血型鉴定常见的疑难问题分析及处理

ABO疑难血型三步分析法在血型分类中没有疑难血型,迄今为止在文献中也查不到“疑难血型”的定义，因为“疑难血型”是1种血型难以检定或判定的“现象”,而不是1种型别。

检定1份标本是否属“疑难血型”，除了标本本身的特殊性外，还与实验室的设备、技术人员的水平、经验等多种因素有关，例如1份ABO亚型标本,在基层医院血库可能因为正定型与反定型不一致而分析不出原因被认为是“疑难血型”,但在血液中心血型参比实验室该问题可能就易于迎刃而解。

在检定血型时,标本如果受多种因素干扰使结果难以判定,便呈现“疑难血型”现象。

一、干扰ABO血型正确判定的因素（一）生理性因素1.年龄老年人(ABO抗原或ABO抗体减弱),6个月前的婴儿(ABO 抗原或ABO抗体不成熟),可能导致ABO血型误定。

2.ABO亚型包括A(B)型、B(A)型,ABO抗原减弱导致细胞定型(正定型)受干扰,或血清中出现不规则抗体干扰血清定型(反定型)。

3.冷凝集素有些健康人血清中含有冷凝集素,且在<4℃才有活性,不干扰ABO血型检定,如果冷凝集素效价升高,或在室温以上反应,致敏自身红细胞可能干扰ABO正定型,存在于血清可能干扰ABO反定型。

4.“先天性”无ABO抗体近年有“先天性”无ABO抗体的个案报告,原因有待研究。

5.双精子授精红细胞呈嵌合体。

6.个体特异性个别人血清中ABO可溶性血型物质过高,ABO正定型红细胞凝集减弱。

（二）实验技术原因1.标本混淆如采错被检者,红细胞和血清非同一人,记录结果与标本编号不对应。

2.静脉输液处采样ABO抗体被输液稀释,干扰ABO反定型。

3.采样不规范用凝血块洗下红细胞检定血型，其中混有凝集程度不一的红细胞；用血浆做ABO反定型,操作过程中纤维蛋白析出凝集试剂红细胞。

4.试剂质量问题或漏加试剂定型试剂过期失效，未达标准，被污染。

操作中未遵循“先加血清后加细胞”的原则，大批量样本试验时漏加试剂血清或试剂红细胞。

5.实验操作不规范被检红细胞未洗涤,非特异性粘附血浆蛋白,或被检红细胞悬液过浓或过稀。

疑难血型鉴定处理流程标题：疑难血型鉴定处理流程引言：血型鉴定是一项重要的医学检测程序，在医疗领域和犯罪调查中扮演着关键的角色。

然而，有时候在进行血型鉴定过程中，会遇到一些疑难的情况，这就需要专业的处理流程来解决问题。

本文将深入探讨疑难血型鉴定处理流程的多个方面，旨在帮助读者更全面、深刻和灵活地理解这一主题。

第一节：背景知识首先，我们将回顾一些背景知识，包括血型系统、血型鉴定的原理以及常见的血型类型。

这将为我们后续讨论提供基础。

第二节：疑难血型的定义与分类在这一部分，我们将详细介绍什么是疑难血型，以及针对不同类型的疑难血型鉴定，应如何分类和处理。

我们将探讨正反交叉试验、重复鉴定、特殊抗体检测等方法和步骤。

第三节：疑难血型的可能原因在这一部分，我们将讨论导致疑难血型出现的可能原因。

这可能涉及到基因突变、转染、婴儿溶血、移植相关的抗体产生等等。

我们将详细解释每种原因并提供相关示例和案例研究。

第四节：疑难血型的鉴定策略与流程在这一部分，我们将介绍处理疑难血型的鉴定策略与流程。

我们将强调疑难血型鉴定的关键步骤，如全面的样品准备、使用特殊的试剂与技术以及信息共享与交流等。

我们还将介绍一些实验室技术和设备，这些可以帮助进行更精确、可靠的疑难血型鉴定。

第五节：案例研究与解决方案在这一部分，我们将通过一些真实的案例研究，让读者更好地了解疑难血型鉴定处理流程的应用。

我们将提供不同案例的详细分析，包括疑难血型的特点、鉴定过程中遇到的问题以及最终的解决方案。

结论：通过本文的阐述，我们希望读者对疑难血型鉴定处理流程有更深入的理解。

我们强调了在处理疑难血型时需要注意的关键步骤和策略。

同时，我们提供了一些真实的案例研究，以帮助读者将理论知识更好地应用于实践。

最后，我们对疑难血型鉴定的未来发展进行了展望，并指出可能的研究方向。

观点和理解：在我的观点和理解中，疑难血型鉴定处理流程是一项复杂而重要的任务。

它需要严谨的实验室技术和专业的知识，以确保准确的鉴定结果。

实验十五 ABO血型鉴定一、正定型法【目的】掌握用盐水介质法进行ABO血型系统(ABO group)正定型(direct typing)的原理、操作方法和结果判断。

【原理】用已知的IgM类特异抗体（标准血清）与被检红细胞在室温条件下、盐水介质中反应，根据红细胞是否出现凝集现象来测定被检红细胞膜上有无与血型抗体相对应的抗原，从而判断和鉴定被检者的血型。

【器材】1. 1.小试管、记号笔、蜡笔、试管架。

2. 2.尖滴管、胶吸头。

3. 3.吸管、吸耳球。

4. 4.载玻片或有凹槽的玻璃板或白瓷板。

5. 5.离心机。

6. 6.显微镜。

【试剂】1．标准抗A、抗B血清（商品）分为人血清ABO血型抗体和人ABO血型单克隆抗体，要求如下：（1）人血清ABO血型抗体：①特异性高。

②凝集效价：抗A不低于1∶128 ，抗B不低于1∶64。

③亲和力：反应开始15s内即出现凝集，3min时明显凝集，血凝块大于1mm2。

④稳定性高。

⑤已灭活补体。

（2）人ABO血型单克隆抗体：①特异性：抗A抗体特异凝集具有A型红细胞抗原的A1、A2、A1B、A2B；抗B抗体只凝集含B抗原的B和AB型红细胞。

②亲和力：以开始反应到出现凝集的时间表示抗血清的亲和力，国家标准是抗A对A1、A2、A2B分别为15s、30s、45s；抗B对B型红细胞为15s。

③凝集效价：国家标准是抗A1、抗B均大于1∶128。

④稳定性：较人血清抗体的稳定性低。

2．生理盐水。

【标本】抗凝静脉血或末梢血。

【操作】制备被检者5％红细胞生理盐水悬液：抗凝血离心或红细胞自然沉降后取试管下层的红细胞2滴于小试管中，加入生理盐水2ml，用尖滴管将红细胞与生理盐水充分混匀。

2 500r/min离心3 min 后弃去上清液，重复洗涤3次。

自管底吸取1滴压积红细胞加入19滴生理盐水中混匀，此即为5％的红细胞生理盐水悬液。

操作示意见图4-1。

图4-15％红细胞生理盐水悬液制备操作示意图1．玻片法（1）标记玻片或白瓷板：取洁净的载玻片或白瓷板1块，用蜡笔画出小格，标明抗A、抗B。

ABO 血型鉴定实验中的问题及对策徐立峰（山东协和学院医学院济南250000)摘要本文阐述了在中学ABO 血型鉴定实验过程中会发生的实验结果与预期结果不一致的情况:一种是血型鉴定与采血机构 或医院鉴定的结果不一致;另一种是与根据父母血型或遗传规律推导出来的结果不一致。

本文分别从原因和对策两个方面进行讨论遥关键词血型遗传ABO 血型鉴定结果不一致原因及对策ABO 血型鉴定实验受到了师生的欢迎，尽管不是 中学规定的实验，但有些教师会把它作为自选实验。

ABO 血型鉴定的方法有多种，学生实验一般会采用玻片法、试管法，这两种方法便于观察红细胞凝集现象。

其中，玻片法操作简单、无需离心设备，在学生实验中 更为常用，该方法可采用人ABO 血型单克隆抗体代替 人血清ABO 血型抗体。

实验操作并不复杂，耗时也较短，但部分实验者会 出现血型鉴定结果与预期结果并不一致的状况:一种 情况是血型实验鉴定结果与采血机构或医院鉴定的结 果不一致;另一种情况是与根据父母血型或遗传规律 推导出来的结果不一致。

有些学生甚至会怀疑是否与 父母有着血缘关系，因而会产生焦虑症，影响身心健 康。

1血型鉴定与医院鉴定的结果不_致1.1原因采血机构和医院对血型的鉴定，是由专业 人员进行的，检测条件控制的非常严格，操作规范、方 法先进，并做正反定型，对正反定型不一致的疑难血型 会做进一步的检测，因而准确率远高于学生的实验。

影响学生血型鉴定实验准确性的因素一般有以下几种：(1)试剂已过有效期或保存不当而失效。

单抗是蛋白质，高温下长时间放置会因变性而失效，受微生物 污染会导致腐败变质。

(2)实验条件与方法受限。

为简化操作或缺乏相关设备和材料，加全血而不对红细胞进行洗涤，只进行 正定型不进行反定型。

玻片法由于无离心加速反应， 容易忽视较弱的凝集而导致定型错误。

不进行镜检， 靠肉眼观察为无凝集，镜检下仍有可能表现为显著凝 集。

(3)操作不规范。

抗体试剂与红细胞比例不合适，血液过多，未能被抗体试剂完全覆盖而发生凝固。

疑难血型鉴定及交叉配血处理流程一、正反定型不一致1、重复试验（严格正规操作）。

2、重新取血（以纠正污染或弄错标本造成的不符），溶血标本不能用于合血。

3、洗涤红细胞后进行以下试验（正反定型凝集低于2+的，应首先怀疑是由于亚型或抗原抗体活降低引起。

）1）、用自身血清、红细胞做定型对照，检验自身有无完全抗体。

2）、用O型红细胞做反定型对照，确认是否存在ABO系统以外完全抗体。

3）、用抗A、抗AB、抗A1和抗H进行正定型：①A亚型细胞与抗A、抗AB的凝集强度低于A1细胞，但与抗H的凝集强度高于A1细胞（3+以上）；②A亚型（特别是A2中约有1-8%会产生抗A1），与抗A1基本不发生凝集。

③用抗AB（O型血清或血浆）是因为它的抗A效价较高，与弱A和弱B抗原亲和力强。

4）、分别用A1型和A2型红细胞反定型检查血清中有无抗A1存在（A亚型中有部份会产生抗A1，能与A1发生凝集，但不与A2凝集。

）5）、询问病史，判断是否是由于病人抗体缺失或减弱引起反定型错误，可延长反应时间，或用灵敏度更高的血型卡做反定型。

6）、被检红细胞做直抗（观察有无被抗体致敏的情况），若为阳性，应将细胞放散至阴性后再定血型。

4、若还不能确定血型，应增加血型物质的检测（如唾液等）。

二、交叉配血不合（一）主侧端不相合1、血型鉴定不正确,重新鉴定血型。

2、病人血清中存在同种抗体，与供血者红细胞上的相应抗原反应。

3、供血者红细胞上已经包被了抗体，导致抗球蛋白试验阳性。

4、病人血清不正常，如白蛋白/球蛋白比例不正常引起缗钱状凝集，血清中存在高分子聚合物的血浆扩容剂引起假阳性。

5、试验系统被污染。

（二）次侧端不相合1、供血者血浆中存在针对病人红细胞抗原的抗体。

2、病人与供血者的ABO血型不相合。

3、病人的红细胞已经包被了抗体，直接抗人球蛋白试验阳性。

4、抗筛阴性，而次侧不合多由自身抗体引起（此是抗人球配血不合，而聚凝胺配血通过可输血）。

（三）配血不合的主要因素1、血型是否正确。

疑难血型鉴定及处理分析摘要：目的：探究ABO疑难血型产生原因和正确血型鉴定方法，意在提高疑难血型鉴定准确性。

方法：把2022年1月到2023年7月本院收集的献血者45例纳入研究，经微孔板法开展ABO血型正反定型检测，选出疑问标本并开展试管法复检，并实行吸收放散试验、不规则抗体筛查、抗球蛋白试验、特异性鉴定工作，鉴别患者血型。

结果：本组45例患者进行血型鉴定后，无标本差错例数35例，10例ABO血型正反定型不相符样本，包括4例（40.00%）抗体减弱，2例（20.00%）抗原减弱，2例（20.00%）冷自身抗体，1例（10.00%）同种抗体，1例（10.00%）亚型。

结论：ABO疑难血型正反定型不相符的原因比较复杂，结合患者基本资料，开展科学检验和分析，可保证疑难血型鉴定准确性，提高患者输血安全。

关键词：疑难血型；鉴定；原因临床输血是抢救危重疾病患者的重要手段，但人体血型类型多样，只有选择合适的血型输血，才可保证患者安全，鉴于此，血型准确鉴定至关重要[1]。

然而实际血型鉴定过程中，正反定型不相符现象时常出现，导致血型鉴定难度变大。

为分析疑难血型的鉴定方法，提高实际鉴定结果准确性，本文以2022年1月到2023年7月收治的献血者为研究对象，现报道如下。

1资料和方法1.1一般资料2022年1月到2023年7月期间，在本院收集的献血者45例均为研究对象，其中男性患者25例，女性患者20例，年龄分布在24~67岁间，均数（44.27±4.58）岁。

医院伦理委员会批准，患者或家属签署同意书。

1.2研究方式本组患者分别完成相关检测工作，包括：（1）ABO血型初筛：微孔板法正反定型，如果血型正反定型不相符，盐水介质试管法二次检测，如果O细胞阴性，正定型抗-A、抗-B反应强度<4+，反定型A型或B型红细胞<2+，亦或者抗原抗体不对应，增加开展试管法抗-AB、抗-H、抗-A1、抗-A1c和抗-A2c血清检验，完成血型正反定型试验工作。

血型鉴定和交叉配血中常见问题分析和处理包括：一、血型相容性检测二、ABO血型正反定型型不一致的原因分析及处理三、交叉配血中常见问题分析及处理四、意外抗体筛选的意义和检测方法五、弱D检测的的意义和检测方法一、血型相容性检测1、受血者和供血者AB0血型是否相容。

2、受血者和供血者RhD血型是否相容。

3、主次侧交叉配血是否相容。

4、受血者血清中是否有临床有意义的意外抗体。

二、ABO正反定型不符的原因分析和处理（一）原因1．实验者操作技术的错误：导致假阴性的有：①未加入抗体或血清。

②未识别溶血。

③血清与红细胞比例不当④离心速度或时间不够。

⑤使用失效或错误试剂。

⑥实验结果记录或解释错误导致假阳性的有：①离心速度过大或时间过长、②使用了受到细菌污染的试剂、③试验器皿不干净、④实验结果记录或解释错误2、红细胞标本问题：①患者近期接受了大量ABO血型相容但不同型的红细胞，如骨髓移植患者，或非O型人接受O型红细胞②某些ABO基因变异的个体或ABO亚型红细胞，一些白血病或其他恶性疾病患者的红细胞ABO抗原太弱，应用抗－A、抗－B试剂未能出现预期的凝集反应③红细胞获得性或遗传性的异常，如获得性B抗原红细胞或Tn/T多凝集红细胞，人血清抗－A、抗－B试剂可能与这些异常的红细胞反应④使用未洗涤的红细胞标本，其表面黏附的血浆或血清中含针对抗－A、抗－B 试剂中染色剂或其他成分的抗体，出现假阳性反应⑤患者血清中高活性、高浓度冷自身抗体严重致敏（包被）自身红细胞，以至自发地发生凝集，而不是抗体试剂的特异性免疫反应所致⑥红细胞表面包被IgG类抗体3、血清标本的问题：①小的纤维蛋白凝集的红细胞凝块被误认为是血液凝集，如使用血浆标本或未完全去除纤维蛋白的血清标本时。

②免疫抑制疾病患者血清中ABO抗体减少或消失。

老年人ABO抗体减弱③4-6月龄内婴儿血清中ABO抗体阴性或很弱，一般只测正定型④血清中不正常浓度和比例的蛋白质成分或高分子蛋白增多可引起非特异凝集，如缗钱状红细胞的非特异凝集⑤血清中含抗－A、抗－B以外的其他红细胞抗体，如抗－M、抗－I等。

疑难血型鉴定处理流程血型鉴定是血液学中的重要内容，对于献血、输血、器官移植等医学领域具有重要意义。

常见的ABO血型系统和Rh血型系统已经被广泛应用，但是在实际操作中，仍然会遇到一些疑难血型，这些血型的鉴定处理流程需要我们特别注意。

一、疑难血型的定义疑难血型是指在常规血型鉴定中不能确定血型的血清学现象，包括以下情况：1.反应弱阳性：指血型抗体试验中，试验反应弱而难以判断是阳性还是阴性。

2.反应不一致：指血型抗体试验中，不同试验反应结果不一致，或者同一试验在不同实验室或不同试验人员的操作下结果不一致。

3.异常反应：指血型抗体试验中，出现异常的血清学反应，如异常凝集、异常吸附等。

4.矛盾血型：指献血者或受血者血型抗体与血型抗原不相符，出现矛盾的情况。

二、疑难血型处理流程对于疑难血型，我们需要进行进一步的血清学鉴定和分析，以确保献血和输血的安全性。

1.血清学鉴定首先需要对疑难血型进行血清学鉴定，包括以下步骤：(1) 重复血型抗体试验：在不同时间、不同试验人员或不同实验室中重复进行血型抗体试验，以排除误判的可能性。

(2) 血型抗原检测：对于疑难血型，需要进行血型抗原检测，以确定血型抗原是否存在。

(3) 血清学鉴定：对于疑难血型，需要进行血清学鉴定，包括直接凝集试验、间接凝集试验、单纯免疫吸附试验、酶联免疫吸附试验等，以确定血型抗体是否存在。

2.分析疑难血型的原因在进行血清学鉴定之后，需要对疑难血型的原因进行分析，包括以下几个方面：(1) 技术问题：疑难血型可能是由于操作不当、试剂失效、试验环境不佳等技术原因造成的，需要排除技术问题。

(2) 血型抗体种类：疑难血型可能是由于罕见的血型抗体种类引起的，需要进行深入的血清学鉴定。

(3) 基因型问题：疑难血型可能是由于基因型问题引起的，需要通过基因分型等方法进行进一步分析。

3.制定血型鉴定方案在分析疑难血型的原因之后，需要制定相应的血型鉴定方案，包括以下几个方面：(1) 确定血型：对于疑难血型，需要确定其血型，以确保献血和输血的安全性。

血型血清学疑难问题滁州市中西医结合医院输血科陈红一、出现疑难血型的原因1、生理性因素年龄、各种ABO亚型、冷凝集素、先天性”无ABO抗体、双精子受精、个体差异。

2、实验技术原因样本混淆、静脉输液处采样、样本不合格、实验操作不规范、结果观察不仔细或误判、试剂质量问题、漏加试剂。

3、临床治疗的影响大量输液、静脉输入高分子药物、近期输过异型红细胞或异型血浆、单采血浆或血浆置换治疗、异型基因造血干细胞移植。

4、疾病影响白血病、其他造血系统恶性疾患、肝脏疾病、结核病、真性红细胞增多症、多发性骨髓瘤、自身抗体、不规则抗体、感染、低丙种球蛋白血症、高丙种球蛋白血病、急性大量失血等。

二、血型误定或疑难血型的提示1、临床提示出现急性溶血性输血反应或输血后24小时内，Hb升高不到理论值。

2、实验室提示本次血型检定结果与既往结果不一致、ABO正反定型不一致、抗-AB与抗-A或抗-B凝集强弱不一致、正定型凝集呈弱阳性或mf、与ABO,RHD同型血交叉配血不合、输血前抗体筛查阴性，输血后（2天至三周）出现不规则抗体。

三、ABO血型正、反定型不一致的分类1、红细胞抗原减弱或丢失ABO亚型、白血病、造血系统恶性疾患、输异型血、造血干细胞移植、可溶性血型物质过高、急性大失血等。

2、红细胞额外反应自身抗体、红细胞上黏附大量纤维蛋白、红细胞未洗涤：样本中含对试剂成分（主要为防腐剂）反应的物质、造血干细胞移植、获得性B抗原（类B)、B(A)或A(B)表型、输异型血。

3、混合凝集近期内输异型血、造血干细胞移植、双精子受精或同卵受精（嵌合体）。

4、血型定型减弱或无反应年龄（<4-6个月，老年）、ABO亚型、低丙种球蛋白血症、造血干细胞移植、先天性ABO抗体缺失、大量输晶体盐或胶体扩容剂。

5、血清额外反应冷自身抗体、冷同种抗体、血清含对试剂成分反应的物质、血清蛋白过高、A/G倒置、输异型血浆、造血干细胞移植、输含某种血型抗体的免疫球蛋白。