复方益母口服液中水溶性生物碱-盐酸水苏碱的HPLC法测定研究
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HPLC-ELSD测定益母草中盐酸水苏碱的含量冯旭;杜成智;梁臣艳;侯小涛;姚蓉;覃洁萍【期刊名称】《广西中医药》【年(卷),期】2007(030)006【摘要】目的:建立HPLC-ELSD法测定益母草中盐酸水苏碱的含量.方法:色谱柱为Lichrospher5-NH2柱(250mm×4.6mm,5μm);柱温为30℃;流动相为乙腈-水(90:10);流速1.0mL/min;进样量10μL;检测器参数:漂移管温度80℃,雾化室温度60℃,载气体积流量1.2mL/min.结果:盐酸水苏碱在1.05~5.26μg范围内呈良好的线性关系,r=0.9992;平均加样回收率为100.03%,RSD=1.4%(n=6).结论:该方法操作简单、快速、准确性高、重复性好,适合于益母草中盐酸水苏碱的定量分析.【总页数】2页(P53-54)【作者】冯旭;杜成智;梁臣艳;侯小涛;姚蓉;覃洁萍【作者单位】广西中医学院,530001,南宁市明秀东路179号;广西中医学院,530001,南宁市明秀东路179号;广西中医学院,530001,南宁市明秀东路179号;广西中医学院,530001,南宁市明秀东路179号;广西中医学院,530001,南宁市明秀东路179号;广西中医学院,530001,南宁市明秀东路179号【正文语种】中文【中图分类】R284.1【相关文献】1.益母草饮片中盐酸水苏碱、益母草碱含量测定的应用研究 [J], 尹金磊;关素珍2.HPLC-ELSD测定益母颗粒中盐酸水苏碱的含量 [J], 冯旭;杜成智;梁臣艳;侯小涛;王胜波;覃洁萍3.益母草颗粒中盐酸水苏碱与盐酸益母草碱的含量测定 [J], 王宁莉;张书华;王丽霞4.HPLC-ELSD法测定益母草颗粒中盐酸水苏碱的含量 [J], 王晓燕;王舒5.HPLC-ELSD法测定益母草流浸膏中盐酸水苏碱的含量 [J], 林冬杰;张会球因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
HPLC-ELSD测定益母颗粒中盐酸水苏碱的含量
冯旭;杜成智;梁臣艳;侯小涛;王胜波;覃洁萍
【期刊名称】《中成药》
【年(卷),期】2008(030)005
【摘要】益母草为唇形科益母草属植物(Leonurus japonicu Houtt.)的地上
部分,始载于《神农本草经》,其味辛、微苦,性微寒,人心包肝经,具有活血调瘀、利尿消肿之功效,是中医妇科良药。
对益母草中化学成分进行大量研究后发现,其主要化学成分为生物碱类、二萜类、甾醇、黄酮类、有机酸、多种微量元素及脂肪酸类等。
【总页数】2页(P附2-附3)
【作者】冯旭;杜成智;梁臣艳;侯小涛;王胜波;覃洁萍
【作者单位】广西中医学院,广西,南宁,530001;广西中医学院,广西,南宁,530001;广西中医学院,广西,南宁,530001;广西中医学院,广西,南宁,530001;广西中医学院,广西,南宁,530001;广西中医学院,广西,南宁,530001
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
【相关文献】
1.HPLC-ELSD测定八珍益母丸中水苏碱的含量 [J], 蒋歆;丁永辉;魏学冰;杨锡
2.高效液相色谱法测定益母颗粒中盐酸水苏碱含量 [J], 钟妍
3.薄层扫描法测定八珍益母膏中盐酸水苏碱的含量 [J], 林燕翔;樊春燕
4.HPLC法测定益母丸中盐酸水苏碱的含量 [J], 王艳华;冯翰;冯伟
5.HPLC-ELSD法测定益母草颗粒中盐酸水苏碱的含量 [J], 王晓燕;王舒
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RP-HPLC法测定益母草不同药用部位中盐酸水苏碱的含量(1)【摘要】目的测定益母草不同药用部位中盐酸水苏碱的含量,以控制药材质量。
方法采用HPLC法,色谱柱为磺酸基键合硅胶,流动相为20 mmol/L磷酸二氢钠溶液(含有0.04%三乙胺和0.15%磷酸),柱温25 ℃;检测波长192 nm,比较益母草花、茎、叶中盐酸水苏碱的含量。
结果益母草中盐酸水苏碱的含量叶中最高,茎中最少。
结论购买益母草药材以叶(包括碎叶片)多者为佳。
【关键词】益母草;盐酸水苏碱;高效液相色谱法Key words:Herba Leonuri;stachydrine hydrochloride;HPLC益母草为唇形科植物益母草Leonurus japonicus Houtt.的新鲜或干燥地上部分。
鲜品春季幼苗期至初夏花前期采割;干品夏季茎叶茂盛、花未开或初开时采割,晒干,或切段晒干[1]。
经深入安徽亳州产地考察得知,在益母草的产地加工过程中,为使商业外观好看,均进行“风选”,即将破碎叶片及果穗筛去,以外观齐整、方茎为主出售,导致以盐酸水苏碱为代表的有效物质生物碱含量下降。
由于药用部位是影响药材质量的主要因素之一,因此,我们考察了益母草不同药用部位中盐酸水苏碱的含量,以控制药材的质量。
1 仪器与试药Angilent HP1100高效液相色谱仪;G1314A紫外检测器;KQ-500DE型超声仪。
益母草药材购于广州广弘药材有限公司,经南方医科大学中医药学院药用植物与鉴定教研室陈兴兴鉴定为益母草 Leonurus japonicus Houtt.的干燥地上部分。
盐酸水苏碱对照品(批号0722-200108,中国药品生物制品检定所)。
水为高纯水;磷酸二氢钠、磷酸(色谱级,北京仁凡红建商贸有限公司);其余试剂均为分析纯。
2 方法及结果2.1 色谱条件色谱柱:Spherisorb SCX(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:20mmol/L磷酸二氢钠溶液(含有0.04%三乙胺和0.15%磷酸);柱温:25 ℃;流速:1.0 mL/min;检测波长:192 nm;进样量:10 μL。
HPLC测定复方益母草流浸膏中盐酸水苏碱含量王英姿;韩春超;赵瑞东【期刊名称】《山东中医药大学学报》【年(卷),期】2009(33)2【摘要】目的:建立复方益母草流浸膏中盐酸水苏碱的含量测定方法,为其质量控制提供依据。
方法:采用高效液相色谱法对复方益母草流浸膏中盐酸水苏碱的含量进行测定,色谱柱:scx强阳离子柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:0.5 mol磷酸二氢钾-三乙胺(1 000∶1.5)(磷酸调pH值2.25~2.3);检测波长:192 nm;流速1.0 ml.min-1;柱温:25℃。
结果:水苏碱的浓度在0.2~2.0 mg.ml-1范围内线性关系良好,r=0.9995,平均回收率为98.63%,RSD=1.21%(n=5)。
结论:该法简便、灵敏、准确,可用于复方益母草流浸膏的质量控制。
【总页数】2页(P157-158)【关键词】复方益母草流浸膏;HPLC;盐酸水苏碱【作者】王英姿;韩春超;赵瑞东【作者单位】北京中医药大学中药学院;山东中医药大学;山东中医药大学附属医院【正文语种】中文【中图分类】R284.1【相关文献】1.HPLC法测定复方杜仲丸中盐酸水苏碱与黄芩苷的含量 [J], 赵磊;于丹;赵宾2.HPLC测定益母草流浸膏中水苏碱的含量 [J], 陈洪涛;蔡丹昭;林立波;李娜3.HPLC-ELSD法测定益母草流浸膏中盐酸水苏碱的含量 [J], 林冬杰;张会球4.RP-HPLC-ELSD同时测定复方益母草胶囊中阿魏酸、盐酸水苏碱、梓醇、麦角甾苷的含量 [J], 钟颖5.HPLC法测定复方益芪颗粒中盐酸水苏碱的含量 [J], 费广明因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
HPLC测定益母草片中盐酸水苏碱含量周立伟;张赞【摘要】目的:建立益母草片中盐酸水苏碱含量的测定方法.方法:运用HPLC对盐酸水苏碱含量进行测定,色谱柱:强酸型阳离子交换色谱柱(200 mm×4.6mm,5μm),流动相:0.1%三乙胺的0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液,用磷酸调节pH值2.3,检测波长:192 nm,流速1.0 mL·min-1,柱温:室温.结果:盐酸水苏碱的量在25 ~300 μg· mL-1浓度同峰面积呈良好的线性关系.平均加样回收率为100.92%,RSD =0.43%.结论:所建立的方法可靠,可用于益母草片的质量控制.【期刊名称】《中国现代中药》【年(卷),期】2011(013)007【总页数】2页(P33-34)【关键词】益母草片;盐酸水苏碱;高效液相色谱法【作者】周立伟;张赞【作者单位】哈药集团三精制药股份有限公司,黑龙江哈尔滨 150069;哈药集团三精制药股份有限公司,黑龙江哈尔滨 150069【正文语种】中文益母草片是哈药集团三精制药股份有限公司生产的活血调经的中药制剂,其质量标准中盐酸水苏碱含量测定为沉淀称重法[1],但该法操作繁琐、测定周期长,误差较大,通过检索对其他含益母草的药品检测方法的文献发现,盐酸水苏碱含量测定方法较为常见的有薄层色谱法[2]、高效液相色谱法[2,3]、HPLC-ELSD法[5],本文应用高效液相色谱法测定益母草片中盐酸水苏碱含量并对其进行方法学考察,结果表明该法简便、快速、准确。
岛津2550紫外分光光度计、岛津LC20A高效液相色谱仪(DGU-20A5脱气机,LC-20AT高效泵,SPD-20A检测器,SIL-20A自动进样器)Lc-solution工作站软件,梅特勒电子分析天平。
三乙胺(分析纯,天津科密欧),磷酸二氢钾(分析纯,天津科密欧),磷酸(天津科密欧),0.45 μm微孔滤膜(津腾),溶剂过滤器。
HPLC法测定复方益母口服液中水苏碱含量 【编者按】医药论文是科技论文的一种是用来进行医药科学研究和描述研究成果的论说性文章。
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HPLC法测定复方益母口服液中水苏碱含量 【摘要】目的建立高效液相色谱法测定复方益母口服液中水苏碱的含量。
方法以Kromasil C18 (5 m,250 mm 4.6 mm)为色谱柱,乙腈?0.05 mol L-1磷酸二氢钾溶液(体积比18∶82,pH值5.5)为流动相,流速1.0 mL min-1,柱温35 ℃,检测波长215 nm,以外标法进行检测。
结果水苏碱进样量在1.00~25. 00 g范围内具有良好的线性关系,r=0.999 7,样品平均加样回收率为98.1% (n=9),RSD为1. 17%。
结论本方法简便,结果准确可靠,重复性好,可作为控制该制剂质量的方法。
【关键词】水苏碱复方益母口服液高效液相色谱法 益母草是一种传统的妇科良药,性味辛、苦,微寒,具有活血化淤、调经利水之功效,常用于妇女月经不调、痛经、难产,以及跌打损伤、水肿和疮疡肿毒等症。
现代药理研究发现,益母草中益母草碱、水苏碱等多种活性生物碱也具有改善心肌缺血、增加冠状动脉血流、提高心功能,抑制血小板聚集、抗凝、抗血栓形成等多种作用,且作用持久[1]。
复方益母口服液是由益母丸(中国药典1977年版)改剂型而成,其中的主要有效成分水苏碱是益母草中生物碱类含量测定的指标性成分,文献报道多采用紫外分光光度法、薄层扫描法和高效毛细管电泳法进行测定,不仅操作过程繁琐、所需时间长,而且水苏碱在湿度大时的稳定性不理想[2-5]。
本文应用高效液相色谱法测定复方益母口服液中主要有效成分水苏碱的含量,方法简便,结果准确可靠,重现性好,可作为控制该制剂质量的方法。
1 仪器与试药 1.1 仪器 Agilengt 1200 系列高效液相色谱系统(Agilent Co. Ltd.,USA):G1376A高效液相泵,G1367B自动进样器,G1316A柱温箱,G1365B多波长UV检测器,Hystar色谱工作站。
HPLC法测定益母草中盐酸水苏碱的含量
吴海林;甄录旭;方宗华;许乐
【期刊名称】《安徽医药》
【年(卷),期】2008(012)007
【摘要】目的建立益母草中盐酸水苏碱含量的HPLC测定方法.方法采用磺酸基团键合硅胶的阳离子交换剂(SCX)为填充剂的色谱柱;流动相为乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氢钾-磷酸(15∶ 85∶ 0.15);检测波长为192 nm.结果盐酸水苏碱在进样量为0.14~11.18 μg范围内具有良好的线性关系,r=0.9999;盐酸水苏碱的平均回收率为98.95%,RSD为1.21%(n=6).结论本方法专属性强,重现性好,可作为益母草中盐酸水苏碱的定量测定方法.
【总页数】2页(P597-598)
【作者】吴海林;甄录旭;方宗华;许乐
【作者单位】华东中药工程集团有限公司,安徽,合肥,230088;华东中药工程集团有限公司,安徽,合肥,230088;华东中药工程集团有限公司,安徽,合肥,230088;华东中药工程集团有限公司,安徽,合肥,230088
【正文语种】中文
【中图分类】R2
【相关文献】
1.HPLC 法测定益母草药材中盐酸水苏碱含量 [J], 杨琼
2.HPLC-RID法测定益母草颗粒中盐酸水苏碱含量 [J], 黄强增
3.HPLC法测定益母草膏中盐酸水苏碱的含量 [J], 李建芳;黄劲通
4.HPLC-ELSD法测定益母草颗粒中盐酸水苏碱的含量 [J], 王晓燕;王舒
5.HPLC-DAD法测定益母草颗粒中盐酸水苏碱含量的方法 [J], 伍涛;肖裕章;李成洪;邓余;唐达;陈诚;唐红梅
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81--加工贮藏•检测分析 引用格式: 王秋萍,杨邦祝,宋善敏,等. HPLC-RID 法测定不同厂家益母草药材中盐酸水苏碱含量[J]. 湖南农业科学,2024(2):81-84. DOI:10.16498/ki.hnnykx.2024.002.016益母草(Leonurus japonicus Houtt.)为唇形科益母草属植物的新鲜或干燥地上部分,别名益母艾、野麻、坤草等,全国大部分地区均有种植[1]。
益母草中主要有效成分为益母草碱和盐酸水苏碱[2]。
药理作用研究表明,益母草中的生物碱具有显著的兴奋子宫、镇痛抗炎、改善血液流变学、抗血栓等多种药理活性[3-5],为治疗月经不调、胎漏难产、产后恶露不尽、瘀血腹痛等妇科病及抗心肌缺血临床治疗的常用良药[6-8]。
目前市面上以益母草为单一原料制成有糖型或无糖型益母草颗粒的国药准字号厂家多达185家,益母草原药材中盐酸水苏碱的含量检测是益母草颗粒生产中的必要步骤。
由于各厂家生产的益母草颗粒中盐酸水苏碱含量的差异,临床和药理试验发现,有病人在服用常规或过量益母草药材后,人体出现过敏、腹泻等不良反应,有的甚至出现严重的肝、肾等脏器损伤[9-12]。
因此,益母草药 H PLC-RID 法测定不同厂家益母草药材中盐酸水苏碱含量 王秋萍1,2,杨邦祝1,宋善敏1,甘梦兰1,李满香 1,何珺2,雷阳1 (1. 贵州农业职业学院,贵州 清镇 551400;2. 贵州大学贵州省生化工程中心,贵州 贵阳 550025)摘要:建立了测定益母草中盐酸水苏碱含量的HPLC-RID 方法,并测定分析了14家药厂的益母草中盐酸水苏碱的含量。
结果表明:以Mercury 益母草专用柱(250 mm × 4.6 mm,5 μm)为色谱柱,以70%乙腈溶液为流动相、流速1.0 mL/min、柱温45℃的条件下采用示差检测器进行检测,盐酸水苏碱在0.100~0.523 mg/mL 浓度范围内呈良好的线性关系;回归方程为y =91 519 x +1 342.2 (R 2=0.991 6),平均回收率100.07 %,RSD 为0.71 %,且该方法具有重复性好、操作简便、快速、稳定、易于普及等优点;各厂家的益母草药材中盐酸水苏碱含量差异较大,14家厂家中仅有1367和8656这2家的益母草药材符合药典标准;盐酸水苏碱含量与益母草药材性状具有关联性,市民、药企和中药商等在购买益母草药材时,建议选择性状为叶多、青绿、茎细的益母草药材。
高效液相色谱法测定益母颗粒中盐酸水苏碱含量钟妍【摘要】目的:建立测定益母颗粒中盐酸水苏碱含量的高效液相色谱法。
方法色谱柱采用强阳离子交换(SCX100A)柱(250 mm ×4.6 mm,5μm),流动相为15 mmol/L磷酸二氢钾(含0.04%三乙胺,0.15%磷酸),检测波长为192 nm。
结果盐酸水苏碱进样量在0.258~5.160μg范围内与峰面积线性关系良好( r=0.9998,n=6),平均加样回收率为97.45%,RSD=0.81%( n=6)。
结论该法简便、准确、专属性强、重复性良好,可用于益母颗粒的质量控制。
%Objective To establish a HPLC method for the determination of the stachydrine hydrochloride content in Yimu Granules. Methods The strong cation exchange ( SCX ) column ( 250 mm × 4. 6 mm, 5 μm ) was used as the chromatographic column. The mobile phase was 15 mmol/L potassium dihydrogen phosphate ( containing 0. 04% triethylamine and 0. 15% phosphoric acid ) . The detection wavelength was 192 nm. Results The sample size of stachydrine hydrochloride within 0. 258-5. 160 μg showed good linearity ( r=0. 999 8, n=6 ); the average recover rate was 97. 45%, RSD=0. 81% ( n=6 ) . Conclusion This method is simple, accurate, strongly specific and better repeatable, and can be used for the quality control of Yimu Granules.【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2015(000)005【总页数】3页(P32-33,34)【关键词】高效液相色谱法;益母颗粒;盐酸水苏碱【作者】钟妍【作者单位】广西壮族自治区食品药品检验所,广西南宁 530021【正文语种】中文【中图分类】R284.1;R286.0益母颗粒由益母草、当归、川芎、木香4味中药材加工提取而制成,具有活血调经、行气止痛功效,临床用于气滞血瘀、月经不调、痛经、产后瘀血腹痛等症。
调经益母胶囊中盐酸水苏碱的HPLC测定叶静;肖美添;张学勤;黄雅燕【期刊名称】《华侨大学学报(自然科学版)》【年(卷),期】2012(033)004【摘要】In this paper, a determination method was established to determine the content of stachydrine hydrochloride in Tiaojing Yimu capsules by using an ion-exchange high performance liquid chromatography (HPLC). The chromatographic conditions were: the chromatographic column was Hypersil SCX (250 mmX4. 6 mm, 5 jim); the mobile phase was 12 mmol · L-1 monopotassium phosphate (comprising 0. 02% triethylamine and 0. 2% acetic acid); the detection wavelength was set at 192 nm; the flow rate was 1. 0 mL · min-1 and the column temperature was controlled at 30 'C. Results showed that the calibration curves for stachydrine hydrochloride showed good linearity in the range of 0.162 8~0. 814 0 fig (r=0. 999 95), and the average recovery rate was 97. 31%. wiri1 RSD=0. 88% (n=6).%建立一种调经益母胶囊中盐酸水苏碱含量的离子交换高压液相色谱(HPLC)测定方法.色谱条件:色谱柱为Hypersil SCX(250 mm×4.6mm,5μm);流动相为12 mmol·L-1磷酸二氢钾溶液(含体积分数为0.02%三乙胺和体积分数为0.2%冰乙酸);检测波长为192 nm;流速为1.0 mL·min-1;柱温为30℃.实验结果表明:盐酸水苏碱在0.162 8~0.814 0 μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999 95),平均加样回收率为97.31%,峰面积积分值的相对标准偏差为0.88%(n=6).【总页数】3页(P417-419)【作者】叶静;肖美添;张学勤;黄雅燕【作者单位】华侨大学化工学院,福建厦门361021;华侨大学化工学院,福建厦门361021;华侨大学化工学院,福建厦门361021;华侨大学化工学院,福建厦门361021【正文语种】中文【中图分类】R927;O657.72【相关文献】1.HPLC-ELSD测定益母颗粒中盐酸水苏碱的含量 [J], 冯旭;杜成智;梁臣艳;侯小涛;王胜波;覃洁萍2.HPLC测定八珍益母胶囊中槲皮素的含量 [J], 朱静;汪正宇3.HPLC法测定益母丸中盐酸水苏碱的含量 [J], 王艳华;冯翰;冯伟4.复方益母口服液中水溶性生物碱-盐酸水苏碱的HPLC法测定研究 [J], 吕海鸿5.HPLC法测定调经益母胶囊中原儿茶醛含量 [J], 姚世霞; 朱旭江; 李欣因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
实训十五 HPLC 测定益母草注射液中盐酸水苏碱含量
一、实训目的
1、掌握高效液相色谱法在中药制剂定量分析中的应用。
2、熟悉高效液相色谱仪的使用。
二、仪器与试药
1、仪器:高效液相色谱仪
2、试剂:盐酸水苏碱对照品,益母草注射液,纯净水,磷酸二氢钾,三乙胺
三、实训原理
益母草注射液为益母草加工制成的灭菌水溶液, 益母草为常用中药, 含盐酸水苏碱、益母草碱等生物碱类成分, 均为益母草中的主要有效成分。
因此本实验选用盐酸水苏碱作为本标准的控制指标, 用高效液相色谱法测定。
四、实训操作
1、色谱条件
反相键合相硅胶柱, 流动相为0.05mol/L磷酸二氢钾-三乙胺(100∶0.1) 色谱柱为C
18
(以磷酸调pH 值至2.3) , 检测波长为203nm , 流速0.18ml·m in- 1, 柱温30℃。
2、供试品溶液的制备
精密量取本品1ml, 置25ml 量瓶中, 用流动相稀释至刻度, 摇匀, 即得。
3、对照品溶液的制备
精密称取盐酸水苏碱对照品适量, 加流动相配制成每1ml含0.4mg的溶液, 即得。
4、测定
精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μL, 注入液相色谱仪,测定,即得。
分别进样3次,记录色谱峰面积。
五、实训结果
按外标法计算含量
六、思考题
1、影响理论塔板数的因素有哪些?
2、系统适应性试验包括哪些内容?
3、HPLC含量测定方法有哪些?。
应用HPLC法测定益母草颗粒中盐酸水苏碱的含量
莫怀初
【期刊名称】《当代医药论丛》
【年(卷),期】2014(000)001
【摘要】目的:探讨分析测定益母草颗粒中盐酸水苏碱含量的方法。
方法:应用HPLC法测定益母草颗粒中盐酸水苏碱的含量,采用氨基柱,以乙腈-水(82∶18)作为流动相[1],检测波长为192nm[2-3],流速为1.0ml/min,柱温为35℃。
结果:盐酸水苏碱在4.112μg~20.560μg范围内与峰面积呈良好的线性关系,
r=0.9999,回收率为99.8%,RSD为1.20%。
结论:应用HPLC法测定益母草颗粒中盐酸水苏碱含量的专属性较强,准确性和重复性均较好,且操作简便,非常适用于益母草颗粒中盐酸水苏碱的含量测定。
【总页数】2页(P197-198)
【作者】莫怀初
【作者单位】桂林葛仙翁药业有限公司广西荔浦 546600
【正文语种】中文
【中图分类】R286
【相关文献】
1.HPLC-RID法测定益母草颗粒中盐酸水苏碱含量 [J], 黄强增
2.HPLC-ELSD法测定益母草颗粒中盐酸水苏碱的含量 [J], 王晓燕;王舒
3.HPLC法测定益母草颗粒(无蔗糖型)中盐酸水苏碱的含量 [J], 李政海;苏作林;廖
展苇;阮碧芳
4.HPLC-DAD法测定益母草颗粒中盐酸水苏碱含量的方法 [J], 伍涛;肖裕章;李成洪;邓余;唐达;陈诚;唐红梅
5.HPLC法测定益母草颗粒中盐酸水苏碱含量 [J], 邹华;吴云波;王金萍;徐修义;林娜;姜慧祯
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复方益母口服液中水溶性生物碱-盐酸水苏碱的HPLC法测定研究目的建立复方益母口服液中水溶性生物碱-盐酸水苏碱的含量测定方法。
方法用雷氏盐沉淀法处理样品,对提纯出的盐酸水苏碱采用HPLC法测定含量。
色谱柱为Agela Venusil XBP NH2柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以乙腈-醋酸溶液(用少量醋酸调节溶液的pH值至3.00±0.15)(77∶23)为流动相,流速为1.0 mL/min,柱温为35℃,检测波长200 nm。
结果复方益母口服液中盐酸水苏碱的进样量在1.083 1~32.491 8 μg范围内线性关系良好(r = 0.999 9),平均回收率为91.1%,RSD = 3.7%(n = 6)。
结论该方法精确可靠,专属性强,可作为复方益母口服液中盐酸水苏碱的质量控制方法。
[Abstract] Objective To establish a method for the content determination of water soluble alkaloids-stachydrine hydrochloride in Complex Yimu Oral Liquid. Methods The sample solution was prepared with the method of Reinecke salt precipitation and was determined the content by HPLC. The column was Agela Venusil XBP NH2 column (4.6 mm×250 mm,5 μm) and CH3CN-H2O (pH was adjusted to 3.00±0.15 by acetic acid) (77∶23) was used as the mobile phase, with the flow rate of 1.0 mL/min. The column temperature was at 35℃and the detection wavelength was 200 nm. Results The good linear ranges were between 1.083 1-32.491 8 μg for stachydrine hydrochloride (r = 0.999 9, n = 6) and the average rate of recovery was 91.1% with RSD = 3.7% (n = 6). Conclusion The method is accurate, reliable, specific and with good reproducibility. It can be used for the quality control of stachydrine hydrochloride in Complex Yimu Oral Liquid.[Key words] Complex YimuOralLiquid; Stachydrine hydrochloride; HPLC; Reinecke salt precipitation复方益母口服液是由益母草、当归、川芎等药经加工制成的口服液,具有活血行气,化瘀止痛的功能,用于气滞血瘀所致的痛经,原为国家药品标准新药转正标准第19册收载品种[1]。
益母草是君药,其指标性成分是盐酸水苏碱,原标准采用薄层扫描法(TLCS)测定水苏碱含量,由于方剂中并存其他的生物碱,TLCS法对水苏碱的选择性和专属性均差,含量不准确。
为此,特研究起草了HPLC法测定复方益母口服液中盐酸水苏碱的含量,专属性强,准确性好,可为标准提高提供修订依据。
1 仪器与试药戴安高效液相色谱仪UltiMate3000系列。
盐酸水苏碱对照品(中国药品生物制品检定所,批号:110712-200709,供含量测定用);复方益母口服液由河南太龙药业股份有限公司生产,批号为10121512、10072011、10031315,水为纯化水,甲醇为色谱纯,醋酸等均为分析纯。
2 方法与结果2.1 色谱条件及系统适应性试验色谱柱:Agela Venusil XBP NH2柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:A∶B=乙腈-醋酸溶液(用少量醋酸调接溶液的pH值至3.00±0.15)(77∶23),柱温:35℃;检测波长:200 nm;流速:1.0 mL/min;进样量:20 μL。
理论板数按盐酸水苏碱峰计算应不低于5 000。
2.2 对照品溶液的制备取盐酸水苏碱对照品适量,精密称定,加流动相B制成每1毫升含0.5 mg 的溶液,即得。
2.3 供试品溶液的制备精密量取本品10 mL,用稀盐酸调节pH值至2.0,加入新制的2%雷氏盐溶液10 mL,冰浴中放置1 h,用G4垂熔玻璃漏斗滤过,沉淀用冰水30 mL洗涤后,用丙酮溶解。
向丙酮液中加等体积的水,摇匀,滴加1%硫酸银溶液至不再有沉淀生成,离心(每分钟2 000 r以上,1~2 min,下同),倾出上清液,沉淀用丙酮1~2 mL洗涤,离心,合并两次上清液并适当浓缩至5 mL。
再向浓缩液中滴加2%氯化钡溶液至不再有沉淀生成,离心,倾出上清液,沉淀用水1~2 mL 洗涤,离心,合并两次上清液并蒸至近干,用水全部转移至10 mL量瓶中并稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
2.4 阴性对照溶液的制备依据处方中的比例,按制法制备缺益母草药材的阴性对照样品,按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。
2.5 系统适应性试验分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各20 μL,注入高效液相色谱仪,记录色谱图(图1)。
结果阴性对照溶液在盐酸水苏碱色谱峰相应的保留时间处无色谱峰出现,供试品溶液在相应的保留时间处有色谱峰出现,并且与相邻峰的分离度大于1.5,表明所建立方法的专属性高,杂质对主成分的测定无干扰。
2.5.1 线性关系考察。
配制浓度为0.541 53 mg/mL的对照品溶液,分别精密吸取2、4、7、10、20、30、40、50、60 μL注入液相色谱仪,测定峰面积,以峰面积积分值A为纵坐标,对照品量X(μg)为横坐标,作线性回归,得回归方程A = 1.762 8X + 0.405 8,r =0.999 9。
结果表明,盐酸水苏碱在1.083 1~32.491 8 μg范围内线性关系良好。
2.5.2 精密度试验。
取同一份对照品溶液,重复进样6次,进样量20 μL,测定峰面积,计算其相对标准偏差RSD = 1.1%。
表明精密度良好。
2.5.3 重现性试验。
取同一批号(批号:10031315)供试品,按供试品溶液制备方法制备6份供试液,分别测定盐酸水苏碱含量,结果平均含量为0.873 mg/mL,RSD =3.1%。
表明重复性较好。
2.5.4 稳定性试验。
取同一份对照品溶液,于0、2、5、8、11、15 h分别进样,测定盐酸水苏碱峰面积,并计算相对标准偏差,结果峰面积RSD = 1.8%。
表明供试品溶液在15 h内稳定性良好。
2.5.5 加样回收率试验。
精密称取盐酸水苏碱对照品适量,加流动相B制成2.036 43 mg/mL的对照品溶液。
精密量取已知含量的供试品(批号10031315,含量0.848 mg/mL)5 mL共6份,分别精密加入上述盐酸水苏碱对照品溶液1 mL,按供试品溶液的制备方法制备供试液,分别进行测定,计算加样回收率。
结果见表1。
由于供试品溶液的制备过程反应多,步骤较繁琐,前处理中的一些损失会对回收率高低有一定影响,考虑到方法重现性较好,回收率结果较稳定,所建立方法是可行的。
2.5.6 耐用性试验。
换用不同厂家的色谱柱,通过微调流动相比例和pH值,每根柱子的系统适用性实验均可达到满意的结果。
所用的色谱柱a:Lanbo的Kromasil NH2柱,4.6 mm×250 mm×5 μm;柱b:依利特的Hypersil NH2柱,4.6 mm×250 mm×5 μm;柱c:Agilent的ZORBAX NH2柱,4.6 mm×250 mm×5 μm。
2.6 样品含量测定取复方益母口服液3批(批号:10121512、10072011、10031315),按“2.2”、“2.3”项下方法分别制备对照品溶液和供试品溶液,进样20 μL,记录峰面积,按外标法计算含量,结果3批盐酸水苏碱的含量分别为0.892、0.958、0.848 mg/mL。
3 讨论3.1 色谱条件的选择3.1.1 本文色谱条件筛选时曾采用C18柱分离,因盐酸水苏碱极性较大,结果在C18柱上保留很小;后采用氨基键合硅胶为填充剂的色谱柱则保留时间适宜,色谱峰分离较好。
3.1.2 从盐酸水苏碱对照品溶液紫外光谱图知盐酸水苏碱最大吸收为192 nm,属于末端吸收,为提高检测灵敏度,故采用截止波长较低的乙腈(190 nm)为有机相,测定波长定为200 nm。
3.1.3 流动相B采用醋酸溶液,实验中发现pH值对盐酸水苏碱峰形影响较大,当从pH 6到pH 2.5范围变化时,色谱峰形从拖尾变化为前延,其中在pH 3.00±0.15处可获得对称峰,可用少量醋酸来调接溶液的pH值。
改变A∶B为60∶40、75∶25、77∶23、80∶23,试验不同的流动相比例,以77∶23时盐酸水苏碱峰与邻近峰分离度好,保留时间适宜,为最佳。
3.2 供试品溶液制备方法的选择3.2.1 益母草药材及含益母草制剂大多以盐酸水苏碱作为定量指标,而盐酸水苏碱是水溶性生物碱,易溶于水,从供试品前处理的操作上看,对于药材及固体制剂如片剂、胶囊、颗粒剂、膏剂等,大多利用盐酸水苏碱的水溶性,只需简单的醇提水沉或活性炭除杂、固相萃取小柱等除杂,即可除掉大部分杂质,进而进行后续的分析测定[2-4]。
但对于溶液状制剂如口服液、合剂等,盐酸水苏碱已存在于水相中,无法利用其水溶性特点直接提取测定,文献[5-8]多采用雷氏盐沉淀法除杂提纯。
在供试液配制方法筛选之初,尝试采用口服液样品稀释后直接进样,但出峰杂乱,共存成分对主峰干扰太大;采用口服液样品用乙酸乙酯或氯仿或正丁醇提取除杂后进样,结果未有改善;最后仍采用此类水溶性生物碱的经典测定方法,通过雷氏盐-硫酸银-氯化钡法除杂并制得主要成分为盐酸水苏碱的进样溶液,注入HPLC仪分析,得到的HPLC色谱图杂质峰少,专属性强,也有较好的重现性和回收率。
3.2.2 雷氏盐沉淀法操作步骤较多,每步都需谨慎操作,才能得到较好的重现性。