在CCl4诱导的大鼠肝脏纤维化模型中肝功、肝脏纤维化程度的监测(1)

一１１３８——

１．１．１材料ＳＤ大鼠，雌性，１８０—２５０９，１００只。药物：４０％四氯化碳橄榄油溶液，４０％酒精。１．１．２实验动物分组ｓＤ大鼠，雌性，１８０—２５０ｇ。正常组１０只，肝硬化大鼠９０只。在肝硬化模型制备中，排除死亡动物，按照每实验组各５只动物作为统计学计算数量，实验用大鼠的数量足够使用。１．１．３给药方法ＣＣｈｏ．１ｍｌ／１００ｇ体重，１ｍｌ酒精，每天给一种药物，按顺序灌胃给药，给药２天后，停药１天。腹水的出现表明终末期肝硬化形成。终末期肝硬化形成后，四氧化碳药量酣晴减少，维持肝硬化腹水的状态，给药方案同上。每天观察大鼠外观的变化，当出现口鼻出血时，停止给药。１．１．４肝脏标本取材大鼠进行苯巴比妥麻醉，０．１５∥ｍｌ，打开腹腔，观察肝脏的外观变化，并拍照。取肝脏标本，置于１０％甲醛溶液浸泡２４ｈ。１．１．５石蜡切片制备按常规方法进行组织切片组织石蜡块的制备：组织块经过脱水、透明和浸蜡过程，组织中的水分被石蜡替代，并保持组织细胞的形态结构不变。脱水，乙醇置换组织细胞中的水的过程：所取组织从５０％乙醇、７０％、８５％、９５％直至无水乙醇的梯度脱水；透明．二甲苯置换酒精的过程：先经纯酒精和二甲苯各半的混合液浸渍１—２ｈ，再转人纯二甲苯中浸渍；浸蜡一石蜡掖体置换组织的浸蜡过程：先把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍１—２ｈ，再先后移入２个熔化的石蜡液中浸渍３ｈ左右，组织中的水被石蜡置换。整个浸蜡过程由机器自动完成。浸蜡后的组织材料块放在装有蜡液的容器中，待蜡液表层凝固即迅速放入冷水中冷却，即做成组织包埋蜡块。

１．１．６切片制备及染色石蜡切片机连续切片，将完整的蜡片置于温水（４５＂Ｃ左右）中展平。捞至玻片上铺正，滤纸吸除多余水分，置入４５＂Ｃ温箱中干燥，

划Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒｔ２０７ｔＶｏｌ１ｌ，Ｎｏ．９得到石蜡切片。石蜡切片用二甲苯梯度脱蜡，再经无水乙醇直至蒸馏水浸泡，得到水化组织切片，进行ＨＥ及网状纤维染色。

１．２病理学检测

每隔７天解剖２只大鼠，取肝脏组织，切成１．５ｃｍ见方的体积，做盯脏的石蜡切片，ＨＥ染色和网状纤维染色相结合。苏木素．伊红（ＨＥ）染色观察肝小叶细胞变化和纤维化进展，网状纤维染色观察肝脏纤维化的进展，观察肝脏超微结构的变化规律。１．３肝功能指标的检测由中山大学附属三院的生化检验科完成。在检测肝功能和纤维化的指标时，用毛细针取眼血１—２ｍｌ，医院病理科送检。具体检测指标如下：

①反映肝纤维化４项指标：血清透明质酸（ＨＡ），层粘连蛋白（Ｌｍ，Ⅲ型前胶原（ＰｃⅢ），Ⅳ型胶原（Ⅳ．ｃ）。

②反映肝细胞蛋白合成代谢功能的指标：总蛋白ＴＰＲＯＴ（ｇ／Ｌ），自蛋白ＡＬＢ（ｇ／Ｌ），球蛋白ＧＬＢ（ｇ／Ｌ）。

③肝细胞受损的指标：谷草转氨酶＆ＳＴ（Ｕ／Ｌ），谷丙转氨酶ＡＬＴ（Ｕ／Ｌ），胆碱脂酶ＣＨＥ（Ｕ／Ｌ）。

④反映肝脏胆排泄、分泌及解毒功能的指标：总胆红素ＴＢＩＬＩ（ｖｍｏｌ／Ｌ），直接胆红素ＤＢＩＬＩ（ｍｎｏｌ／Ｌ），闯接胆红素ＩＢＩＬＩ（ｇｍｏｌ／Ｌ），总胆汁酸ＴＢＡ（ｆｍ∥Ｌ）。

⑤胆汁淤积指示酶（包括同工酶）有帮助的酶指标：古氨酰转肽酶ｃＧ“Ｕ／Ｌ），碱性磷酸酶ＡＬＰ（Ｕ／Ｌ）。

数据处理：各项指标的检测都用丁检验，检验水准设为０．０５。

２结果

２．１肝纤维化模型的建立

图中可见，肝硬化大鼠的肝脏呈现颗粒样改变，为肝硬化结节的表现。此时的肝脏已经有大量腹水，为终末期肝硬化（见图１）。

围１肝硬化大鼠的解剖和病理图片，圈片为放太２∞倍

在CCl4诱导的大鼠肝脏纤维化模型中肝功、肝脏纤维化程度

的监测

作者：徐川， 董云旭， 吕文天， 赵大兵， 王劲， 姜在波， 张建生， 朱康顺， 单鸿

作者单位：中山大学附属第三医院放射科,广东,广州,510630

刊名：

中国实验诊断学

英文刊名：CHINESE JOURNAL OF LABORATORY DIAGNOSIS

年，卷(期)：2007,11(9)

被引用次数：2次

1.Britton RS;Bacon BR Intracellular signaling pathways in stellate cell activation 1999

2.Lindquist JN;Marzluff WF;Stefanovic BⅢ.Posttranscriptional regulation of type collagen 2000

3.Arthur MJ Fibrogenesis Ⅱ Metalloproteinases and their inhibitors in liver cirrhosis 2000

4.Bonis PA;Friedman SL;Kaplan MN Is liver fibrosis reversible[外文期刊] 2001

5.Gaudio E;Onori P;Pannarale L Hepatic microcirculation and peribiliary plexus in experimental

biliary cirrhosis:A morphological study[外文期刊] 1996

6.Brunt EM Grading and staging the histopathological lesion of chronic hepatitis:The Knodell histology activity index and beyond[外文期刊] 2000(1)

7.Fausto N Liver regeneration 2000

8.Fausto N Liver regeneration 2000(zk)

1.孙海芸.任映.尹军祥.李本志.叶永安.杨金铎.崔界蜂.谭玮.宋崇顺加味鳖甲煎丸对白蛋白所致免疫性肝纤维化大鼠病理模型的影响[期刊论文]-中国中西医结合杂志2008,28(6)

2.刘立新.石永强药物所致肝纤维化动物模型的研究进展[期刊论文]-中国药物与临床2009,9(9)

3.赵宗江.张新雪实验性肝纤维化动物模型研究述评[期刊论文]-中国中西医结合消化杂志2007,15(3)

4.刘平.高云华肝纤维化动物模型的建立[期刊论文]-世界华人消化杂志2002,10(6)

5.林冬静.金政常用肝纤维化动物模型的研究及评价[期刊论文]-时珍国医国药2006,17(3)

6.叶霖财.肖智勇.周文霞.张永祥.YE Lin-cai.XIAO Zhi-yong.ZHOU Wen-xia.ZHANG Yong-xiang四氯化碳致肝纤维化动物模型实验条件的优化[期刊论文]-军事医学科学院院刊2010,34(4)

7.李生财.李彤.Li Shengcai.Li Tong肝纤维化动物模型的造模原理及应用[期刊论文]-中医药学刊2006,24(12)

8.张广林.孙勇伟.徐庆.施志强.陈炜.罗蒙.ZHANG Guang-lin.SUN Yong-wei.XU Qing.SHI Zhi-qiang.CHEN Wei. LUO Meng DDR2RNA干扰对CCl4诱导肝纤维化动物模型的实验研究[期刊论文]-中华肝胆外科杂志2011,17(2)

9.陈月桥.毛德文肝纤维化动物模型制备的研究进展[期刊论文]-实用肝脏病杂志2007,10(3)

10.曾林.王慧芳.胡仲明肝纤维化动物模型的研究进展[期刊论文]-动物医学进展2003,24(6)

1.张玉侠.黄大可.马盼盼.陈柳茜.刘淼.任翠平.沈际佳小鼠感染日本血吸虫肝脏损害的动态观察[期刊论文]-中国人兽共患病学报 2010(8)

2.陈宝田.龙亚秋.葛鑫宇.李华灵芝孢子粉对大鼠肝硬化血生化指标的影响[期刊论文]-陕西中医 2009(5)