦签垫鲞蔓§翅测序，一般２—４周内可有结果。
这一期间，检出ｗＰｖｓ的１１个国家中，７个国家（阿富汗、埃及、印度、尼日尔、尼日利亚、巴基斯坦和索马里）发生了ｗＰｖｌ—３型传播；另４个国家出现了输入病例（２００２年布基纳法索和２００３年加纳由尼目利亚／尼日尔输入，２００３年黎巴嫩由印度输入，２００２年赞比亚由安哥拉输入）。
基因测序结果表明，ｗＰｖｓ基因型数量稳步下降，残存的１型基因型从２００１年的８个下降到２００２年的４个，３型基因型从２００１年的６个减少到２００２年的３个。
网络实验室于２００１年１月开始筛检ｖＤＰｖｓ，Ａ开监测中分离出的所有脊灰病毒用２种皿检测方法进行检测，对结果不一致的病毒进行测序，与ｓ出ｎ病毒基因相差１％一１５％的病毒为ｖⅨⅣｓ。
２００２年１月～２００３年６月，测定了３９３３份ｓａｂｉｎ相关病毒的基因序列，１７份（０．４％）被证实为ｖＤｎｒｓ，这些ｖＤＰｖｓ分离物来自９例Ａ冲病人，其中４例与２００２年马达加斯加的爆发有关；另５例来自中国（２例）、尼日利亚（１例）、罗马尼亚（１倒）和哈萨克斯坦（１例）。
同期，还从其他来源报告了３份ⅦＰ、Ｔｓ，ｊ份（１型）获自蒙古１名健康非麻痹儿童，１份（２型）获自斯洛伐克的污水样本，１份（３型）获自爱沙尼亚的污水样本。
（严有望摘李少安校）啪猪生殖与呼吸综台征病毒起源的假说［英］，Ｐｌａｇｅ删ＰＧＷ，，Ｅｍ。
瑁Ｉ士ｄＤｉｓ，－２００３．９（８）．一９０３—９昕猪生殖呼吸综合征（ＰＲＲｓ）是一种严重的猪疾病。
该病大约在１４年前突然在美国中西部和欧洲中部出现，现已传播到全球。
它是由一种正链ＲＮＡ病毒寻【起，命名为猪生殖与呼吸综台征病毒（ＰＲＲｓｖ）。
它与小鼠乳酸脱氢酶升高病毒（ｚ鲫幽如妇沁聊争如州【ｒ曾ＦＬ删，ＩＪ）ｖ）、马动脉炎病毒和猴出血热病毒同属于动脉炎病毒属。
动脉炎病毒的主要结构蛋白是核壳体（Ｎ）蛋白、膜整台／基质（Ｍ）蛋白和主要的糖蛋白外壳（ＧＰ５）。
流行性出血热流行性出血热，又称肾综合征出血热（HFRS），是由汉坦病毒引起的，以鼠类为主要传染源的一种自然疫源性疾病。
本病的主要病理变化是全身小血管广泛性损害，临床上以发热、休克、充血出血和肾损害为主要表现。
典型病例病程呈五期经过。
广泛流行于亚欧等国，我国为高发区。
【病原学】汉坦病毒归属布尼亚病毒科，是一种有包膜分节段的负链RNA 病毒，基因组包括L、M和S三个片段，分别编码L聚合酶蛋白、G1和G2糖蛋白、核蛋白。
汉坦病毒包括引起肾综合征出血热(HFRS)的汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV)、汉城病毒(Seoul virus,SEOV)、普马拉病毒(Puumala virus,PUUV)、多不拉伐病毒(Dobrava virus,DOBV)，引起汉坦病毒肺综合征(HPS)的无名病毒(Sin Nombre virus,SNV)、纽约病毒(New York virus,NYV)、污黑小河沟病毒(Black Creek Canal virus,BCCNV)、牛轭湖病毒(Bayou virus,BAYV)、安第斯病毒(Andes virus,ANV)以及与人类疾病关系尚不清楚的一组病毒，如希望山病毒(Prospect Hill virus,PHV)、泰国病毒(Thailand virus,THAIV)、图拉病毒(Tula virus,TULV)、索托帕拉雅病毒(Thottapalayam virus,TPMV)、哈巴罗夫斯基病毒(Khabarovsk virus,KBRV)、El Moro Canyon病毒(ELMCV)、Rio Segundo 病毒(RIOSV)、岛景病毒(Isla vista virus,ISLAV)、Muleshoe病毒(MULEV)、Bloodland lake病毒(BLLLV)、Rio Mamore病毒(RMV)、Topografov病毒(TOPV)等。
近年来随着新技术的应用和新型病毒的发现，汉坦病毒及其相关疾病的研究得以飞速发展。
中国部分地区汉坦病毒在鼠形动物中感染及基因变异汉坦病毒(Hantavirus, HV)属布尼亚病毒科汉坦病毒属,是一种分节段的、单股、负链RNA病毒,其基因组由S(small)、M(medium)和L(large)三个片段组成。
到目前为止,全世界已确定有23种汉坦病毒的血清型存在,且不同的汉坦病毒在致病性、疾病谱以及自然携带宿主上都各不相同,该病毒在临床上主要引起欧亚地区的肾综合征出血热(Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome, HFRS)和美洲的汉坦病毒肺综合征(Hantavirus Pulmonary Syndrome, HPS)。
我国是肾综合征出血热的高发国家,每年报告发病人数在2-5万,占世界该病总数的90%以上。
长期以来,汉滩型(Hantaan, HTNV)和汉城型(Seoul, SEOV)病毒是存在于我国的两个主要血清型,其宿主分别为黑线姬鼠(Apodemus agrarius)和褐家鼠(Rattus norvegicus)。
近年来,随着现代生物技术的进步和发展,我国对汉坦病毒的研究也不断深入,一些在国内从未报道过的新基因型或新亚型病毒相继被发现和报道。
然而,我国地势辽阔,地理环境多样,生物物种丰富。
是否存在其它尚未发现的新型汉坦病毒或病毒的新亚型还有待进一步的调查和研究。
本研究采用将现场调查与实验室检测相结合的方法,在我国云南西北部大小中甸山周围、内蒙古呼伦贝尔盟莫力达瓦旗、陕西西安地区等地针对汉坦病毒进行了系统深入的分子流行病学调查研究,以了解我国可能存在的新型或新亚型汉坦病毒及其宿主分布和感染状况,进而探讨分析这些病毒的基因特征及其与其他汉坦病毒的关系。
对采自云南西北部地区11个采样点的600余份来自40多个鼠种的小动物脏器标本中汉坦病毒L片段进行RT-PCR检测,结果提示该地区多种小动物携带变异较大的汉坦病毒,总的阳性率为6.4%,除啮齿目动物外,首次在国内发现食虫目动物如纹背鼩鼱、缺齿鼩、短尾鼩、多齿鼩鼹等也携带变异很大的汉坦病毒,这些研究结果提示该地区汉坦病毒的流行状态可能十分复杂;对来自内蒙古呼伦贝尔盟莫力达瓦旗地区的80份标本进行检测,结果提示,宿主动物总的病毒感染率为2.5%,而且该地区至少有两种动物----大林姬鼠和黑线姬鼠为当地汉坦病毒的主要携带宿主,其中大林姬鼠可能感染率较高,而且所携带的汉坦病毒变异也较大,因而在当地汉坦病毒流行中的作用值得引起重视;对来自西安的26份抗原阳性黑线姬鼠标本进行检测,结果提示该地区主要流行汉滩型病毒,病毒序列与以前报道的当地流行株的基因差异较大,与贵州地区流行株的同源性较高,但各毒株之间序列差异较小,具有地区聚集性的特点。
