利用SELDI技术检测大鼠肝纤维化组织的实验研究

中文摘要目的本文通过对SD大鼠腹腔注射四氯化碳以诱导大鼠肝纤维化动物模型。

方法取15只SD大鼠，180—220g，分为A组10只，B组5只，A组为模型组：40%CCL4橄榄油混合液按0.12ml/100g腹腔注射，一周两次，共八周。

B组为对照组：纯橄榄油按0.12ml/100g腹腔注射，一周两次，共八周，八周后，禁食12小时处死全部大鼠，解剖取肝组织。

病理学检测：HE染色，MASSON染色,PAS染色。

基因学检测：1.3.4型胶原蛋白结果八周试验期间B组大鼠全部存活，肝组织标本结构清晰，无异常情况；A组大鼠出现明显的病态，肝组织标本均已达到肝纤维化S3以上，多数标本可见小叶被纤维结构分割包围，假小叶形成，干细胞可见脂肪变性；结论该方法肝损伤明显，死亡率低，周期短，能够成功作为慢性肝损伤，肝纤维化的模型。

关键词肝纤维化，四氯化碳，动物模型AbstractObjective: Established animal model of hepatic fibrosis in rats induced by carbon tetrachloride.Methods: Take 15 SD rats,180-220g, divided into 10 group A, group B 5 只, A group of model group: 40% CCL4 0.12ml/100g by abdominal injection of a mixture of olive oil, twice a week, a total of eight weeks. Group B was the control group: pure olive oil press 0.12ml/100g abdominal injection twice a week, a total of eight weeks, eight weeks later, all rats were fasted for 12 hours were sacrificed, dissected liver tissue. Pathology: HE staining, MASSON staining, PAS staining. Genetics testing: 1.3.4 collagenResults: During the eight-week test group B rats survived, liver tissue specimens clear structure, no exceptions; significant morbidity A rat liver tissue fibrosis S3 have reached above, the majority of samples are split fiber structure visible lobular surrounded pseudo lobule formation, stem cell degeneration visible fat.Conclusion: This method obviously liver injury mortality, the period is short, to be successful as chronic liver damage, liver fibrosis model.Key words: Fibrosis, carbon tetrachloride, animal model前言肝病包括1.慢性病毒性肝炎2.药物性肝炎 3.中毒性肝炎 4.脂肪肝 5.酒精肝 6.肝硬化 7.肝肿瘤 8.肝胆结石 9.肝囊肿大多数肝病伴随着肝纤维化，肝纤维化是威胁人类健康的常见疾病，是各种慢性肝病最重要的病理特征，是发生肝硬化的病理基础，也是原发性肝癌发病的危险因素之一。

肝纤维化动物模型造模方法的研究进展I. 综述肝纤维化是一种严重的肝脏疾病，其病理特征为肝实质中大量纤维组织增生，导致肝脏功能受损。

肝纤维化的发生和发展受到多种因素的影响，如病毒感染、药物毒性、酒精性肝病等。

因此建立有效的动物模型对于研究肝纤维化的发病机制和治疗方法具有重要意义。

本文将对近年来关于肝纤维化动物模型造模方法的研究进展进行综述。

在构建肝纤维化动物模型时，首先需要选择合适的动物种类。

常用的动物模型包括CRISPRCas9基因敲除小鼠、自发性肝纤维化大鼠、四氯化碳(CCl诱导的肝纤维化大鼠等。

其中CRISPRCas9基因敲除小鼠是目前最为理想的肝纤维化动物模型之一，因为它可以精确地靶向特定基因进行敲除，从而有效地模拟人类肝纤维化的病理过程。

目前主要采用CRISPRCas9技术进行基因敲除。

通过构建特定的sgRNA序列，可以特异性地靶向目标基因，实现对其表达水平的抑制。

这种方法的优点是操作简便、高效，且可以精确地控制基因敲除的范围和程度。

然而CRISPRCas9技术仍存在一定的局限性，如可能导致非特异性敲除、影响其他基因的表达等。

因此未来还需要进一步优化该技术，以提高其在肝纤维化动物模型构建中的应用效果。

另一种常用的肝纤维化动物模型构建方法是通过化学物质的直接或间接作用诱导肝纤维化。

常用的化学物质包括四氯化碳(CCl、二甲基亚硝胺(DMN)、苯并芘等。

这些化学物质可以通过不同途径进入肝脏，引起肝细胞损伤和坏死，进而导致肝纤维化的发生。

然而这种方法存在一定的毒副作用，如长期暴露于高浓度的CCl4可能会导致肝癌的发生。

因此在使用化学物质诱导法构建动物模型时，需要严格控制剂量和时间，以降低实验风险。

A. 肝纤维化的定义和重要性肝纤维化是一种严重的肝脏疾病，其特征是正常肝细胞被大量的胶原纤维所替代，导致肝脏结构和功能的严重改变。

这种病变过程被称为纤维化，最终可能导致肝硬化，甚至肝癌。

因此对肝纤维化的早期诊断和治疗具有重要的临床意义。

SUMO-1在实验性大鼠肝纤维化中的表达及意义的开题报告一、研究目的及意义肝纤维化是一种常见的慢性肝病，严重影响患者的生活质量。

SUMO-1（small ubiquitin-like modifier-1）是一种泛素类似物，在细胞生物学中起着重要的调节作用，包括转录、DNA修复、信号传导和衰老等过程。

研究表明，SUMO-1和肝纤维化发生了密切的关系，但目前关于SUMO-1在肝纤维化中的表达及机制的研究还十分有限，我们希望通过该项目的研究，深入探究SUMO-1在肝纤维化中的角色，揭示其可能的分子机制，以期对肝纤维化的治疗和预防提供参考。

二、研究内容1. 搜集大鼠肝纤维化的组织样本；2. 通过免疫组化、Western blot等技术分析SUMO-1在大鼠肝纤维化中的表达情况；3. 利用药物干预或基因编辑等方法，调控SUMO-1的表达水平，观察其对肝纤维化的影响；4. 结合RNA测序、ChIP-Seq等技术，分析SUMO-1调控肝纤维化的分子机制。

三、研究方法1. 样本采集：收集实验性大鼠肝纤维化组织样本，对照正常对照组；2. 免疫组化：首先对比两组样本中SUMO-1的表达差异，通过免疫组化技术检测SUMO-1在组织中的定位和表达；3. Western blot：结合免疫组化，进一步定量分析SUMO-1的表达；4. 药物干预或基因编辑：利用药物干预或基因编辑技术调控SUMO-1的表达水平，观察其对肝纤维化的影响；5. RNA测序和ChIP-Seq：分析SUMO-1调控肝纤维化的分子机制，从转录水平和基因组水平两方面探究其调控机制。

四、预期成果通过本研究，我们预计可以：1. 确定SUMO-1在大鼠肝纤维化中的表达情况；2. 揭示SUMO-1在肝纤维化中的作用机制；3. 验证SUMO-1是否为肝纤维化的潜在治疗靶点，为治疗和预防肝纤维化提供新的策略和思路。

五、研究意义SUMO-1作为泛素样蛋白，其在细胞生物学中起到重要的作用，但其在肝纤维化中的作用及分子机制尚未深入探究。

益肝浓缩煎剂方中重用丹参活血化瘀，为君药．赤芍化瘀行滞止痛；当归补血活血止痛．助丹参活血祛瘀：黄芪补气升阳：白术、茯苓益气健脾化湿．补中气之不足．助脾胃以行运化之职．共为臣药：以柴胡为佐使，一药而有二用，一者疏肝理气，再者可作为引经药，引药力直达病所。

诸药配合，共奏活血化瘀、益气健脾、疏肝理气之功．可使瘀滞得去，脾气健运．则诸证自解。

本实验表明益肝煎剂具有良好保护肝细胞，抑制胶原纤维的合成、沉积及促进其降解的作用，从而可明显改善肝组织的病理改变，其疗效略优于丹参．而明显优于黄芪．表现在益肝煎剂可使纤维化大鼠肝小叶结构基本恢复正常，肝细胞无明显脂肪变性，肝索排列较整齐，仅汇管区少量胶原沉积．无纤维问隔形成；而丹参组肝小叶结构基本恢复正常，肝细胞轻度脂肪变性，汇管区稍有扩大．有少量胶原纤维沉积，井见纤细纤维间隔形成；黄芪组肝小叶结构排列仍紊乱，肝细胞脂肪变性明显，汇管区扩大，有较多胶原纤维沉积．并有少量较粗大纤维间隔形成。

因之．具有活血化瘀、益气健脾作用的益肝浓缩煎剂疗效较单纯应用活血化瘀药或益气健脾药为佳。

总之，具有活血化瘀、益气健脾作用的中药对抗肝纤维化有良好作用，有较好的开拓前景。

今后还应加强针对中药复方中单味药抗肝纤维化作用机制及其主要有效成分提取方面的研究，对于简化处方、发现真正有效药物有重要意义。

强肝胶囊抗大鼠肝纤维化作用实验研究白求恩国际和平医院（０５００８２）姚欣河北医科大学第二医院（０５００００）姚冬梅姚希贤近年来国内以活血化瘀为主中药防治肝纤维化的研究已取得可喜成果，然而缺乏正式投产者。

以活血化瘀为主中药组方的强肝胶囊为近年来正式投产药物，但目前尚缺乏抗肝纤维化实验研究报道。

本实验拟以ｃｃｈ诱导大鼠肝纤维化为模型．应用强肝胶囊进行预防和治疗．从动物实验角度探讨其抗肝纤维化作用，为进一步推广应用提供依据。

ｌ材料与方法１－ｌ实验材料ｌ－１．１动物与分组：ｓＤ雄性大鼠７５只，体重１８０～２２０９，清洁级，由河北医科大学实验动物中心提供。

《截短TGF-βⅡ型受体对肝纤维化大鼠上皮间质转化的影响》摘要：本研究旨在探讨截短TGF-βⅡ型受体对肝纤维化大鼠上皮间质转化的影响。

通过建立肝纤维化大鼠模型，观察截短TGF-βⅡ型受体后上皮间质转化标志物的变化，以评估其在大鼠肝脏疾病进展中的潜在作用。

结果表明，截短TGF-βⅡ型受体能有效抑制肝纤维化大鼠上皮间质转化，对治疗和预防肝纤维化疾病具有重要意义。

一、引言肝纤维化是一种常见的肝脏疾病，其特点是细胞外基质（ECM）过度沉积和肝细胞损伤。

上皮间质转化（EMT）是肝纤维化过程中的重要机制之一，与纤维化的发生、发展密切相关。

TGF-βⅡ型受体在EMT过程中起着关键作用。

因此，研究截短TGF-βⅡ型受体对肝纤维化大鼠上皮间质转化的影响，有助于深入理解肝纤维化的发病机制，为临床治疗提供新的思路。

二、材料与方法1. 实验动物与模型建立选择健康SD大鼠，建立肝纤维化模型。

通过药物干预或基因编辑技术，构建截短TGF-βⅡ型受体的实验动物模型。

2. 实验方法（1）采用免疫组化、Western blot等方法检测大鼠肝脏组织中EMT相关标志物的表达。

（2）通过对比截短TGF-βⅡ型受体前后大鼠肝脏组织形态学变化，评估截短TGF-βⅡ型受体对EMT的影响。

（3）利用统计学方法分析数据，探讨截短TGF-βⅡ型受体与肝纤维化大鼠上皮间质转化的关系。

三、实验结果1. 截短TGF-βⅡ型受体对EMT标志物的影响实验结果显示，截短TGF-βⅡ型受体后，大鼠肝脏组织中EMT相关标志物如E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达增加，而间质标志物如α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达减少。

这表明截短TGF-βⅡ型受体能有效抑制EMT过程。

2. 截短TGF-βⅡ型受体对肝纤维化大鼠的影响在肝纤维化大鼠模型中，截短TGF-βⅡ型受体后，大鼠肝脏组织纤维化程度减轻，炎症反应减弱，肝脏结构得到改善。

这表明截短TGF-βⅡ型受体对肝纤维化大鼠具有治疗作用。

复合因子法建立大鼠肝纤维化模型的实验研究摘要目的:采用复合因子法建立健康SD雄性大鼠肝纤维化模型，探讨复合因子法建立肝纤维化模型的应用价值。

方法:于0周、2周、4周、6周分别对以复合因子所建立大鼠肝纤维化模型进行肝组织病理检查及血清纤维化指标检查，以病理诊断结果为标准，探讨复合因子法建立肝纤维化模型的应用价值。

结果：以复合因子法成功建立了鼠肝纤维化模型，该模型肝组织病理检查与血清纤维化指标检查相关性良好。

结论:复合因子法建立健康SD雄性大鼠肝纤维化模型成功率较高，有较高的应用价值。

肝纤维化动物模型的制作方法较多，根据不同的实验目的选用的动物和模型制作方法也不同[1]。

文献报道较多，经常应用的经典方法为四氯化碳制作肝纤维化模型法,选择的实验动物主要是小白鼠或大白鼠。

本实验采用复合因子法建立健康SD雄性大鼠肝纤维化模型，探讨复合因子法建立肝纤维化模型的应用价值。

资料与方法肝纤维化模型准备：实验材料：①实验动物：健康雄性Sprague-Dawley大鼠，购自包头医学院实验动物中心。

②实验试剂：四氯化碳，99.9％分析纯；10％乙醇。

肝纤维化模型制作：四氯化碳复合肝纤维化模型制备方法：健康清洁级雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠38只，体质量150~220g，平均180g，随机分5组，根据文献报道方法采用复合因子致肝纤维化模型方法，建立鼠肝纤维化模型。

造模方法：①以79.5％纯玉米粉加20％猪油、0.5％胆固醇制成低蛋白高脂肪高胆固醇混合饲料喂饲实验大鼠；②以10％乙醇为惟一饮用水喂饲实验大鼠；③第1次皮下注射40％四氯化碳石蜡油液0.5ml/100g，以后每隔3天0.3ml/100g 重复皮下注射，为期6周。

病理标本制作：各阶段造模结束后，处死实验动物，取肝组织以10％甲醛固定，标本大小约1cm×1cm×1cm。

常规石蜡连续切片，分别进行苏木精-伊红(HE)及Masson三色染色进行病理观察。

补充VE、Se对大鼠肝纤维化和抗氧化功能影响的研究李锋;李宣海;程五凤;谢良民【期刊名称】《营养学报》【年(卷),期】2003(25)1【摘要】目的 : 探讨维生素 E(VE)、硒 (Se)对 CCl4 大鼠肝纤维化和抗氧化功能的影响。

方法 : 48只 SD大鼠随机分为 3组。

模型组 ,采用腹腔注射 5 0 % CCl4 和橄榄油混合制剂的方式建立大鼠肝纤维化模型 ,喂饲标准饲料 ;干预组 ,处理方式同前 ,并在大鼠饲料中加 VE(2 5 0 mg/kg )和 Se(0 .2 mg/kg)进行营养干预 ;对照组 ,腹腔注射生理盐水 ,喂饲标准饲料。

全部动物于处理 8w后处死。

通过HE常规染色和 Masson三色胶原染色对肝组织切片进行病理组织学检查 ;同时分别检测大鼠体内各种抗氧化指标和其他肝纤维化指标 ,并观察其变化。

结果 : 干预组大鼠抗氧化能力有显著提高 ,表现在肝组织和血清 SOD、红细胞 GPX活性均显著高于模型组 ,而肝组织和血清MDA水平显著低于模型组。

同时 ,干预组大鼠的肝纤维化程度显著低于模型组 ,体现在血清 ALT、AST水平、肝组织羟脯氨酸含量都显著低于模型组 ;组织病理学检查显示肝脏胶原纤维增生程度也显著低于模型组。

结论 : 补充适量 VE和 Se具有提高机体抗氧化的能力。

【总页数】5页(P60-64)【关键词】维生素E;硒;抗氧化;肝纤维化【作者】李锋;李宣海;程五凤;谢良民【作者单位】上海第二医科大学营养教研室【正文语种】中文【中图分类】R151.41【相关文献】1.有机硒、无机硒、VE单独使用及有机硒与VE联用对大鼠体内抗氧化能力的影响 [J], 姚昭;李红艳;张云龙;邓泽元2.不同补充乳酸亚铁方法对大鼠机体抗氧化功能的影响 [J], 杨青俊;赖建强;赵显峰;孟晶;汪之顼;荫士安3.Se和VE对大鼠心肌组织TGF-β1mRNA表达的影响 [J], 吴军;吕晓红;李广生;饶明俐;孙波4.每日或间歇性大剂量补充硫酸亚铁对大鼠铁营养状况和抗氧化功能的影响 [J], 杨青俊;荫士安;赖建强;孟晶;赵显峰;徐青梅5.Se和VE对大鼠心肌肌球蛋白重链基因表达影响的研究 [J], 李荣文;朱筱娟;刘晓茹;李绍巍;杨同书因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

作者单位:230001合肥市安徽医科大学解放军临床学院(石莹,童清平);解放军联勤保障部队第901医院超声诊断科(吕永燕,杨增娣,童清平);感染病科(刘波,娄方明);病理科(徐军)第一作者:石莹,男,28岁,硕士研究生通讯作者:童清平,E-mail:tongqp168@ ㊃实验性肝炎㊃超声剪切波弹性成像技术评估CCl4诱导的肝损伤大鼠肝纤维化程度效能研究石莹,吕永燕,杨增娣,刘波,娄方明,徐军,童清平㊀㊀ʌ摘要ɔ㊀目的㊀探讨剪切波弹性成像(SWE)评估肝损伤大鼠肝纤维化程度的价值㊂方法㊀将52只SD大鼠随机分为对照组12只和实验组40只,采用CCl4腹腔注射诱导肝损伤模型,分别实验4w㊁6w㊁8w和10w,后者每个时段10只㊂在实验结束前,在麻醉状态下采用SWE行肝脏硬度检测(LSMs),常规进行血生化和血液检查,计算天冬氨酸氨基转移酶(AST)/血小板(PLT)比率指数(APRI)和肝纤维化-4因子指数(FIB-4)㊂在处死动物后立即行LSMd检测,常规进行肝组织病理学检查㊂应用受试者工作特征曲线(ROC)评估各指标诊断显著性肝纤维化的效能㊂结果㊀肝组织病理学检查诊断大鼠F0/F1期非显著性肝纤维化18只,ȡF2显著性肝纤维化30只;非显著性肝纤维化组APRI评分为(0.05ʃ0.02),显著低于显著组ʌ(0.14ʃ0.12),P<0.05ɔ,FIB-4评分为(0.13-100ʃ0.09-100),显著低于显著组ʌ(0.25-100ʃ0.13-100),P<0.05ɔ,LSMs为(5.2ʃ1.7))kPa,显著低于显著组ʌ(9.7ʃ2.8)kPa,P<0.05ɔ,LSMd为(3.6ʃ0.8))kPa,显著低于显著组ʌ(8.8ʃ1.7)kPa,P<0.05ɔ;LSMs和LSMd诊断显著性肝纤维化的曲线下面积分别为0.91和0.93,显著大于APRI(0.75,P<0.05)或FIB-4(0.69,P<0.05),其诊断的敏感度和特异度分别为76.7%和87.5%,及85.7%和92.0%㊂结论㊀采用SWE检测肝硬度评估肝损伤大鼠显著性肝纤维化具有较高的诊断效能,操作简便,准确率高,可重复性强,值得探讨应用㊂㊀㊀ʌ关键词ɔ㊀肝纤维化;剪切波弹性成像;肝脏硬度检测;诊断;大鼠㊀㊀DOI:10.3969/j.issn.1672-5069.2023.04.006㊀㊀Evaluation of significant liver fibrosis by ultrasonic shear wave elastography in rats with carbon tetrachloride-induced liver injury㊀Shi Ying,Lyu Yongyan,Yang Zengdi,et al.Department of Ultrasound,901st Hospital,Clinical Medical College, Affiliated to Anhui Medical University,Hefei230001,Anhui Province,China㊀㊀ʌAbstractɔ㊀Objective㊀The aim of this study was to explore the evaluation of significant liver fibrosis(SLF)by ultrasonic shear wave elastography(SWE)in rats with carbon tetrachloride(CCl4)-induced liver injury.Methods㊀52male SD rats were randomly divided into control group(n=12)and experimental group(n=40).The liver injury model was induced by intraperitoneal injection of carbon tetrachloride for4,6,8and10weeks,with10rats sacrificed at each time.At end of each experiment,the rats were anesthetized for liver stiffness measurement(LSMs)by SWE.The blood routine and serum biochemical parameters were obtained for calculation of APRI and FIB-4.The LSM immediately after dead(LSMd)was performed again after execution.The liver fibrosis,steatosis and inflammatory activity were evaluated by pathological examination.The receiver operating characteristic(ROC)curve was applied to evaluate the performance of parameters in the diagnosis of SLF.Results㊀The pathological examination showed F0/F1non-significant LF(NSLF)in18rats,and>F2SLF in30rats;the APRI score in rats with NSLF was(0.051ʃ0.023),significantly lower than[(0.135ʃ0.117),P<0.05],and the FIB-4score was(0.132-100ʃ0.088-100),significantly lower than[(0.245-100ʃ0.125-100),P<0.05],the LSMs was(5.2ʃ1.7)kPa,significantly lower than [(9.7ʃ2.8)kPa,P<0.05]and the LSMd was(3.6ʃ0.8)kPa,significantly lower than[(8.8ʃ1.7)kPa,P<0.05]in rats with SLF;the areas under the ROC curve(AUC)by LSMs and LSMd in predicting SLF were0.91and0.93,significantly higher than0.75by APRI or0.69by FIB-4,with the sensitivities and specificities of76.7%and87.5%,and85.7%and92.0%,respectively.Conclusion㊀The SWE technique has a highclinical value in evaluating LF in rats with CCl4-induced liverinjury,with the advantages of non-invasive,simple andrepeatable feature.㊀㊀ʌKey wordsɔ㊀Liver fibrosis;Shear wave elastography;Liver stiffness measurement;Diagnosis;Rats㊀㊀肝损伤是临床常见的严重影响人类健康的疾病,进一步发展可导致肝硬化㊁肝癌,甚至死亡㊂评估肝损伤患者肝纤维化程度对及时治疗有着重大影响[1,2]㊂虽然肝活组织病理学检查是确定肝纤维化分期的金标准,但是由于其具有有创性,患者接受性差㊂瞬时弹性成像(TE)是临床上评估肝纤维化常用方法,但是由于缺乏二维超声图像引导无法避免血管和伪影等因素的干扰,有时也会因为肋间隙狭窄而影响检查㊂超声剪切波弹性成像(shear wave elastography,SWE)技术能够安全㊁无辐射㊁无临床禁忌的测量肝脏硬度,可帮助量化诊断慢性乙型肝炎患者肝纤维化程度,已广泛应用于临床[3-9]㊂相较于TE,SWE在二维图像的引导下可以准确地选择感兴趣区(ROI),测量成功率和准确率较高㊂天冬氨酸氨基转移酶/血小板比率指数(APRI)和肝纤维化-4因子指数(FIB-4)等评分方法也常被用来评估肝纤维化程度㊂本研究采用四氯化碳(CCl4)橄榄油溶液腹腔注射诱导肝损伤大鼠模型[10,11],探讨了SWE评估肝损伤大鼠肝纤维化程度的价值,现将结果报道如下㊂1㊀资料与方法1.1动物㊁试剂与仪器㊀SPF级雄性SD大鼠52只,体质量为200~220g,购自安徽医科大学实验动物中心[SCXK(皖)2017-001],光/暗周期为12h,平均室温为23ħ㊂40%CCl4橄榄油溶液和5%水合氯醛溶液㊂西门子OXANA3彩色超声诊断仪,9L4线阵探头,频率为4~9MHZ㊂1.2模型制备与SWE检测㊀适应性饲养1w㊂将大鼠随机分为对照组12只和实验组40只,后者包括注射药物4w㊁6w㊁8w和10w,每组10只㊂在实验组,给予40%CCl4橄榄油溶液2ml.kg-1腹腔注射,首次剂量加倍,以后2次/w,分别进行4w㊁6w㊁8w 和10w;在对照组,给予同等量0.9%生理盐水腹腔注射㊂检查前,禁食8~12h,给予5%水合氯醛腹腔注射麻醉,备皮,左侧卧位,涂抹1cm厚耦合剂㊂使用超声诊断仪扫查肝脏,在肝脏中叶避开大血管㊁胆道和叶间裂区域,启动VTQ模式,于距离体表1.0 cm处选择ROI,取三个点采用SWE行肝脏硬度检测(LSMs),分别测量5次,取平均值㊂采用颈椎脱臼法处死大鼠,在呼吸心跳停止后再立即行LSMd 检测[12]㊂1.3血生化指标检测㊀使用全自动生化分析仪检测血生化指标,使用血液细胞分析仪检测血常规指标,计算APRI[=AST(U/L)/正常上限ˑ100/PLT(ˑ109/L)]和FIB-4[=年龄(岁)ˑAST(U/L)]/[(PLT (ˑ109/L)ˑALT(U/L)][13]㊂1.4肝组织病理学检查㊀取部分肝组织,于10%中性福尔马林溶液中固定,包埋㊁切片,行HE和Masson染色㊂另取部分肝组织行冰冻切片,经油红O染色㊂对所有切片进行SAF评分:S代表肝脏脂肪变㊁A代表肝脏炎症活动度,F代表纤维化㊂肝细胞脂肪变性:0分(<5%),1分(5%~33%),2分(34%~66%),3分(>66%);炎症活动程度:包含肝小叶内炎症和气球样变性㊂肝小叶内炎症:0分(无),1分(每个肝小叶内有1~2个坏死灶),2分(每个肝小叶内有2个以上坏死灶)㊂气球样变性:0分(正常立方体型肝细胞,锐角明显,细胞呈粉红色),1分(肝细胞聚集成团,网格状,胞质空化,形状不一),2分(在1分基础上存在一个肿大气球样细胞,在一簇是1分气球样变性肝细胞中至少存在一个是其他气球样变性细胞两倍大小的细胞)㊂肝纤维化:0分(无纤维化),1分(中央静脉周围或汇管区纤维化),2分(中央静脉周围和汇管区纤维化),3分(桥接纤维化),4分(肝硬化)[13]㊂1.5统计学分析㊀应用SPSS22.0软件进行统计学分析,先应用Shapiro-Wilk检验计量资料的正态分布,对符合正态分布者以(xʃs)表示,采用t检验,对非正态分布者以[M(P25,P75)]表示,采用Mann-Whitney检验㊂以病理学检查为金标准,应用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线下面积(AUC)分析指标诊断显著性肝纤维化的效能,计算诊断的敏感度和特异度㊂P<0.05为差异有统计学意义㊂2㊀结果2.1模型制备情况㊀对照组12只大鼠全部成活;36只实验组动物造模成功,4只死亡㊂随着实验时间延长,大鼠肝纤维化程度逐渐变得显著(表1㊁图1)㊂表1㊀不同分组大鼠病理学结果只数脂肪变(0/1/2/3)炎症活动(0/1/2/3/4)纤维化(0/1/2/3/4)对照组12(10/2/0/0)(12/0/0/0/0)(12/0/0/0/0)实验组4w8(0/0/3/5)(0/1/3/3/1)(0/4/3/1/0)㊀㊀㊀6w10(0/0/4/6)(0/3/2/4/1)(0/1/4/3/2)㊀㊀㊀8w9(0/0/4/5)(0/0/1/4/4)(0/1/2/3/3)㊀㊀㊀10w9(0/0/4/5)(0/0/1/2/6)(0/0/0/4/5)图1㊀两组大鼠肝组织病理学表现㊀(A㊁B:HE,100ˑ;C㊁D:Masson染色,200ˑ;E㊁F:油红染色,200ˑ)A:对照组肝小叶结构正常,未见明显细胞坏死;B:实验组动物肝小叶结构破坏,肝细胞变性,点灶状坏死(箭头所示);C:对照组肝组织无纤维组织增生;D:实验组肝组织纤维组织增生,纤维间隔形成(箭头所示);E:对照组肝组织无脂肪变性;F:实验组肝细胞广泛大泡状脂肪变性(箭头所示)2.2㊀两组大鼠肝脏超声表现见图2㊂2.3非显著性与显著性肝纤维化大鼠有关指标比较㊀将F0/F1期肝纤维化定义为非显著性肝纤维化(n=18),将F2~F4定义为显著性肝纤维化(n= 30),结果两组APRI㊁FIB-4和不同状态下测量的图2㊀大鼠肝脏SWE检测A:对照组大鼠肝脏实质回声细密均匀,LSM为3.6 kPa;B:实验组大鼠肝脏实质回声增粗,分布欠均匀,LSM 为8.4kPaLSM比较,差异均有统计学意义(P<0.05,表2)㊂表2㊀非显著性与显著性肝纤维化大鼠有关指标(xʃs)比较非显著(n=18)显著(n=30) APRI0.05ʃ0.02①0.14ʃ0.12 FIB-40.13-100ʃ0.09-100①0.25-100ʃ0.13-100 LSMs(kPa) 5.2ʃ1.7①9.7ʃ2.8 LSMd(kPa) 3.6ʃ0.8①8.8ʃ1.7㊀㊀与显著性肝纤维化组比,①P<0.052.4各指标诊断价值分析㊀无论存活还是死亡状态下测量的LSM诊断显著性肝纤维化的AUC均显著大于APRI或FIB-4,差异有统计学意义(P<0.05,表3)㊂表3㊀各指标诊断大鼠显著性肝纤维化的效能截断点AUC95%CI敏感度(%)特异度(%) APRI0.0710.750.73~0.9173.185.6 FIB-40.163-1000.690.81~0.8868.579.4 LSMs(kPa)7.60.91①76.3~97.376.787.5 LSMd(kPa) 6.50.93①85.5~99.785.792.0㊀㊀与APRI或FIB-4比,①P<0.053㊀讨论准确判断肝损伤患者肝纤维化程度对及时干预有着重大的意义㊂目前,判断肝损伤患者肝纤维化程度的金标准是肝活组织病理学检查㊂然而,穿刺活检是一种侵袭性操作,存在发生潜在并发症的可能[14,15]㊂肝纤维化是一个连续性的过程,组织学结果是一个半定量分级,肝活检不适合作为连续随访及监测治疗的手段㊂如何无创㊁简便㊁准确㊁可重复地评估肝损伤患者肝纤维化程度是亟需解决的问题㊂近年来,越来越多的研究报道无创性评估肝纤维化程度的方法,如SWE㊁APRI和FIB-4评分等㊂虽然这些方法不能完全替代肝脏穿刺活检,但是由于它们都简便㊁可重复,具有较高的临床应用价值㊂SWE作为一门新技术,基于超声探头发射低频声辐射力脉冲,引起组织位移,通过测量组织运动产生的横向波的速度进行剪切波弹性成像,以其无创㊁简便㊁可重复㊁价格低廉等优点常用来评估乙型肝炎肝纤维化[16],并写入各大指南㊂本实验采用腹腔注射CCl4橄榄油溶液诱导肝损伤大鼠模型,是最早且最广泛应用的经典动物模型㊂本研究建模成功㊂SWE测量结果容易受到多种因素的影响,如呼吸㊁体位㊁心跳㊁探头压力等[17],尤以呼吸和心跳为著㊂在实验中,我们在麻醉状态下和处死后立即获得LSM,经ROC分析结果显示两种测量方法获得的LSM诊断显著性肝纤维化的AUC分别为0.91和0.93,表明采用SWE检测评估肝纤维化具有良好的诊断价值㊂学者们研究认为SWE检测诊断肝纤维化分期具有较高的应用价值[18,19]㊂在临床上,常应用APRI和FIB-4等指标反映肝纤维化程度[20]㊂通过比较非显著性肝纤维化与显著性肝纤维化组APRI㊁FIB-4和LSM,发现存在显著性差异㊂应用ROC曲线分析发现LSMs和LSMd 诊断显著性肝纤维化的AUC分别为0.91和0.93,显著大于APRI或FIB-4诊断,表明采用SWE评估肝损伤大鼠肝纤维化程度的效能优于APRI或FIB-4㊂有研究应用SWE评估慢性乙型肝炎患者肝纤维化程度,结果也很好[21]㊂有研究报道应用APRI可以较准确地评估肝硬化患者F3/F4分期肝纤维化[22]㊂也有人认为应用APRI和FIB-4诊断慢性乙型肝炎患者肝纤维化程度的效能相似[23]㊂综上所述,本研究在CCL4诱导模型,采用SWE 检测LSM诊断肝损伤大鼠肝纤维化程度,发现其具有较高的应用价值,显著优于血液和血清指标㊂应用SWE评估肝损伤大鼠显著性肝纤维化具有较高的诊断效能,操作简便,准确率高,可重复性强,具有一定的研究应用价值㊂ʌ参考文献ɔ[1]廖月,何毅怀,罗亚文.氧化应激在急性肝损伤中的作用.临床肝胆病杂志,2022,38(10):2402-2407.[2]Björnsson ES.Epidemiology,predisposing factors,and outcomes ofdrug-induced liver injury.Clin Liver Dis,2020,24(1):1-10.[3]中华医学会超声医学分会介入超声学组弹性成像评估肝纤维化专家组.二维剪切波弹性成像评估慢性乙型肝炎肝纤维化临床应用指南.中华超声影像学杂志,2017,26(11):921-927. 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《截短TGF-βⅡ型受体对肝纤维化大鼠上皮间质转化的影响》一、引言肝纤维化是一种常见的肝脏疾病，其病理过程涉及多种细胞因子和信号通路的相互作用。

转化生长因子-β（TGF-β）作为关键的纤维化介质，在肝纤维化进程中扮演着重要角色。

TGF-βⅡ型受体作为TGF-β信号转导的关键组成部分，其表达和功能与肝纤维化的发生、发展密切相关。

近年来，截短TGF-βⅡ型受体的研究逐渐成为肝纤维化治疗的新方向。

本文旨在探讨截短TGF-βⅡ型受体对肝纤维化大鼠上皮间质转化的影响，以期为肝纤维化的治疗提供新的思路。

二、材料与方法1. 材料（1）实验动物：选用成年SD大鼠，建立肝纤维化模型。

（2）试剂与药品：截短TGF-βⅡ型受体抑制剂、免疫组化试剂、Western blot试剂等。

（3）仪器设备：显微镜、酶标仪、Western blot仪等。

2. 方法（1）肝纤维化大鼠模型的建立：通过化学方法诱导大鼠肝纤维化。

（2）实验分组：将大鼠随机分为对照组、模型组、截短TGF-βⅡ型受体抑制剂组。

（3）给药与处理：各组大鼠分别接受相应处理，包括生理盐水注射、模型诱导剂注射、截短TGF-βⅡ型受体抑制剂注射等。

（4）样品收集与检测：收集大鼠肝脏组织，进行免疫组化、Western blot等检测，分析各组大鼠上皮间质转化的程度及TGF-βⅡ型受体的表达情况。

三、实验结果1. 肝纤维化大鼠模型的成功建立：通过化学方法成功诱导大鼠肝纤维化，模型组大鼠肝脏组织出现明显的纤维化改变。

2. 截短TGF-βⅡ型受体对肝纤维化大鼠上皮间质转化的影响：与模型组相比，截短TGF-βⅡ型受体抑制剂组大鼠的上皮间质转化程度明显减轻，表现为间质细胞数量减少、上皮细胞形态恢复等。

同时，该组大鼠肝脏组织中TGF-βⅡ型受体的表达也明显降低。

3. 免疫组化和Western blot结果分析：免疫组化结果显示，截短TGF-βⅡ型受体抑制剂组大鼠肝脏组织中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）等间质细胞标志物的表达降低，而上皮细胞标志物的表达增加。