耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的耐药机制及流行特征研究
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碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌的分子生物学及其临床感染特征研究细菌耐药性目前已成为全球性关注的问题,耐药细菌所致感染已构成新世纪抗感染治疗的新挑战,是当前人类健康和生命面临的主要威胁。
肠杆菌科细菌分布广,与人类关系密切。
在医院感染中,肠杆菌科细菌包括大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌等是引起医院感染最常见的病原菌,并以多重耐药菌株引起的感染为显著特点。
碳青霉烯类抗生素是目前临床治疗产超广谱β-内酰胺酶(Extended Spectrumβ-Lactamases, ESBLs)及AmpC酶等多重耐药菌株所引起感染的最有效的抗菌药。
但随着该类抗生素在临床上的广泛应用及不合理使用,临床上已出现对碳青霉烯类抗生素耐药的菌株。
目前国内外关于肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制报道主要集中在四个方面:①产生碳青霉烯酶,如IMP型和VIM型金属酶以及KPC (Klebsiella pneumoniae carbapenemase, KPC)型碳青霉烯酶等;②ESBL和/或AmpC酶过度表达同时合并外膜孔蛋白的丢失;③外排泵高表达的膜屏障机制;④药物靶位改变。
在上述几种耐药机制中,产碳青霉烯酶是肠杆菌科细菌对碳青霉烯类耐药最主要的机制。
骆俊等人对2003年6月到2004年5月华山医院临床分离的耐亚胺培南的革兰阴性杆菌中的碳青霉烯酶进行了筛查,发现细菌产碳青霉烯酶是不动杆菌和弗劳地柠檬酸杆菌对亚胺培南和美罗培南等碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因之一。
沈继录等人采用琼脂稀释法测定亚胺培南和美罗培南对199株革兰阴性杆菌的最低抑菌浓度(MIC),结果显示耐碳青霉烯类革兰阴性杆菌对12种抗生素的耐药率均高于碳青霉烯类敏感革兰阴性杆菌的耐药率,而且产生多种碳青霉烯酶,如KPC、IMP、VIM和OXA型碳青霉烯酶等,并在弗劳地柠檬酸杆菌、鲍曼不动杆菌和肺炎克雷伯菌中有产酶克隆株的流行。
在巴西,肠杆菌科细菌中对碳青霉烯耐药已成为主要问题,特别是产KPC酶的耐药株已在多个地区报道。
碳青霉烯肺炎克雷伯菌(Kpn)的分布特点及耐药性陈波;易涛平【摘要】目的探讨耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(Kpn)的分布特点及其耐药性的变化.方法 5986株Kpn送检标本中筛选出247株耐碳青霉烯类Kpn作为研究对象,通过临床资料收集与试验,了解耐碳青霉烯类Kpn的分布特点及耐药性变化趋势,并应用Spearman相关性法分析耐碳青霉烯类Kpn发生的高危因素.结果耐碳青霉烯类Kpn标本来源科室主要为ICU、呼吸内科与神经内科,菌株分离途径主要为痰液与尿液;Kpn标本不仅对碳青霉烯类抗生素高度耐药,对临床常用头孢类、喹诺酮类抗生素也呈高度耐药,其检出率呈逐年上升趋势.耐碳青霉烯类Kpn的发生与高龄、合并基础疾病、侵入性操作、长期住院、抗菌药物应用时间长等因素呈正相关(r值分别为:0.218、0.354、0.268、0.270、0.319,P<0.05).结论耐碳青霉烯类Kpn 的检出率逐年升高,临床应加强对高危科室的防控与监测,强化感染预防与控制措施,以避免耐碳青霉烯类Kpn的传播与流行.【期刊名称】《河北医药》【年(卷),期】2019(041)008【总页数】3页(P1254-1256)【关键词】肺炎克雷伯菌;碳青霉烯类抗生素;分布特点;多重耐药;变化趋势【作者】陈波;易涛平【作者单位】642150 四川省隆昌市人民医院呼吸内科;642150 四川省隆昌市人民医院呼吸内科【正文语种】中文【中图分类】R378.2碳青霉烯类抗生素是由青霉素结构改造而成的一类非典型的β-内酰胺抗菌药,其适用范围广、抗菌作用强,且毒性比较低,在临床上有着较为广泛的应用[1,2]。
但很多医院对碳青霉烯类抗生素的使用并不规范,长期、大量滥用所导致的细菌耐药问题也愈加严峻。
而肺炎克雷伯菌(Klebsiella Pneumoniae,Kpn)是一种容易感染于患者肠道、上呼吸道的肠杆菌,在泌尿道、颅脑、下呼吸道等部位也可能引起感染[3]。
耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌感染的危险因素及耐药机制的研究胡小飞厉银平刘桂霞彭清臻王锋【摘要】目的探讨耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌感染的危险因素及耐药机制。
方法对我院2018年6月1日-2019年5月31日57例耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(CRKP)感染患者和70例碳青霉烯敏感肺炎克雷伯菌(CSKP)感染患者进行回顾性分析。
结果CRKP感染患者主要分布在呼吸科31.6%(18/57)、神经内科21.1%(12/57)、神经外科14%(8/57)和ILU10.5%(6/57),感染部位以下呼吸道感染78.9%(45/57)和泌尿道感染17.8%(8/57)为主;相比CSKP感染组,使用两种或三种抗生素患者的比例在CRKP感染组中显著增加。
多元L wp U c回归分析显示,1月内使用三代头抱/酶抑制剂、1月内使用碳青霉烯类以及留置尿管为CRKP感染的独立危险因素。
57株CRKP菌株中,有39株(68.4%)携带biKPC基因,6株(10.5%)携带bilMP基因$结论CRKP菌株日见增多,规范化使用碳青霉烯类抗生素,减少或缩短侵入性医疗操作有利于降低CRKP感染的发生率;产KPC型碳青霉烯酶是CRKP菌株对碳青酶烯类耐药的最主要耐药机制。
【关键词】肺炎克雷伯菌;碳青霉烯类耐药;危险因素;碳青霉烯酶基因Risk factors and drrg resistancc mechanism of carbapenem-resistant KUbsieea pnenmoniae infectionHU Xiao-fei,LI Yitfing,LI Gui-fi,PENG Qing-zZee,WANG FengDepartment of RespiratorS and Critical Can Medicine,Xiaogan Hospital0ffiliate0m Wuhan Universito f Science and TecCnology,Xiaogan,Hubei432000,China(Abstract]Objective To investigate the risk factors and drug resistance mechanism of carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae infection.Methods A retrospective analysis was conducted on57patients with carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae(CRKP)infection and70patienO with carbapenem sensitive Klebsiella pneumoniae (CSKP)infection in our hospital from June1,2018to May31,2019.ResUs The patients with CRKP infection weeemainiydisieibuied in eespieaioeydepaeimeni(31.6%),neueoiogydepaeimeni(21.1%),neueosuegeeydepaei-meni(14%)and ICU(10.5%).Loweeeespieaioeyieaciineeciion(78.9%)and ueinaeyieaciineeciion(17.8%) weeeihemain ineeciion paeed wiih iheCSKPineeciion geoup,ihepeopoeiion oepaiienisusingiwooeiheee aniibioiicsinceeased signieicaniiyin iheCRKPineeciion geoup.Muiiipieiogisiiceegee s ion anaiysisshowed ihaiihe use of thPd-aeneration cephalosporins/enzyme inhibitors within one month,carbapenem antibjotics within one month and indwe i ingcaiheieeweeeindependenieik eacioeeoeCRKPineeciion.Oeihe57CRKPHieainH,39(68.4%)cae-ried blaKPC gene and6(10.5%)carried blalMP gene.Conclusion The number of CRKP strains is increasing day by day,standardizing the use of carbapenem antibiotics and reducing or shortening invesive medical procedures are beneeiciaiioeeduceiheincidenceoeCRKPineeciion.Thepeoduciion oeKPCiypecaebapenem isihemosiimpoeiani mechanism oecaebapenem eesisianceoeCRKPsieains.(Keywords]Klebsiella pneumoniae;carbapenem-resistant;risk factor;carbapenemase gene肺炎克雷伯菌是医院获得性感染检出排名仅次于大肠埃希菌的革兰氏阴性杆菌,是造成呼吸道、泌尿道、血流等多个部位感染的重要致病菌之一。
耐碳青霉烯类肺炎克雷伯杆菌的感染现状及治疗进展摘要:本文首先对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯杆菌(CRKP)的感染现状进行了分析,其次对其抗感染治疗的最新研究进展分别按照药物种类从β-内酰胺酶抑制剂、β-内酰胺类抗生素、氨基糖苷类抗生素、甘氨酰环素类抗生素、多肽类抗生素及中西医结合治疗的角度进行了分析,现综述如下:关键词:耐碳青霉烯类;肺炎克雷伯菌;抗感染;耐药;机制由于临床抗生素的长期大量应用,耐碳青霉烯类肺炎克雷伯杆菌(Carbapenem-Resistant Klebsiella Pneumoniae,CRKP)感染发病率逐年增加,耐药性的增加,使得治疗该病可供选择的药物类型不断减少,临床治疗难度提升。
对比,本文针对CRKP的感染现状及治疗的最新进展开展综述,以期能为循证医学提供临床指导。
2.1感染现状其中CRKP占CRE菌种感染的73.9%;从国内的耐药区域分布分析,河南省最高;从感染部位上分析,下呼吸道感染占比最高。
近年来CRKP的检出率正不断上升,2014年数据为6.4%,而2019年数据则攀升至10.9%,可见细菌耐药已成为危害全球卫生健康的重大卫生问题之一[1]。
2.2治疗进展2.1 β-内酰胺酶抑制剂其中以药物阿维巴坦为代表,该药物抑酶作用较为长效。
临床为强化该药的抗菌活性,常采用复合给药的方式,与头孢他啶相联合。
临床给药时,针对老年人,给药依据参照患者肾功能水平;而针对≥18岁以上人群,建议根据血药浓度水平及年龄调整剂量。
最新研究显示,头孢他啶-阿维巴坦杀灭肺炎克雷伯菌的效果较为显著。
数据结果显示,90%的抑菌浓度为8mg/L、50%的抑菌浓度为4mg/L[2]。
2.2 β-内酰胺类抗生素其中以美罗培南为代表,该药物的抗菌效果较为强力。
最新临床研究结果显示,针对菌群最低抑菌浓度≤8mg/L的KPC型肺炎克雷伯菌感染患者,应用美罗培南治疗,患者存活率提升较为显著。
研究者又进行了另一项实验,将菌群的最低抑菌浓度调整至≥16mg/L,结果显示美罗培南同样具备保护患者的效果。
文章编号:1001-8689(2021)05-0468-06收稿日期:2020-10-29作者简介:黄晓琳,生于1922年,女,在读硕士研究生,主要研究方向临床微生物检验和耐药机制,E-mail:********************通讯作者:E-mail:*****************2015—2019年我院肺炎克雷伯菌的感染特征与耐药机制黄晓琳1 李明2 范晓怡1 刘菊珍1 黄云祖1 李小丽1 邹海珠1*(1 暨南大学附属第一医院临床检验中心 广州 510630; 2 东莞市滨海湾中心医院 东莞 523000)摘要:目的 分析2015—2019年广州暨南大学附属第一医院肺炎克雷伯菌的感染情况和耐药性变迁,并进一步探讨其耐药机制,为临床防治肺炎克雷伯菌感染用药提供实验室依据。
方法 采用回顾性分析方法,对我院2015—2019年分离的1514株肺炎克雷伯菌进行标本来源、科室分布、耐药性变化等分析,并对其中123株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)采用改良碳青霉烯类失活法(mCIM)和EDTA 碳青霉烯类失活法(eCIM)进行碳青霉烯酶表型筛选试验,并通过PCR 方法检测bla KPC 、bla VIM 、bla IMP 和bla NDM 4种最常见的碳青霉烯酶耐药基因。
结果 2015—2019年期间我院肺炎克雷伯菌每年的平均分离率为9.44%,从临床标本分布来看,主要分离自痰液(47.36%)、尿液(23.51%)和血液(16.51%);从临床科室分布来看,分离率最高的依次是ICU 病区(17.83%)、呼吸病房(17.83%)和神外病房(9.11%)。
肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类药物的耐药率相对较低(10%~30%),但在2019年明显上升;对喹诺酮类、头孢类、单环类、四环素类、磺胺类药物耐药率较高(30%~50%);除头孢哌酮/舒巴坦和复方磺胺甲噁唑外,对其他抗菌药物的耐药率均呈上升趋势。
耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的耐药现状及耐药机制研究
刘昆;李文强
【期刊名称】《临床医学进展》
【年(卷),期】2022(12)10
【摘要】肺炎克雷伯菌作为革兰氏阴性机会致病菌,常定植于人体口腔、呼吸道、胃肠道、泌尿道,是引起院内和社区获得性感染中重要的肠杆菌科。
碳青霉烯类抗生素是治疗肺炎克雷伯菌感染的常用药物,然而,随着近年来临床上碳青霉烯类抗菌药物的广泛使用,耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的患病率以惊人的速度上升,其多重耐药性正在成为一个日益严重的全球性问题,为临床治疗带来了巨大挑战。
本文就近年来耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的耐药现状及分子耐药机制进行综述,为预防及有效遏制该菌的传播提供依据。
【总页数】7页(P9507-9513)
【作者】刘昆;李文强
【作者单位】济宁医学院临床医学院济宁;山东省济宁市第一人民医院重症医学科济宁
【正文语种】中文
【中图分类】R44
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药机制的研究进展4.耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌对替加环素的耐药机制研究进展5.耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药机制的研究进展
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肺炎克雷伯菌耐碳青霉烯类抗菌药的研究进展唐小红;朱卫民【摘要】肺炎克雷伯菌是一种常见的机会性致病菌,为医院内感染的重要病原菌之一.近年来,肺炎克雷伯菌的感染率及耐药率呈上升趋势,碳青霉烯类抗菌药是治疗该菌最有效的抗菌药物,但随着使用的增加,其耐药性也不断增加.本文就肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制:产生碳青霉烯酶、青霉素结合蛋白对碳青霉烯类亲和力的下降、高产AmpC酶或ESBLs合并外膜蛋白缺失、生物被膜、主动外排系统等方面的研究进展作一综述.【期刊名称】《国外医药(抗生素分册)》【年(卷),期】2014(035)003【总页数】5页(P115-118,122)【关键词】肺炎克雷伯菌;碳青霉烯酶;碳青霉烯类抗生素;细菌;耐药性【作者】唐小红;朱卫民【作者单位】重庆医科大学附属第一医院感染科, 重庆400016;重庆医科大学附属第一医院感染科, 重庆400016【正文语种】中文【中图分类】R378肺炎克雷伯菌(Kpn)属于克雷伯菌属的7个亚种之一—肺炎克雷伯菌肺炎亚种,革兰阴性菌,是重要的条件致病菌。
常导致肺炎、支气管炎、泌尿道和创伤感染等医院感染。
近十年来,因青霉素与头孢类抗菌药的大量及广泛使用,尤其是第3代头孢抗菌药的使用,肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类抗生素为主的各种抗菌药的耐药性不断增强,该耐药菌的出现加剧了各种难治性感染,使治疗十分棘手 [1-3]。
碳青霉烯类抗生素因其广谱的抗菌活性,对超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、头孢菌素酶(AmpC)稳定,持续的抗菌后效应[4]等特点,已成为临床治疗革兰阴性菌引起严重感染的一线药物[5],更成为治疗肠杆菌科细菌引起严重感染的首选药物。
但随着应用的增加,对其耐药的报道也逐渐增多。
探究其耐药机制有:产生碳青霉烯酶,青霉素结合蛋白对碳青霉烯类亲和力的下降,高产AmpC酶或ESBLs合并外膜蛋白缺失,生物被膜,主动外排系统。
本文就近年来肺炎克雷伯菌耐碳青霉烯类抗菌药的主要作用机制作一介绍,分述如下。
耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的耐药性及分子机制研究安童童;赵志军;李刚;康宇婷;刘学雷;杨宁爱;贾伟【摘要】目的探讨耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的耐药性及其分子机制.方法采用WHONET 5.6软件对某三甲综合教学医院2014-2016年分离的肠杆菌科中耐亚胺培南的细菌进行初筛,采用肉汤稀释法检测碳青霉烯类抗生素对细菌的最低抑菌浓度(MIC),用PCR方法检测blaNDM、blaKPC-2、blaCTX-M-15、blaOXA-48等耐药基因;利用测序方法鉴定blaNDM亚型.结果共筛选出92株耐药菌,标本来源主要为胆汁、痰和无菌中段尿,92株耐药菌主要分离自肝胆外科、ICU和血管外科.药敏试验表明92株耐药菌对阿米卡星的敏感率最高(88%),对其他抗生素敏感率均较低,对头孢呋辛、头孢唑啉和亚胺培南的敏感率低至0.应用PCR检测耐药基因,其中blaNDM、blaCTX-M-15、blaTEM和blaSHV检出率较高,分别为64.1%、64.1%、91.3%和72.8%;blaKPC-2和blaVIM阳性率较低,分别为13.0%和3.3%,未检测出blaOXA-48耐药基因;测序发现59株blaNDM阳性菌中有35株为blaNDM-1,24株为blaNDM-5.结论耐碳青霉烯的肠杆菌科细菌耐药基因检出率高;宁夏地区首次发现blaNDM-5亚型;blaNDM型耐药基因的阳性率高,应加强对基因的监测,控制其在医院内的传播流行.%Objective To explore the molecular epidemiology and mechanism of bacteria resistant to carbapenem-resistant Enterobacteriaceae. Methods The WHONET5.6 software was used to screen the imipenem-resistant bacteria in Enterobacteriaceae isolated from a comprehensive teaching hospitalin2014-2016. The positive strains were tested for the minimum inhibitory concentration of carbapenem by broth dilution method. The blaNDM, blaKPC, blaCTX-M-15 and blaOXA-48 resistance genes were detected byPCR.NDM subtypes were identified by sequencing. Results A total of 92 resistant strains were screened. The main sources of samples were bile, sputum and aseptic midstream urine. 92 strains of resistant bacteria were mainly isolated from hepatobiliary surgery, ICU and vascular surgery. Drug susceptibility test showed that 92 resistant strains had the highest sensitivity to amikacin (88%), lower sensitivity to other antibiotics, and the susceptibility to cefuroxime, cefazolin and imipenem was as low as 0. PCR was used to detect drug resistance genes. The detection rates of blaNDM, blaCTX-M-15, blaTEM and blaSHV were 64.1%, 64.1%, 91.3% and72.8%, respectively. The positive rates of blaKPC-2 and blaVIM were 13.0% and 3.3%, respectively. No blaOXA-48 resistant genes were detected. 35 of 59 blaNDM-positive strains were blaNDM-1 and 24 were blaNDM-5. Conclusion Detection rates of resistance genes in Carbapenem-resistant Enterobacteriaceae were very high which may cause nosocomial infections. blaNDM-5 subtype was found in Ningxia for the first time, and the positive rate of blaNDM type resistance gene was high. We should strengthen the monitoring of blaNDM type drug-resistant strains to control their spread in the hospital.【期刊名称】《宁夏医科大学学报》【年(卷),期】2019(041)001【总页数】5页(P19-23)【关键词】肠杆菌科;碳青霉烯酶;新德里金属-β-内酰胺酶-1;耐药基因【作者】安童童;赵志军;李刚;康宇婷;刘学雷;杨宁爱;贾伟【作者单位】宁夏医科大学临床医学院, 银川 750004;宁夏医科大学总医院医学实验中心, 银川 750004;宁夏病原微生物重点实验室, 银川 750004;宁夏医科大学总医院医学实验中心, 银川 750004;宁夏病原微生物重点实验室, 银川 750004;宁夏医科大学临床医学院, 银川 750004;宁夏医科大学临床医学院, 银川 750004;宁夏医科大学临床医学院, 银川 750004;宁夏医科大学总医院医学实验中心, 银川750004;宁夏病原微生物重点实验室, 银川 750004【正文语种】中文【中图分类】R378.2肠杆菌科细菌分布广泛,多数为肠道正常菌群,部分为致病菌,在某些情况下,尤其是免疫缺陷、粒细胞缺乏患者易引起各种严重感染,如下呼吸道、消化道、泌尿道、手术切口等多部位感染,故称为条件致病菌,是医院感染性疾病最重要的致病菌,已成为医学界共同关注的问题[1]。
・732・宁夏医学杂志2021年8月第43卷第8期Ningxia Med J,Aug.2021,Vol.43,No.8 Doi:10.13621/j.1001-5949.2021.0&0732•实验研究•NICU分离碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌分子流行病学特征任峥,邹翠美[摘要]目的研究新生儿重症监护病房(NICU)中碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)流行特征及耐药机制。
方法收集某三甲医院NICU的CRKP11株,采用自动化仪器法或纸片扩散法(K-B法)检测其对常用抗菌药物的耐药性,乙二胺四乙酸(EDTA)协同试验和3〜氨基苯硼酸(APB)协同试验进行碳青霉烯酶表型分析,PCR扩增及DNA测序进行碳青霉烯酶基因型确证,多位点序列分型(MLST)检测菌株间基因的相关性。
结果11株NICU的菌株对多黏菌素E、阿米卡星、摩诺酮类等抗菌药物均敏感,对B-内酰胺类抗菌药物表现出高度耐药,对头抱菌素耐药率均为100%,对亚胺培南、美罗培南、厄他培南的耐药率均是100%o PCR及DNA测序显示11株CRKP中9株产NDM-5,2株产IPM-24,同时均产超广谱0-内酰胺酶是CTX-M-3、CIX-M-15和CTX-M-65O MLST分型显示,8株菌是ST17型,2株ST357型,1株ST2740型。
结论某院NICU病房的CRKP主要是产耐碳青霉烯酶B类酶NDM-5型金属酶,而且具有高度相关性。
[关键词]NICU;肺炎克雷伯菌;碳青霉烯酶[中图分类号]R378[文献标识码]AMolecular epidemiological characteristics of carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae in pediatric patients from NICU REN Zheng,ZOU Cuimei.Clinical Laboratory,The First People,s Hospital of Yinchuan,Yinchuan750001,ChinaCorresponding author^ZOU Cuimei,Email:zoucuimei668@yeah,net[Abstract]Objective To study the epidemic characteristics and drug resistance mechanism of the carbapenem-resistant Klebisella pneumoniae(CRKP)in neonatal intensive care unit(NICU).Methods A total of11CRKP strains were isolated from NICU.The resistance to common antibiotics was detected by automatic instrument method or Kirby-Bauer(K-B method).The phenotypes of carbapenemase-producing strains were identifed by3*-aminophenylboronic acid(APB)or EDTA synergy test.The carbapen-emase genotype was confirmed by PCR amplification and DNA sequencing,Multilocus sequence typing(MLST)was used to detect the gene correlation among strains.Results11CRKP strains of NICU were susceptible to polymyxin E,amikacin and quinolones,they were highly resistant to p-Lactam antibiotics.The resistance rates to cephalosporins were100%,and the resistance rates to imipenem,mero-penem and ertapenem were100%.PCR and DNA sequencing analysis confirmed that99of11CRKP strains produced NDM—5and2 strains produced IPM-24.The MLST results showed that the8strains of K.pneumoniae were ST17and2strains of K.pneumoniae were ST357and1strains of K.pneumoniae were ST2740.Conclusion CRKP in NICU ward of the hospital mainly produces carbapenem resistant class B enzyme NDM—5metalloenzyme,which is highly correlated.[Key words]Children;Carbapenemase;Klebsiella pneumoniae全国细菌耐药监测网的流行病学调查显示⑴,碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)在中国儿童及新生儿患者检出率呈现缓慢上升趋势,引起医疗卫生领域的高度关注。
浙江临床医学2019年6月第21卷第6期·750··论著·
【摘要】 目的 研究医院耐碳青霉烯类抗生素耐药肺炎克雷伯菌的耐药机制和分子同源性,为医院感染的预防和控制提供可靠的研究基
础。方法 收集临床分离的碳青霉烯类抗生素耐药肺炎克雷伯菌;琼脂稀释法测定抗生素最低抑菌浓度(MIC);PCR特异扩增和序列比对分析研究细菌对碳青霉烯类抗生素耐药的分子机制及流行特征。结果 分离碳青霉烯类抗生素耐药的肺炎克雷伯菌共189株,均为产blaKPC-2
肺炎克雷伯菌,其对美罗培南、亚胺培南和厄他培南的MIC范围分别为2~128mg/L、4~128mg/L、4~128mg/L。其中5株细菌同时产blaVIM-1。
ERIC分型显示189株细菌分为a型、b型,其中a型较多(67.9%)。结论 院内可能有过携带blaKPC-2的肺炎克雷伯菌引起的医院内暴发流行,需要加强消毒隔离,防止进一步播散。【关键词】 肺炎克雷伯菌 碳青霉烯 KPC-2
【Abstract】 Objective To investigate the mechanism of reduced susceptibility to carbapenems of Klebsiella pneumoniae and its homology.
Methods The clinical isolates of carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae were collected,The minimum inhibitory concentration(MIC)
of antibiotics was determined by agar dilution method. The molecular mechanism and epidemiological characteristics of carbapenem-resistant bacteria were analyzed by PCR-specific amplification and sequence alignment. Results A total of 64 carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae strains were isolated. All of them were BlaKPC-2-producing Klebsiella pneumoniae. The MIC ranges of meropenem,imipenem and ertapenem were 2~128mg/L,4~128mg/L,4~128mg/L,respectively. 2 strains of bacteria produce blaVIM-1 simultaneously. ERIC typing showed that 64 strains of bacteria were classified into type A and B,among which type A was more(67.9%). Conclusion Hospital outbreaks caused by Klebsiella pneumoniae carrying blaKPC-2 may have occurred in hospitals,and disinfection and isolation should be strengthened to prevent further dissemination【Key words】 Klebsiella pneumoniae Carbapenem KPC-2
碳青霉烯类抗生素因其抗菌谱广、抗菌活性强、对ESBLs稳定及毒性低等优点,一直作为ESBLs菌株严重感染患者的首要选择,曾被称为临床治疗阴性菌所致严重感染的“最后一道防线”[1]。但近些年随着碳青霉烯类抗生素在临床的广泛使用,耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的报道越来越多[2]。其中KPC型碳青霉烯酶于2001年美国首先报道在肺炎克雷伯菌中发现的一种丝氨酸酶[3],能够水解亚胺培南、美罗培南和头孢菌素等多种临床常用一线抗菌药物,从而导致细菌多重耐药,对人类健康造成了严重的威胁。有研究显示[4],KPC基因位于质粒上,易在同一菌种不同菌株甚至不同菌种之间移动,造成局部暴发甚至世界范围内的扩散。耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)在巴西、中国台湾、日本、古巴等多个地区均有分离[5-8]。本研究对本院临床标本中CRKP的药物敏感性进行分析,以了解其耐药机制和流行特征。
1 材料与方法1.1 菌株来源 分离本院2017年1月至2018年6月临床标本中CRKP共189株。126株分离自痰液,23株分离自分泌物,20株分离自尿液,13株分离自全血,1株分离自脑脊液,6株分离自导管尖端。
1.2 试剂和仪器 Vitek 2 Compact 全自动细菌鉴定仪(法国bioMérieux公司),PCR扩增仪、Rotaphor System 6.0 脉冲场凝胶电泳仪、UVIBand PFGE 图像分析软件及紫外成像系统(德国Biometra公司),细菌多点接种仪(日本Oriental Motor公司),Taq酶及PCR相关试剂(日本TaKaRa),亚胺培南、美罗培南、厄他培南纸片(英国Oxoid公司),琼脂糖电泳仪。1.3 菌株鉴定及药敏试验 分离的细菌由Vitek 2 Compact全自动细菌鉴定仪进行菌种鉴定及药敏试验。碳青霉烯类抗生素药敏采用琼脂稀释法测定其最低抑菌浓度(MIC)。根据美国临床和实验室标准化协会(CLSI,2016)的解释标准判断药敏试验结果。1.4 细菌耐药基因PCR扩增及序列分析 细菌基因组DNA提取:根据产品说明书,通过水浴裂解、去蛋白、异丙醇沉淀和洗脱等步骤完成基因组DNA快速抽提。PCR反应体系为:引物各10pmol,含MgCl2的dNTP8μl,10×Buffer 2 5μl,Taq酶0.5μl,0.1μg基因组DNA,无菌纯水补足至50μl。PCR反应条件为:94℃ 4min,1个循环;94℃ 1min,退火1min,72℃延伸1min,35个循环;72℃充分延伸5min,1个循环。PCR产物在含EB的1.0%琼脂糖凝胶上100V恒压电泳30min,紫外灯下观察结果。PCR产物由上海生工生物工程技术服务有限公司测序。所得DNA序列与GenBank中的数据库进行比对,确定耐药基因型。耐药基因的引物序列、扩增长度等相关信息见表1。
耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的耐药机制及流行特征研究徐伟军 潘辉 陈西佳 赵褀
作者单位:318000 浙江省台州市中医院浙江临床医学2019年6月第21卷第6期·751·表1 耐药基因PCR扩增所用序列基因引物名称引物序列(5-3)扩增长度(bp)参考文献碳青霉烯酶基因blaKPC-2KPC-2FGCTACACCTAGCTCCACCTTC10503
KPC-2RTCAGTGCTCTACAGAAAACCblaIMIIMI-FATAGCCATCCTTGTTTAGCTC
IMI-RTCTGCGATTACTTTATCCTC81810blaIMP-1IMP-1-FTGAGCAAGTTATCTGTATTC
IMP-1-RTTAGTTGCTTGGTTTTGATG74010blaIMP-2IMP-2-FGGCAGTCGCCCTAAAACAAA
IMP-2-RTAGTTACTTGGCTGTGATGG73710blaVIM-1VIM-1-FTTATGGAGCAGCAACCGATGT
VIM-1-RCAAAAGTCCCGCTCCAACGA92010blaVIM-2VIM-2-FAAAGTTATGCCGCACTCACC
VIM-2-RTGCAACTTCATGTTATGCCG86510blaNDM-1NDM-1-FCTCGCACCGAATGTCTGGC
NDM-1-RCATTGGCGGCGAAAGTCA34111blaOXA-48OXA-48-FTTGGTGGCATCGATTATCGG
OXA-48-RGAGCACTTCTTTTGTGATGGC74410其它β-内酰胺酶基因blaTEMTEM-FTCGGGGAAATGTGCG
TEM-RTGCTTAATCAGTGAGGCACC97212blaSHVSHV-FGCCTTTATCGGCCTTCACTCAAG
SHV-RTTAGCGTTGCCAGTGCTCGATCA89812blaCTX-M-2组CTX-M-2-FCTCAGAGCATTCGCCGCTCA
CTX-M-2-RCCGCCGCAGCCAGAATATCC84312blaCTX-M-9组CTX-M-9-FGTTACAGCCCTTCGGCGATGATTC
CTX-M-9-RGCGCATGGTGACAAAGAGAGTGCAA88112
2 结果
2.1 CRKP药敏结果 本研究共分离到CRKP 189株,对亚胺培南耐药或中介耐药(MIC:2~128mg/L),对美罗培南和厄他培南均为耐药(MIC:4~128mg/L)。CRKP对头孢菌素、氨曲南、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星、和左氧氟沙星呈高水平耐药,对多粘菌素E、替加环素敏感性较高(见表2)。表2 肺炎克雷伯菌药物敏感试验结果(%)抗菌药物敏感率中介率耐药率头孢吡肟0.00.0100.0阿米卡星11.50.088.5左氧氟沙星0.09.590.5多粘菌素E100.00.00.0头孢哌酮/舒巴坦0.020.879.2氨曲南0.00.0100.0哌拉西林/他唑巴坦0.03.396.7替加环素82.212.55.3
2.2 耐药基因检测结果 189株肺炎克雷伯菌均产KPC-2型碳青霉烯酶,未检出NDM与IMP型金属β-内酰胺酶,其中5株同时产VIM-1型金属β-内酰胺酶,blaCTX-M-9、blaTEM、blaSHV检出率均>60%。见表3。表3 耐药基因检测结果分析耐药基因种类耐药基因阳性率(%)碳青霉烯酶基因blaKPC-2100.0
blaVIM-112.5
其它β-内酰胺酶基因blaCTX-M-987.5
blaTEM64.1
blaSHV76.6
2.3 染色体DNA同源性分析 应用UVIBand软件对PFGE条带进行分析显示,共有2种分型(a型、b型),其中a型较多,占67.9%。(见图1)。
3 讨论临床研究显示,大部分产blaKPC肺炎克雷伯菌分离自入住ICU 病房、患有心脑血管疾病的老年患者,提示这类患者是感染或携带产KPC-2肺炎克雷伯菌的
高危人群[9]。本研究收集到携带CRKP的患者中106