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130307 IRAK-4在新生小鼠巨细胞病毒感染性耳聋发病机制中的作用

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中图分类号：R764.35 硕 士 学 位 论 文 IRAK-4在新生小鼠巨细胞病毒感染性耳聋 发病机制中的作用

届 别： 二○一六届 专 业： 耳鼻咽喉头颈外科学 学 位 类 型： 学术学位 研 究 方 向： 巨细胞病毒与感音神经性耳聋 研究生编号： 起 止 日 期： 2014年9月至2015年9月

2016年4月目 录 缩 略 词 表 ............................................................................................................................................................. 1 中 文 摘 要 ............................................................................................................................................................. 3 Abstract ...................................................................................................................................................................... 5 前 言 ................................................................................................................................................................... 7 材 料 和 方 法 ....................................................................................................................................................... 9 结 果 ................................................................................................................................................................. 21 讨 论 ................................................................................................................................................................. 28 结 论 ................................................................................................................................................................. 31 参考文献 ................................................................................................................................................................. 32 综 述 ................................................................................................................................................................. 35 攻读硕士学位期间发表学术论文 ......................................................................................................................... 49 临床培训小结 ......................................................................................................................................................... 50 致 谢 ................................................................................................................................................................. 51 论文独创性声明 ..................................................................................................................................................... 52 论文使用授权声明 ................................................................................................................................................. 52 论文审阅认定书 ..................................................................................................................................................... 53 ***医学院硕士学位论文

1 缩 略 词 表

Abbreviation 缩略词 英文全称 中文全称 ABR Auditory brainstem response 脑干听觉诱发电位 cDNA complementary DNA 互补脱氧核苷酸 CMV Cytomegalovirus 巨细胞病毒 CPE Cytopathogenic effect 细胞病变 DAB 3,3’-diaminobenzidine 二氨基联苯氨基 DNA Deoxyribonucleic acid 脱氧核苷酸 EDTA Ethylene diamine tetraacetic acid 乙二胺四乙酸 FBS Fetal bovine serum 胎牛血清 HCMV Human cytomegalovirus 人巨细胞病毒 IRAK Interleukin-1 receptor associated 白介素1受体相关激酶 kinase MCMV Murine cytomegalovirus 小鼠巨细胞病毒 PBS Phosphate-buffered saline 磷酸盐缓冲液 PCR Polymerase chain reaction 聚合酶链反应 PFA Paraformaldehyde 多聚甲醛 PLL Poly-L-lysine 多聚赖氨酸 RNA Ribonucleic Acid 核糖核苷酸 rpm Revolution per minute 每分钟转数 RT-PCR Reverse Transcription PCR 逆转录聚合酶链反应 SGN spiral ganglion cell 螺旋神经节 SNHL Sensorineural hearing loss 感音神经性耳聋 ***医学院硕士学位论文 2 TCID50 Tissue culture infections dose 50 半数细胞感染量 TLR Toll-like receptors Toll样受体 3T3 Murine embryo fibroblast 小鼠胚胎成纤维细胞 ***医学院硕士学位论文

3 IRAK-4在新生小鼠CMV感染性耳聋

发病机制中的作用

中 文 摘 要 目的 颅内接种小鼠巨细胞病毒（murine cytomegalovirus, MCMV）建立新生小鼠MCMV性耳聋模型，以及建立MCMV感染原代培养螺旋神经节（spiral ganglion neuron, SGN）细胞模型，通过观察感染MCMV后耳蜗内和原代培养SGNs中TLR-9、MyD88、IRAK-4表达量的变化，探讨MCMV感染导致SGN细胞凋亡从而引起听力损伤的分子生物学机制，为今后进一步的研究和临床治疗提供实验依据。 方法 将新生（出生24h 内）BALB/C 小鼠平均随机分成两组：模型组和对照组。模型组采用颅内注射MCMV悬液法（接种部位注射TCID50 为104.15/0.1mL病毒悬液10μl ）建立 MCMV感染-听力损伤模型，对照组用同样的注射方法注射无菌生理盐水10μl 观察小鼠的生长发育和存活情况，在建模后第21天，使用ABR分别测定模型组和对照组小鼠听阈；在建模后第7天处死小鼠，分别测定：1. 用Trizol法提取RNA，逆转录为cDNA用Real time qRT-PCR方法分析不同组小鼠耳蜗TLR-9、MyD88、IRAK-4在RNA水平表达量的变化；2. 运用免疫组织化学法分析不同组小鼠耳蜗SGNs中TLR-9、IRAK-4蛋白质表达量的不同； 将新生BALB/C小鼠（出生24h 内）端头处死，在解剖显微镜下取出耳蜗组织离体培养，用神经元标志物抗神经元微丝蛋白200抗体（NF-200）和抗突触标志物synapsin抗体鉴定。培养 96 h后SGNs随机分为两组：实验组和对照组。实验组在培养基中加入MCMV悬液（MOI=1）建立MCMV感染模型，对照组不作处理。加入MCMV 6h 后用4%多聚甲醛固定，运用免疫细胞化学法观察两组细胞TLR-9、IRAK-4表达量的不同。 结果 1. 对照组的小鼠生长发育良好（皮毛光滑，反应灵敏，活动好），实验组的小鼠生长发育缓慢（皮毛凌乱稀疏、睁眼延迟、反应略迟钝、活动差、体态略

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帕立骨化醇通过HMGB1TLR4NF-κB信号通路减轻小鼠肠缺血再灌注损伤

帕立骨化醇通过HMGB1TLR4NF-κB信号通路减轻小鼠肠缺血再灌注损伤

◇基础研究◇中国临床药理学与治疗学中国药理学会主办!"#$ %&'()*，+,,"%''- &.'%/0012))3334565104578&'&&9:;<&=>%?2% =&'&% '- %#收稿　&'&% %% %@修回国家自然科学基金项目（@%-('#$.）吴林，男，本科，在读硕士研究生，主治医师，研究方向：围术期器官保护。

ABC2%=(-#%%&&@@　D 8:EC2C3F%-G CHF4BIF45;冷玉芳，通信作者，女，博士，主任医师，博士生导师，研究方向：围术期脏器保护和镇痛机制。

ABC2%==-#%=.(%%　D 8:EC2CB;JKLG CHF4BIF45;帕立骨化醇通过MNOP%)AQ*$)"R κP 信号通路减轻小鼠肠缺血再灌注损伤吴林%S&，郝颖香%，张蕾%，张天雪%，高明晶%，冷玉芳%S&%兰州大学第一临床医学院，兰州=#''''，甘肃；&兰州大学第一医院麻醉手术科，兰州=#''''，甘肃摘要　目的：观察帕立骨化醇对肠缺血再灌注损伤的影响，并进一步研究其与MNOP%)AQ*$)"R κP 信号通路的关系。

方法：,TR 级健康成年雄性!.=PQ)(9小鼠&$只，采用随机数字表法分为$组（ U (）：假手术组（,组）、帕立骨化醇预处理V 假手术组（,T 组）、肠缺血再灌注组（+*组）和帕立骨化醇缺血预处理组（T 组）。

,组与,T 组仅分离肠系膜上动脉，+*组与T 组建夹闭肠系膜上动脉$.8E;后再灌注&/，建立肠缺血再灌注模型；,T 组与T 组在术前&$/经腹腔注射'4#μJ)XJ 帕立骨化醇，其余两组给予等体积生理盐水。

依达拉奉右莰醇通过抑制TLR4NF-κB信号通路减轻实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠炎症反应

依达拉奉右莰醇通过抑制TLR4NF-κB信号通路减轻实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠炎症反应

实验研究依达拉奉右莰醇通过抑制TLR4/NF-κB信号通路减轻实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠炎症反应晚丽，李作孝△摘要：目的探讨依达拉奉右莰醇对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠炎症反应的影响及其机制。

方法30只雌性C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、依达拉奉右莰醇干预组各10只。

除空白组外，其余2组小鼠均采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55（MOG35-55）多肽诱导EAE模型。

从造模次日开始，依达拉奉右莰醇干预组腹腔注射依达拉奉右莰醇12.5mg/kg，空白组及模型组腹腔注射等量生理盐水，1次/d，连续14d。

观察小鼠发病情况，并行神经功能障碍评分；HE和LFB染色观察脊髓组织病理改变；实时荧光定量PCR检测脑组织匀浆中白细胞介素（IL）-1β、IL-6及肿瘤坏死因子（TNF）-αmRNA表达水平；蛋白免疫印迹法检测脊髓组织中Toll样受体4（TLR4）、核因子κB p65（NF-κB p65）蛋白表达水平。

结果空白组小鼠均未发病，其余2组小鼠不同程度发病。

与模型组相比，依达拉奉右莰醇干预组小鼠的发病潜伏期、高峰期延迟，高峰期神经功能障碍评分降低（P＜0.01）。

空白组小鼠脊髓组织未见异常；模型组脊髓组织大量炎性细胞浸润、髓鞘结构紊乱；依达拉奉右莰醇干预组较模型组的炎性细胞浸润减少、髓鞘结构紊乱情况改善。

与空白组相比，其余2组小鼠脑组织匀浆中IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达水平以及脊髓组织中TLR4、NF-κB p65蛋白表达水平显著升高，以依达拉奉右莰醇干预可逆转建模引起的上述改变（P＜0.05）。

结论依达拉奉右莰醇可减轻EAE小鼠炎症反应，其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路活化有关。

关键词：脑脊髓炎，自身免疫性，实验性；Toll样受体4；NF-κB；炎症；白细胞介素类；肿瘤坏死因子α；依达拉奉右莰醇；TLR4/NF-κB信号通路中图分类号：R744.51文献标志码：A DOI：10.11958/20212362Edaravone dexborneol reduces inflammation in mice with experimental autoimmuneencephalomyelitis by inhibiting TLR4/NF-κB signaling pathwayWAN Li,LI Zuoxiao△Department of Neurology,the Affiliated Hospital of Southwest Medical University,Luzhou646000,China△Corresponding Author E-mail:****************Abstract:Objective To investigate the effect and mechanism of edaravone dexborneol on the inflammatory response in mice with experimental autoimmune encephalomyelitis(EAE).Methods Thirty female C57BL/6mice were randomly divided into the blank group,the model group and the edaravone dexborneol intervention group,with10mice in each group. Except for the blank group,EAE model was induced by myelin oligodendrocyte glycoprotein35-55(MOG35-55) polypeptide in the other two groups.From the day after modeling,mice in the edaravone dexborneol intervention group were intraperitoneally injected with edaravone dexborneol12.5mg/kg,while the mice in the blank group and the model group were intraperitoneally injected with the equal amount normal saline,once a day for consecutive14days.The behavioral changes of mice were observed,and neurological dysfunction scores were performed.HE and LFB staining were used to detect spinal cord pathological changes.The mRNA expression levels of interleukin(IL)-1β,IL-6and tumor necrosis factor-α(TNF-α)in brain homogenate were detected by real-time fluorescence quantitative PCR.The protein expression levels of Toll-like receptor4(TLR4)and nuclear factorκB p65(NF-κB p65)in spinal cord tissue were detected by Western blot assay.Results None of the mice in the blank group had the disease,and the other two groups of mice had different degrees of pared with the model group,the incubation period and peak period were delayed in the edaravone dexborneol intervention group,and neurological deficit scores in peak period decreased(P＜0.01).No abnormality was found in spinal cord tissue structure in mice of the blank group,and a large number of inflammatory cell infiltration,myelin structure 基金项目：泸州市人民政府-西南医科大学科技战略合作基金项目（2018LZXNYD-ZK17）作者单位：西南医科大学附属医院神经内科（邮编646000）作者简介：晚丽（1994），女，硕士在读，主要从事神经免疫方面研究。

RLR信号通路在病毒感染中作用机制研究进展

RLR信号通路在病毒感染中作用机制研究进展

RLR信号通路在病毒感染中作用机制研究进展李园园;史伟峰【摘要】固有免疫反应构成了机体免疫系统的第一道防线,在抵抗病毒感染的过程中发挥着重要作用.在此过程中宿主细胞通过模式识别受体(pattern recognition receptor,PRR)识别侵入的病原微生物的病原体相关分子模型(pathogen associated molecular pattern,PAMP),激活下游信号级联反应,诱导宿主细胞释放促炎症细胞因子及Ⅰ型干扰素,抑制病毒的复制及感染.其中,维甲酸诱导基因Ⅰ受体(RIG-Ⅰ like receptors,RLR)定位于胞浆,是识别胞浆中病毒RNA的主要受体,在抗病毒固有免疫反应起着非常重要的作用.本文就RLR信号通路在病毒感染中作用机制的研究进展作一综述.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2014(032)011【总页数】4页(P852-855)【关键词】维甲酸诱导基因Ⅰ受体信号通路;病毒感染【作者】李园园;史伟峰【作者单位】常州市第一人民医院检验科,江苏常州213000;常州市第一人民医院检验科,江苏常州213000【正文语种】中文【中图分类】R392.1RLRs属于含有DExD/H-box 结构域的RNA 解旋酶家族(RNA helicase family),在大多数组织细胞中都能表达。

目前发现的RLRs家族成员主要有维甲酸诱导基因Ⅰ(retinoic acid-induced gene Ⅰ,RIG-Ⅰ )、黑色素瘤分化相关基因5(melanoma differentiation associated gene 5,MDA5)和LGP2(laboratory of genetics and physiology 2,LGP2)。

RIG-Ⅰ、MDA5和LGP2分别由925、1 025和678氨基酸残基组成，其中RIG-Ⅰ和MDA5均包含N端2个半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶激活和募集结构域(caspase activation and recruitment domain,CARD)、1个具有ATP酶活性的DExD/H-box解旋酶结构域和C端的1个阻遏子结构域(repressor domain,RD)，而LGP2则没有CARD结构域[1]。

干扰素刺激基因15抗病毒感染的分子机制

干扰素刺激基因15抗病毒感染的分子机制

·综述·Chinese Journal of Animal Infectious Diseases中国动物传染病学报摘 要：干扰素刺激基因15（ISG15）是由病原微生物或干扰素诱导产生的一种大小为15 kDa 的泛素样蛋白。

在干扰素诱导的数百个干扰素刺激基因中，ISG15是诱导最强烈、最快的ISG 蛋白之一。

研究表明，ISG15对多种病毒具有抗病毒作用。

此外，ISG15在调节宿主损伤、DNA 修复，调节信号通路及抗原递呈中也发挥着重要的作用。

文章介绍了ISG15的概况，并阐述了近年来ISG15在抗病毒、免疫调节和调节宿主信号通路过程中的作用。

关键词：干扰素刺激基因15；抗病毒作用；免疫调节中图分类号：S852.4 文献标志码：A 文章编号：1674-6422（2023）06-0170-07Molecular Mechanism of Interferon-Stimulated Gene 15 Antiviral InfectionTANG Jingyu 1, DU Hanyu 1,2, JIA Nannan 1, TANG Aoxing 1, LIU Chuncao 1, ZHU Jie 1, MENGChunchun 1, LI Chuanfeng 1, LIU Guangqing 1(1. Shanghai V eterinary Research Institute, CAAS, Shanghai 200241, China; 2. Xinjiang Agricultural University, Xinjiang 830052, China)收稿日期：2021-11-02作者简介：国家重点研发计划项目（2016YFD0500108）；中国农业科学院创新工程项目作者简介：唐井玉，女，博士研究生，预防兽医学专业通信作者：刘光清，E-mail：**************.cn干扰素刺激基因15抗病毒感染的分子机制唐井玉1，杜汉宇1,2，贾楠楠1，汤傲星1，刘春草1，朱 杰1，孟春春1，李传峰1，刘光清1（1.中国农业科学院上海兽医研究所 小动物传染病预防与控制创新团队，上海200241；2.新疆农业大学，乌鲁木齐830052）2023,31(6):170-176Abstract: Interferon-stimulated gene 15 (ISG15) is a ubiquitin-like protein of approximately 15 kDa induced by pathogenic microorganisms or interferons. Among the hundreds of interferon-stimulated genes induced by interferons, ISG15 is one of the most strongly and fastest induced ISG proteins. Studies have shown that ISG15 has antiviral effects against a variety of viruses. In addition, ISG15 plays an important role in regulating host damage, DNA repair, and regulating signaling pathways and antigen delivery. The article presented an overview of ISG15 and described the role of ISG15 in the process of antiviral, immunomodulation and regulation of host signaling pathways in recent years.Key words: Interferon-stimulated gene 15; antiviral infection; immunomodulation先天性免疫应答是抵抗入侵病原体的第一道防线，病原体可以通过宿主模式识别受体来感知。