酶联免疫分析法

酶联免疫吸附测定实验报告酶联免疫吸附测定实验报告酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）是一种常用的实验技术，用于检测和定量分析生物样本中特定分子的存在。

本实验旨在通过ELISA技术，对特定抗原在样本中的含量进行测定，并了解其原理及应用。

一、实验原理ELISA技术是一种基于免疫反应的实验方法，其原理主要包括固相吸附、特异性结合、酶标记和显色反应。

首先，在微孔板中固定特异性抗体，形成固相吸附。

然后，加入待测样本，样本中的目标抗原与固相抗体结合。

接着，加入酶标记的二抗与目标抗原结合，形成特异性结合。

最后，通过添加显色底物，酶催化反应产生可见的颜色变化，从而定量分析目标抗原的含量。

二、实验步骤1. 准备样本和试剂：收集待测样本，如血清、尿液或细胞培养上清液，并准备好ELISA试剂盒中的各种试剂。

2. 板洗涤：将微孔板放入洗板机中，加入洗板缓冲液，进行洗涤步骤，以去除未结合的物质。

3. 固相吸附：将特异性抗体加入微孔板孔中，孵育一段时间，使其与固相吸附。

4. 样本孵育：将待测样本加入各孔中，与固相抗体结合，在恒温条件下孵育。

5. 二抗结合：加入酶标记的二抗，与目标抗原结合形成特异性结合。

6. 洗涤：再次进行洗板步骤，去除未结合的物质。

7. 底物反应：加入显色底物，酶催化反应产生可见的颜色变化。

8. 反应终止：加入终止液，停止酶催化反应。

9. 测定吸光度：使用酶标仪测定各孔的吸光度值。

10. 数据分析：根据吸光度值，绘制标准曲线，通过比较待测样本的吸光度值，计算出目标抗原的浓度。

三、实验结果通过ELISA实验，我们成功测定了待测样本中目标抗原的含量。

根据标准曲线，我们计算出了各样本中目标抗原的浓度。

这些结果将有助于我们了解样本中特定分子的水平，从而进一步研究其生物学功能和相关疾病的发生机制。

四、实验应用ELISA技术具有广泛的应用领域，包括生物医学研究、临床诊断、药物开发等。

ELISA方法类型及原理ELISA是一种重要的实验技术，用于检测和定量分析蛋白质、抗体、荷尔蒙、生物学分子等。

ELISA的全称是酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay），它通过将目标物（如抗原或抗体）与特定的酶标记物结合，然后利用染色反应来检测、定量或分析目标物。

根据目标物的不同，ELISA可以分为直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA、间接竞争ELISA和反向ELISA等方法。

1.直接ELISA直接ELISA是最简单的一种ELISA方法。

它将目标物直接吸附在固相载体表面，然后加入与目标物特异性结合的酶标记抗体来检测目标物。

具体步骤包括：将目标物溶液加入固相载体中，使目标物吸附在载体表面；加入特异性酶标记抗体，与目标物结合；通过染色反应来检测酶的活性和目标物的定量。

2.间接ELISA间接ELISA是较常用的一种ELISA方法。

它将目标物首先吸附在固相载体表面，然后加入与目标物特异性结合的初级抗体，再加入与初级抗体特异性结合的酶标记二抗来检测目标物。

具体步骤包括：将目标物溶液加入固相载体中，使目标物吸附在载体表面；加入特异性的初级抗体，与目标物结合；加入与初级抗体特异性结合的酶标记二抗；通过染色反应来检测酶的活性和目标物的定量。

3.竞争ELISA竞争ELISA是一种用于定量测定样品中目标物含量的ELISA方法。

它将目标物预先包被在固相载体表面，然后加入与目标物特异性结合的酶标记抗体和待测样品，测定抗体与固相载体表面的目标物竞争的程度来定量目标物的含量。

具体步骤包括：将目标物溶液加入固相载体中，使目标物包被在载体表面；加入特异性酶标记抗体和待测样品；通过染色反应来检测酶的活性和竞争程度来定量目标物的含量。

4.间接竞争ELISA间接竞争ELISA结合了间接ELISA和竞争ELISA的原理。

首先将目标物吸附在固相载体上，然后加入与目标物特异性结合的初级抗体，再加入与初级抗体特异性结合的酶标记二抗和待测样品。

酶联免疫吸附测定法（ELISA）1.定义 (3)2.原理 (3)2.1抗原抗体反应 (3)2.2免疫测定在临床检验中的应用 (5)3.ELISA的类型 (5)3.1双抗体夹心法测抗原： (6)3.2双抗原夹心法测抗体 (6)3.3间接法测抗体 (6)3.4竞争法测抗体 (7)3.5竞争性测抗原 (7)3.6捕获包被法测抗体 (7)3.7ABS-ELISA法 (8)4.ELISA试剂的组成 (9)4.1固相载体： (9)4.2包被的方式 (9)4.3包被用抗原：天然抗原、重组抗原、合成多肽抗原。

(10)4.4包被的条件： (10)4.5洗涤液： (10)4.7酶的催化性； (11)4.8结合物的制备 (11)4.9结合物的保存 (12)4.10酶的底物 (12)4.11酶反应终止液 (12)4.12参考标准品 (13)4.13加样： (13)4.14保温 (13)4.15保温方式： (13)4.16室温温育的反应 (13)4.17洗涤 (14)4.18显色 (14)4.19比色 (14)4.20酶标比色仪 (15)4.21结果判定 (15)4.22定量测定 (16)4.23ELISA的操作要点 (16)1.定义酶联免疫吸附测定法（Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay），简称ELISA，采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，对受检物质进行定性或定量分析的一种检测方法。

2.原理采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，可对受检物质的定性或定量分析。

2.1抗原抗体反应2.1.1可逆性抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡，其反应式为：Ag+Ab→Ag·Ab抗体的亲和力（affinity），可以用平衡常数K表示：K=[Ag·Ab]／[Ag][Ab]，Ag·Ab 的解离程度与K值有关。

免疫印迹酶联免疫
免疫印迹和酶联免疫都是生物化学和免疫学领域常用的实验技术，用于检测特定蛋白质的存在和浓度。

免疫印迹（Western blot）是一种用于检测特定蛋白质的技术，它通过将待测样品中的蛋白质
分离并转移到膜上，然后使用特异性抗体与目标蛋白结合，最终通
过显色或发光方法来检测蛋白质的存在和相对丰度。

免疫印迹技术
常用于研究蛋白质的表达和定量分析。

而酶联免疫（ELISA）是一种广泛应用于生物医学和生物化学领
域的实验技术，用于检测样品中特定蛋白质的存在和浓度。

酶联免
疫的原理是利用酶标记的抗体或配体与待测物质结合，然后通过底
物的反应产生可定量的信号，从而检测样品中目标物质的存在和浓度。

ELISA技术具有高灵敏度和高特异性，常用于临床诊断、药物
筛选、生物学研究等领域。

从技术原理上来看，免疫印迹和酶联免疫都是利用抗体与特定
抗原结合的原理，但在实验步骤、操作流程和应用领域上有所不同。

免疫印迹主要用于研究蛋白质的表达和定量分析，而酶联免疫则更
广泛地应用于临床诊断和生物学研究中。

两种技术在科研和临床实
验室中都具有重要意义，能够帮助科学家和医生更准确地检测和分析样品中的蛋白质，为疾病诊断和药物研发提供重要信息。

浅谈用酶联免疫法与胶体金法检测乙肝表面抗原的优缺点乙肝病毒感染已成为全球范围内的重大公共健康问题，而乙肝表面抗原（HBsAg）的检测是诊断乙肝病毒感染的重要手段之一。

目前常用的检测方法包括酶联免疫法和胶体金法，这两种方法各有优缺点。

下面将从不同的角度来分析这两种方法的优缺点。

一、酶联免疫法的优缺点1. 优点：（1）高灵敏度：酶联免疫法对HBsAg具有高灵敏度，能够检测到低浓度的抗原，使得该方法可以检测到早期感染的乙肝病毒患者，从而有助于早期诊断和治疗。

（2）精准性：酶联免疫法的结果准确可靠，不受干扰因素影响，可以提供可靠的检测结果。

（3）多重检测：酶联免疫法可以同时检测多个样本，提高了检测效率。

（1）操作复杂：酶联免疫法的操作流程较为繁琐，需要较长的操作时间和专业的实验操作技能，对操作人员的要求较高。

（2）昂贵：酶联免疫法所需的试剂和设备价格较高，增加了检测成本。

（3）存储条件苛刻：酶联免疫法检测所需的试剂对储存条件要求高，不适合在一些偏远地区和基层医疗机构使用。

二、胶体金法的优缺点（1）快速简便：胶体金法是一种简便、快速的检测方法，操作流程相对简单，不需要复杂的实验操作技能即可操作。

（2）直观：胶体金法的检测结果具有直观性，对结果的解读相对较为容易，即使是非专业人员也可以进行初步解读。

（3）价格低廉：胶体金法所需的试剂和设备价格相对较低，降低了检测成本，适合在基层医疗机构使用。

（2）专一性较差：胶体金法对于一些其他的蛋白质可能会出现交叉反应，影响结果的准确性。

（3）结果不稳定：胶体金法的结果受到环境因素的影响较大，可能会出现结果不稳定的情况。

酶联免疫法和胶体金法在检测乙肝表面抗原方面各有优缺点。

酶联免疫法具有高灵敏度和精准性，但操作复杂且价格昂贵，适合在大型医疗机构使用；而胶体金法快速简便、价格低廉，适合在基层医疗机构使用，但灵敏度较低，结果不稳定。

在选择检测方法时，需要综合考虑实际情况，根据不同的应用场景和实际需求选择适合的检测方法。

ELISA法测定多肽的原理
酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种灵敏、特异的检测方法，被广泛应用于多种
生物分子，包括多肽的定量和定性检测。

其基本原理是利用抗原或抗体与固相载体表面的结合能力，使待测物与固相载体固定，再通过加入酶标记的抗体或抗原，使待测物与酶结合。

最后，通过酶催化底物显色，对待测物进行定量或定性分析。

在多肽的ELISA测定中，首先将多肽固定在固相载体上，如聚苯乙烯微孔板。

然
后，加入特异性抗体，该抗体可以与待测多肽发生特异结合。

在后续步骤中，加入酶标记的二抗，使其与特异性抗体结合。

最后，加入酶的底物，通过酶催化底物显色，根据颜色的深浅，即可判断多肽的浓度。

ELISA法测定多肽具有许多优点。

首先，该方法灵敏度高，可以检测出低浓度的多肽。

其次，特异性好，由于采用了特异性的抗体，因此能够准确地识别待测多肽。

此外，ELISA法操作简便，所需设备简单，易于在实验室或临床环境中实施。

然而，ELISA法也存在一些局限性。

例如，多肽必须具有稳定的结构，以便能够与抗体结合。

此外，由于抗体的制备过程复杂且成本高昂，因此ELISA法的成本也相对较高。

另外，ELISA法的实验结果可能会受到多种因素的影响，如抗体的质量、实验操作的一致性等。

尽管存在这些局限性，ELISA法在多肽的检测中仍具有广泛的应用价值。

通过不断改进和完善实验方法，提高检测的灵敏度和特异性，ELISA法有望在未来为多肽的检测提供更准确、更可靠的结果。

酶联免疫胶体金法（enzyme-linked immunogold assay，ELIGA）是一种常用的免疫试验方法，用于检测特定抗原或抗体的存在。

它结合了酶标技术和胶体金技术的优点，具有高灵敏度和高特异性的特点。

酶联免疫胶体金法的原理是将与特定抗原或抗体结合的胶体金标记物用作检测信号。

标记的胶体金微粒具有良好的稳定性和可视性，能够在光学显微镜下观察到。

该方法主要包括以下步骤：
1. 样品处理：对待检样品进行处理，如提取目标抗原或抗体。

2. 固相吸附：将处理后的样品加入固相吸附物（如酶标板、膜片等），使目标物质固定在上面。

3. 阻断：用适当的阻断液封闭非特异性吸附位点，减少假阳性反应。

4. 孵育：加入特异性原抗体或特异性标记的抗原，使其与固相上的目标物质结合。

5. 清洗：通过洗涤的方式去除未结合的物质，减少背景干扰。

6. 标记：加入胶体金标记物，使其与特异性抗体或抗原结合。

7. 可视化：使用适当的显色底物，使得胶体金变成颜色或形成可见沉淀。

8. 停止反应：加入停止液或停止酶作用，使反应停止。

9. 分析：使用光学显微镜或分光光度计等设备对结果进行观察和分析。

酶联免疫胶体金法广泛应用于生物医学研究、临床诊断和生物工程领域，可用于检测病原微生物、肿瘤标记物、抗体、激素等生物分子的存在和定量分析。

浅谈用酶联免疫法与胶体金法检测乙肝表面抗原的优缺点【摘要】乙肝是一种常见的传染病，及早发现和治疗对预防疾病的传播非常重要。

本文通过对酶联免疫法和胶体金法两种检测乙肝表面抗原的方法进行比较，讨论它们的优缺点。

酶联免疫法具有操作简单、灵敏度高等优点，但也存在耗时长、易受干扰等缺点；而胶体金法则具有操作简便、快速等优点，但灵敏度稍低、结果稳定性差等缺点。

两种方法相比较，各自有其适用的场景。

通过本文的分析，希望能够为乙肝表面抗原检测方法的选择提供参考，从而更好地进行疾病的预防和控制。

【关键词】乙肝表面抗原、酶联免疫法、胶体金法、优缺点、比较、检测、浅谈1. 引言1.1 背景介绍乙肝病毒感染是一种全球性公共卫生问题，已成为世界各国的重要健康挑战。

乙肝表面抗原（HBsAg）是乙肝病毒的表面抗原，在乙肝病毒感染的早期和慢性感染阶段都会持续存在于患者血清中。

检测HBsAg对于乙肝病毒感染的早期诊断和预防传播具有重要意义。

酶联免疫法（ELISA）和胶体金法是目前常用于检测HBsAg的两种常规方法。

ELISA是一种高灵敏度、高特异性的免疫学检测方法，通过酶与抗原结合来检测目标物质，已被广泛用于乙肝病毒感染的临床诊断。

而胶体金法是利用胶体金颗粒与抗原之间的特异性结合来检测目标物质，具有简便、快速、灵敏的特点，逐渐成为乙肝病毒感染检测领域中备受关注的新方法。

在本文中，将就使用酶联免疫法与胶体金法检测乙肝表面抗原的优缺点进行探讨，以期为乙肝病毒感染的早期诊断和治疗提供参考和借鉴。

1.2 研究意义乙肝病毒感染是一种常见的病毒性感染，它可以导致肝炎、肝硬化甚至肝癌等严重并发症。

乙肝表面抗原（HBsAg）是乙肝病毒感染的主要标志物，检测HBsAg对于及早诊断乙肝感染、指导治疗以及控制乙肝疫情具有重要意义。

酶联免疫法和胶体金法作为两种常用的乙肝表面抗原检测方法，具有各自的优点和缺点。

通过比较这两种方法的优缺点，我们可以更好地选择适合实际应用的检测方法，提高乙肝感染的诊断准确性和效率。

化学发光免疫分析法与酶联免疫法检测艾滋病抗体结果比较摘要】目的：分别通过化学发光免疫分析法（CLIA）和酶联免疫法（ELISA）对艾滋病抗体情况进行检测，对两种方法的检测结果进行比较，从而分析两种方法的检测价值。

方法：2017—2018年在我院进行HIV抗原抗体筛查的人员，包括有创性诊疗操作前、输血前、孕产妇、门诊、体检等自愿筛查的288名艾滋病高危患者的血清进行检查。

结果：CLIA检测阳性率为95.83%，ELISA检测阳性率为89.93%，两组检测方法阳性率比较，差异显著（P＜0.05）。

结论：CLIA检测阳性率高于ELISA，但两方法各有优缺点，因此，临床中可以将两种方法进行结合检测。

【关键词】化学分光免疫分析法；酶联免疫法；艾滋病抗体【中图分类号】R512.91 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2019）12-0038-02A contrast study of chemiluminescence immunoassay and enzyme-linked immunoassay for detecting HIV antibodyHe Hua1,Sun Hongmei2(Corresponding author).1 Department of Blood Transfusion,No.1 Affiliated Southwest Hospital of Military Medical University,Chongqing 400038,China;2 Chongqing Angel's Obstetrics and Gynecology Hospital,Chongqing 401120,China【Abstract】Objective To compare the results of chemiluminescence immunoassay (CLIA) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for HIV antibody detection, and to analyze the value of the two methods. Methods From 2017 to 2018, serum of 288 HIV high-risk patients who underwent HIV antigen antibody screening in our hospital, including those who were screened voluntarily before invasive diagnosis and treatment, before blood transfusion, maternal, outpatient and physical examination, were examined.Results The positive rate of CLIA and ELISA was 95.83% and 89.93%, respectively.Conclusion CLIA has a higher positive rate than ELISA, butboth methods have their own advantages and disadvantages. Therefore, the two methods can be combined for clinical detection.【Key words】Chemical spectroscopic immunoassay;Enzyme-linked immunosorbent assay;AIDS antibody艾滋病是一种对人类生命安全造成严重威胁的传染性疾病，该病属于一种免疫系统缺陷疾病，艾滋病是由HIV病毒（人类免疫缺陷病毒）所引起的疾病，临床中通过对患者血清中的HIV抗体的检测诊断艾滋病。

犬IgE酶联免疫分析（IgE）ELISA试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：E0545c预期应用ELISA法定量测定犬血清、血浆或其它相关液体中IgE含量。

概述免疫球蛋白是一组具有抗体活性的蛋白质，存在与血液、体液、外分泌液及某些细胞的膜上。

本篇内除特别指出外，均为血清的免疫球蛋白测定。

目前，将免疫球蛋白分为IgG、IgA、IgM、IgD、IgE等五类。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中IgE水平。

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入IgE、生物素化的抗犬IgE抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。

TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的IgE呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒组成1.酶联板：一块（96孔）2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，其浓度为600 IU/mL，做系列倍比稀释后，分别稀释成600 IU/mL，300 pg/mL ，150 IU/mL，75 IU/mL，37.5 IU/mL，18.7 IU/mL，9.3 IU/mL，其原液直接作为最高标准浓度，样品稀释液直接作为标准浓度0IU/mL，临用前15分钟内配制。

3.样品稀释液：1×20ml/瓶。

4.抗体稀释液A：1×10ml/瓶。

5.抗体稀释液B：1×10ml/瓶。

6.检测溶液A：1×120ul/瓶（1：100）临用前以抗体稀释液A1：100稀释。

7.检测溶液B：1×120ul/瓶（1：100）临用前以抗体稀释液B1：100稀释。

8.底物溶液：1×10ml/瓶。

9.浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10.终止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

酶联免疫吸附试验检间接法测IgG抗体步骤酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常用的实验技术，用于定量或定性检测特定抗原或抗体。

其中，酶联免疫吸附试验检间接法是一种用于检测IgG抗体的常用方法。

本文将详细介绍酶联免疫吸附试验检间接法测量IgG抗体的步骤。

步骤一：制备诊断试样首先，我们需要获得待测的诊断试样。

这可能是一种血液样品，如血清或血浆。

需注意的是，样本应严格遵循安全操作规程进行采集和储存。

步骤二：涂覆固相抗原在这一步骤中，我们将使用具有高亲和力的抗原（可能是蛋白质或多肽）来涂覆固定在试验板上的固相。

常见的抗原固相材料有微孔板或磁珠。

涂覆过程包括以下几个步骤：1.准备1x涂层缓冲液，pH值通常在8.0-9.0之间。

加入适量的缓冲液到微孔板的孔中，使每个孔完全涂覆。

2.在每个涂层孔中加入一定浓度的抗原。

一般来说，我们可以通过实验确定最佳的抗原浓度。

孔中的抗原应覆盖整个孔底，并允许在温和的条件下孵育一段时间，以实现抗原的吸附和固定。

3.抗原吸附完成后，将板孔转至4℃的冰箱中，在适当的条件下储存板孔，以防止抗原降解。

步骤三：阻断非特异性结合位点在进行酶联免疫吸附试验时，我们希望检测到的信号仅来自于特定的抗体与抗原结合。

然而，试样中存在的非特异性成分可能与固相抗原结合，导致干扰或错误结果。

因此，在进行特异性结合之前，我们需要阻断非特异性结合位点。

这一步骤的目的是减少背景信号。

1.将非特异性结合位点涂覆孔中的样品排除。

2.溶液的组成可以包括蛋白质、牛血清白蛋白（BSA）或牛血清。

3.将阻断溶液加入涂覆孔中，孵育一段时间以实现充分的结合。

4.之后，将孔排空，可用洗涤缓冲液冲洗孔。

在这一步骤中，我们将待测的样品（如血清或血浆）加入至阻断后的涂覆孔中。

通过与固相抗原结合，特定的IgG抗体会与固相抗原结合形成免疫复合物。

这一步骤的操作包括：1.加入待测样品到阻断后的涂覆孔中。

酶联免疫吸附法实验步骤酶联免疫吸附法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，简称ELISA）是一种常用的实验方法，用于检测样品中特定的抗原或抗体。

以下是ELISA实验的基本步骤。

步骤1：制备试样首先，需要准备样品，可以是血清、细胞上清、尿液等。

样品可能含有目标抗原或抗体，也可能含有其他干扰物质。

样品的准备过程通常包括离心、稀释等步骤，以获得适合实验的样品。

步骤2：涂布固相材料ELISA试验通常使用微孔板（96孔板），每个孔都涂布有特定的抗原或抗体。

涂布的过程包括将抗原或抗体溶液加入每个孔中，并在适当的条件下孵育一段时间，使其吸附在固相材料上。

步骤3：阻断非特异性结合为了降低非特异性背景信号，需要在涂布后阻断孔中未被特异性结合的部分。

常用的阻断剂包括牛血清蛋白（BSA），牛阴离子解脂磷酸酰胆碱（BSA-PIPC），非脂阻断剂（Nonfat blocking reagent）等。

阻断剂溶液通常加入每个孔，孵育一段时间，然后将其倒出。

步骤4：加入样品与控制品经过阻断后，样品和控制品被加入每个孔中，以检测其中的特定抗原或抗体。

每个孔可以添加不同浓度的样品和控制品，以建立浓度-效应曲线。

步骤5：孵育与洗涤样品和控制品孵育的时间和温度因实验设计而异。

在孵育过程中，抗原或抗体与样品中的目标分子发生特异性结合。

完成孵育后，需要进行洗涤以去除未结合的物质，减少背景干扰。

洗涤缓冲液通常用洗板机进行，该步骤重复数次。

步骤6：加入检测抗体经过洗涤后，需要加入与样品中目标分子特异结合的检测抗体。

检测抗体通常与酶（如辣根过氧化物酶HRP）偶联，以便在后续步骤中进行信号放大。

加入的检测抗体需要与目标分子特异性结合，并在适当的条件下孵育。

步骤7：加入底物经过检测抗体孵育后，需要加入底物以触发酶催化反应。

底物的选择取决于所使用的酶和反应类型。

例如，在HRP酶联ELISA中，一种常用的底物为TMB（3,3',5,5'-四甲基苯基胺）。

好风光好风光恢复供货才人磷酸化ERK（p-ERK）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：E0930h预期应用ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养物上清或其它相关液体中总磷酸化ERK，p-ERK 含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中p-ERK水平。

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入p-ERK、生物素化的抗人p-ERK抗体、HRP 标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。

TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的p-ERK呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制1.酶联板：一块（96孔）2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为10 ng/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释成10 ng/ml，5 ng/ml，2.5 ng/ml，1.25 ng/ml，0.625 ng/ml，0.312 ng/ml，0.156 ng/ml，其原液直接作为最高标准浓度，样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml，临用前15分钟内配制。

如配制5ng/ml标准品：取0.5ml 10 ng/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3.样品稀释液：1×20ml/瓶。

4.检测稀释液A：1×10ml/瓶。

5.检测稀释液B：1×10ml/瓶。

6.检测溶液A：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液A1：100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。

如1ul 检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

免疫酶联免疫吸附实验报告免疫酶联免疫吸附实验报告免疫酶联免疫吸附实验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，简称ELISA）是一种常用的实验方法，用于检测和定量测定生物样本中特定抗原或抗体的存在。

本实验旨在通过ELISA法检测某种病毒感染后产生的抗体水平，以评估免疫系统的应答能力。

实验材料和方法：1. 样本制备：收集病毒感染后的血清样本，离心去除细胞和颗粒物，得到清澈的血清。

2. 酶标板涂布：将目标抗原溶液加入酶标板孔中，孵育一段时间，使抗原吸附于酶标板表面。

3. 洗涤：将洗涤缓冲液加入酶标板孔中，轻轻摇动，倒出液体，重复此步骤多次，以去除未结合的抗原。

4. 反应：加入待测血清样本和辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗人免疫球蛋白G（IgG）抗体，孵育一段时间，使抗体与抗原结合。

5. 洗涤：重复第三步骤，去除未结合的抗体。

6. 显色：加入底物溶液，使底物与HRP发生反应，产生可见的颜色。

7. 终止反应：加入终止液，停止底物与HRP的反应。

8. 测定：使用酶标仪测定吸光度，根据标准曲线计算待测样本中抗体的浓度。

实验结果：根据实验操作步骤，我们成功地进行了ELISA实验，获得了一系列吸光度值。

通过绘制标准曲线，我们可以将吸光度值转化为抗体浓度。

进一步分析数据，我们发现不同样本的抗体浓度存在差异。

这表明，病毒感染后，机体会产生相应的抗体作为免疫应答的一部分。

讨论与分析：ELISA法是一种高灵敏度、高特异性的实验方法，广泛应用于医学、生物学和疾病诊断领域。

通过本实验，我们验证了ELISA法的可行性，并获得了关于抗体水平的有用信息。

在实验过程中，我们注意到样本制备的重要性。

样本的质量和处理方式会直接影响实验结果的准确性。

因此，在实验前，我们需要仔细选择和处理样本，确保样本中的抗原或抗体得到充分释放和稳定。

此外，实验中的洗涤步骤也非常重要。

洗涤的目的是去除未结合的抗原或抗体，以减少非特异性信号。

植物激素的酶联免疫吸附测定法（ELISA）免疫测定是利用抗原、抗体特异性反应而建立的，根据可视化方法的不同可分为：酶联免疫、放射免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定、生物发光免疫测定、浊度免疫测定法等。

由于酶联免疫吸附分析法（Enzyme-linked Immunosorbent Assays, 简称ELISA）具有灵敏性、特异性高，且方便、快速、安全、成本低廉的特点，而日益被广泛应用于植物激素测定。

目前，几大类植物激素IAA,ABA, GA3、GA4、iPA、ZR、DHZR等都建立了相应的ELISA方法并有试剂盒出售。

植物激素的酶联免疫检测方法有两种形式，一种是在固相载体上包被抗体（直接法），另一种是包被抗原（间接法）。

直接法利用游离抗原和酶标抗原与吸附的抗体进行竞争。

间接法利用游离抗原和吸附抗原与游离抗体进行竞争。

间接法的原理可用下式表示：Ab+H+HP=AbH+AbHP其中Ab表示抗体，H表示游离激素，HP表示吸附在板上的激素－蛋白质复合物。

根据质量作用定律，当该反应体系中Ab及HP的量确定时，游离H越多，结合物AbH形成的就越多，而AbHP形成的就越少，即结合在板上的抗体就越少，通过酶标二抗检测结合物AbHP的多少，就可以确定游离H 量的多少。

材料、试剂及设备1 材料各种新鲜植物材料2 仪器设备研钵，冷冻离心机，台式快速离心浓缩干燥器或氮气吹干装置，酶联免疫分光光度计，吸水纸，恒温箱，冰箱，酶标板（40孔或96孔），可调微量液体加样器（10μl，40μl,200μl,1000μl），带盖瓷盘（内铺湿纱布）。

3 试剂(1) 磷酸盐缓冲液（PBS）：称取8.0g NaCl, 0.2g KH2PO4, 2.96g Na2HPO4·12H2O，用量筒加1 000 ml蒸馏水，pH为7.5。

(2) 样品稀释液：500 ml PBS中加0.5 ml Tween-20，0.5g明胶（稍加热溶解）。

植物激素的酶联免疫吸附测定法（ELISA）免疫测定是利用抗原、抗体特异性反应而建立的，根据可视化方法的不同可分为：酶联免疫、放射免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定、生物发光免疫测定、浊度免疫测定法等。

由于酶联免疫吸附分析法（Enzyme-linked Immunosorbent Assays, 简称ELISA）具有灵敏性、特异性高，且方便、快速、安全、成本低廉的特点，而日益被广泛应用于植物激素测定。

目前，几大类植物激素IAA,ABA, GA3、GA4、iPA、ZR、DHZR等都建立了相应的ELISA方法并有试剂盒出售。

植物激素的酶联免疫检测方法有两种形式（见下图），一种是在固相载体上直接包被抗体（直接法，先包被二抗，再加一抗），另一种是包被抗原（间接法）。

直接法利用游离抗原和酶标抗原与吸附的抗体进行竞争。

间接法利用游离抗原和吸附抗原与游离抗体进行竞争。

间接法的原理可用下式表示：Ab+H+HP=AbH+AbHP其中Ab表示抗体，H表示游离激素，HP表示吸附在板上的激素－蛋白质复合物。

根据质量作用定律，当该反应体系中Ab及HP的量确定时，游离H越多，结合物AbH形成的就越多，而AbHP形成的就越少，即结合在板上的抗体就越少，通过酶标二抗检测结合物AbHP的多少，就可以确定游离H量的多少。

材料、试剂及设备1 材料各种新鲜植物材料2 仪器设备研钵，冷冻离心机，台式快速离心浓缩干燥器或氮气吹干装置，酶联免疫分光光度计，吸水纸，恒温箱，冰箱，酶标板（40孔或96孔），可调微量液体加样器（10μl，40μl,200μl,1000μl），带盖瓷盘（内铺湿纱布）。

3 试剂(1) 包被缓冲液：称取１.５g Na2CO3, 2.93g Na HCO3, 0.2g NaN3（可不加）, 用量筒加1 000 ml蒸馏水，pH为9.6(2) 磷酸盐缓冲液（PBS）：称取8.0g NaCl, 0.2g KH2PO4, 2.96g Na2HPO4·12H2O，用量筒加1 000 ml蒸馏水，pH为7.5。