Vo.l 31高等学校化学学报No .82010年8月 CHEM I CAL J OURNAL OF CH I NESE UN I VERSI T I E S 1682~1687生物素化壳聚糖修饰的PLGA纳米粒的制备及表征陈红丽1,唐红波2,杨文智2,陈 汉2,王银松3,梅 林4,5,张 彤2,熊青青2,张其清2(1.新乡医学院生命科学技术系,河南省遗传性疾病与分子靶向药物重点实验室培育基地,新乡453003;2.中国医学科学院生物医学工程研究所,天津市生物材料重点实验室,天津300192;3.天津医科大学药学院,天津300070;4.清华大学深圳研究生院,深圳518055;5.大连医科大学药学院,大连116027)摘要 合成了生物素化壳聚糖(B i o -CS),并通过核磁共振(1H NM R )及电感耦合等离子体光质谱法(I CP -M S)对其进行结构确证.采用溶剂挥发法(W 1/O /W 2)制备聚乳酸-羟基乙醇酸(PLGA )纳米粒,并通过共价交联法对纳米粒进行B io -CS 表面修饰.未修饰的PLGA 纳米粒在扫描电镜下观察呈规则球状形态,平均粒径为(24814?2110)n m,Zeta 电势为-(21121?2113)mV,B i o -CS 修饰后的PLGA 纳米粒保持球状形态,平均粒径为(26813?2314)n m,Z eta 电势为(25145?2159)mV.采用X 射线光电子能谱(XPS)以及试剂盒对纳米粒表面生物素进行定性及定量研究,结果显示,经过B io -CS 修饰后的纳米粒表面含有N,S 元素,生物素取代度为31%的B i o -CS 修饰的PLGA 纳米粒,其表面生物素含量为(1136?0134)L mo l/100m g 纳米粒.关键词 纳米粒;聚乳酸-羟基乙醇酸;生物素化壳聚糖;抗肿瘤中图分类号 O 631 文献标识码 A 文章编号 0251-0790(2010)08-1682-06收稿日期:2009-11-05.基金项目:国家重大科学研究计划项目(批准号:2006CB933300)和新乡医学院省级重点学科开放课题资助.联系人简介:陈红丽,女,博士,讲师,主要从事高分子生物医学材料及药物制剂方面的研究.E-m ai:l chenh l h @l 张其清,男,教授,博士生导师,主要从事生物材料、组织工程和控制释放药物体系的研究.E-m ai:l zhangq i q@ .cn近10年来,大量用于制备微球及纳米粒控释系统的合成高分子材料主要为聚酯类如乳酸-羟基乙醇酸共聚物(PLGA )和聚乳酸(PLA)等.目前,采用PLGA 制备的控缓释微球制剂如Lupron Depot 等已经上市.虽然这些聚酯类载体可以达到保护药物、防止降解以及缓释的优点,但是其与机体细胞缺少特异性结合,从而使到达非病灶组织的药物量增加,这在一定程度上限制了其在临床上的广泛应用[1~3].当前,大量的研究旨在通过对聚酯类材料的纳米粒或微球进行表面修饰,以达到药物长循环及靶向性的目的.采用具有良好生物相容性、可生物降解性及抗酸、抗炎和抗肿瘤活性[4,5]的多糖材料壳聚糖对PLGA 纳米粒进行表面修饰可以相应避免或减少其缺陷[6~10],我们曾系统研究了其作为抗肿瘤药物载体的可行性[11].在载体上连接靶向配体,与细胞表面特别是肿瘤细胞表面的受体结合,可以达到靶向输送药物的作用[12].生物素(B iotin)即维生素H,是分子量为244的小分子营养物质,人体几乎所有的细胞表面都具有表达这种小分子营养素的受体;而肿瘤细胞的快速生长,需要大量营养物质,其细胞表面往往会过度表达生物素的特异受体,与正常组织和细胞相比,具有较高的生物素结合能力.因此,将生物素受体作为一种特异识别的靶点,对药物载体进行生物素修饰,使其达到靶向杀肿瘤细胞的作用,已成为靶向抗肿瘤药物载体领域的研究热点之一[13~21].本文通过两步法合成了生物素化壳聚糖衍生物(B i o -CS),并对PLGA 纳米粒进行了表面修饰;采用动态激光散射法、Zeta 电位测定法以及扫描电镜对纳米粒的粒径大小、形态结构以及表面荷电性质进行表征;通过XPS 和试剂盒对纳米粒表面生物素进行定性及定量研究,为将这种新型纳米体系用作抗肿瘤靶向给药载体的研究提供了体外数据参考.1 实验部分1.1 试剂与仪器PLGA (M w =10000~30000,乳酸与羟基乙醇酸的摩尔比为50B 50,山东省医疗器械研究所),壳聚糖(低分子量,脱乙酰度85%,Sig m a 公司),生物素(北京嘉康源生物制品公司),N,N c -二环己基碳酰亚胺(DCC ,化学纯,批号:T20060815,国药集团化学试剂有限公司),N -羟基琥珀酰亚胺(NH S ,纯度>99%,HPLC 级,上海延长生化有限公司),生物素定量测定试剂盒Quant Tag B iotin K it(Ca.t N o .BDK-2000,Vector 公司),其余试剂均为分析纯.场发射扫描电镜(J EOL,JSM-6700F,日本);X 射线光电子能谱(P H I -1600,美国);电感耦合等离子体光质谱仪(V I STA-M PX,美国);核磁共振波谱仪(I NOAVA 500MH zV ar i a n,美国);超声波匀质仪(UH-500A,天津奥特赛斯仪器有限公司);粒径及电位分析仪(Zeta PALS Brookhaven Instrum ents C o .,美国),低温冷冻真空干燥机(Labconco 公司,美国).1.2 B io -CS 的合成及表征分别将1mm o l 生物素、1mm o lNH S 和112mm o lDCC 溶于20mL D M F 中,于50e 水浴中磁力搅拌反应16h 后滤去反应液中生成的白色沉淀二环己基脲(DCU ),收集滤液,加入乙醚至沉淀不再增加,放入冰浴中1h,过滤收集沉淀,即为活性生物素酯(B i o -NH S)粗品.将B i o -NH S 粗品用热异丙醇溶解,置于冰浴中3h 结晶,过滤收集结晶,用DM F 溶解后加入乙醚,冰浴1h ,过滤收集沉淀,真空干燥得B i o -NH S [20].取质量分数为1%的CS 溶液10mL ,将一定量B i o -NH S 溶于DM F 溶液中,在搅拌下逐滴加入CS 溶液中,搅拌反应20h ,多次透析,除去残留小分子化合物,冷冻干燥得B io -CS ,干燥储存,备用.将合成的产物生物素酯以及不同取代度的B i o -CS 以四甲基硅烷(TM S)为内标,分别进行1H NMR 谱分析.通过电感耦合等离子体光质谱法(I CP -M S)测定B i o -CS 样品中硫元素的浓度,并通过下式计算其B i o -CS 分子中生物素的取代度(Deg ree o f substitution ,DS),即每100个糖单元中偶联上的生物素残基数目.DS=n (S)@162/(m tota l -m b iotin )@100%,其中n (S)为S 元素的摩尔数,即S 测得的浓度@V ,其中V =10m L ,m total 为待测样品的质量,本实验中m total =10m g ;m b iotin 为待测样品中生物素残基的质量,即m b iotin =n (S)@227131;162为CS 分子中糖单元的分子量.精确称取干燥的1010m g B io -CS ,溶于10mL 稀盐酸中并定容,以100m g /L 标准硫元素溶液作为标准品,进行测定.硫分析谱线:18017n m.测定B io -CS 样品中S 元素的含量,计算B io -CS 分子中生物素的取代度.1.3 PLGA 纳米粒的制备采用超声乳化法制备纳米粒[11],取200mg PLGA 溶于4mL 二氯甲烷中,将015mL 水溶液转入PLGA 溶液中,超声30s 形成初乳,将初乳转入20mL 质量分数为1%的PVA 溶液中,再次超声30s ,形成复乳,转入100mL PVA 溶液中,搅拌4h ,待有机溶剂挥发后在18000r /m i n 离心下收集纳米粒,冷冻干燥,即得PLGA 纳米粒.1.4 CS 及B io -CS 修饰的PLGA 纳米粒采用共价交联法[11],取100m g PLGA 纳米粒,用去离子水分散并加入适量EDC 活化2h ,然后加入适量B io -CS 溶液(L 剂量:100m g ,M 剂量:150m g ,H 剂量:200m g),磁力搅拌反应24h ,离心收集纳米粒,冷冻干燥,待检.1.5 纳米粒表面壳聚糖及生物素的测定X 射线光电子能谱(XPS),使用P H I 1600ESC A 系统(Per k i n -E l m er)进行分析,以M g K A 为X 射线源(125316e V ),测试角度为50b ,功率250W,电压15kV,真空度为617@10-7Pa .每组取2个样品进行检测,每个样品扫描2个不同部位,以对纳米粒表面元素进行定量分析.采用生物素试剂盒Quan*t Tag TM B i o ti n K it 测定纳米粒表面的生物素含量.该试剂盒可用于定量测定游离生物素以及吸附或结合于蛋白、核酸和其它大分子上的生物素.该试剂盒能与生物素发生化学1683 N o .8 陈红丽等:生物素化壳聚糖修饰的PLGA 纳米粒的制备及表征反应,生成的有色产物具有紫外吸收.根据试剂盒使用说明,选用011mL 测定法,以535nm 波长测量其吸光值定量.1.6 纳米粒表面形态、粒径及Z eta 电位测定将干燥后的纳米粒置于铜片上,真空喷金后用场发射扫描电镜观察纳米粒形态结构.取适量纳米粒分散于去离子水中,用激光粒度分析仪测定纳米粒的粒径及粒径分布,并对其表面Z eta 电位进行检测,每个样本测量5次.1.7 统计学分析实验数据以均数?标准差表示,样本均数间比较采用t 检验,3种纳米粒的释放采用方差分析,以P <0105为差异具有统计学意义.2 结果与讨论2.1 B io -CS 的合成N -羟基琥珀酰亚胺生物素酯(简称活性生物素酯)及B i o -CS 的合成路线见Sche m e 1.生物素侧链上的羧基可与羟基和氨基等活性基团发生化学反应生成生物素衍生物.将生物素分子中的羧基和NH S 分子中的羟基反应转化成活泼酯的形式使羧基得以活化,然后在温和条件下与CS 分子中的氨基发生酰胺反应制备B i o -CS .生物素具有生物活性作用的是其二元环分子结构,将其侧链活性基团与CS 偶联的方法制备B i o -CS ,不破坏其活性结构,因而不会影响生物素与细胞表面生物素受体间的特异性识别作用[22].原料CS 、生物素、中间产物活性生物素酯及产物B i o -CS 的核磁图谱见图1.Sche m e 1 Synth etic routes of bioti ny l ated ch itosan (B i o-CS)Fig .11H N MR spec tra of b i otin(A ),NH S -biotin(B),CS(C)and B io -CS(D ) Tab le 1 D egree of s ub stitut i on (DS)of B i o -CS Sa m ple m (CS)/m g m (B io -N H S )/m g 105n (S)/mo l DS(%)B i o -CS141001000.72214B i o -CS31100150 1.3331B i o -CS34100200 1.4234B i o -CS36100250 1.4636活性生物素酯:1H NMR (DM SO,400MH z),D :6144(s ,1H,NH ),6136(s ,1H,NH ),4129~4136(m,1H,)C HC H 2S),4112~4115(m,1H,)C H C H S),3108~3113(m ,1H,)C H S),2186(m,4H,)C H 2)),2183(d ,J =512,1214H z ,1H,)C H 2S),2156(d ,J =1214H z ,1H,)C H S),2120(,t J =716H z ,2H,)CH 2COO),1131~1165(m,6H,)C H 2)).壳聚糖:1H NMR(D 2O /F 3CCOOD,400MH z),D :4174(H 1),2179(H 2),3153~3134(H 3,4,5,6),1176(NH C OC H 3).B i o -CS :1H NMR (D 2O /F 3CCOOD ,400MH z):4172(H 1),4135(m,1H,)CHC H 2S),4116(m,1H,)C H C H S),3162~3114(H 3,4,5,6),3107(m ,1H,)C H S),2191(m ,4H,)C H 2)),2172(d ,J =512,1214H z ,1H,)CH 2S),2153(d ,J =1214H z ,1H,)C H S ),2101(,t J =716H z ,2H,)C H 2COO ),1178(NHCOCH 3),1151~1114(m ,6H,)C H 2));产物图谱与相关文献[23~25]一致.可以籍此计算产物中生物素的取代度.根据投料比的不同,合成了4种不同生物素取代度的B io -CS (见表1),采用I CP -MS 测定硫元素的浓度,并通过公式精确计算B io -CS 分子中生物1684高等学校化学学报 V o.l 31素的取代度.2.2 纳米粒的制备及粒径、粒径分布、形态结构和表面荷电性的表征制备B i o -CS 修饰的纳米粒有两种思路:(1)合成B io -CS ,作为包覆材料来修饰制备好的PLGA 纳米粒;(2)用吸附的方式制备CS 修饰的PLGA 纳米粒,然后在纳米粒表面化学键合生物素.本文考虑到纳米粒经历化学反应可能造成包载药物的损失,因而选择了第一种制备方法.纳米粒的扫描电镜如图2所示.PLGA 纳米粒[图2(A )]呈规则球状形态,表面光滑,分散均匀,无粘连现象发生;CS 和B i o -CS 修饰的PLGA 纳米粒[图2(B ),(C )]保持了球状形态,但出现聚集的现象,并且随着CS 和B io -CS 投料量的增加,聚集程度呈增加的趋势,表现为分散性变差,这是由于PLGA 纳米粒表面包覆CS 或B io -CS 造成的[11].Fig .2 SEM i mages of PLGA nanospheres(A),CS m od ified PLGA nanospheres(B)andB io -CS m od ified PLGA nanospheres(C)纳米粒的粒径、粒径分布及表面Zeta 电位检测结果列于表2.PLGA 纳米粒平均粒径为(24814?2110)nm ,分散系数为01154?01079,Z eta 电位为-(21121?2113)mV;CS 和B i o -CS 修饰的PLGA 纳米粒粒径分别为(27313?2612)和(26813?2314)nm,Zeta 电位分别为(24145?1129)和(25145?2159)mV.PLGA 纳米粒表面荷负电说明在超声乳化制备过程中,PLGA 分子末端羧基由于其亲水性主要分布于纳米粒表面,有利于与包覆材料CS 及B i o -CS 分子中的氨基共价连接.与PLGA 纳米粒相比,CS 及B io -CS 修饰后的纳米粒粒径有所增加,Z eta 电位为正值,结合吸附法和共价交联法修饰PLGA 纳米粒的结论[11],均说明采用本法可成功地对PLGA 纳米粒进行CS 及B i o -CS 表面修饰.T ab le 2 Character istics of the nanospheres *Sa m p l em (PLGA)B [m (CS)or m (B io -CS )]Y iel d(%)Po l yd is pers it y i nd ex Particl e size/nm Z eta potenti al/mV PLGA n anospheres1B 091.4?2.60.154?0.079248.4?21.0-21.21?2.13CS-m od ified n anospheres1B 0.677.7?2.00.268?0.171273.3?26.224.45?1.29B i o -CS m od ified nanos pheres1B 0.674.7?2.60.213?0.064268.3?23.425.45?2.59 *Val ues express as m ean ?S .D.(n =5).2.3 纳米粒表面生物素的定性及定量检测图3为纳米粒的XPS 谱.在相同噪音水平下,PLGA 纳米粒表面未观察到氮和硫元素的信号,而CS 修饰的PLGA 纳米粒在400e V 附近出现明显的氮元素信号,B io -CS 修饰的纳米粒在160和400e V 附近出现了明显的氮和硫元素信号.以上数据均说明本文采用共价交联法成功完成了对PLGA 纳米粒的CS 及B io -CS 表面修饰[21].虽然通过XPS 分析结果,可获得B io -CS 修饰的PLGA 纳米粒单位面积上硫元素的质量比为0178%,但考虑到纳米粒粒径分布以及表面生物素分布的不均匀性,其表面积难以准确定量,从而难以量化后续细胞实验中的细胞摄取率,因此本文采用试剂盒法进一步对单位质量纳米粒的生物素含量进行了检测.靶向配体(如生物素)在纳米粒表面的分布密度决定了纳米粒与受体间的结合能力大小,从而影响纳米粒被肿瘤细胞摄取的程度,因此是制剂靶向性以及药效学的重要评价指标.本文采用Quant *Tag T MB iotin K it 生物素试剂盒精确测量并计算单位质量纳米粒的生物素含量,旨在为客观评价B io -CS 修饰的PLGA 纳米粒与肿瘤细胞间的结合能力提供数据支持.不同取代度的B i o -CS 通过共价连接的方式包覆于PLGA 纳米粒表面,试剂盒法测定单位质量纳米粒表面的生物素含量结果如图4所示.在相同生物素剂量(200m g)下,随着包覆材料B i o -CS 分子中生物素取代度的增加,纳米粒表面生物素含量1685 N o .8 陈红丽等:生物素化壳聚糖修饰的PLGA 纳米粒的制备及表征F i g .3 XPS spectra of PLGA nanosph ere s(A ),CS -m od ified PLGA nan ospheres(B )andB io -CS modif ied PLGA nanos ph eres(C)F i g .4 B iotin con ten t on the sur face of th e un it m ass of nanosph ere sL :100mg ,M:150m g ,H:200mg .也呈增加的趋势,如14%和31%生物素取代度的B io -CS 修饰的PLGA 纳米粒的生物素含量分别为(0186?0119)和(1136?0134)L m ol/100mg 纳米粒;34%及36%生物素取代度的B i o -CS 修饰的纳米粒的检测结果和31%生物素取代度相比,没有显著性差异(P >0105).此外,实验结果还显示在100~200m g 剂量范围内,随着B io -CS 投入剂量的增加,B io -CS 修饰的PLGA 纳米粒的生物素含量呈增加的趋势.理论上,纳米粒表面生物素含量越高,则与肿瘤细胞表面生物素受体结合的配体数量越多,也就越有利于两者之间的相互作用,从而增加肿瘤细胞对纳米粒的摄取.但是纳米粒表面的羧基及活性基团数目是一定的,并且由于空间位阻的作用,因而增加B io -CS 的量并不能无限增加纳米粒表面的生物素的量.因此,选用31%取代度的B io -CS 对PLGA 纳米粒进行表面修饰.综上所述,本文合成了4种不同生物素取代度的B io -CS 样品,并以其为包覆材料通过共价交联的方法对PLGA 纳米粒进行表面修饰.对纳米粒的形态结构、粒径大小以及表面荷电性质进行了表征,并通过XPS 和生物素试剂盒法对纳米粒表面生物素进行了定性及定量研究.结果显示,B i o -CS 修饰的PLGA 纳米粒呈规则球状形态;与PLGA 纳米粒相比其粒径有所增大,Z eta 电位变为正值;31%生物素取代度的B i o -CS 修饰的PLGA 纳米粒表面生物素含量为(1136?0134)L m o l/100m g 纳米粒.为后续B io -CS 修饰的PLGA 纳米粒的肿瘤靶向性研究提供数据支持.参 考 文 献[1] Aw es h K.Y.,Pradeep M.,A nilK .M.,Pu s hpa M.,Sanyog J .,Govi nd P .A ..Nano m ed ici ne :NB M [J],2007,3(4):246)257[2] Zhang Z .,L ee S .H.,Feng S.S..B i o m aterial s[J],2007,28:1889)1899[3] F i scher S .,A ll m en E.U.,M en Y.W.,Groettrup M.,H ans P .M.,Gander B..B i o m aterial s[J],2007,28:994)1004[4] K ocbek P .,Ob er m ajer N.,C egn arM.,Janko K.,J u lijana K ..J .Con tro.l Rel ease[J ],2007,120:18)26[5] M undargia R . C.,Babua V.R.,Rangas w a m y V.,Prad i p P .,T ej rajM.A ..J .Con tro.l R el ease[J],2008,125:193)209[6] TaH.T.,D ass C.R.,Dunstan D . E..J .C on tro.l R elease[J],2008,126:205)216[7] H an H.D .,Song C.K.,Park Y .S .,Noh K.H.,K i m J .H.,Hw ang T .,K i m T .W.,Sh i n B .C ..Int .J .Ph ar m.[J],2008,35:27)34[8] Chatterj eea D .K .,Zhang Y..Sc.i Techno.l Adv .M ater .[J],2007,8:131)133[9] Chan P .,Ku ri sa w aM.,C hung J .E .,Yang Y.Y..B i o m aterials [J],2007,28:540)549[10] GUAN X-iPeng(官习鹏),QUAN D a -P i ng(全大萍),LI AO K a-iRong(廖凯荣),M AI K an -Cheng(麦堪成).C he m.J .Ch i nese Un-iversiti es(高等学校化学学报)[J],2006,27(10):1965)1968[11] Chen H.L .,Y angW.Z .,Ch en H.,L i u L .R.,Gao F .P .,Yang X.D .,Jiang Q .,Zh ang Q .Q.,W ang Y.S..C oll o i ds and Sur -faces B:B i oi n terfaces[J],2009,73:212)218[12] Langer R..Nat u re[J],1998,392:5)10[13] G regory R .J .,K i rsten M.,J ohn M.,John R .,Dav i d N..J .I n org .B ioche m.[J],2004,98(10):1625)1633[14] Y oges h B .P .,Udaya S .T .,Ay m an K .,M a L.,Panya m J ..B i o m aterials [J],2009,30:859)8661686高等学校化学学报 V o.l 31[15] Kun N.,Lee T. B.,Par k K.H.,Sh i n E .K .,LeeY. B.,C hoiH.K..Eur .J .Phar m.Sc.i [J],2003,18(2):165)173[16] Cheng C.,W eiH.,Bao X .,Ch engH.,L i C .,Gu Z .W.,Cheng S.X.,Zh ang X.Z .,Zhu o R .X..B i o m aterial s[J],2008,29(4):497)505[17] C ri sti na L.Z .,W illia m T.P ..J .Phar m.[J],2007,337(1/2):316)328[18] YAO Q i an(姚倩),HOU Sh-iX i ang(侯世祥),ZHANG Xuan(张宣),ZHAO Gang(赵钢),GOU X iao -Jun(苟小军),YOU Ji n-Zong(游金宗).A cta Ph ar m aceutica S i n i ca(药学学报)[J],2007,42(5):557)561[19] Y angW.J .,Cheng Y.Y .,Xu T .W.,W ang X.Y .,W en L .P ..E urop ean J ournal ofM ed ici nalCh e m istry[J],2009,44(2):862)868[20] M is h ra P .R.,Jai n N.K..In t .J .Phar m.[J],2002,231:145)153[21] Ru ss el-l Jones G.,M c T avis h K.,M cEw an J ..J .Inorg .B i oc h e m.[J],2004,98:1625)1633[22] X U Chang -Long(徐常龙),YAN P i ng(严平),W ANG L i n(王琳),AN Gan-C heng(安赣成).Ch e m ical In ter m ed i ate(化工中间体)[J ],2007,1:15)17[23] Sale m A.K.,Cann izz aro S.M.,Dav i esM. C..B i o m acromo l ecules[J],2001,2(2):575)580[24] Chen F . E.,JiaH.Q.,Chen X .X .,DaiH.F .,X i e B ..Che m.Phar m.Bu l.l [J],2005,53(7):743)746[25] Z HANG Can (张灿),DI NG Ya(丁娅),YANG B o(杨波),S H EN Jian(沈健).C hinese Journ alofN at uralM ed i ci n es(中国天然药物)[J ],2004,2(2):94)97Preparati on and Characterizati on of PLGA N anospheres SurfaceM odified w ith B i oti nylated ChitosanC HEN H ong -Li 1*,TANG H ong -Bo 2,YANG W en -Zhi 2,C H E N H an 2,WANG Y i n -Song 3,ME I L i n 4,5,Z HANG Tong 2,X I O NG Q i n g -Q i n g 2,Z HANG Q -i Q i n g 2*(1.H enan K ey Laboratory of H ere d itary D isease and M olecular T arget D rug T herapy (Cultivati ng B ase),D e p ar t m ent of L i fe Science and T echnology,X inx i ang M edical Universit y,X inx i ang 453003,Ch i na ;2.Instit u te of B i om e d ical Eng i neering,Chi nese A cade my of M edical Science ,P ek i ng Union M e d ical Co llege ,T ianjin 300192,Chi na ;3.Colle ge of Phar macy,T ianjin M edical Universit y,T ianjin 300070,Ch i na ;4.The Shenzhen K ey Lab of G ene and A ntibody Therapy,C enter for B io tech and B io-M edicine and D i vision ofL i fe Sciences ,Graduate Schoo l at Shenzhen ,T s i nghua Universit y,Shenzhen 518055,Ch i na ;5.Co llege of Phar m ac y,D ali anM e d ical U ni ver sit y,D ali an 116027,China )Abst ract B ioti n y l a ted ch itosan (B i o -CS con j u gates o r B io -CS )w ere synthesized and characterized .The deg ree o f substit u ti o n(DS),as defi n ed as t h e num ber o f bioti n per 100anhydroglucose un its of CS ,w as deter -m ined by 1H NMR and I CP .Po ly(lactic -co -g l y colic ac i d )(PLGA )nanospheres w ere prepared by a so l v en t evaporation techn i q ue(W 1/O /W 2).The surface of PLGA nanosphere w as m odified w ith B io -CS by covalen t bi n ding .PLGA nanospheres w ere al m ost spherica l i n shape under the scanning e lectron m icr oscopy (SE M )observation,and their m ean d ia m e ter deter m ined by the laser li g ht scatteri n g technique w as (24814?2110)n m.B io -CS m od ified PLGA nanospheresw ere a lso spherical i n shape ;t h e irm ean dia m eter and Z eta po tenti a l val u e w ere (26813?2314)nm and -(21121?2113)mV,respectively .The surface che m i s try o f nanosph -eresw as quantitatively st u died by X-ray photoelectron spectroscopy(XPS).The resu lts sho w t h e N reg i o n cor -respond i n g to the pri m ary a m ide o f CS and the S reg ion correspond i n g to the b i o ti n ,i n d icati n g that PLGA nanospheres w ere successfu lly surface -m odified w ith B i o -CS .The con tent of b i o ti n on the surface of B io -CS m odified PLGA nanospheresw it h DS o f b i o ti n of 31%w as deter m i n ed usi n g a co mm ercially ava ilable Quan*t Tag TM B iotin K it and its value w as (1136?0134)m ol/100m g .K eywords N anoparticle ;Po l y (lactic -co -g lyco li c ac i d )(PLGA );B i o ti n ylated ch itosan anticancer(Ed.:D,Z)1687 N o .8 陈红丽等:生物素化壳聚糖修饰的PLGA 纳米粒的制备及表征。
