疑难血型鉴定和疑难交叉配血

输血科疑难交叉配血试验标准操作规程1.目的为规范疑难交叉配血试验操作，保证临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》4.1.7(2)条款的要求制定本规程。

2.适用范围适用于医疗机构输血科对临床疑难交叉配血受血者，主要是对红细胞ABO血型鉴定困难、红细胞不规则抗体筛选阳性及自身免疫性溶血性贫血(AlHA)患者的交叉配血试验。

3.职责医疗机构输血科技术人员负责疑难交叉配血试验。

4.原理本规程中疑难交叉配血是指受血者ABO血型鉴定困难、红细胞不规则抗体筛选阳性或受血者是自身免疫性溶血性贫血患者等情况下的交叉配血试验。

配血前需确定受血者的ABO血型或红细胞不规则抗体的特异性,选择ABO血型相容的红细胞或红细胞不规则抗体对应抗原阴性的红细胞进行交叉配血试验。

5.所需设备和试剂普通离心机，血型血清学专用离心机，水浴震荡仪，普通显微镜等。

6.检测环境条件室温应控制在18-27°C,湿度应保持30%-70%°7.步骤与方法7.1交叉配血前受血者ABO血型鉴定不确定者执行《ABO疑难血型鉴定标准操作规程》，确定ABO血型后，再选择ABO血型相同或相容的献血者血液进行交叉配血试验。

7.2红细胞不规则抗体筛选阳性时7.2.1随机与库存血中多袋血液进行交叉配血试验，选择交叉配血相合的血液输注。

7.2.2我院库存血中无相合的血液时，应立即联系临床医生说明情况：①上述实际情况；②应送市血液中心进行“疑难配血”，会产生费用，存在配血不成功的可能：③详细告知家属，决定是否送市血液中心。

7.2.3家属同意后，由医生填写“免疫学申请单”，并抽取血样EDTA抗凝血5-10ml,送输血科。

7.2.4输血科联系血液中心，并送血样。

7.3冷型自身抗体或冷型AIHA患者交叉配血试验：执行7.2.2-7.2.4程序8.交叉配血结果判定主侧、次侧交叉配血均无溶血、无凝集，表示配血相合。

对于AlHA患者，已经排除同种抗体的存在，而所有交叉配血又都不相和时，可选择凝集强度弱于自身凝集的血液输注。

血型鉴定及交叉配血室内质量保证措施1、在血型鉴定及交叉配血时，工作人员必须有高度责任感，严格“三查七对”。

2、所用试剂要有三证，要有防伪标记。

3、不同批号试剂使用前要做一次新老试剂对照试验，合格后方可使用。

4、试剂在使用中当发现凝集效价降低时，对结果观察带来困难时，应查找原因，或弃去不用。

5、碰到ABO血型罕见亚型时，不要草率报告，应报告科主任，共同核实后方可下结论。

6、在交叉配血中逐一填写ABO正反型和RH试验结果，最后综合反应结果做出结论,在发出报告单前还需审核一遍。

7、交叉配血用原始标本须保存一周，以便发生输血反应时，查找原因。

ABO血型鉴定标准化操作规程1.检测原理：根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B 型、AB型及O型4种。

可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。

所谓正定型，是用已知抗-A和抗-B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗-B。

2.标本采集与处理2.1受检者的准备病人不需空腹，根据病情随时可抽血检测。

2.2静脉采血除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。

一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。

2.3 标本的处理血标本室温放置30min～45min（或在37℃水温箱放置20分钟）后离心分离血清，置洁净试管加盖低温（4-8℃）保存3. 试剂和材料3.1抗A、抗B血型定型试剂。

（单克隆抗体）3.2 献血员5%红细胞盐水悬液；3.3 受检者血清；3.4 受检者5%红细胞盐水悬液。

4.方法4.1玻片法：4.1.1取清洁玻片1张（或用白瓷板1块），用蜡笔标明抗-A、抗-B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B分型血清1滴，再各加受检者5%红细胞悬液1滴，混和。

4.1.2取洁净玻片一张（或白瓷板1块）用蜡笔标明A细胞、B细胞，然后分别滴加受检者血清1滴，再分别用滴管滴加A、B红细胞悬液1滴。

临床输血规范血型鉴定与配血操作步骤详解输血是一项重要的医疗技术，对于一些临床病例来说，输血可以挽救患者的生命。

而在输血操作过程中，准确的血型鉴定与配血是至关重要的环节。

本文将从血型鉴定和配血操作两个方面，详细介绍临床输血规范的步骤。

一、血型鉴定血型鉴定是确保输血安全的前提，它是根据红细胞表面产生的抗原和抗体的相互作用来确定的。

目前，常用的血型系统有ABO血型系统和Rh血型系统。

以下是血型鉴定的步骤：1. 样本采集临床血型鉴定通常采用的样本是抗凝血全血或抗凝血血浆。

样本采集时，要保证无菌操作，并确保在采集前患者已经停药或者没有接受其他相关的干扰性治疗。

2. 血凝试验血凝试验是根据血型抗体与红细胞抗原相互作用而产生的凝集反应来确定血型。

常用的血凝试验有直接凝集试验和间接凝集试验。

在实验过程中，要严格按照试剂说明书进行操作，并记录凝集结果以及反应程度。

3. 抗人球蛋白试验抗人球蛋白试验用于鉴定Rh血型系统。

该试验是通过抗人球蛋白抗体与红细胞抗原相互作用来确定血型。

操作过程中，也需要注意严格按照试剂说明书进行操作，并记录试验结果。

二、配血操作在完成血型鉴定后，即可进行配血操作。

配血的目标是寻找与受血者血型相匹配的供血者，以确保输血的安全有效。

以下是配血操作的步骤：1. 选择合适的供血者根据受血者的血型需求以及供血者的血型特点，选择合适的供血者。

一般情况下，可以通过ABO和Rh血型相匹配的原则来进行选择。

2. 交叉配血试验交叉配血试验是将受血者的血浆与供血者的红细胞进行反应，以判断是否存在抗体与红细胞抗原相互作用。

该试验主要用于检测受血者的血浆中是否存在不相容的抗体。

3. 输血前配血记录在进行输血之前，要对配血结果进行记录。

记录内容通常包括受血者与供血者的血型信息、交叉配血试验结果以及配血的目的等。

4. 输血操作输血操作中，要严格按照规范的操作流程进行。

首先，核对受血者和供血者的身份；其次，核对血液制品的标签与要求；然后，进行给药前的检查，包括外观、溶解情况和悬浊物等；最后，开始进行输血操作，同时监测受血者的生命体征。

血型交叉配型_血型鉴定和交叉配血技术的进展 医学界在输血治疗手段出现之初，曾发生过无数血的教训。1492年，首例输血由于使用的方法很原始，没有成功病人死亡；1667年法国国王御医Jean用羊血治疗精神病患者，偿试将动物血输给人导致死亡，这一严重事故使以后150多年没人再敢尝试输血治疗。1818年，英国产科医生JameBlundell首次用人血输治患者，取得一定效果。1900年奥地利维也纳大学科学家KarlLandteiner发现ABO血型及Rh血型系统，增加了人类对血型系统的认识。直到1907年，Hektoen建议通过献血者和受血者之间的交叉配血才提高了输血的安全性，ReubenOttenberg完成了首例使用血型和交叉配血的输血实验，开启了现代输血医学的新纪元职称。

输血前试验包括血型鉴定、抗体筛选和交叉配血，其中交叉配血是关键[1]。交叉配血是在血型鉴定的基础上，进一步证实血型测定是否有误，以及受血者和供血者之间是否存在血型不合的抗原抗体反应，以保证受血者的输血安全。这一试验对于未进行红细胞血型抗体筛选的患者尤为重要，红细胞血型抗体有完全抗体和不完全抗体。完全抗体为分子量较大的IgM抗体，可在盐水介质的交叉配血中与相应的红细胞发生凝集反应；不完全抗体指ABO系统以外的其他血型抗体，为分子量较小的IgG抗体，在盐水介质中虽然能够结合红细胞上的抗原，但不能使红细胞凝集，必须通过特定的方法使致敏红细胞发生凝集。根据红细胞血型抗体的特性，血型鉴定和交叉配血方法在不断产生，其检测技术也在不断发展。

1盐水交叉配血法 盐水法配血时，用生理盐水配制红细胞悬液，红细胞膜上由于唾液酸中的羧基离子而带负电，此负电荷形成的排斥力（Zeta电位）使单个红细胞之间保持一定的距离，当其与血清相配合时，血清中的大分子完全抗体，能在相应红细胞之间搭桥，使其发生凝集，通过观察凝集或溶血来判断配血结果。盐水法是交叉配血的必做项目，能简便快速的检测IgM型抗体，发现血型是否错误或判断是否发生溶血，但不能检出不完全IgG型抗体[2,3]，不能有效的防止免疫性溶血性和非溶血性输血反应的发生，因此单用盐水法配血存在一定的危险性。

一、首诊负责制度1、门诊首诊负责制度（1）凡经挂号的病人，各科医务人员均需做到“谁首诊，谁负责”，不得相互推诿。

（2）首诊医师经检查、诊断，发现该病人为非本科疾病患者，应认真书写门诊病历，并耐心向患者介绍其病种及应去就诊的科室。

（3）对边缘性疾病患者，首诊医师应负责诊疗。

必要时，可请有关科室会诊。

（4）对危重、体弱、残疾的病人，若需转科，由首诊医师与有关科室联系并做好转科的护送及交接病人的工作。

（5）需转院治疗的病人，经科主任同意，同时上报医务科同意后与转入医院联系或电话邀请会诊。

（6）若发现医师推诿病人而延误病情或导致对传染病的误诊漏诊者，必须追究首诊医师的责任。

2、急诊首诊负责制度（1）一般急诊病人，参照门诊首诊负责制度执行，由急诊科护士通知有关科室值班医师应诊。

（2）危重病人如非本科室范畴，首诊医师应首先对病人进行一般抢救，并立刻通知有关科室值班医师，在接诊医师到来后，向其介绍病情及抢救措施后方可离开。

如提前离开，在此期间发生问题，由首诊医师负责。

（3）如遇到复杂病例，需两个科室或多个科室协同抢救时，首诊医师应首先实行必要的抢救，并逐级上报医务科或总值班人员，以便立即调集各有关科室值班医师、护士等有关人员参与抢救。

当调集人员到达后，以其中职务或职称最高者负责组织抢救工作。

对不服从安排的人员，按医院有关规定追究责任。

二、医师查房制度一、科主任、正副主任医师查房制度科主任、正副主任医师查房每周1—2次，应有主治医师、住院医师、护士长、进修医师、实习医师和有关人员参加。

（1）查房内容包括审查和决定急、危重、疑难患者及新入院患者的诊断及治疗计划，决定重大手术及特殊检查、新的治疗方法及参加全科会诊。

（2）抽查医嘱、病历、护理质量、发现缺陷、纠正错误、指导实践、不断提高医疗水平。

（3）利用典型、特殊病历、进行教学查房，提高教学水平。

（4）对所查病人，应亲自询问诊疗情况和病情变化，了解生活和一般情况，并全面查体。

生理实验二------ABO 血型鉴定[实验目的]1.观察红细胞凝集现象。

2.学习ABO 血型鉴定方法，掌握血型鉴定原理。

[实验原理]（一）ABO 血型的分型血型是指红细胞膜上特异性抗原的类型。

ABO 血型系统有两种不同的抗原，即A 抗原、 B 抗原。

而血清中还存在对应的两种抗体，即抗A 抗体和抗B 抗体。

ABO 血型的分型是根据红细胞膜上是否存在A 抗原和B 抗原将血液分为A 、B 、AB 和O 型四类。

A 抗原与抗A 抗体相遇或B 抗原与抗B 抗体相遇时，会发生红细胞凝集反应。

当给人输入血型不相容的血液时，可发生血管内红细胞凝集和溶血反应，严重时可危及生命。

表1 ABO 血型系统的抗原和抗体血型 红细胞膜上的抗原血清中的抗体 A 型A 抗B B 型 B 抗A AB 型 A+B 无 O 型无抗A+抗B（二）ABO 血型的鉴定---正向定型常规ABO 血型的定兴包括：正向定型和反向定型。

1.正向定型是用抗A 抗体和抗B 抗体检测未知红细胞上有无A 或B 抗原；反向定型是用已知血型的红细胞检测血清中有无抗A 或抗B 抗体。

表2 ABO 正向定型 正向定型血型 B 型血清 （抗A ）A 型血清 （抗B ）O 型血清 （抗A ，抗B ）- - - O 型 + - + A 型 - + + B 型 +++AB 型一般A 型标准血清中含有抗B 抗体，B 型标准血清中含有抗A 抗体，因此可以用标准血清中的抗体与被测者红细胞反应，以确定其血型。

（三）ABO 血型的遗传由三个等位基因控制人类ABO血型系统的遗传由9号染色体上的A、B和O三个等位基因来控制。

在一对染色体上只可能出现上述三个基因的两个，分别由父母双方各遗传给子代。

三个基因可组成六组基因型。

由于A和B基因为显性基因，O基因为隐性基因，故血型的表现型仅四种。

血型相同的人，其遗传基因型不一定相同。

见表3表3 ABO血型的基因型和表现型思考题：A型、B型的父母，子女可能的血型？利用血型遗传的规律，可推知子女可能有的血型和不可能有的血型，可从子女的血型表现型来推断亲子关系。

血型鉴定和交叉配血中常见问题分析和处理包括：一、血型相容性检测二、ABO血型正反定型型不一致的原因分析及处理三、交叉配血中常见问题分析及处理四、意外抗体筛选的意义和检测方法五、弱D检测的的意义和检测方法一、血型相容性检测1、受血者和供血者AB0血型是否相容。

2、受血者和供血者RhD血型是否相容。

3、主次侧交叉配血是否相容。

4、受血者血清中是否有临床有意义的意外抗体。

二、ABO正反定型不符的原因分析和处理（一）原因1．实验者操作技术的错误：导致假阴性的有：①未加入抗体或血清。

②未识别溶血。

③血清与红细胞比例不当④离心速度或时间不够。

⑤使用失效或错误试剂。

⑥实验结果记录或解释错误导致假阳性的有：①离心速度过大或时间过长、②使用了受到细菌污染的试剂、③试验器皿不干净、④实验结果记录或解释错误2、红细胞标本问题：①患者近期接受了大量ABO血型相容但不同型的红细胞，如骨髓移植患者，或非O型人接受O型红细胞②某些ABO基因变异的个体或ABO亚型红细胞，一些白血病或其他恶性疾病患者的红细胞ABO抗原太弱，应用抗－A、抗－B试剂未能出现预期的凝集反应③红细胞获得性或遗传性的异常，如获得性B抗原红细胞或Tn/T多凝集红细胞，人血清抗－A、抗－B试剂可能与这些异常的红细胞反应④使用未洗涤的红细胞标本，其表面黏附的血浆或血清中含针对抗－A、抗－B 试剂中染色剂或其他成分的抗体，出现假阳性反应⑤患者血清中高活性、高浓度冷自身抗体严重致敏（包被）自身红细胞，以至自发地发生凝集，而不是抗体试剂的特异性免疫反应所致⑥红细胞表面包被IgG类抗体3、血清标本的问题：①小的纤维蛋白凝集的红细胞凝块被误认为是血液凝集，如使用血浆标本或未完全去除纤维蛋白的血清标本时。

②免疫抑制疾病患者血清中ABO抗体减少或消失。

老年人ABO抗体减弱③4-6月龄内婴儿血清中ABO抗体阴性或很弱，一般只测正定型④血清中不正常浓度和比例的蛋白质成分或高分子蛋白增多可引起非特异凝集，如缗钱状红细胞的非特异凝集⑤血清中含抗－A、抗－B以外的其他红细胞抗体，如抗－M、抗－I等。

血型鉴定、交叉配血、不规则抗体筛查标本的采集1患者准备及原始标本识别1.1患者血液采集前，应避免跑步、骑自行车、爬楼梯等剧烈的运动，要求患者休息 15 分钟后进行采血。

冬季采血时应保持血液循环通畅；1.2.静脉血标本由临床医护人员采集，遵照医嘱准备好标本采集前所用的容器以及消毒器材、一次性注射器、标本条形码、检验申请单或输血申请单等备用。

首先确认患者姓名、住院号和血型，并将带有姓名、住院号、床位、检测项目的标本条形码贴于标本采血真空试管上；1.3.采血前应向患者作适当解释，以消除疑虑和恐惧。

如遇患者采血后发生晕厥，可让患者平卧，通常休息片刻即可恢复。

必要时可嗅芳香氨酊，针刺或指掐人中、合谷等穴位； 1.4.认真核对医嘱及患者信息，严格执行查对制度，询问患者姓名而不是询问你是 XX;. 采血前必须询问病人或病人家属，核对腕带，对受检者的身份信息进行确认，采血完成后必须再次核对病人与标本的条码信息是否一致。

1.5.标本条形码上的条形码是原始标本惟一标识。

1.6 非急诊输血时，ABO、RHD 血型鉴定和交叉配血标本不允许同一时间采集完成。

2 临床医生的指导2.1.临床医生必须对患者讲清楚血型鉴定、交叉配血检测的目的、采血时间(住院患者应在早晨卧床时取血；其他人员应最好在空腹时采血，急诊除外)及相关注意事项；2.2.临床医生应向患者讲清楚采集血液标本前，使用青霉素、非那西丁、氨基比林、磺胺、甲基多巴、肝素、右旋糖苷等药物可能会影响检验结果；临床医生确认患者近期使用上述药物，应在申请单中注明或直接通知检验科工作人员，以利于实验结果的正确判断。

3申请单的填写、处理及保存3.1.临床医生在开具输血申请单时，应采用计算机程序进行申请，填写完整，包括患者姓名、性别、年龄、申请科室、病人住院号、申请日期、标本类型、申请目的等。

输血申请单还需要填写患者输血前检测项目结果，包括 ABO 及RhD 血型、血红蛋白含量、白细胞计数、血小板计数、凝血酶原时间、凝血酶时间、部分活化凝血酶原时间、ALT、HBsAg 抗-HCV、抗HIV、梅毒实验结果；急诊申请输血时可写待定。

疑难交叉配血试验标准操作规程一、目的为规范疑难交叉配血试验操作，保证临床输血安全有效。

二、适用范围输血科负责疑难交叉配血试验的工作技术人员。

三、原理疑难交叉配血仅指ABO血型鉴定困难，红细胞不规则抗体筛选阳性或者受血者是自身免疫性溶血性贫血（AIHA)的患者等情况下的交叉配血试验。

配血前须确定受血者ABO血型或者不规则抗体的特异性，选择ABO血型相容的红细胞或者不规则抗体对应阴性抗原的红细胞进行试验。

四、步骤和方法（1）ABO血型鉴定不确定时，按照《ABO疑难血型鉴定操作规程》确定血型后再选择与ABO血型相同或相容性的血液进行交叉配血。

（2）冷型自身抗体1、按照《吸收试验操作规程》，对受检者血清进行冷自身抗体的吸收和去除冷自身抗体红细胞的制备。

2、对去除冷自身抗体的血清进行不规则抗体的筛选，结果若为阴性则用该血清和去除冷自身抗体红细胞分别和血型相容的献血者血液进行交叉配血试验。

（3）温型AIHA患者配血1、采用单特异性抗-IgG和抗-C3d试剂做DAT，鉴别溶血原因是IgG还是补体引起的。

2、若为抗-C3d阳性、抗-IgG阴性，则选择ABO及RhD血型相容的献血者血液进行配血，或者用单特异性抗-IgG试剂进行抗球蛋白法交叉配血，输注主侧相合的洗涤红细胞。

3、若为抗-IgG阳性、抗-C3d阳性或者阴性，则与多名献血者血液分别进行主侧交叉试验，选择主侧相合或者凝集最弱献血者的洗涤红细胞。

也可对抗凝标本的红细胞进行充分放散试验，对不抗凝标本血清进行完全吸收试验后分别与血型相容的血液进行交叉配血。

（4）不规则抗体筛选阳性，已确定为特异性同种抗体的患者，采用与其相同特异性的单克隆抗体试剂进行对应的抗原阴性的红细胞进行交叉配血。

不规则抗体筛选阳性，但不确定特异性的同种抗体的患者，随机和多名献血者血液进行交叉配血，选择相容的血液进行输注。

（1）结果判断：主、次侧均无溶血、无凝集表示配血相合；对于AIHA已经排除同种抗体的存在，而所有交叉配血又不相合时，可选择凝集强度弱于自身凝集的血液。