人γ干扰素(IFN-γ)酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中γ干扰素(IFN-γ)的含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人γ干扰素(IFN-γ)水平。用纯化的人γ干扰素(IFN-γ)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入γ干扰素(IFN-γ)，再与HRP标记的IFN-γ结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的γ干扰素(IFN-γ)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人γ干扰素(IFN-γ)含量。
试剂盒组成：
样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上
清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心
20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程
中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/
分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞
浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备
用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上
进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标
准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为300ng/L，200ng/L ，100ng/L，50 ng/L，25ng/L）。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样
品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
注意事项：
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算：
在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD
值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释
倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值
代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释
倍数，即为样品的实际浓度。
（此图仅供参考）
试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%
检测范围：
20ng/L -400ng/L
保存条件及有效期：
1.试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月
RD
Human Interferon γ
Drug Names
Generic Name：Human Interferon γ(IFN-γ) ELISA Kit.
Purpose
This kit allows for the determination of IFN-γconcentrations in Human serum, blood plasma, and other biological fluids.
Principle of the assay
T he kit assay Human IFN-γ level in the sample，use Purified Human IFN-γ antibody to coat microtiter plate wells, make solid-phase antibody, then add IFN-γto wells, Combined IFN-γantibody which With HRP labeled , become antibody - antigen - enzyme-antibody complex, after washing Completely, Add TMB substrate solution,TMB substrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed, reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color change is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm. The concentration of IFN-γ in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.
Materials provided with the kit
Specimen requirements
1.serum- coagulation at room temperature 10-20 mins，centrifugation 20-min at the speed of
2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.
2.plasma-use suited EDTA or citrate plasma as an anticoagulant,mix 10-20
mins ,centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.
3.Urine-collect sue a sterile container, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m.
remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again. The Operation of Hydrothorax and cerebrospinal fluid Reference to it.
4.cell culture supernatant-detect secretory components, collect sue a sterile container,
centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant,detect the composition of cells, Dilut cell suspension with PBS（PH7.2-7.4）, Cell concentration reached 1 million / ml, repeated freeze-thaw cycles, damage cells and release of intracellular components, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.
5.Tissue samples- After cutting samples, check the weight,add PBS（PH7.2-7.4）, Rapidly
frozen with liquid nitrogen, maintain samples at 2-8℃ after melting,add PBS（PH7.4）, Homogenized by hand or Grinders, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m.
remove supernatant.
6.extract as soon as possible after Specimen collection,and according to the relevant
literature, and should be experiment as soon as possible after the extraction. If it can’t, specimen can be kept in -20 ℃ to preserve, Avoid repeated freeze-thaw cycles.
7.Can’t detect the sample which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRP active. Assay procedure
1.Dilute and add sample to Standard: set 10 Standard wells on the ELISA plates coated, add Standard 100μl to the first and the second well, then add Standard dilution50μl to the first and the second well, mix; take out 100μl form the first and the second well then add it to the third and the forth well separately. then add Standard dilution 50μl to the third and the forth well ,mix ; then take out 50μl from the third and the forth well discard, add 50μl to the fifth and the sixth well ,then add Standard dilution 50μl to the fifth and the sixth well, mix ; take out 50μl from the fifth and the sixth well and add to the seventh and the eighth well, then add Standard dilution 50μl to the seventh and the eighth well ,mix ; take out 50μl from the seventh and the eighth well and add to the ninth and the tenth well, add Standard dilution 50μl to the nin th and the tenth well, mix , take out 50μl fro m the ninth and the tenth well discard(add Sample 50μl to each well after Diluting ,(density:300ng/L,200ng/L ,100ng/L,50 ng/L, 25ng/L)
2.add sample：Set blank wells separately (blank comparison wells don’t add sample and HRP-Conjugate reagent, other each step operation is same). testing sample well. add Sample dilution 40μl to testing sample well, then add testing sample 10μl (sample final dilution is 5-fold), add sample to wells , don’t touch the well wall as f ar as possible, and Gently mix.
3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30 min at 37℃.
4.Configurate liquid: 30-fold (or 20-fold)wash solution diluted 30-fold (or 20-fold) with distilled water and reserve.
5.washing：Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing buffer to every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat.
6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent 50μl to each well, except blank well.
7.incubate：Operation with 3.
8.washing：Operation with 5.
9.color：Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B to each well, evade the light preservation for 15 min at 37℃
10.Stop the reaction：Add Stop Solution50μl to each well, Stop the reaction(the blue color change to yellow color).
11.assay：take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution and within 15min.
Important notes
1.The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced 15-30 minutes in
the room temperature, ELISA plates coated if has not use up after opened, the plate should be stored in Sealed bag.
2.washing buffer will Crystallization separation, it can be heated the water helps dissolve
when dilute . Washing does not affect the result.
3.add Sample with sampler Each step, And proofread its accuracy frequently, avoids the
experimental error. add sample within 5 mins, if the number of sample is much , recommend to use Volley .
4.if the testing material content is excessively higher (The sample OD is bigger than the first
standard well ),please dilute Sample (n-fold), Please diluente and multiplied by the dilution factor.（×n×5）.
5.Closure plate membrane only limits the disposable use, to avoid cross-contamination.
6.The substrate evade the light preservation.
7.Please according to use instruction strictly, The test result determination must take the
microtiter plate reader as a standard.
8.All samples, washing buffer and each kind of reject should according to infective material
process.
9.Do not mix reagents with those from other lots.
Calculate
Assay range
20ng/L -400ng/L
Storage and validity
1．Storage ： 2-8℃. 2．validity ： six months.
Take the standard density as the horizontal, the OD value for the vertical ,draw the standard curve on graph paper, Find out the corresponding density according to the sample OD value by the Sample curve, multiplied by the dilution multiple, or calculate the straight line regression equation of the standard curve with the standard density and the OD value ,with the sample OD value in the equation, calculate the sample density, multiplied by the dilution factor, the result is the sample actual density.
This chartis for reference only
重组人新型白细胞介素-2（125Ser-rhIL-2）治疗晚期肿瘤疗效的多中心对照研究 发表时间：2016-09-08T10:09:39.670Z 来源：《航空军医》2016年第15期作者：唐巧玲 [导读] 通过多中心临床对照研究，对重组人白细胞介素-2（125Ser-rhlL-2）施以晚期实体肿瘤和恶性胸腹腔积液病人的治疗效果以及安全性进行分析。 湖南省株洲市中心医院田心院区综合内科 【摘要】目的：通过多中心临床对照研究，对重组人白细胞介素-2（125Ser-rhlL-2）施以晚期实体肿瘤和恶性胸腹腔积液病人的治疗效果以及安全性进行分析。方法：选择2014年6月~2015年12月满足试验要求的晚期肿瘤180例患者为研究对象，其中癌性胸腹腔积液133例，实体瘤患者47例，对肾透明细胞癌和恶性黑色素瘤等实体瘤施以皮下注射以及胸腔内注射治疗，而恶性胸腔积液则是施以腹腔内注射治疗。结果：133例癌性胸腹腔积液患者经治疗的总有效率达到59.4%，其中癌性胸水有效率64.5%，癌性腹腔积液有效率47.5%。主要的不良反应包括低热和寒颤，另外还有乏力、局部皮肤红肿以及消化道反应。结论：125ser-hrlL-2对于治疗恶性黑色素瘤、肾透明细胞癌以及恶性胸腹腔积液具有一定的疗效，相关的不良反应程度较轻。 【关键词】重组人新型白细胞介素-2；晚期肿瘤；恶性胸腹腔积液 白细胞介素-2是人机体免疫系统中的重要的淋巴因子，近年来，相关的临床研究表明。应用基因重组技术所生产的IL-2对于恶性黑色素瘤、肾透明细胞癌等实体瘤以及癌性胸腹腔积液具有一定的治疗效果[1]。本试验中所用的重组人新型白细胞介素-2（125Ser-rhIL-2）具有高的比活性、相应半衰期长以及临床不良反应低等特点[2]。本次试验主要是进行前瞻性的多中心Ⅱ期临床试验，来对该药施用于实体瘤以及癌性胸腹腔积液病人的治疗效果及安全性进行评价，现将整研究报告如下。 1.资料与方法 1.1 一般资料 选择2014年6月~2015年12月满足试验要求的晚期肿瘤180例患者为研究对象，其中男性患者106例，女性74例；患者年龄分布在20～85岁，平均年龄（54.6±3.8）岁。癌性胸腹腔积液患者133例和实体瘤患者47例。 1.2方法 1.2.1局部用药 胸膜腔内的注射：应当作引流以及抽净胸水以后，将药品200-300万IU以及生理盐水40mL经溶解后注入到胸腔内，每周进行1-2次，以2周作为1个疗程[2]。腹腔内的注射：将本品300-400万IU以及生理盐水溶液40mL经溶解后注入到腹腔内，需每周进行1-2次，以2周作为1个疗程。注射后注意间隔15分钟嘱咐患者变换1次体位，使药物可在胸腔、腹腔中均匀的接触。 1.2.2全身用药 125Ser-rhIL-2 200-300万IU 注射用水2mL，进行皮下注射，应每周进行3次，以4-6周作为1个疗程，若治疗中出现高热并伴有低血压、严重的胃肠道反应、出血以及下肢体的浮肿的应当相应减少用药量1/2；如果出现过敏反应或者严重的毛细血管渗漏综合征以及心、肝、肾功能的损害者应立即停药。 1.3疗效判定标准 1.3.1 实体瘤客观疗效评价标准 依据国内外认定的实体瘤的疗效评价标准[3]：完全缓解（CR）：所有的可见病变均完全消失，且能维持在4周以上；部分缓解（PR）：肿瘤病变部位的2个最大垂直直径的乘积减小在50%以上，并能维持在4周以上；无变化（NC）：肿瘤病变部位的2个最大垂直直径的乘积减小低于50%，或增大小于25%，无新病变的出现；进展（PD）：肿瘤病变部位的2个最大垂直直径的乘积增大在25%以上或没有出现新的病变。 1.3.2 癌性胸水评价标准[4] 完全缓解（CR）：施药以后患者胸水消失，且能维持在4周以上；部分缓解（PR）：施药以后胸水降低在2个肋间以上（应从后肋计算），且能持续在4周以上；无效（NC）：施药以后胸水减少不超过2个肋间[4]。 1.3.3 癌性腹水的评价标准 完全缓解（CR）：施药以后腹部B超的检查腹水完全消失，且能持续在4周以上；部分缓解（PR）：施药以后腹水降低在30%～50%以上，且腹围缩小在5cm以上，并能持续在4周以上；无效（NC）：施药以后腹水减少小于30%[5]。 1.3.4 不良反应的评价 根据WHO1981年所制定的抗癌药物急性、亚急性的毒性标准来进行不良反应的评价。 1.4 统计分析方法 然后运用spass18.0统计分析软件对数据资料进行统计分析，计量资料用（ ±s）表示，并进行t检验，而计数资料用百分率（%）表示，并用x2检验，如果P＜0.05则表示结果差异明显，具有统计学意义。 2.结果 2.1 疗效分析 所研究的180例患者中，癌性胸腹腔积液患者有133例，其中经过治疗后，CR 有31例，PR 有48例，总的有效率达到59.4%。癌性胸水有效率64.5%，癌性腹腔积液有效率47.5%，见表1：
人重组白细胞介素12肿瘤免疫新药 一、丰原药业受让中科大人重组白细胞介素12新药事项 2015年7月25日，丰原药业（000153）与中国科学技术大学就抗癌新药人重组白细胞介素-12药物技术转让及后继合作事宜正式签订《关于白介素-12新药技术成果转让的备忘录》。备忘录主要内容如下: 1、双方同意中国科学技术大学向公司转让人重组白细胞介素-12药物的科技成果,转让价格约5000万元(最终价格以资产评估结果为准),具体转让过程、价格及付款方式,将于评估结果出来后1个月内另行签订转让合同。 2、双方同意以合作的方式完成后续包括临床实验研究和获得新药证书和生产证书的相关研究,具体内容和方式将另行签订技术服务合同。 3、双方同意在合适的时候,在中国科学技术大学先进技术研究院成立联合实验室,共同推进相关新药研究和开发工作。 二、中科大研究白细胞介素12肿瘤免疫领军核心人物 （一）魏海明：教授，博士生导师。籍贯：安徽。山东大学医学院免疫学专业博士毕业。现为中国科学技术大学生命科学学院教授、博士生导师; 中国科学技术大学生命学院实验动物中心主任,中国免疫学会英文会刊Cellular & Molecular Immunology编辑部主任。中国免疫学会终身会
员、理事，中国免疫学会基础免疫学专业委员会副主任，中国抗癌协会肿瘤生物治疗专业委员会委员，安徽省免疫学会副理事长。2002年以来为首承担参加了9项科研项目，其中国家863课题2项，国家973课题2项，国家自然科学基金项目重点项目1项、面上项目2项，国家新药创制重大专项1项，国家杰出青年科学基金B类1项(国内负责人)。近5年在J Immunol，Plos Pathogens, J Allergy Clin Immunol，Hepatology，PNAS，J Hepatol等杂志发表SCI论文35篇。《介导肝脏免疫损伤与再生的天然免疫识别及其调控机制》分别于2007年获中华医学科技一等奖，2008年获国家自然科学二等奖。 主要研究兴趣：1. NK细胞亚群与重要疾病发生发展的关系：研究组织居留NK细胞（ThNK）与肝炎、哮喘、自身免疫病等疾病的发生发展；研究ThNK与肿瘤免疫逃逸及肿瘤免疫治疗的关系。 2. 基于天然免疫的肿瘤生物治疗技术：研究以“预存免疫”为基础的抗肿瘤“免疫化疗”方案及抗肿瘤药物白细胞介素12的研制。 （二）田志刚：中国科技大学生命科学学院教授，博士生导师。中国科学院“百人计划”获得者、国家杰出青年科学基金获得者、国家基金委创新研究群体学术带头人。
人白细胞介素2（IL-2）酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 第一部分 ELISA简介 ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。自上 世纪70年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原 或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。 在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗 涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗 原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一 定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质 的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地 放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。 第二部分 ELISA 的样本实验准备 在收集样本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后 当天就进行检测的样本，及时储存在4℃备用。对于隔天再检测的样本，及时分装后冻存在-20℃备用，有条件的，最好-70℃冻存备用。标本应避免反复冻融。 液体类标本: 包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。 1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集 上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离 心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。 4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/ 分）。仔细收集上清。 5.培养细胞：检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100 万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。 离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 6.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH 7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。 标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂，用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。 分装后一份待检测，其余冷冻备用。
7 摘要：白细胞介素种类繁多，功能多样，形成网络，复杂重叠。每种白细胞介素都有自已独特的功能，同时还可与其他细胞因子共同作用。目前对于白细胞介素Interleukin 7（IL-7）的研究主要集中在T细胞生长中对于抗凋亡的功能上，如何维持体内T细胞增殖平衡的信号通路。最新研究表明IL-7作为一个调控子在T细胞维持上起着重要的作用，但细胞如何产生IL-7信号的生物应答通路，以及在CD4+T细胞和CD8+T细胞上为何会产生差异，对于这两者知道的并不清楚。除此之外，IL-7对于肿瘤免疫治疗、肺结核免疫治疗也起到了重要的作用。 关键词：白细胞介素7、T细胞、抗肿瘤免疫、肺结核免疫 白细胞介素是由白细胞或其他细胞产生的，介导白细胞或免疫细胞间相互作用，传递免疫信息的细胞因子统称。由多种细胞产生并作用于多种细胞。最初是指由白细胞产生又在白细胞间起调节作用的细胞因子，现在是指一类分子结构和生物学功能已基本明确，具有重要调节作用而统一命名的细胞因子，它和血细胞生长因子同属细胞因子。两者相互协调，相互作用，共同完成造血和免疫调节功能。白细胞介素在传递信息，激活与调节免疫细胞，介导T、B细胞活化、增殖与分化及在炎症反应中起重要作用。目前已发现30多种白细胞介素，他们功能多样，形成网络，复杂重叠。 IL-7是众多白细胞介素中的一种，是由骨髓基质细胞分泌的糖蛋白，其靶细胞主要为淋巴细胞，对来自人或小鼠骨髓的B祖细胞、胸腺细胞及外周成熟的T细胞等均有促生长活性。IL-7能与干细胞生长因子协同能够刺激B前体发生有丝分裂，这一效应可被TGF所抑制；但对B祖细胞的生长没有明显作用；促进双阴性胸腺细胞的成熟，提供胚胎胸腺细胞发育过程中TCR基因重组的始动信号；但对成熟T细胞无明显作用；诱导胸腺细胞或外周血淋巴细胞产生LAK细胞活性，其效应细胞主要为CD8+亚群；但IL-7诱导的LAK细胞不具有NK 活性，IL-7能刺激髓样前体细胞和巨核细胞产生集落形成单位和血小板，使机体从环磷酰胺的免疫抑制作用中恢复过来；在较高浓度时，IL-7还能增强巨噬细胞的细胞毒活性，诱导单核细胞分泌细胞因子。 现已证明白细胞介素7和T细胞受体信号是体内T细胞增殖平衡的主要驱动因素，也是T细胞代谢的一个调控因子1。另一方面，在淋巴细胞减少的宿主中，T细胞再生主要通过胸腺合成和胸腺依赖的外周T细胞的体内增殖。临床上胸腺的生成被化疗、放疗、HIV感染、移植排斥反应等限制2，所以体内T细胞增殖与外周T细胞数量密切相关。但是，相比于CD8+T 细胞，CD4+T细胞平衡增殖效率却要低很多，而现有理论和模型在细胞和分子水平上不能解释为什么此机制其只对CD8+T细胞有明显效果3。 1. IL-7与T细胞生长代谢 胸腺是T细胞分化、成熟的中枢免疫器官，也是驯化和选择T细胞的场所。胸腺输出T 细胞数量与质量直接影响免疫系统整体功能4。胸腺微环境是不可替代的，不但提供胸腺细胞发育所需一系列细胞因子，胸腺细胞与胸腺基质细胞之间的接触也至关重要。 IL-7在胸腺的分化发育过程中是一种必需的细胞因子5。目前认为与IL-7促T细胞生长的两条主要途径为JAK/STAT通路和PI3K/AKT信号通路。 目前JAK/STAT信号模型主要是针对以STA T5为信号分子构建的。IL-7首先与IL-7受体结合，触发细胞内与IL-7受体相关联的JAK活化，活化后的JAK能够磷酸化STAT细胞因子，使得STAT形成二聚体，然后进入细胞的细胞核发生作用，在细胞核调控一系列的细胞生存和生长因子，如BCL-XL，c-myc等。最终促进T细胞在体内的增殖6。
新德路生(重组人白介素-2注射液) 【药品名称】 商品名称：新德路生 通用名称：重组人白介素-2注射液 英文名称：Recombinant Human Interleukin-2 Injection 【成份】 主要组成成分：重组人白细胞介素-2。 【适应症】 本品为抗肿瘤的生物治疗用药，主要用于肾癌、恶性黑色素瘤及癌性胸、腹腔积液的治疗,也可以用于其他恶性肿瘤综合治疗。 【用法用量】 用于癌症治疗，一般可静脉输注或皮下注射每日20-40万IU/m2体表面积（50-100万IU/次），每日一次，每周连用五日，四周为一疗程。癌性胸、腹水腔内注射应尽量排出胸、腹水后，每次注射40-60万IU/m2体表面积（50-100万IU/次），每周1-2次，注射2-4周，或根据病人情况按医嘱使用。 【不良反应】 各种不良反应中最常见的是发热、寒战，肌肉酸痛，与用药剂量有关，一般是一过性发热（38℃左右），亦可有寒战高热，停药后3～4小时体温多可自行恢复到正常。个别患者可出现恶心、呕吐、皮疹、类感冒症状。皮下注射者局部可出现红肿、硬结、疼痛，所有副反应停药后均可自行恢复。使用较大剂量时，本品可能会引起毛细血管渗漏综合征，表现为低血压、末梢水肿、暂时性肾功能不全等，应立即停用，积极对症处理。应注意，使用本品应严格掌握安全剂量。
【禁忌】 1.对本品成分有过敏史的病人。 2.高热、严重心脏病、低血压者，严重心肾功能不全者，肺功能异常或进行过器官移植者。 3.重组人白细胞介素-2即往用药史中出现过与之相关的毒性反应：⑴持续性室性心动过速； ⑵未控制的心率失常；⑶胸痛并伴有心电图改变、心绞痛或心肌梗塞；⑷心压塞；⑸肾功能衰竭需透析＞72小时；⑹昏迷或中毒性精神病＞48小时；⑺顽固性或难治性癫痫； ⑻肠局部缺血或穿孔；⑼消化道出血需外科手术； 【注意事项】 1.本品应在医生指导下使用。 2.药瓶有裂缝、破损者不能使用。药瓶开启后，应一次使用完，不得多次使用。预充式注射器包装仅为一次性使用，不得重复使用。 3.使用本品从小剂量开始，逐渐增大剂量。应严格掌握安全剂量。使用本品低剂量、长疗程可降低毒性，并且可维持抗肿瘤活性。 【特殊人群用药】 儿童注意事项： 18岁以下儿童用药的安全性和药效尚未得到确证。 妊娠与哺乳期注意事项： 本品对妊娠妇女缺乏足够充分的对照研究资料，只有当使用本品的有利因素超过胎儿可能承担的风险时，才可应用本品。本品是否分泌于人乳中尚不清楚。由于本品对乳儿有潜在的不良反应，所以决定中止哺乳还是中止用药，要取决于药物对母亲的重要性。 老人注意事项： 本品对老年患者和轻年患者中发生的情况是相同的。
人白细胞介素-10（IL-10）酶联免疫检测 试剂盒使用说明书 使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理，来检测人白细胞介素-10（IL-10），只能用于研究用途，不得用于医学诊断。 用途：用于人血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素-10（IL-10）的测定。 工作原理 本试剂盒采用的是双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中人白细胞介素-10（IL-10）的水平。向预先包被了人白细胞介素-10（IL-10）单克隆抗体的酶标孔中加入白细胞介素-10（IL-10），温育；洗涤后，加入HRP标记过的白细胞介素-10（IL-10）抗体。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中人白细胞介素-10（IL-10）的浓度呈正相关。 试剂盒组成 需要而未提供的试剂和器材 1．37℃恒温箱。 2．标准规格酶标仪。 3．精密移液器及一次性吸头 4．蒸馏水， 5．一次性试管 6．吸水纸 注意事项 1．从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差 3．建议所有标准品、样本都做双份检测。如标本中待测物质含量过高，请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再按说明书操作进行测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。 4．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
5．为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。 6．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 7．底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。 洗板方法 手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。 自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中 标本要求 1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 操作程序 1．标准品的稀释：（本试剂盒提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍比 2 测样品孔。在酶标包被板上标准品孔中加入稀释好的标准品50μl；在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。轻轻晃动混匀，37℃温育30分钟。 3．弃去液体，甩干，每孔加满稀释后洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。 如此重复5次，拍干。 4．每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。轻轻晃动混匀，37℃温育30分钟。 5．弃去液体，甩干，每孔加满稀释后洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。 如此重复5次，拍干。 6．每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟. 7．取出酶标板，每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 8．测定：以空白孔调零，在450nm波长下测量各孔的吸光度值（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。 9．根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD 值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了的，其实际浓度应该乘以总稀释倍数。 操作程序总结：
白细胞介素-21研究进展 摘要：白细胞介素-21(Interleukin21，IL-21)[1]是一种新发现的细胞因子，主要由活化的CD4+T 细胞分泌，与IL-2、IL-15、IL-4等细胞因子具有高度同源性。IL-21的受体广泛分布在脾、胸腺、淋巴结等器官和组织，可调控T细胞、B细胞增殖，增强自然杀伤（NK）细胞等的活性。并促进机体由先天性免疫向适应性免疫的转变。本文就IL-21及其受体的产生、分子结构、生物学作用及与疾病关系的研究进展作一综述。 关键词：白细胞介素-21；生物学作用；疾病 白细胞介素-21（IL-21）是最近命名的Ⅰ型细胞因子，由活化的CD+4T细胞合成，包括133个氨基酸残基和4个螺旋结构[2]，与IL-2、IL-15同为细胞因子受体γc家族的单链蛋白质[3]。IL-21通过特异性结合IL-21R介导多种生物学效应:IL-21对不同阶段的B、T淋巴细胞和自然杀伤(NK)细胞均起作用，在特定的刺激物存在时，可促进B、T淋巴细胞和NK等细胞增殖。近年的研究证实，IL-21及其受体选择性地在淋巴组织特别是NK细胞、B淋巴细胞、T细胞、树状突细胞、巨噬细胞和内皮细胞中表达[2]，参与对多种免疫细胞的调节，尤其与NK细胞的功能调节密切相关，是NK细胞发挥抗肿瘤作用中起关键作用的因子。可见，IL-21有望成为临床一个重要的免疫治疗药物。 1IL-21的分子结构和基因 IL-21基因定位于人染色体4q26-q27，与IL-2、IL-15在同一染色体上，距IL-2基因大约180 kb，距IL-15则较远[4]。Asao等[5]报道IL-21cDNA共642个核苷酸，其中自42位至535位核苷酸为编码区，美国国立医学图书馆的注解组报道IL-21cDNA为617位核苷酸，去除了最后25个核苷酸。IL-21开放阅读码框编码162个氨基酸的多肽前体，在31位G1y处被酶切后形成131个氨基酸残基成熟的IL-21蛋白质。成熟的IL-21含有四螺旋族细胞因子结构域，该结构域与IL-2、IL-4、IL-15的四螺旋族细胞因子结构域有较高的同源性。IL-21与IL-15在相同的位置有两对相同的半胱氨酸，其中一对在IL-2、IL-4、GM-CSF中具有保守性，另一对则为IL-21与IL-15所特有，表明IL-21与IL-15是结构上最相近的细胞因子。并且机体在正常情况下，IL-21的表达量很少，在模拟T细胞活化的条件下可诱导IL-21的高水平表达。 2IL-21的生物学活性 2.1对T细胞的作用 IL-21能明显增强抗CD3mAb诱导的T细胞增殖，并增加CD8+T细胞的活化、增殖和效应功能，但在不同T细胞亚群或在不同状态下IL-21的反应不一致,它可和IL-4、IL-6等一起诱导Th细胞向Th2应答分化，抑制Th1应答，调节Th1/Th2的比例,保持机体的免疫自稳平衡。IL-21可促使T细胞分泌IFN-γ；IL-21能通过STAT4途径来抑制天然T前体细胞IFN-γ的产生，抑制IFN-γ对前体T细胞向Th1细胞分化的促进作用[6]。Kasaian等[7]研究报道，IL-21可促进抗CD3抗体活化的胸腺细胞、成熟外周血T细胞的增殖，在无抗CD3抗体的刺激下，IL-21与IL-2、IL-15、IL-7协同作用可促使外周血T细胞增殖；IL-21能影响T细胞初次免疫应答及效应T细胞的功能，在再次免疫
重组人白细胞介素11治疗急性白血病化疗后血小板减少的疗效和机制研究 发表时间：2017-08-23T14:51:56.817Z 来源：《航空军医》2017年第11期作者：陈宏耀 [导读] 急性白血病化疗后血小板减少采用重组人白细胞介素11治疗效果较好，有助于快速升血小板，且临床应用安全可靠。（中国人民解放军181医院血液内科 541000） 摘要：目的探讨重组人白细胞介素11治疗急性白血病化疗后血小板减少的疗效和机制。方法选取我院 2015年1月至 2017年2月期间本院收治的82例急性白血病化疗相关性血小板减少患者作为研究对象，随机分为对照组和观察组，各41例。观察组化疗结束 24 ～48 h后开始采用重组人白细胞介素11治疗，两组患者出现出血症状或外周血小板计数＜10×109/L时，预防性输注血小板。分别记录两组患者治疗前和治疗1周后血小板计数变化，统计恢复至≥50×109／L和≥100×109／L的时间，并评估观察组用药安全性。结果治疗后，观察组血小板计数显著高于对照组，组间差异p＜0.05。观察组输注血小板量均显著少于对照组，组间差异p＜0.05。观察组血小板恢复至≥50×109／L时间和≥100×109／L时间均显著少于对照组，组间差异p＜0.05。观察组用药后不良反应发生率为14.63%（6/41）。结论急性白血病化疗后血小板减少采用重组人白细胞介素11治疗效果较好，有助于快速升血小板，且临床应用安全可靠。 关键词：重组人白细胞介素11；急性白血病；化疗；血小板减少 急性白血病是较为常见的恶性血液系统疾病，化疗是治疗该病的主要手段，疗效较好，但是化疗药物均具有明显细胞毒性，造血系统受损明显，骨髓抑制等不良反应发生率较高，以粒细胞和血小板减少为主要表现[1]。目前，急性白血病化疗后粒细胞减少问题已经得到了较好的解决，但是血小板减少问题仍有待研究[2]。重组白细胞介素 11是治疗化疗后血小板减少症的重要药物，为进一步探明其治疗急性白血病化疗相关性血小板减少症的临床疗效，本次研究选取我院 2015年1月至 2017年2月期间本院收治的82例急性白血病化疗相关性血小板减少患者作为研究对象，对比分析了其临床疗效，现报道如下。 1资料与方法 1.1一般资料 选取我院 2015年1月至 2017年2月期间本院收治的82例急性白血病化疗相关性血小板减少患者作为研究对象，随机分为对照组和观察组，各41例。两组患者均符合急性白血病诊断标准及化疗指征，化疗期间出现血小板减少（血小板计数＜80×109／L），两组患者已排除肝、肾功能障碍者、化疗前凝血功能异常，合并急性感染者、活动性出血等。观察组，男26例，女15例，年龄 16～54岁，平均年龄（35.24±19.12）岁；急性淋巴细胞白血病17例，急性非淋巴细胞白血病 24例。对照组，男25例，女16例，年龄 18～54岁，平均年龄（36.07±18.08）岁；急性淋巴细胞白血病18例，急性非淋巴细胞白血病23例。两组患者在白血病分型等一般资料方面，无显著差异均（P ＞0.05），具有可比性。 1.2方法 两组患者化疗前，采集自体血小板并保存，便于患者化疗后自体输注使用。观察组采用重组人白细胞介素11治疗，患者均在化疗结束24 ～48 h后开始治疗：注射用重组人白细胞介素-11（上海中信国健药业股份有限公司，国药准字S2*******，1.5mg/瓶）。对照组不使用药物干预。两组患者出现出血症状或外周血小板计数＜10×109/L时，预防性输注血小板，每次输注10U，输注后计算血小板校正计数增值，要求1 h血小板校正计数＞ 7.5，24 h血小板校正计数＞ 4． 5。 1.3观察指标 1.3.1血小板计数监测 两组患者期间定期采血（枸橼酸钠抗凝管），采用全自动血球分析仪测定血小板，分别记录两组患者治疗前和治疗1周后血小板计数变化。同时，观察血小板计数上升时间，分别统计恢复至≥50×109／L和≥100×109／L的时间。 1.3.2用药安全性评估 用药后，密切关注观察组患者是否出现明显不良反应、异常体征等情况，统计观察组不良反应发生率和转归。 1.4统计学方法 本次研究采用SPSS20. 0 统计学软件分析所有数据，计量资料采用t检验；采用χ2检验计数资料，P<0.05 认为差异显著，有统计学意义。 2结果 2.1两组血小板变化及输注血小板量比较 治疗前，观察组血小板计数与对照组比较，无显著差异p＞0.05，无统计学意义。治疗后，观察组血小板计数显著高于对照组，组间差异p＜0.05，有统计学意义。观察组输注血小板量均显著少于对照组，组间差异p＜0.05，有统计学意义。见表1。 2.3两组患者不良反应情况比较 观察组用药后出现恶心呕吐1例，全身乏力2例，肌肉酸痛1例，心率异常1例，局部红肿硬结1例，不良反应发生率为
人白细胞介素1a（IL-1a）酶联免疫检测 试剂盒使用说明书 使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理，来检测人白细胞介素1a（IL-1a），只能用于研究用途，不得用于医学诊断。 用途：用于人血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素1a（IL-1a）的测定。 工作原理 本试剂盒采用的是双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中人白细胞介素1a （IL-1a）的水平。向预先包被了人白细胞介素1a（IL-1a）单克隆抗体的酶标孔中加入白细胞介素1a（IL-1a），温育；洗涤后，加入HRP标记过的白细胞介素1a（IL-1a）抗体。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中人白细胞介素1a（IL-1a）的浓度呈正相关。 试剂盒组成 1 标准品（80ng/L）7 显色剂A液6ml 2 标准品稀释液3ml8 显色剂B液6ml 3 酶标包被板12孔×8条9 终止液6ml 4 酶标试剂6ml10 说明书1份 5 30倍浓缩洗涤液20ml11 封板膜2张 6 样品稀释液6ml12 密封袋1个 需要而未提供的试剂和器材 1．37℃恒温箱。 2．标准规格酶标仪。 3．精密移液器及一次性吸头 4．蒸馏水， 5．一次性试管 6．吸水纸 注意事项 1．从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差 3．建议所有标准品、样本都做双份检测。如标本中待测物质含量过高，请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再按说明书操作进行测定，计算时请最后乘以总稀释倍数
白细胞介素-1，简称白介素1 (IL-1)，是一种细胞因子，属于白细胞介素的一种。白细胞介素（interleukin，IL），简称白介素，是指在白细胞或免疫细胞间相互作用的淋巴因子。白细胞介素在传递信息，激活与调节免疫细胞，介导T、B细胞活化、增殖与分化及在炎症反应中起重要作用。 白细胞介素-2主要由活化的CD4+T细胞和CD8+T细胞产生的具有广泛生物活性的细胞因子。是所有T细胞亚群的生长因子，并可促进活化B细胞增殖，故为调控免疫应答的重要因子，也参与抗体反应、造血和肿瘤监视。21世纪初人类开始的生命方舟计划对于白介素2的研究取得了突破性的进展。 IL-2R：对急性排斥反应和免疫性疾病有诊断意义，可作为病情观察和药效监测的一项指标。 白细胞介素-4的生物作用，包括刺激活化B细胞和T细胞增殖、CD4+T细胞分化成II型辅助T细胞. 它也在调节体液免疫和适应性免疫中起关键作用。白细胞介素-4诱导B细胞抗体类别转换向IgE，上调第二型主要组织兼容性复合体的产生。 白细胞介素-6，简称白介素6 (IL-6)，是一种细胞因子，属于白细胞介素的一种。它是由纤维母细胞、单核／巨噬细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞、上皮细胞、角质细胞、以及多种瘤细胞所产生。IL-1、TNF-a, PDGF、病毒感染、双链RNA及c AMP等，均可诱导正常细胞产生白介素6。白介素6能够刺激参与免疫反应的细胞增殖、分化并提高其功能。 白介素10是一种多细胞源、多功能的细胞因子，调节细胞的生长与分化，参与炎性反应和免疫反应，是目前公认的炎症与免疫抑制因子。在肿瘤、感染、器官移植、造血系统及心血管系统中发挥重要作用，与血液、消化、尤其是心血管系统疾病密切相关。在1989年，Mosmannand及他们的同事描述了一种新的免疫介质，由Th2细胞克隆分泌，能够抑制Th1细胞克隆IL-2和IFNr的合成。早期被命名为细胞因子合成抑制因子(CSIF)，这种因子后来被命名为IL-10 白细胞介素-13是趋化因子家族的一种细胞因子，目前共发现了29个白细胞介素（现在可能为35个），分别命名为IL-1---IL29.功能复杂，成网络，复杂重叠。
人重组白细胞介素-8在大肠杆菌的表达、鉴定 【摘要】目的利用PCR技术扩增hIL-8 cDNA，将其连接于原核表达载体pKpL-3a（含PL启动子）中,并在大肠杆菌中表达、鉴定。方法PCR技术扩增hIL-8 cDNA获取目的基因，将该基因重组到大肠杆菌表达载体pKpL3a质粒中，重组DNA分子转化到Pop2136大肠杆菌中，利用其所产生的温度敏感性λ阻遏蛋白来调控外源基因表达，经ELISA反应检测其表达水平。结果带hIL-8基因的重组pKpL3a质粒成功转化到Pop2136大肠杆菌中，经诱导，表达了IL-8并经ELISA反应检测了其表达水平。结论：hIL-8成功在大肠杆菌中表达。 【关键词】hIL-8 PCR 重组基因表达 正文 趋化因子（Chemokine）是一组具有趋化作用的细胞因子，能吸引免疫细胞到免疫应答局部，参与免疫调节和免疫病理反应。白细胞介素-8（Interleukin-8）属于趋化因子家族成员，其分子中含有Cys-X-Cys的三联氨基酸序列，因而属于CXC趋化因子亚家族（α家族）。IL-8的重要生物学功能是对中性粒细胞、嗜碱性粒细胞和T细胞具有区划作用，并可促进中性粒细胞的活化，在炎症反应中是一种重要的炎症因子。另外，IL-8还具有促进造血细胞增殖及新生血管生成作用，在伤口愈合和肿瘤生长及转移的过程中发挥重要作用。 由于天然来源的IL-8含量极低，难以大批量制备，因而只能利用基因工程技术进行表达和生产。其基本过程是：获取目的基因；表达载体的选择和构建；目的基因与表达载体的拼接；重组DNA分子转化到大肠杆菌；使其复制转录并合成重组的免疫分子。利用重组技术, 可使大肠杆菌成为生产IL-8的生物工厂。这种生物工厂一旦建造成功, 只要供给大肠杆菌适当的生长条件, 就可提供取之不尽的IL-8。 1 材料与方法 1.1 主要材料 1.1.1 菌株与载体 Pop2136大肠杆菌和含pKpL-3a质粒的大肠杆菌由本实验室提供。 1.1.2 工具酶与试剂 TaqDNA聚合酶及其buffer购于北联生物医学工程公司。dNTPmix购于Takara 公司。Klenow酶购于北联生物医学工程公司。内切酶StyⅠ、XbaⅠ购于Takara公司。T4 DNA连接酶及其buffer购于Takara公司。 1.1.3 PCR引物的设计、合成 上游5ˊ引物：agt gct aaa gaa ctt aga tgt； 下游3ˊ引物：ccg tct aga tta tga att ata agc cct ct(内含XbaⅠ酶切位点和TAA终止密码)由Takara公司合成。
泉奇(注射用重组人白介素-2(125Ser)) 【药品名称】 商品名称：泉奇 通用名称：注射用重组人白介素-2(125Ser) 英文名称：Pyritinol Hydrochloride Capsules 【成份】 重组人白细胞介素-2（125Ser） 【适应症】 本品可用于癌性胸腹腔积液及黑色素瘤、肾癌等恶性肿瘤的治疗。 【用法用量】 用无菌生理盐水溶解，具体用法、剂量和疗程因病而异，一般采用下述几种方法（或遵医嘱）。1全身给药：皮下注射：重组人白细胞介素-2（125Ser）60～100万IU/m2加2毫升无菌生理盐水溶解，皮下注射3次/周，6周为一疗程。2区域与局部给药：（1）胸腔注入：用于癌性胸腔积液，重组人白细胞介素-2（125Ser）100～200万IU/m2次，尽量抽去腔内积液后注入，1～2次/周，2～4周（或积液消失）为一疗程。（2）&nb 【不良反应】 常见的不良反应为发热、畏寒、肌肉酸疼，与用药剂量有关，也可有寒战高热，个别患者可出现恶心、呕吐，少数病人有皮疹、注射局部红肿等，所有不良反应停药后可自行恢复。本品大剂量使用时，国外报道有可能引起毛细血管渗漏综合症，表现为血压降低、末梢水肿、暂时性肾功能不全等，应立即停用，积极对症处理。 【禁忌】 对本品成份过敏者、严重心肾功能不全者、严重低血压者、高热者禁用。
【注意事项】 1 本品溶解后如有摇不散的沉淀、异物或瓶有裂纹者不可使用。 2 启瓶后制品应一次性使用完毕不得分次使用。 3 使用剂量应遵医嘱。 【药物相互作用】 本品会影响中枢神经系统功能。因此，本品与精神药物一同用药治疗后，可能会发生相互作用（例如麻醉药、止痛剂、止吐药、镇静剂、安定药）。 本品若与对肾脏有危害性的药物（例如氨基葡糖苷、镇痛消炎药），对骨髓有毒性的药物（例如细胞毒素的化学疗法），对心脏有毒害的药物（例如阿霉素）或肝毒性药物（例如氨甲蝶呤、天冬酰胺酶）并行给药时，会增强对这些器官系统的毒性作用。 本品与任何抗肿瘤剂并行给药的安全性和药效尚未得到确证。 此外，由于使用本品而引起的肝、肾功能下降，会延缓并用药物清除，从而增加这些【药理作用】 本品显示具有人天然IL-2的生物学活性，包括增加淋巴细胞有丝分裂可使具有细胞毒性T 细胞、自然杀伤细胞和淋巴因子活化杀伤细胞（LAK）增殖，并使其杀伤活性增强。当本品在人体内给药量达到一定程度后会产生免疫效应，能诱导一些细胞因子如肿瘤坏死因子、IL-1及γ-干扰素的产生。本品具有抗病毒、抗肿瘤和增强肌体免疫功能等作用。 【贮藏】 2～8℃避光保存。有效期暂定24个月 【批准文号】 国药准字S2******* 【生产企业】
人(Human) 白细胞介素-2（IL-2）ELISA 检测试剂盒使用方法 用途： 人IL-2 ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、缓冲液中细胞上清液及各种体液中的IL-2 。本试剂盒可以检测天然和重组的IL-2 。本试剂盒专用于科研、而非用于临床诊断。 试验原理： 人IL-2 试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知IL-2 浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将IL-2 和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中IL-2 的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10 ul、50 ul、100 ul、200、500 u、1000lul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 1．此试剂盒的人血制品中的HbsAg、和抗HIV为阴性，但没有实验室可完全保证此血制品不会传染肝炎、AIDS或其它传染病，依据当地的安全条例处理本试剂盒里的成份及血清和血浆等样品。2．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。 3．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。 4．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项 1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 3．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。 8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。 9．按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。 样品收集、处理及保存方法 1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g 离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。 3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4、保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使 用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 试剂的准备 1．标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行： 2．洗涤缓冲液（20×）的稀释：蒸馏水20倍稀释。 操作步骤 1．使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。 2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。 3．加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
白细胞介素是由多种细胞产生并作用于多种细胞的一类细胞因子。由于最初是由白细胞产生又在白细胞间发挥作用，所以由此得名，现仍一直沿用。白细胞介素interleukin 缩写为IL。关于免疫反应的表达和调节，有来源于淋巴细胞或巨噬细胞等许多因子参与。来源于淋巴细胞的有淋巴细胞活素，来源于巨噬细胞的总称为monokine，其中的各个因子的生物活性各有不同（例如巨噬细胞活化，促进T细胞繁殖等），因子自身的物理化学性质多不清楚。1979年这方面的研究团体提出了在淋巴细胞活素及巨噬细胞因子（monoki－ne）中，已作为一种分子提纯并弄清了性质的称为白细胞间[杀菌]素。最初测定的为IL1和IL2。IL1属于monokine，以前曾以淋巴细胞活化因子（lymphocyte activating factor）命名。细胞促进蛋白质（mitogenic protein）以及B细胞活化因子（B cell－activating factor）等七种名称称之。而IL2属于淋巴细胞活素，以前曾以胸腺细胞刺激因子（thymocyte stimulating factor）、T 细胞生长因子（T cell growth factor）等六种名称称之。 现在是指一类分子结构和生物学功能已基本明确，具有重要调节作用而统一命名的细胞因子，它和血细胞生长因子同属细胞因子。两者相互协调，相互作用，共同完成造血和免疫调节功能。白细胞介素在传递信息，激活与调节免疫细胞，介导T、B细胞活化、增殖与分化及在炎症反应中起重要作用. 2主要分类编辑 目前发现了29个白细胞介素（后为35个），分别命名为IL-1---IL29.功能复杂，成网络，复杂重叠。 IL-1 (又称淋巴细胞刺激因子) 1. 细胞来源主要由活化的单核－巨噬细胞产生。 白细胞介素 2. 存在形式IL-1α和IL-1β。 3. 主要生物学功能 （1）局部低浓度－－免疫调节：协同刺激APC和T细胞活化，促进B细胞增殖和分泌抗体。 （2）大量产生－－内分泌效应：诱导肝脏急性期蛋白合成；引起发热和恶病质。 IL-2 (又称T细胞生长因子,TCGF) 1. 细胞来源主要由T细胞产生。 2. 作用方式以自分泌和旁分泌方式发挥效应。 3. 主要生物学功能 （1）活化T细胞，促进细胞因子产生； （2）刺激NK细胞增殖，增强NK杀伤活性及产生细胞因子，诱导LAK细胞产生； （3）促进B细胞增殖和分泌抗体； （4）激活巨噬细胞。 IL-4 1. 细胞来源主要由Th2细胞、肥大细胞及嗜碱性 粒细胞产生。 2. 主要功能 （1）促B细胞增殖、分化； （2）诱导IgG1 和IgE产生； （3）促进Th0细胞向Th2细胞分化； （4）抑制Th1细胞活化及分泌细胞因子；