革兰氏染色操作规程

1 目的

建立微生物实验室细菌形态和主要构造检验方法，以鉴定菌种。

2 范围

本规程适用于我司革兰氏染色测试实验。

3 职责

质量部微生物实验员负责按此规程进行革兰氏染色测试。

4 染液的配制

4.1 0.5%结晶紫染色液

称取1g结晶紫，放入250ml试剂瓶中，加95%乙醇2ml,溶解后加入200ml蒸馏水摇匀即可。

4.2 革兰氏碘液

分别称取碘 1g和碘化钾2g放入蒸馏水300ml中，溶解摇匀即可。

4.3 脱色剂

95%乙醇

4.4 复染液（番红染液）

称取番红0.25g，加入10ml 95%乙醇内，然后用90ml蒸馏水稀释，摇匀即可。

5 革兰氏染色程序

5.1 涂片

用纱布擦净载玻片，以无菌接种环取一小滴无菌生理盐水，然后用无菌接种环挑取少数菌苔（菌落）或液体培养物（不必加生理盐水），在玻璃片中央涂成一薄膜。

5.2 干燥

涂片后放室温中自然干燥。

5.3 固定

将载玻片迅速通过火焰三次（其目的是杀死细菌），使菌体与载玻片粘附牢固，以及改变对染料的通透性。

5.4 初染

滴加结晶紫染液于已固定的载玻片上，染1min，水洗。