革兰氏染色法
一、目的要求
了解革兰氏染色的原理，学习并掌握革兰氏染色的方法。
二、基本原理
革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。它是1884年由丹麦医师Gram创立的。革兰氏染色法（Gram stain）不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G +表示；染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G-表示。细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。
革兰氏染色需用四种不同的溶液：碱性染料（basic dye）初染液；媒染剂（mordant）；脱色剂（decolorising agent）和复染液（counterstain）。碱性染料初染液的作用象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫（crystal violet）。媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落，碘（iodine）是常用的媒染剂。脱色剂是将被染色的细胞进行脱色，不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不能，脱色剂常用95％的酒精（ethanol）。复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染液，复染的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色，而未被脱色的细胞仍然保持初染的颜色，从而将细胞区分成G 和G-两大类群，常用的复染液是番红。
三、器材
大肠杆菌，枯草芽孢杆菌；
革兰氏染色液，载玻片，显微镜等。
四、操作步骤
1．涂片将培养14—16小时的枯草芽孢杆菌和培养24小时的大肠杆菌分别作涂片（注意涂片切不可过于浓厚），干燥、固定。固定时通过火焰1—2次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。
2．染色
（1）初染加草酸铵结晶紫一滴，约一分钟，水洗。
（2）媒染滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。
（3）脱色将载玻片上面的水甩净，并衬以白背景，用95％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20—30秒钟，立即用水冲净酒精。
（4）复染用番红液染1—2分钟，水洗。
（5）镜检干燥后，置油镜观察。革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。
（6）同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片，作革兰氏染色对比。
革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈阴性反应。
图Ⅳ-2示革兰氏染色过程。
五、实验报告
1．结果
在你所作的革兰氏染色制片中，大肠杆菌和枯草芽孢杆菌各染成何色？它们是革兰氏阴性菌还是革兰氏阳性菌？
2．思考题
（1）作革兰氏染色涂片为什么不能过于浓厚？其染色成败的关键一步是什么？
（2）当你对一株未知菌进行革兰氏染色时，怎样能确证你的染色技术操作正确，结果可靠？
实验二细菌的简单染色和革兰氏染色及其形态观察 1. 目的要求 （1）学习细菌涂片、染色的基本技术及无菌操作技术。 （2）掌握细菌的简单染色法，初步认识细菌的形态特征。 （3）了解革兰氏染色的原理，学习并掌握革兰氏染色的方法。 2. 基本原理 （1）简单染色法 用单一染料进行细菌染色，操作简便，适于菌体一般形状和细菌排列的观 察。 常用碱性染料进行简单染色，这是因为：在中性、碱性或弱碱性溶液中，细 菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷（酸性染料电离时，其分子的染色部分带正电荷），因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色，经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下易于识别。常用作简单染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红等。 （2）革兰氏染色法 革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。它是1884年由丹麦医师Gram创立的。革兰氏染色法不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为 两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示；染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G-表示。细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类
物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现 红色。 革兰氏染色需用四种不同的溶液：碱性染料初染液；媒染剂；脱色剂和复染液。碱性染料初染液的作用象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革 兰氏染色的初染液一般是结晶紫。媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或 附着力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落，碘是常用的媒染剂。 脱色剂是将被染色的细胞进行脱色，不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱 色，有的则不能，脱色剂常用95％的酒精。复染液也是一种碱性染料，其颜色不 同于初染液，复染的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色，而未被脱色 的细胞仍然保持初染的颜色，从而将细胞区分成G+和G-两大类群，常用的复染液是番红。 3. 材料及器材 (1) 大肠杆菌，枯草芽孢杆菌 (2) 革兰氏染色液，载玻片，显微镜等 4. 方法与步骤 Ⅰ涂片取两块载玻片，各滴一小滴蒸馏水于玻片中央，用接种环以无菌 操作分别从培养14～16h的枯草芽孢杆菌和培养24h的大肠杆菌的斜面上挑取少量菌苔于水滴中，混匀并涂成薄膜。 载玻片要洁净无油迹；滴蒸馏水和取菌不宜过多；涂片要均匀，不宜过厚。 Ⅱ干燥室温自然干燥。 Ⅲ固定固定时通过火焰2～3次即可。此过程称热固定，其目的是使细胞质凝固，以固定细胞形态，并使之牢固附着在载玻片上。
革兰氏染色的实验原理 ●G＋细胞壁的网状结构致密，交联度高，用乙醇处理后，发生脱水作用，肽聚糖层孔径缩小，透性降低，故细菌仍保留初染时的紫色。 ●G－肽聚糖层较薄，交联度低，含较多类脂质，故用乙醇处理后，类脂质被溶解，细胞壁孔径变大，通透性增加，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，细胞被脱色，经沙黄复染呈红色。 涂片固定→结晶紫初染（碱性）→碘液媒染→乙醇（丙酮）脱色→番红复染（碱性）
◆◆◆原理： 当用结晶紫初染后，所有细菌都被染成初染剂的兰紫色，碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫-碘复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。当用脱色剂处理时，两类细菌的脱色效果是不同的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要有舦聚糖形成的网状结构组成，壁厚，类脂含量低，用酒精脱色时细胞壁脱水，使舦聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫碘复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的兰紫色。革兰氏阴性细菌则不同，由于其细胞壁舦聚糖层较薄，类脂含量较高，，所以当脱色处理时，类脂质被酒精溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-碘复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。 ◆◆实验步骤： 1、制片 涂片——干燥——固定 2、初染 滴加结晶紫染色1——2分钟，水洗； 3、媒染 用碘液冲去残水，并用碘液覆盖1分钟； 4、脱色 滴加95%酒精脱色，25-30秒，立即水洗； 5、复染 用番红液复染约2分钟，水洗； 6、镜检 干燥后，用油镜观察。 细菌：细菌是一种具有细胞壁的单细胞微生物，在适宜条件下，能进行无性二分裂繁殖，其形态和结构相对稳定。一般体积微小，通常需要借助光学显微镜才能看到，其测量单位用微米表示。
染色操作工安全操作规程 一、常温常压染色机安全操作规程 1. 开车前，将工作场地、设备、工器具进行清洁卫生工作。 2. 检设备、仪器仪表是否完好无损，打开热交换器检查更换过滤网（将更换下来的过滤网必须当班清理干净）。 3. 按流转卡核对坯布名称、缸号、匹数是否相符，发现问题及时提出。 4. 坯布需用缝纫机接头，针码5-6针/2厘米，布匹两端必须打2厘米倒针。 5. 打开压缩空气阀门，打开少量主循环泵降温水，合上电控柜空气开关，关闭排液阀门。 6. 打开手动或自动进水开关，按工艺浴比要求准确入水。 7. 打开主循环水泵，待喷嘴喷出水时将布头投入，同时打开提布轮，让坯布导入染缸，首尾相接，关闭机门要严密，不准漏汽、漏液（同一染缸内各容布网管坯布量要均等，否则易造成管差）。 8. 打开机头照明灯，调整好车速及喷压，使坯布运行顺畅。 9. 打开电脑电源，按工艺流程选择合适的电脑曲线进行自动控制程序。 10. 化染料前，检查化料筒是否漏水，在正常条件下按工艺要求化料。打开搅拌机，直到化料化到无颗粒，全部溶解为止。 11. 按工艺要求，按顺序加入染液，加料时要均匀慢慢全部加入。 12. 在整个染色过程中，操作工应随时检查染缸温度、布速、喷压是否正常，发现问题及时处理。 13.染色完毕后，停止主循环泵，打开排污阀，将残液全部排放后，打开机门，局部查看染色质量情况，同时关闭排水阀门。 14.按工艺要求进行水洗，水洗后排水。打开出布开关，坯
布由出布机均匀摆放在小车内，出完布应关闭出布机，主泵降温水，机头照明灯，最后关闭总电源。 15.严禁染缸内无水、主泵无降温水空转运行，化料筒无水严禁开搅拌器。 16. 任何时候，电控柜、分控盒、各电机不得用水冲洗，严禁电控柜内放置各种杂物。 17.热交换器过滤网每班最少清理一次，严禁不放过滤网操作。上紧热交换器四颗螺丝时应均匀上紧，不得上偏或少上。 18.严禁软化水阀、自来水阀同时开放，以防串水。严禁排污阀、排清水阀同时开放。 19.工作完毕，应做好设备、工器具及环境清洁工作，并做好交接班。 二、高温高压染色机安全操作规程 1. 每次开机前，将工作场地、染色机、工器具进行清洁卫生工作。 2. 检查设备、仪器仪表是否完好无损，打开热交换器检查更换过滤网（更换下来的过滤网必须当班清理干净）。 3. 按流转卡核对坯布名称、缸号、匹数是否相符，若有问题及时提出。 4. 坯布需用缝纫机接头，针码5-6针/2cm，布匹两端必须打2厘米倒针。 5.打开压缩空气阀门，打开少量主循环泵降温水，合上电控柜开关，并关闭排水阀门。 6. 打开手动或电动进水开关，按工艺浴比要求准确入水。 7. 打开主循环泵，待喷嘴喷出水时，将布头投入，让坯布导入染缸内，各个网管坯布首尾相接后，关闭机门要严密，不准漏汽、漏液（同一染缸内各容布网管坯布量要均等，否则易造成管差） 8. 打开机头照明灯，调整好车速及喷嘴压力，使坯布运行
1. 革兰氏染色的机理和步骤 机理：G+、G-主要由其CW化学成分的差异而引起对乙醇的通透性，抗脱色能力的差异。主要有肽聚糖的厚度和结构所决定。 G+的CW:肽聚糖层厚，脂质含量低。乙醇脱色时CW脱水，孔径减少，透性降低，不易脱色，呈初染得蓝紫色。 G-的CW：肽聚糖层薄，脂质含量高。乙醇脱色时，类脂被乙醇溶解，透性升高，细胞被复染显红色。 步骤：①涂片：在干净的载玻片上滴一滴水，用接种环挑取菌体均匀涂布于水中。 ②固定：将玻片靠近酒精灯火焰，蒸干水分，但不要烤焦。 ③初染：用碱性颜料结晶紫对菌液涂片进行初染。 ④媒染: 以碘液媒染1min，水洗，吸干水分。(细胞内形成结晶紫与碘的复合物，增强相互作用） ⑤脱色(关键步骤）：以95%的乙醇脱色30s，应适当振荡均匀，是乙醇脱色完全。 ⑥水洗，吸干。 ⑦复染：??(第2张）复染30s，水洗吸干。 ⑧干燥镜检。 2、用渗透皮层膨胀学说解说芽孢耐热机制。 芽孢的耐热性在于芽孢衣对多价阳离子和水分的透性很差，以及皮层的离子强度很高，这就使皮层产生了极高的渗透压去夺取芽孢核心中水分，其结果造成皮层的充分膨胀和核心的高度失水，正是这种
失水的核心才赋予芽孢极强的耐热性。 3、引起微生物培养过程中PH变化的几种可能反应，并说明如何能够维持微培PH稳定。 答：培养过程中，由于营养物质被分解利用，代谢产物的形成与积累，会导致PH变化。 （第2张中的图） 还与培养基的C/N比有关，C/N高，经培养基后PH显著下降，C/N 低，经培养基后PH明显上升。 PH调节：①加入缓冲剂--------常用:一氢二氢磷酸盐，K2HPO4 呈碱性，KH2PO4 酸性，只在一定的PH范围内调节（6.4--7.2） ②大量产酸的菌株，加CaCO3调节，CaCO3难溶于水，不会使培养液的PH过度增加，但可不断中和微生物产的酸。 ③培养液中存在天然的缓冲系统，如AA，肽，Pr均属两性电解质，也起缓冲的作用。 ④过酸：治标------加NaOH、Na2CO3中和，治本-----加适量氮源：NaNO3、Pr、NH3·H2O；增加通风量。 ⑤过碱：治标-----H2SO4、HCl中和，治本----加适量碳源:G类，脂类;减小通风量。 3、抗生素法和菌丝过滤法为何能浓缩营养缺陷型突变株？ 抗生素法（青霉素法）：适用于细菌。原理：青霉素抑制肽聚糖链间的交联，组织了合成完整的CW，野生型B处于正常生长繁殖，所以对青霉素敏感，可被抑制或杀死；营缺B在基本培养基上休眠状态
常温染色安全机操作规程 操作规程： 一、开机前准备工作： 1、穿戴好劳保用品（工作服、工作鞋） 2、检查： A过滤网是否清理干净。 B观察窗玻璃是否有裂纹。 C化料桶是否清洁卫生。 D所有控制阀门是否正常、有无漏水、漏气现象。 E观察热交换器、喷嘴压力表指针应在0kg/cm2。 F电器操作按钮、电动机、主泵螺栓有否松动。 二、操作顺序： 1、浴比水量，核对“生产流转卡”上投布量、用水量与水位 计是否相符。 2、调节循环泵旋钮至中等位置，起动循环泵，观察循环泵运 转情况有无异常、提布轮皮带松紧适中。 3、调节提布轮至最小位置，调节循环泵旋钮至适当位置，方 能进布。 4、双管进布时，将其中一个布头打个记号，避免接错头。
5、缸口螺丝应按缸口序号对角拧紧。 6、关门时螺口不能拧的过紧，以免损坏密封圈。 7、打开加料阀门或开关开始加料。 8、打开蒸汽阀，注意开度。 A选择自动时，打开手动升温旋钮开始升温。 B选择自动时，打开自动旋钮，按“染机电脑”上的“运行”按钮。 9、当须降温、或电脑功能号指示“06”、“07”时、打开冷水 阀，注意开度。 10、水洗干净后，关机循环泵，启动出布装置出布。 三、安全注意事项： 1、非本岗位操作人员、未取得上岗证一律不得操作。 2、当进入正常运转后，操作人员应注意各个传动部是否正常 有无噪声，热交换器压力表指针不超过5kg/cm2，指针式温度表是否与“染机电脑”指示温度一致，温度不超过100℃。 3、操作人员如发现任何异常应及时，进行处理。 4、设备出现异常应首先上报车间主任或工段长，待温度降到 80℃以下时，关闭电源。 5、设备出现紧急情况（循环泵、提布轮端口、机门密封大量 漏液、观察窗玻璃有裂纹，电器故障），迅速关闭循环泵，
微生物的革兰氏染色 一、实验目的： 1、学习并初步掌握革兰氏染色法； 2、了解革兰氏染色的原理； 3、巩固显微镜的使用。 二、实验原理： 革兰氏染色是细菌学中最重要的鉴别染色法。染色步骤分为四个部分： 1、初染：加入碱性染料结晶紫固定细菌图片； 2、媒染：加入碘液，碘与结晶紫形成一种不溶于水的复合物； 3、脱色：利用有机溶剂乙醇或丙酮进行脱色； 4、复染：复红配成碳酸复红作为复染剂。 成分占细胞壁干重的% 革兰氏阳性细菌革兰氏阴性细菌肽聚糖含量很高（50~90）含量很低（~10） 磷壁酸含量较高（<50）无 类脂质一般无（<2）含量较高（~20） 蛋白质无含量较高G-和G+细胞壁的比较： 1、阳性（G+）菌细胞壁特点：细胞壁厚，只有一层，主要由肽聚糖构成，肽聚糖含量高，结构紧密，脂类含量低。当乙醇脱色时，细胞壁肽聚糖层孔径变小，通透性降低，结晶紫和碘的复合物被保留在细胞壁内，复染后仍显紫色（如芽孢杆菌）。 2、阴性（G-）菌细胞壁特点：细胞壁薄，由两层构成，内壁层和外壁层，细胞壁中脂类中脂类物质含量较高，肽聚糖含量较低，网状结构交联程度低，乙醇脱色时溶解了脂类物质，通透性增强，结晶紫与碘的复合物易被乙醇抽提出来，因此，革兰氏阴性菌细胞被脱色，当复染时，脱掉紫色的细胞的细胞壁又着上红色（例如大肠杆菌）。 三、实验步骤： 1、取一个载玻片，将其洗净并沿一个方向擦拭干净，直至液体不再其上收缩为止；将接种环整平，用灼烧过的接种环在混匀的菌种中取菌，按常规方法图片，应涂大，不宜过厚。 2、将涂片用火焰固定，不宜烤得太狠，否则菌种呈假阳性。 3、滴加1滴结晶紫染液，染色1min，水洗。 4、滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗 5、滴加脱色乙醇，脱色30~40s，不宜脱色太狠，否则菌种呈假阴性。 6、水洗，滴加番红复染液，复染1min，水洗，晾干 7、镜检并拍照。 四、注意事项： 1、选用活跃生长期菌种染色，老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性。 2、涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。 3、脱色是革兰氏染色是否成功的关键，脱色不够造成假阳性，脱色过度造成假阴性。实验结果与讨论： 1、结果： 高倍镜下观察的菌体图像：
革兰氏染色法的过程及原理 一，过程 1 ．涂片 将培养的不同菌分别作涂片（注意涂片切不可过于浓厚），干燥、固定。固定时通过火焰l 一2 次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。 2 ．染色 ( 1 ）初染加草酸铰结晶紫一滴，约一分钟，水洗。 ( 2 ）媒染滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。 ( 3 ）脱色将载玻片上面的水甩净，并衬以白背景，用95 ％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20 一30 秒钟，立即用水冲净酒精。 ( 4 ）复染用番红液染1 一2 分钟，水洗。 ( 5 ）镜检干燥后，置油镜观察．革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。( 6 ) 同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片，作革兰氏染色对比。 二，原理 革兰氏染色法（Gram stain ）不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G＋表示：染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G 一表示。细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肤聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫一碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肤聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫一碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。 革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌：而脱色，不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈阴性反应。 青霉素作用机制 干扰细菌细胞壁的合成。青霉素你的结果与细胞壁的成分粘肽结构中德D-丙氨酰-D-丙氨酸近似，可与后者竞争转肽酶，阻碍你粘肽的形成，造成细胞壁的缺损，使细菌失去细胞壁的渗透屏障，对细菌起到杀灭作用。 溶菌酶与青霉素对细菌细胞壁的作用 溶菌酶作用机制：是一种能水解致病菌种黏
工贸企业染色机安全操作规程示范文本 In The Actual Work Production Management, In Order To Ensure The Smooth Progress Of The Process, And Consider The Relationship Between Each Link, The Specific Requirements Of Each Link To Achieve Risk Control And Planning 某某管理中心 XX年XX月
工贸企业染色机安全操作规程示范文本使用指引：此操作规程资料应用在实际工作生产管理中为了保障过程顺利推进，同时考虑各个环节之间的关系，每个环节实现的具体要求而进行的风险控制与规划，并将危害降低到最小，文档经过下载可进行自定义修改，请根据实际需求进行调整与使用。 1、染色工上岗前要经过安全培训并考试合格方可上岗 操作。 2、工作时要劳保穿戴整齐并符合要求方可工作。 3、每天工作前要先检查设备状况，设备如有安全隐 患，不得操作设备。 4、操作蒸汽加热水时打开控制阀不能太急，同时盖好 缸盖，防止沸水烫伤。 5、做吊染时身体各部位不能伸入吊架下，防止吊架脱 落伤人。 6、如操作蒸锅，必须由取得特种设备操作许可证的人 员并严格按蒸锅操作规程的要求操作。 7、所有染料、助剂的领用必须遵循定人、定时、定量
的原则，向缸内投放时防止灼伤。 8、保持消防通道的畅通，严禁堵塞通道；随时清除地面积水，防止摔伤。 9、每天工作结束后必须切断水、电、汽，清理设备。 请在此位置输入品牌名/标语/slogan Please Enter The Brand Name / Slogan / Slogan In This Position, Such As Foonsion
微生实验报告 姓名： xx 专业年级：2011级生物技术 学号：1032 实验二细菌的简单染色和革兰氏染色 一、实验目的 学习细菌的简单染色法和革兰氏染色法的实验原理和实验操作。 二、实验原理 用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电荷，能和带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低，当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通常采用碱性染料（如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿等）使其着色。酸性染料的离子带负电何，能与带正电荷的物质结合。当细菌分解糖类产酸使培养基pH值下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红、或刚果红等酸性染料着色。中性染料是前两者的结合物，又称复合染料，如伊红美蓝、伊红天青等。 简单染色法是只用一种染料使细菌着色以显示其形态的方法，简单染色一般难于辨别细菌细胞的构造。 革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法之所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。G—菌的细胞壁中含有较多的易被乙醇溶解的类脂质，增加了细胞壁的通透性，使处染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经番红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔
径缩小，通透性降低，草酸铵结晶紫与碘的复合物不易被脱掉，因此细菌仍保留处染时的紫色。 三、实验器材 1、菌种： 金色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌。 2、染色剂和试剂： 草酸铵结晶紫染液，卢哥氏碘液，95%酒精，番红复染液，复红染液，吕氏美蓝染液，显微镜擦拭液（乙醚： 乙醇=7:3），xx柏油。 3、器材： 废液缸，洗瓶，载玻片，接种环，酒精灯，擦镜纸，双层瓶，显微镜。 四、实验方法 （一）简单染色 1．涂片： 取干净载玻片一片，在载玻片的左右各加一滴生理盐水，按无菌操作法取菌涂片，左边涂金黄色葡萄球菌，右边涂大肠杆菌，做成浓菌悬液。再取干净载玻片一块将刚制成的金黄色葡萄球菌浓菌悬液挑1~2环涂在左边制成薄的涂片，将大肠杆菌的浓菌悬液取1~2环涂在右边制成薄涂片。亦可直接在载玻片上制薄的涂片，注意取菌不要太多。 2．晾干： 让涂片自然晾干。 3．固定：
目录 1、金属拉链安全生产操作规程.......... 错误!未指定书签。 2、树脂拉链安全生产操作规程.......... 错误!未指定书签。 3、尼龙拉链安全生产操作规程.......... 错误!未指定书签。 4、喷漆车间安全操作规程.............. 错误!未指定书签。 5、织带车间安全操作规程.............. 错误!未指定书签。 6、电工安全操作规程.................. 错误!未指定书签。 7、空气压缩机安全操作规程............ 错误!未指定书签。 8、砂轮机（公用）安全操作规程........ 错误!未指定书签。 9、食堂炊事员安全操作规程............ 错误!未指定书签。 10、钻床安全操作规程................. 错误!未指定书签。 11、电梯安全操作规程................. 错误!未指定书签。 12、冲床安全操作规程................. 错误!未指定书签。 13、手扳机安全操作规程............... 错误!未指定书签。 14、裁片机安全操作规程............... 错误!未指定书签。 15、普通车床安全操作规程............. 错误!未指定书签。 16、染色车间安全操作规程............. 错误!未指定书签。 1、金属拉链安全生产操作规程 植齿机（排米） 1．检查供应本机台的电源是否正确。 2．每一部机台，在同一时间，仅能由一位人员操作，其他人员必须离开机器台，以免误触开关，造成危险。
3．下班以后或较长时间离岗，必须切断电源。 全自动订寸除齿机（定寸） 1．本机器所使用电源电压是380V，三相四线，开机前务必检查电源是否符合要求，主电机必须顺时针旋转，如反转会损坏主传动轴的行程开关。 2．必须接安全地线，防止触电事故发生。 3．非操作人员不得随意开动此机。 4．保持机台干净，下班后关掉电源及气压，且给模具加防锈油。 5．下班以后或较长时间离岗，必须切断电源。 半自动冲床（定寸） 1．在机器运转时，切勿将手伸入模具处，以防冲坏。 2．下班以后或较长时间离岗，必须切断电源。 贴布机（贴胶） 1．本机一定要保证电源是220V、50Hz，需加一个3Kw的稳压器。 2．电箱可靠接地，以防静电。 3．发振箱与振动子内有高压电，非专业人员不得拆开维修。 4．空气压力不得超过6kg，不得低于5kg。 5．操作时，双手切勿接近焊头，以防烫伤。 6．非操作人员不得随便开动此机，以防损坏机件。 8．音波发振时切勿让焊头碰到金属机件。 9．下班以后或较长时间离岗，必须切断电源。 全自动打孔机（打孔） 1．该机不能打切金属或硬质物体。 2．下班以后或较长时间离岗，必须切断电源。 半自动方块、插销固定机（打方块、打插座、打插管） 1．必须在电源关闭情况下，才可把码带穿过模具。 2．接好电源，电源电压应为220V。 3．电源开启，开始打插管、插座，到一定位置，才可踏下脚板。 4．在操作过程中，切不可把手伸入模具内。 5．本机不能打切金属或硬质物体。
革兰氏染色法的步骤 详细阐叙革兰氏染色法的步骤 浏览次数:174次悬赏分:0 |解决时间:2011-5-25 17:44 |提问者:肖箫 2011shaw 最佳答案 革兰氏染色 一、目的:在细胞发放之前,利用标准的革兰氏染色法对即将发放的细胞悬液进行检测,判断细胞悬液中是否含有革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌。 二、原理: 通过结晶紫初染和碘液媒染后,在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物,革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密,故遇乙醇脱色处理时,因失水反而使网孔缩小,再加上它不含类脂,故乙醇处理不会出现缝隙,因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内,使其仍呈紫色;而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差,在遇脱色剂后,以类脂为主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出,因此通过乙醇脱色后仍呈无色,再经沙黄等红色染料复染,就使革兰氏阴性菌呈红色。 三、实验用品准备: 灭菌玻片、10-100ul移液器、10-100ul灭菌移液吸头、100ul-1000ul移液器、100ul-1000ul移液吸头、接种环、酒精灯、打火机、革兰氏染色液、吸水纸、显微镜、香柏油、擦镜纸、计时器 四、操作: 1 涂片:取灭过菌的载玻片于实验台上,用移液枪吸取10ul待检样品滴在载玻片的中央,用烧红冷却后的接种环将液滴涂布成一均匀的薄层,涂布面不宜过大。 2 干燥:将标本面向上,手持载玻片一端的两侧,小心地在酒精灯上高处微微加热,使水分蒸发,但切勿紧靠火焰或加热时间过长,以防标本烤枯而变形。 3 固定:固定常常利用高温,手持载玻片的一端,标本向上,在酒精灯火焰处尽快的来回通过2-3次,共约2-3秒种,并不时以载玻片背面加热触及皮肤,不觉过烫为宜(不超过60℃),放置待冷后,进行染色。 4 初染:在涂片薄膜上滴加草酸铵结晶紫1-2滴,使染色液覆盖涂片,染色约 1min。 5 水洗:斜置载玻片,在自来水龙头下用小股水流冲洗,直至洗下的水呈无色为止。 6 媒染:用100-1000ul移液枪吸取约300ul碘液滴在涂片薄膜上,使染色液覆盖涂片,染色约1min。
酞菁染料安全操作规程示 范文本 In The Actual Work Production Management, In Order To Ensure The Smooth Progress Of The Process, And Consider The Relationship Between Each Link, The Specific Requirements Of Each Link To Achieve Risk Control And Planning 某某管理中心 XX年XX月
酞菁染料安全操作规程示范文本 使用指引：此操作规程资料应用在实际工作生产管理中为了保障过程顺利推进，同时考虑各个环节之间的关系，每个环节实现的具体要求而进行的风险控制与规划，并将危害降低到最小，文档经过下载可进行自定义修改，请根据实际需求进行调整与使用。 1、酞菁染色机械的轧液、汽蒸、酸洗设备部分应装有 局部而密闭良好的排气和通风设备，有利于将有毒有刺激 性氨气及时排除，保持作业场所空气新鲜。 2、配液室的配液机械应自动搅拌，加罩密闭并设置良 好的排毒设备和换气装置。 3、定期检测工作场所的有毒、有害气体，使低于国家 允许浓度标准。如氨气浓度不得超过30mg/m3，二氧化氮 气体不超过5mg/m3 。 4、酞菁染料的助溶剂力求做到以无毒代有毒，加强劳 动保护和工业卫生。 5、操作工应配备好必需的个人防护用品，工作时要认 真穿戴。如倒氨水时，要戴好防护眼镜，加有机溶剂勒伐
素ND，因有毒性，必须戴好橡胶手套方能操作。并按国家规定，供给保健食品和定期疗养。 请在此位置输入品牌名/标语/slogan Please Enter The Brand Name / Slogan / Slogan In This Position, Such As Foonsion
实验二革兰氏染色法 【实验目的】 1.学习并初步掌握革兰氏染色法。 2.了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。 3.巩固显微镜油镜的使用方法。 【实验仪器、材料】 1.菌种：大肠杆菌，金黄色葡萄球菌菌液。 2.染色剂：革兰氏染色试剂盒（结晶紫染色液、碘液、脱色液（95%乙醇）、复红染液）。 3.仪器及其他物品： 显微镜、香柏油、无水乙醇、载玻片、擦镜纸、滤纸、酒精灯、试管架、废液缸、记号笔、接种环、镊子、打火机等。 【实验内容】 革兰氏染色法 一、染色标本制备 1.涂片取一张洁净的载玻片，滴加少许生理盐水，用无菌操作方法从试管中沾取菌液一环，与生理盐水研磨均匀，做一薄而均匀、直径约1cm的菌膜。涂菌后将接种环火焰灭菌。（事先在载玻片的反面滴加菌液的相应位置做好标记） 2.干燥于空气中自然干燥。亦可把玻片置于火焰上部略加温加速干燥。(温度不宜过高) 3.固定目的是杀死细菌并使细菌粘附在玻片上，便于染料着色，常
用加热法，即将细菌涂片膜向上，通过火焰3次，以热而不烫为宜，防止菌体烧焦、变形。此制片可用于染色。 二、染色 l.初染滴加结晶紫覆盖菌膜，染lmin，自来水缓缓冲洗，甩去积水。 2.媒染滴加卢氏碘液，染lmin，水洗，甩去积水。 3.脱色滴加95%乙醇数滴，20s~30s，见紫色脱下立即用水冲洗，甩去积水。 4.复染滴加石炭酸复红液，染lmin，水洗，甩去积水，标本片用滤纸吸干。 三、镜检 待染色片充分干燥后，用油镜观察。 【实验结果】 葡萄球菌呈葡萄状排列，呈紫色，为革兰氏阳性菌； 大肠杆菌为散在的短小杆菌，呈红色，为革兰氏阴性菌。 注：绘图展示染色结果 【结果分析、讨论（结论与评价）】 注：分析你的染色结果是否正确？如果不正确，请分析原因。
1.革兰氏染色的机理和步骤 机理：G+、G-主要由其CW化学成分的差异而引起对乙醇的通透性，抗脱色能力的差异。主要有肽聚糖的厚度和结构所决定。 G+的CW:肽聚糖层厚，脂质含量低。乙醇脱色时CW脱水，孔径减少，透性降低，不易脱色，呈初染得蓝紫色。 G-的CW：肽聚糖层薄，脂质含量高。乙醇脱色时，类脂被乙醇溶解，透性升高，细胞被复染显红色。 步骤：①涂片：在干净的载玻片上滴一滴水，用接种环挑取菌体均匀涂布于水中。 ②固定：将玻片靠近酒精灯火焰，蒸干水分，但不要烤焦。 ③初染：用碱性颜料结晶紫对菌液涂片进行初染。 ④媒染: 以碘液媒染1min，水洗，吸干水分。(细胞内形成结晶紫与碘的复合物，增强相互作用） ⑤脱色(关键步骤）：以95%的乙醇脱色30s，应适当振荡均匀，是乙醇脱色完全。 ⑥水洗，吸干。 ⑦复染：??(第2张）复染30s，水洗吸干。 ⑧干燥镜检。 2、用渗透皮层膨胀学说解说芽孢耐热机制。 芽孢的耐热性在于芽孢衣对多价阳离子和水分的透性很差，以及皮层的离子强度很高，这就使皮层产生了极高的渗透压去夺取芽孢核心中水分，其结果造成皮层的充分膨胀和核心的高度失水，正是这种
失水的核心才赋予芽孢极强的耐热性。 3、引起微生物培养过程中PH变化的几种可能反应，并说明如何能够维持微培PH稳定。 答：培养过程中，由于营养物质被分解利用，代谢产物的形成与积累，会导致PH变化。 （第2张中的图） 还与培养基的C/N比有关，C/N高，经培养基后PH显著下降，C/N 低，经培养基后PH明显上升。 PH调节：①加入缓冲剂--------常用:一氢二氢磷酸盐，K2HPO4 呈碱性，KH2PO4 酸性，只在一定的PH范围内调节（6.4--7.2） ②大量产酸的菌株，加CaCO3调节，CaCO3难溶于水，不会使培养液的PH过度增加，但可不断中和微生物产的酸。 ③培养液中存在天然的缓冲系统，如AA，肽，Pr均属两性电解质，也起缓冲的作用。 ④过酸：治标------加NaOH、Na2CO3中和，治本-----加适量氮源：NaNO3、Pr、NH3·H2O；增加通风量。 ⑤过碱：治标-----H2SO4、HCl中和，治本----加适量碳源:G类，脂类;减小通风量。 3、抗生素法和菌丝过滤法为何能浓缩营养缺陷型突变株？ 抗生素法（青霉素法）：适用于细菌。原理：青霉素抑制肽聚糖链间的交联，组织了合成完整的CW，野生型B处于正常生长繁殖，所以对青霉素敏感，可被抑制或杀死；营缺B在基本培养基上休眠状态
文件编号：RHD-QB-K5529 （操作规程范本系列） 编辑：XXXXXX 查核：XXXXXX 时间：XXXXXX 染缸安全操作规程标准 版本
染缸安全操作规程标准版本 操作指导：该操作规程文件为日常单位或公司为保证的工作、生产能够安全稳定地有效运转而制定的，并由相关人员在办理业务或操作时必须遵循的程序或步骤。，其中条款可根据自己现实基础上调整，请仔细浏览后进行编辑与保存。 一、操作要求： 要求操作人员熟悉本操作规程，了解各注意事项及安全措施 二、操作指引： 1、进布。上一缸出缸前，必须准备下一缸布。进布前要认真核对布种、车号、条数。入布时发现布疋条数不对或分管不均匀时，要及时上报。要检查缝头有无脱口，胚布布面是否勾纱油污等，如打结进缸的，打结要牢固。 2、定水位。根据布入缸的条数和重量，按工艺要求计算合理的水位，然后不管做前处理、
染色、后处理、洗水均以此档水位线为停机水位的标准。以保证染液的克/升浓度不变。 3、前处理。凡需要做前处理，可边升温边入布，入布后检查停机水位是否准确，然后从主缸抽水到副缸溶解前处理助剂（除油剂及纯碱等），再由副缸打入缸体内，然后通知电脑控制室进入电脑程序，升温当保温时间足够后，可直接一次性将残液排完（特殊布种要按工艺 要求降温、水洗），再按标准水量进水进行两次洗水，每次洗水时间不得少于5分钟。再排 清后再次按标准进水，测试酸碱度接近中性时（PH等于7），可进入染色工序。 4、染色； ①经认真核准停机水位后，然后由主缸抽水到副缸，下染色助剂（酸和匀染剂等），再由副缸将助剂
打入主缸后运行5分钟，开缸盖检测染液的酸碱度，即PH值在4.5至5.0的范围，并请染色领班监管，在运转卡上确认签名。如PH值达不到要求，染色工直接找对色主管说明情况，申请加料。 ②染色工在下染料前必须先对染料，助剂进行核对、对色号、缸号、条数及颜色，如有差异，不得入料，并马上报告领班。 ③在保证了染液的水量和酸碱度后，染色工关紧染缸盖，由主缸抽水到副缸加入染料，再把染液打入主缸内，绝不允许边入染料边升温，必须把染料全部入缸运行后，通知电脑控制室让染缸进入电脑程序运行。 ④在染色途中，如发生“打柴”或其他机械故障，要及时通知电脑控制室。转为手动降温。 5、剪板；
革兰氏染色法的过程及原理一，过程 1 ．涂片将培养的不同菌分别作涂片(注意涂片切不可过于浓厚)，干燥、固定。固定时通过火焰l 一 2 次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。 2 ．染色 ( 1 )初染加草酸铰结晶紫一滴，约一分钟，水洗。 ( 2 )媒染滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。 ( 3 )脱色将载玻片上面的水甩净，并衬以白背景，用95 ％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20 一30 秒钟，立即用水冲净酒精。 ( 4 )复染用番红液染1 一2 分钟，水洗。 ( 5 )镜检干燥后，置油镜观察．革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。 ( 6 ) 同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片，作革兰氏染色对比。二，原理 革兰氏染色法( Gram stain )不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示：染色反应呈红色(复染颜色) 的称为革兰氏阴性细菌，用G 一表示。细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肤聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫一碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肤聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫一碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液 (番红)的颜色，因此呈现红色。 革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌：而脱色，不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈阴性反应。 青霉素作用机制 干扰细菌细胞壁的合成。青霉素你的结果与细胞壁的成分粘肽结构中德D-丙氨酰-D-丙氨酸近似，可与后者竞争转肽酶，阻碍你粘肽的形成，造成细胞壁的缺损，使细菌失去细胞壁的渗透屏障，对细菌起到杀灭作用。 溶菌酶与青霉素对细菌细胞壁的作用 溶菌酶作用机制：是一种能水解致病菌种黏 多糖的碱性酶，只要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之间的B-1，4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物流出而使细菌溶解，溶菌酶还可以和带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA RNA脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活，因此该酶具有抗菌消炎，抗病毒等作用 判断细菌有无鞭毛的方法 电镜观察，鞭毛染色，半固体穿刺培养，菌落形态观察 描述细菌与古细菌在细胞膜上的主要化学区别 在革兰氏阴性菌的表层，有由肽葡聚糖形成的细胞壁，在壁的外面，又有由蛋白质、磷脂质、脂多糖形成的膜层，与里面的细胞质膜相对应，特称此层为细菌外膜。夕卜膜比细胞质膜的磷脂质含量低，但脂多糖的含量则比较高。夕卜膜的蛋白质与细胞质膜不同，主要部分为数种蛋白质所构成。其主要蛋白质的部分与特异的内面的肽葡聚糖以共价键结合。脂多糖存在于外膜的最外层。在
编号：SM-ZD-83089 保险粉安全操作规程Through the process agreement to achieve a unified action policy for different people, so as to coordinate action, reduce blindness, and make the work orderly. 编制：____________________ 审核：____________________ 批准：____________________ 本文档下载后可任意修改
保险粉安全操作规程 简介：该规程资料适用于公司或组织通过合理化地制定计划，达成上下级或不同的人员之间形成统一的行动方针，明确执行目标，工作内容，执行方式，执行进度，从而使整体计划目标统一，行动协调，过程有条不紊。文档可直接下载或修改，使用时请详细阅读内容。 一、目的 由于车间使用的保险粉有强烈的致敏性和刺激性，属于自燃危险品，遇水剧烈反应，可引起燃烧，为防止其对人体和环境造成一定的影响，车间对操作人员进行定期培训并制定保险粉安全操作规程。 二、范围 适用于染整车间染色工序 三、安全管理 1. 操作注意事项：密闭操作，局部排风。操作人员必须经过专门培训，严格遵守操作规程。建议操作人员佩戴自吸过滤式防尘口罩，戴安全防护眼镜，穿化学防护服，戴乳胶手套。远离火种、热源，工作场所严禁吸烟。使用防爆型的通风系统和设备。远离易燃、可燃物。避免产生粉尘。避免与氧化剂、酸类接触。尤其要注意避免与水接触。搬运时要
轻装轻卸，防止包装及容器损坏。配备相应品种和数量的消防器材及泄漏应急处理设备。倒空的容器可能残留有害物。 2. 储存注意事项：储存于阴凉、通风的库房。包装要求密封，不可与空气接触。应与氧化剂、酸类、易（可）燃物分开存放，切忌混储。采用防爆型照明、通风设施。禁止使用易产生火花的机械设备和工具。储区应备有合适的材料收容泄漏物。 四、应急防护及处置 1.急救措施 皮肤接触：脱去污染的衣着，用肥皂水和清水彻底冲洗皮肤。如有不适感，就医。 眼睛接触：提起眼睑，用流动清水或生理盐水冲洗。如有不适感，就医。防护：戴安全防护眼镜。 吸入：迅速脱离现场至空气新鲜处。保持呼吸道通畅。如呼吸困难，给输氧。呼吸、心跳停止，立即进行心肺复苏术。就医。呼吸系统防护：可能接触其粉尘时，应该佩戴过滤式防尘呼吸器。必要时配戴空气呼吸器。 食入：饮足量温水，催吐。就医。
实验6 细菌的革兰氏染色 一、实验目的和内容 目的：初步掌握细菌涂片方法及革兰氏染色法步骤。 内容：1．制作细菌染色装片。 2．进行革兰氏染色法操作。 二、实验材料和用具 金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽胞杆菌菌液，待测菌菌液1～2种。 革兰氏染色液(结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、石炭酸复红液等)、香柏油、二甲苯；显微镜、擦镜纸、接种环、载玻片、吸水纸、试管、小滴管、酒精灯。 三、操作步骤 (一)制片 1．涂菌用无菌操作方法从试管中沾取菌液一环，用接种环在洁净无脂的载玻片上做一薄而均匀、直径约lcm的菌膜。涂菌后将接种环火焰灭菌。 2．干燥于空气中自然干燥。亦可把玻片置于火焰上部略加温加速干燥(温度不宜过高)。 3．固定目的是杀死细菌并使细菌粘附在玻片上，便于染料着色，常用加热法，即将细菌涂片膜向上，通过火焰3次，以热而不烫为宜，防止菌体烧焦、变形。此制片可用于染色。 (二)染色 l．初染于制片上滴加结晶紫染液，染lmin后，用水洗去剩余染料。 2．媒染滴加卢戈氏碘液，lmin后水洗。 3．脱色滴加95%乙醇脱色，摇动玻片至紫色不再为乙醇脱退为止(根据涂片之厚薄需时30s至lmin)，水洗。 4．复染滴加石炭酸复红液复染lmin，水洗。 5．滤纸吸干，油镜镜检。 (三)结果 革兰氏阳性菌染成蓝紫色，革兰氏阴性菌染成淡红色。 (四)检测未知菌 用以上方法对未知菌进行革兰氏染色，并绘图、记录染色结果。 四、注意事项 1. 涂片务求均匀，切忌过厚。 2．在染色过程中，不可使染液干涸。 3．脱色时间十分重要，过长，则脱色过度，会使阳性菌被染成阴性菌；脱色不够，则会使阴性菌被染成阳性菌。 4．老龄菌因体内核酸减少，会便阳性菌被染成阴性菌，故不能选用。 五、实验报告 (一)绘图 1．大肠杆菌革兰氏染色视野图。 2．金黄色葡萄球菌或苏云金杆菌革兰氏染色视野图。 (二)记录革兰氏染色法法步骤，并进行结果分析。 (三)未知菌的检测结果。 六、问题和思考 1．涂片后为什么要进行固定?固定时应注意什么? 2．什么是革兰氏染色法?染色过程应注意什么? 3．试分析革兰氏染色法在细菌分类中的意义。
安全操作规程培训记录 培训内容安全操作 规程 实施 部门 生产部时间 主讲人培训 对象 公司从业人员地点会议室培训实施记录 定型机安全操作规程 1、每次开机前，将工作场地、定型机、工器具进行清洁卫生工作。 2、凡未经授权的值班人员，在没有熟练技工的带领下禁止操作。 3、机器运转时，严禁将身体靠近压辘马达、切边刀及其它运转装置（如打边等）。 4、严禁任何人将物品放在消防设施、电柜箱上等。 5、当机器突然停止运转时，要打铃后方可开机，待热风打开后，才可以开到所需的车速。 6、为节约能源、消除火警隐患，各班交接后必须认真清扫过滤网一次。 7、当机器运转过程中出现异响等问题时，要立即通知有关人员处理或采取相应措施。 8、工作完毕，应做好设备、工器具及环境清洁工作，并做好交接班。 染色机安全操作规程 1. 使用设备前应检查设备的阀门，安全附件是否符合要求，电动葫芦运行是否正常，吊钩及钢丝绳是否完好。空气压缩机是否正常，确认符合要求才允许使用。 2. 入纱时应将纱笼放正，装压纱盖时应对正位置后才把盖压下，严禁用螺栓或其他物件撞击强行压下，造成压盖变形。 3.吊笼入锅时必须对正中心，才慢慢放下，防止吊笼及锅体互相碰坏。 4. 关锅盖时应认真检查锅盖与锅体搭子应完全齿合或大于4/5并将柄放回限位装置的关闭槽内。 5. 高温高压染纱时，要打开水泵冷却水，以防轴承润滑溶解流失，损坏轴承。 6. 染纱后开锅盖时一定要放冷却水，并开泵循环，将温度降到80度以下，压力表的压力降至零点，并打开排压阀，确认锅内无压力后，停机才许开盖。 7. 如工艺需要染纱后急排染液，待染液排走后，再放冷水开循环泵，让温度降到80度，压力表指针为零，打开排压阀，确认锅内无压力后，停机，才许开盖。 8. 如遇锅盖不能正常打开时，严禁强行开盖，应查明原因或通知有关人员，采取安全措施后才许开盖。 9. 吊运纱笼时，应让吊车平稳地运行，严禁使用同时行走、上落。吊运纱笼时要注意起吊高度，防止限位开关失灵将钢丝绳拉断造成事故。 10. 当班操作工在染色过程中，应以认真的态度监视压力表（压力不许超0.2MPa）、温度表的变化及设备的运行情况，发现异常应采取措施，使其安全运转。 11. 非值机人员不准乱动，值机工不能离开工作岗位，如需要暂时离开时必须交给熟悉本工作的人监视，防止事故发生。