苏丹红检测方法

超高效液相-串联质谱法筛查食品中的苏丹红陈 英（周至县食品药品检验检测中心，陕西西安 710400）摘 要：运用超高效液相-串联质谱法（UPLC-MS/MS）同时测定辣椒面、火锅料、辣条、鸭蛋、鸭血中的苏丹红Ⅰ～Ⅳ。

通过优化萃取试剂、样品基质效应的消除、色谱及质谱条件等参数，检测方法的灵敏度和适用性。

在电喷雾离子源正离子模式下，多反应监测（MRM）方式检测，外标法定量。

苏丹红Ⅰ～Ⅳ线性关系良好，相关系数（r2）均大于0.999，苏丹红Ⅰ～Ⅳ在3个添加水平下，回收率范围为85.1%～104.9%，标准偏差（RSD）均小于6.2%，检出限和定量限为1.0～6.0μg/kg。

本方法处理过程简单、分析时间短、准确度高，适用于辣椒面、火锅料、辣条、鸭蛋和鸭血中的苏丹红Ⅰ～Ⅳ检测，可用于食品中非法添加苏丹红Ⅰ～Ⅳ的筛查。

关键词：超高效液相-串联质谱法；苏丹红；非法添加苏丹红共有4个组分，为苏丹红Ⅰ～Ⅳ，是一种红色颗粒或粉末状的红色染料常用于工业上色如鞋、地板等的增光，因为有致癌作用危害人体健康，我国和欧盟都禁止其用于食品生产[1]。

市面上有一些不法分子为了产品成色漂亮好出售，依然违法添加工业染料。

目前，苏丹红Ⅰ～Ⅳ检测方法主要有薄层色谱法[2]、紫外可见分光光度法[3]、近红外显微成像光谱法[4]、液相色谱法[5-6]、液相色谱-质谱联用法[7-8]和化学发光分析法[9]，这些方法前处理复杂、试剂用量大、检测周期长、准确度不高，不适应实际工作中遇到的多种复杂基质中苏丹红的筛查测定。

本试验通过对色谱条件和质谱参数的研究、优化，建立了高效液相色谱-串联质谱同时分析苏丹红Ⅰ～Ⅳ的方法。

本方法前处理简单，7 min即可同时测出苏丹红Ⅰ～Ⅳ的含量，方法快速简单，结果准确，可以用于食品中非法添加苏丹红Ⅰ～Ⅳ的筛查。

1 材料与方法1.1 仪器与试药液相色谱-串联质谱联用仪：Qtrap 5500三重四极杆串联质谱仪（美国AB SCIEX公司）；配有电喷雾离子源（ESI）；LC20A超高效液相色谱仪（日本Shimadzu公司）；MS1003S电子天平（瑞士Mettler Toledo公司）；Milli-Q超纯水仪（美国Millipore公司）；MFV-24智能氮吹仪（广州德泰仪器科技有限公司）。

苏丹红、苏丹黄、偶氮苯的薄层层析一、苏丹红(Sudan Red)苏丹红是一种常用的红色染料，被广泛应用于食品、化妆品、药品、指甲油等业界，能够赋予产品艳丽的色泽。

然而苏丹红也被认为是致癌物质之一。

为了避免食品安全问题，许多国家和地区禁止苏丹红的使用。

在分析检测方法方面，薄层层析技术是一种比较简单、快捷、经济的方法。

下面是针对苏丹红的薄层层析过程：试料：苏丹红试剂：正洁净丙酮、橄榄油(甘油)、硅胶G工具：薄层层析板、层析罐、玻璃棒、显色剂方法：1.将硅胶G加入根据需要加入橄榄油(甘油)加至湿润状态。

2.将硅胶G加至薄层层析板上。

3.将湿润硅胶G平均的铺置于薄层层析板上，待干燥。

4.取适量的苏丹红加入正洁净丙酮中，使其完全溶解（尽量不要加多）。

0.2克左右即可。

5.将Sudan Red加入到上一步得到的层析板中。

6.晾干后，将层析板塞于等温层析罐中，上面加入适量的正洁净丙酮，将罐盖好。

7.将等温层析罐放入直线扫描层析仪中，使其等温30-60分钟。

8.测定苏丹红的吸收峰，记录其波长和相对强度。

9.采用显色剂可更加准确的测定吸收峰的波长和相对强度，进而进行定量分析。

苏丹黄是一种荧光亮黄色的有机颜料，被广泛用于染料、涂料、食品、饮料等多个领域，亦为一种致癌物质。

因此，人们对其分析检测越来越重视。

下面是苏丹黄的薄层层析方法：试剂：苯酚，四氯化碳1.取得薄层层析板，并在上面用硅胶G均匀的抹上一层。

2.将苯酚和四氯化碳混合，其配比为1：1，得到的混合溶液为显色剂。

3.将苏丹黄与混合溶液按需要的含量混合，制成样品溶液。

4.将样品溶液放在层析板边缘上，慢慢靠近层析板中心。

5.用含四氯化碳小槽将薄层层析板放入液面中，控制好溶液高度。

6.让样品溶液慢慢上升，进行层析分离。

7.分离结束后，将层析板晾干。

8.将晾干的层析板放入紫外灯下进行检测，通过温和化学反应，苏丹黄将被氧化，产生出淡黄色的荧光。

9.将层析板放入显色剂中，用显色剂复过程进行检测，最后根据相对迁移率计算定量分析。

实验十、食品中苏丹红染料的测定标准依据：GB/T19681-2005食品中苏丹红染料的测定（高效液相色谱法）一、目的要求学习食品中苏丹红染料测定的原理和方法。

二、实验原理苏丹红色素是应用于油彩蜡、地板蜡和香皂等化工产品中的一种非生物合成的着色剂，非食用色素，长期食用具有致癌致畸作用。

苏丹红色素一般不溶于水易溶于有机溶剂，待测样品经有机溶剂提取，经浓缩及氧化铝柱层析萃取净化，用反相高效液相色谱—紫外可见光检测器进行色谱分析，采用外标法定量。

三、仪器与试剂（一）试剂1、乙腈色谱纯2、丙酮色谱纯、分析纯3、甲酸分析纯4、乙醚分析纯5、正己烷分析纯6、无水硫酸钠分析纯7、层析柱管：1cm (内径) 5cm (高)的注射器管。

8、层析用氧化铝（中性100目~200目）：105℃干燥2h，于干燥器中冷至室温，每100g中加入2mL 水降活，均匀后密封，放置12h 后使用。

9、氧化铝层析柱：在层析柱管底部塞入一薄层脱脂棉，干法装入处理过的氧化铝至3cm高，经敲实后加一薄层脱脂棉，用10mL 正己烷预淋洗，洗净柱杂质后，备用。

10、5%丙酮的正己烷溶液：吸取50mL 丙酮用正己烷定容至1L。

11、标准物质：苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ；纯度≥95%。

12、标准贮备液：分别称取苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ及苏丹红Ⅳ各10.0mg （按实际含量折算），用乙醚溶解后用正己烷定容至250m L。

（二）仪器1、高效液相色谱仪（配有紫外可见光检测器）2、分析天平：感量0.1mg3、旋转蒸发仪4、均质机或匀浆机5、粉碎机6、离心机7、0.45μm有机滤膜四、实验步骤（一）样品制备：将液体、浆状样品混合均匀，固体样品需粉碎磨细。

（二）样品处理：1、红辣椒粉等粉状样品称取1g ~ 2 g（准确至0.001 g）样品于三角瓶中，加入10mL ~20mL 正己烷，超声处理5min，过滤，用10 mL 正己烷洗涤残渣数次，至洗出液无色，合并正己烷液，用旋转蒸发仪浓缩至5 mL 以下，慢慢加入氧化铝层析柱中，为保证层析效果，在柱中保持正己烷液面为2mm左右时上样，在全程的层析过程中不应使柱干涸，用正己烷少量多次淋洗浓缩瓶，一并注入层析柱。

苏丹红检测方法检测方法 (中文)欧洲委员会健康与消费者保护综合委员会第四分委员会―生产与流通过环节的食品安全第三部―物理化学危害物监督新方法声明:03/99主题:苏丹红检测方法的更正以前的3/92新方法声明在此更正(原方法4.12.1存在错误:正确的数字是100ml而不是50ml)代办处已收到来自法国的方法声明内容如下:辣椒粉及以辣椒为主要成分的产品中苏丹红和胭脂树橙的含量分析O.Veretout,L.Demesse,L.Szymanski1 应用范围本方法涉及以辣椒为主要成分的产品中苏丹红1号、苏丹红2号、苏丹红3号、苏丹红4号、苏丹橙B、苏丹红7B和胭脂树橙的检测。

2 定义苏丹红是应用于诸如油彩、蜡、地板蜡和香皂等化工产品中的一种非生物合成着色剂，一般不溶于水易溶于有机溶剂，胭脂树橙是一种食品着色剂但不允许在辣椒粉和调味品中使用。

3 方法要点上述着色剂经乙腈提取后，过滤，滤液用反相高效液相色谱仪进行色谱分析。

以波长可变的紫外―可见检测器定性与定量。

4 试剂与标准品除有特殊指明外，本方法中涉及试剂均为分析纯，实验用水均为蒸馏水、去离子水或相同质量的分析用水。

4.1 乙腈色谱纯4.2 水色谱级4.3 冰醋酸4.4 氯仿4.5 苏丹红1号(Aldrich Chemical Company)4.6 苏丹红2号(Acros organics 化工合成有机物)4.7苏丹红3号(Acros organics 化工合成有机物)4.8苏丹红4号(Acros organics 化工合成有机物)4.9苏丹橙B(Acros organics 化工合成有机物)4.10 苏丹红7B(Acros organics 化工合成有机物)4.11 胭脂树橙(特殊合成产品)4.12 标准溶液4.12.1 标准贮备液称取50.0mg着色剂(按产品标明的纯度折算成纯着色剂)并按以下方式移入100ml容量瓶定容。

着色剂溶解和转移溶剂定容溶剂苏丹红1号乙腈乙腈苏丹红2号乙腈乙腈苏丹红3号氯仿乙腈苏丹红4号氯仿乙腈苏丹橙B 乙腈乙腈苏丹红7B 乙腈乙腈胭脂树橙氯仿氯仿 4.12.1 标准工作液取上述标准贮备液各5ml移入50ml容量瓶中以乙腈定容，再分别从以上容量瓶中吸取0.5ml、1ml、2.5ml、4ml和5ml溶液移入50ml容量瓶中以乙腈定容，此时溶液中各种着色剂的浓度分别为0.5,1,2.5,4和5μg/ml。

苏丹红快速检测试剂盒使用说明一、本方法适用于非食用色素苏丹红（1、2、3、4号）的现场快速检测。

二、样品处理：1、取约1克样品于试管中，加入2～5ml乙酸乙酯，振摇提取1分钟，静置5分钟，2、取一张层析纸，在端底向上1cm处、平行相隔1cm、用铅笔画出将要点样的五个+字线或点五个小点。

3、用四支毛细管分别沾取苏丹红1、2、3、4号对照液少许（毛细管尖端不多于0.5厘米容积距离）点在层析纸1、2、3、4号+字线上，另取1支毛细管沾取静置后已经染色的乙酸乙酯样品溶液（体积不限），将其点在层析纸5号+字线上。

（溶液的颜色较浅时，可在每次点样斑点挥干后重复点样），斑点直径控制在5毫米内。

三、测定：取一个约200ml的烧杯，加入约5ml展开剂，将层析纸（样品端朝下）插入展开剂中靠在杯壁上，待展开剂延层析纸向上平行展开至约 7厘米处时取出层析纸，观察结果。

四、判断：在本实验条件下，如果样品在展开轨迹中出现斑点，其斑点展开（向上跑）的距离与某一对照液展开后的斑点距离相等、形状相同、颜色虽浅却相近时，即可判断样品中加入了这一色素。

五、说明：1、本方法能够判定样品中是否加入了目视可见的苏丹红（1、2、3、4号），同时对判断样品中是否加入了其它非食用色素也有一定的参考价值，论据在于国家标准允许使用的辣椒红天然色素以及允许使用的合成色素在本方法展开过程中不会形成斑点，对出现异常斑点的样品，可用高效液相色谱仪进一步确正。

注意：国家允许使用的红曲天然色素在展开后的前沿顶端会形成斑点，需要时可用对照液作对比实验。

2、苏丹红对照液的点样量不要太多，否则会产生拖尾现象。

在用毛细管沾取对照液后，可在棉花球或一张废弃的层析纸上沾弃多余的溶液，使毛细管尖端留有不超过0.5厘米距离的溶液，将其一次性点到层析纸+字线上。

3、展开剂的使用应适量，液面高度应控制在斑点以下，展开过程中层析纸不能倾倒，每展一张层析纸最好更换一次展开剂。

4、环境温度会影响斑点的展开距离。