食品中苏丹红的检测方法

食品中苏丹红检测方法探讨中国质量新闻网 2008-11-26 15:17:25摘要本文介绍了食品中苏丹红检测方法的研究进展，主要包括高效液相色谱(HPLC)、液相色谱-质谱(LC-MS)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)、薄层层析法等。

关键词苏丹红高效液相色谱液相色谱-质谱气相色谱-质谱联用薄层层析近年来，一些国家和地区不断发生食品污染等恶性事件。

特别是随着科技的发展，一些原来认为无害的食品添加剂，发现存在慢性或致癌作用,原来检测不出的有害物质被查出等。

苏丹红是偶氮苯类人工色素，属于工业染料，主要用于油、蜡、鞋等的增光着色。

由于苏丹红I、II、III、IV及其代谢产物具有致癌性，国家禁止作为色素添加剂在食品中使用。

苏丹红I、II、III、IV的检测方法有高效液相色谱法[1]、液相色谱-质谱法[2]、气相色谱-质谱联用法[3]、薄层层析法[4]等。

1. 高效液相色谱法对食品中苏丹红的检测高效液相色谱法是一种以液体为流动相的现代色谱柱分离分析方法，它是在经典液相色谱的基础上，引入气相色谱的理论和技术发展起来的[5]。

原则上讲，只要能溶解在流动相中的物质都可以用高效液相色谱法分析。

在目前已知的有机化合物中，有80%的有机化合物能用高效液相色谱法分析[6]。

高效液相色谱法主要有以下几种：1.1 欧洲委员会推荐的液相色谱法[7]该方法是将样品经匀浆化或粉碎后，加入乙睛(苏丹红III、IV加入氯仿)提取，过滤，滤液用反相高效液相色谱仪进行色谱分析。

苏丹红I、苏丹红II的检测波长为478nm，苏丹红III、苏丹红IV则为520nm。

苏丹I的检测限是0.013μg/ml、最低浓度为0.106μg/ml、在辣椒粉样品中的添加回收率高于90%。

1.2 国家质量监督检验检疫总局、国家标准化管理委员会发布的高效液相色谱法该方法在欧洲委员会公布的检验方法的基础上作了改进。

苏丹红检测方法国家标准采用了简单的正相吸附固相萃取原理，一次性去除了样品中红辣椒和番茄中的干扰成分，使用目前国内已广泛应用的高效液相色谱仪就可准确完成4种苏丹红染料的检测。

薄层色谱- 紫外可见分光光度法测定食品中的苏丹红Ⅲ庞艳玲王怀友(菏泽学院化学与化工系,菏泽274015 ) (山东师范大学化学化工与材料科学学院,济南250014 )摘要建立了测定食品中苏丹红Ⅲ号的新方法薄层色谱- 紫外可见分光光度法。

用薄层色谱分离杂质,优化了分析条件,讨论了影响测定的因素。

方法的线性回归方程为A = 0. 090 96 c- 0. 003 54, 在0. 50 ～15. 0 μg /mL 之间苏丹红Ⅲ号的浓度与吸光度成线性关系,相关系数r = 0. 999 2 ,检出限为0. 05 μg /mL。

关键词苏丹红Ⅲ 薄层色谱紫外可见分光光度法分离苏丹红Ⅲ号是一种人工合成的化工染料,化学名称是1 2[ 4 2(苯基偶氮) 苯基]偶氮22 2萘酚。

苏丹红Ⅲ号为致癌物质[ 1 , 2 ] , 被禁止作为食品添加剂使用。

我国和欧盟标准检测方法为液相色谱法[ 3 , 4 ] , 许多分析化学工作者对苏丹红染料的测定开展了研究, 建立了一些有价值的测定方法, 如H P LC 法[ 5～7 ] 、分子印迹固相萃取法[ 8 ] 、毛细管液相色谱- 质谱法[ 9 ] 、电离质谱同位素稀释法[ 10 ]已应用于苏丹红染料的测定。

但是上述方法由于仪器和试剂昂贵而难以普及。

笔者研究了样品的处理方法,样品提取液用薄层展开后以分光光光度法测定,所用设备简单,分析结果与国家标准H P LC法准确度相当。

1 实验部分1. 1 主要仪器与试剂双光束紫外可见分光光度计: T U - 1901 型,北京普析通用仪器有限责任公司;旋转浓缩器: R - 250型,上海亚荣分析仪器厂;高效液相色谱议: W a t e r s 2695 型, 美国W a t e r s 公司;超声波萃取仪: FS - 300 型, 上海超声有限公司;硅胶板: H S G型,烟台化工研究所;苏丹红Ⅲ号标准品: 中国医药集团上海化学试剂公司;苏丹红Ⅲ号标准溶液: 100 μg /mL。

苏丹红检测的意义
提高公众健康水平
提升食品安全监管水平
通过苏丹红检测，能够减少含有苏丹 红的食品对公众健康的危害，提高整 体健康水平。
苏丹红检测技术的不断发展和完善， 有助于提高食品安全监管机构的监管 能力和水平。
规范食品行业秩序
加强苏丹红检测能够促使食品企业自 律，遵守食品安全法规，规范行业秩 序。
趋势分析
对多次实验结果进行趋势分析， 了解苏丹红含量的变化趋势。
因素分析
分析影响实验结果的各种因素， 为改进实验方法提供依据。
结果解读与报告撰写
结果解读
对实验结果进行深入解读，理解苏丹红在食品中 的存在状态和潜在风险。
报告撰写
根据实验结果和分析结论撰写实验报告，包括数 据记录、结果分析和建议措施等。
根据实验需要，准备适量的苏丹 红标准品、提取剂、缓冲液等试 剂，确保其质量和纯度。
实验操作步骤
提取
将处理好的样品加入适 量的提取剂中，进行充 分搅拌、纯 化，去除杂质，提高检
测准确性。
显色反应
加入适量的缓冲液和苏 丹红标准品，进行显色
反应。
检测
使用分光光度计在 550nm波长处测定吸光 度值，根据标准曲线计
算苏丹红含量。
05
实验结果分析
数据处理与结果判定
数据分析
对实验数据进行统计分析，包括 平均值、标准差等。
结果判定
根据实验数据判定食品中是否含有 苏丹红，以及苏丹红的含量是否超 标。
可信度评估
对实验结果的可信度进行评估，确 保结果的准确性和可靠性。
结果分析方法
对比分析
将实验结果与标准值进行对比， 分析差异原因。
气相色谱-质谱联用法
总结词

异型(非直管型)、高强度型，或非30w功率等紫外线灯管的检测距离和辐照度值合格标准，随产品用途和使用方法而定。原则上，不应底于产品使用说明书注明的辐照度值。
第二十页，编辑于星期五：十点 十一分。
（3）消毒液有效氯的快速测定
消毒液在食品加工过程中使用广泛，控制消毒液的有效浓度是一个重要的环节。 目前使用较多的是含氯消毒液，测定有效氯的方法有两种试纸法。
方法：于盛有2mL牛乳的试管中加入2mL玫瑰红试剂，乳中无碱性物质则呈黄色，有碱性物质时呈玫瑰红色，其碱性物质的存在量与反应颜色的深浅成正比。
0.00 0.03 0.06 0.09
相当于掺入碳酸钠的百分含量
第五页，编辑于星期五：十点 十一分。
5、牛乳中淀粉和麦芽糊精的快速检测
意义：牛乳掺水后乳密度会降低，很容易检出，加入淀粉和麦芽糊精后乳密度会升高，但营养成份并未增加。检测淀粉和麦芽糊精是否存在，主要是检测牛乳是否掺假。 方法：取5mL牛乳注入试管中（有条件时稍稍煮沸，待冷却后），加入数滴淀粉检测试液，如有淀粉和麦芽糊精存在时，则有蓝色或青蓝色沉淀物出现。
第十七页，编辑于星期五：十点 十一分。
三、 食品加工贮藏安全度的快速测定
食品中心温度、食品加工和贮藏温度 消毒间紫外线辅照强度 消毒液有效氯 游离性余氯
第十八页，编辑于星期五：十点 十一分。
（1）食品中心温度、加工和贮藏温度的快速测定
细菌生长最适宜的温度在10～60℃范围之内。因此,食品的储存温度应控制在10℃以下。食品加工应当烧熟煮透其中心温度应在70℃以上并保持一定的时间才可杀灭细菌。 在烹饪后至食用前超过2小时的食品，应当在高于60℃或低于10℃的条件下存放。需要冷藏的熟制品，应当放凉后在0～10℃之间冷藏。 煎炸食品时，油温最高不得大于250℃，一般不得超过190℃。 温度对于食品的质量起着重要作用。国家卫生部《餐饮业食品卫生管理办法》中对各环节的温度控制有明确的规定 。采用食品中心温度计和红外线瞬时测温仪可有效加以监控。

超高效液相-串联质谱法筛查食品中的苏丹红陈 英（周至县食品药品检验检测中心，陕西西安 710400）摘 要：运用超高效液相-串联质谱法（UPLC-MS/MS）同时测定辣椒面、火锅料、辣条、鸭蛋、鸭血中的苏丹红Ⅰ～Ⅳ。

通过优化萃取试剂、样品基质效应的消除、色谱及质谱条件等参数，检测方法的灵敏度和适用性。

在电喷雾离子源正离子模式下，多反应监测（MRM）方式检测，外标法定量。

苏丹红Ⅰ～Ⅳ线性关系良好，相关系数（r2）均大于0.999，苏丹红Ⅰ～Ⅳ在3个添加水平下，回收率范围为85.1%～104.9%，标准偏差（RSD）均小于6.2%，检出限和定量限为1.0～6.0μg/kg。

本方法处理过程简单、分析时间短、准确度高，适用于辣椒面、火锅料、辣条、鸭蛋和鸭血中的苏丹红Ⅰ～Ⅳ检测，可用于食品中非法添加苏丹红Ⅰ～Ⅳ的筛查。

关键词：超高效液相-串联质谱法；苏丹红；非法添加苏丹红共有4个组分，为苏丹红Ⅰ～Ⅳ，是一种红色颗粒或粉末状的红色染料常用于工业上色如鞋、地板等的增光，因为有致癌作用危害人体健康，我国和欧盟都禁止其用于食品生产[1]。

市面上有一些不法分子为了产品成色漂亮好出售，依然违法添加工业染料。

目前，苏丹红Ⅰ～Ⅳ检测方法主要有薄层色谱法[2]、紫外可见分光光度法[3]、近红外显微成像光谱法[4]、液相色谱法[5-6]、液相色谱-质谱联用法[7-8]和化学发光分析法[9]，这些方法前处理复杂、试剂用量大、检测周期长、准确度不高，不适应实际工作中遇到的多种复杂基质中苏丹红的筛查测定。

本试验通过对色谱条件和质谱参数的研究、优化，建立了高效液相色谱-串联质谱同时分析苏丹红Ⅰ～Ⅳ的方法。

本方法前处理简单，7 min即可同时测出苏丹红Ⅰ～Ⅳ的含量，方法快速简单，结果准确，可以用于食品中非法添加苏丹红Ⅰ～Ⅳ的筛查。

1 材料与方法1.1 仪器与试药液相色谱-串联质谱联用仪：Qtrap 5500三重四极杆串联质谱仪（美国AB SCIEX公司）；配有电喷雾离子源（ESI）；LC20A超高效液相色谱仪（日本Shimadzu公司）；MS1003S电子天平（瑞士Mettler Toledo公司）；Milli-Q超纯水仪（美国Millipore公司）；MFV-24智能氮吹仪（广州德泰仪器科技有限公司）。

苏丹红最新检测方法下载苏丹红检测套装：固相萃取柱：HiCapt Sudan苏丹红专用柱(500mg/3mL，订货号：22-05003)液相色谱柱：HiSep C18-T 150 mm×4.6 mm i.d., 5 μm（订货号：0246150）苏丹红是偶氮苯类人工色素,由于苏丹红具有潜在的致癌性, 中国和欧盟等多数国家都禁止其作为色素添加剂在食品中使用。

然而, 仍有不少食品生产企业为了改善食品色泽、降低成本将其作为食用色素。

我国质量监督部门检出了包括几家知名企业生产的众多含有苏丹红的食品, 引起了整个社会的关注。

因此，建立快速可靠的检测方法至关重要。

目前报道的苏丹红的检测方法主要是采用液相色谱法。

由于辣椒油、辣椒粉等食品成分复杂,液相色谱分离困难,易导致假阳性结果。

国家标准的方法是采用正已烷作为萃取溶剂，用氧化铝固相萃取柱净化样品。

但该方法样品处理过程复杂，而且氧化铝的活性不易控制，方法回收率难以得到保证。

因此我们开发了HiCapt Sudan苏丹红专用固相萃取柱，建立了同时检测食品中四种苏丹红的高效液相色谱分析方法，较好地解决了这一问题。

方法的优势：∙专利创新的苏丹红专用萃取填料，有效去除食品中的天然色素和植物油等杂质干扰∙回收率稳定、重现，克服了传统方法中氧化铝活性不稳定的缺陷∙方法简单、快速、节省溶剂∙优化的色谱分离条件，有效去除杂质干扰1. 样品处理：1.1 样品提取：（参考国标GB/T 19681—2005）1.1.1辣椒粉等粉状样品称取0.5 g（准确至0.001g）样品于三角瓶中，加入5mL正己烷，超声10min，5000 r/min离心5 min 后取上清液3 mL，待净化。

1.1.2辣椒油等油状样品称取0.5 g（准确至0.001g）样品于小烧杯中，加入3mL正己烷溶解，涡旋1分钟混匀，待净化。

1.1.3腊肠样品将腊肠切成小丁，称取3.0 g, 放入10 mL离心管中，加入5 mL正己烷，超声10分钟，然后步骤同辣椒粉样品。

高效液相色谱法（HPLC）
我国国家质量监督检验检疫总局、国家标准化管 理委员会发布的高效液相色谱法在欧洲委员会公 布的检测方法基础上做了改进。 国标法的提取液由乙腈改为正己烷，将液体、浆 状样品混合均匀，固体样品磨细后用正己烷提取、 过滤，必要时加入无水硫酸钠脱水后稍加温溶解， 用旋转蒸发仪蒸发浓缩，然后慢慢加入氧化铝层 析柱中萃取净化后用丙酮转移定容待测。
苏丹红的分析技术

高效液相色谱法（HPLC）
迄今为止，国际上食品中苏丹染料的常用检测方 法是高效液相色谱法，而高效液相-质谱联用法和 前面所述的电喷雾解析电离质谱法等用于检测结 果的确证。 欧洲委员会推荐的液相色谱法是由样品经匀桨化 或粉碎后，加入乙腈（Sudan Ⅲ、Sudan Ⅳ加入 氯仿）提取，过滤，滤液用反相高效液相色谱仪 进行色谱分析。以波长可变的紫外-可见检测器定 性和定量。
苏丹红的结构，合成与危害

合成方法 苏丹红属偶氮染料，可用芳胺做为前体通过重氮 化反应生成重氮离子再通过亲电取代反应和萘酚 偶联体还原酶的作用下在体内生成相应的 胺类物质。在多项化学与生物实验中发现，苏丹 红的致毒性与代谢生成的胺类及萘酚类物质有关。 Sudan I在体内的代谢如下图所示。
苏丹红的结构，合成与危害

分类及结构 苏丹红为亲脂性偶氮化合物，外观呈暗红 色或深黄色片状晶体，难溶于水，主要包 括Ⅰ、Ⅱ、III 和Ⅳ4 种类型。其中II、III 和IV 均为I 的化学衍生物。结构和IUPAC命 名如下所示
苏丹红的结构，合成与危害
Sudan Sudan Sudan Sudan
苏丹红的分析技术

高效液相色谱法（HPLC）
检测波长：Sudan Ⅰ、Sudan Ⅱ在478nm 波长有 最大吸收，Sudan Ⅲ、Sudan Ⅳ在520nm波长有 最大吸收。 Sudan Ⅰ的检测限是13微克/升，定量的最低浓 度为106微克/升，在辣椒粉样品中的添加回收率 高于90％。

实验十、食品中苏丹红染料的测定标准依据：GB/T19681-2005食品中苏丹红染料的测定（高效液相色谱法）一、目的要求学习食品中苏丹红染料测定的原理和方法。

二、实验原理苏丹红色素是应用于油彩蜡、地板蜡和香皂等化工产品中的一种非生物合成的着色剂，非食用色素，长期食用具有致癌致畸作用。

苏丹红色素一般不溶于水易溶于有机溶剂，待测样品经有机溶剂提取，经浓缩及氧化铝柱层析萃取净化，用反相高效液相色谱—紫外可见光检测器进行色谱分析，采用外标法定量。

三、仪器与试剂（一）试剂1、乙腈色谱纯2、丙酮色谱纯、分析纯3、甲酸分析纯4、乙醚分析纯5、正己烷分析纯6、无水硫酸钠分析纯7、层析柱管：1cm (内径) 5cm (高)的注射器管。

8、层析用氧化铝（中性100目~200目）：105℃干燥2h，于干燥器中冷至室温，每100g中加入2mL 水降活，均匀后密封，放置12h 后使用。

9、氧化铝层析柱：在层析柱管底部塞入一薄层脱脂棉，干法装入处理过的氧化铝至3cm高，经敲实后加一薄层脱脂棉，用10mL 正己烷预淋洗，洗净柱杂质后，备用。

10、5%丙酮的正己烷溶液：吸取50mL 丙酮用正己烷定容至1L。

11、标准物质：苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ；纯度≥95%。

12、标准贮备液：分别称取苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ及苏丹红Ⅳ各10.0mg （按实际含量折算），用乙醚溶解后用正己烷定容至250m L。

（二）仪器1、高效液相色谱仪（配有紫外可见光检测器）2、分析天平：感量0.1mg3、旋转蒸发仪4、均质机或匀浆机5、粉碎机6、离心机7、0.45μm有机滤膜四、实验步骤（一）样品制备：将液体、浆状样品混合均匀，固体样品需粉碎磨细。

（二）样品处理：1、红辣椒粉等粉状样品称取1g ~ 2 g（准确至0.001 g）样品于三角瓶中，加入10mL ~20mL 正己烷，超声处理5min，过滤，用10 mL 正己烷洗涤残渣数次，至洗出液无色，合并正己烷液，用旋转蒸发仪浓缩至5 mL 以下，慢慢加入氧化铝层析柱中，为保证层析效果，在柱中保持正己烷液面为2mm左右时上样，在全程的层析过程中不应使柱干涸，用正己烷少量多次淋洗浓缩瓶，一并注入层析柱。

过滤
，
、
a n人 氯仿)提
l l ¨g ／ g k
，
1 0 u g ／k g
8 u g ／ g k 2 6％
．
、
，
滤 液 用 反 相 高效 液 相 色 谱 仪
。
8 bt g ／ g k
相对 标 准 偏 差 <
10 6 ％
。
，
回收
影响
，
整 个分 析 时 间 只 需 3 2
．
m
in
。
进 行 色谱 分 析
，
蓝
、
丽 春 红 4 R 四 种 偶氮 染 料 对 苏 丹 红 I
，
薄 层 层 析法 等
．
…
采 用梯 度洗 脱
，
色谱 分 离 的 干 扰
线形 梯度洗脱 果
一
发现 以p H 值 为2
．
高效液 相 色 谱 法对 食 品 中苏 丹
一
相 色 谱 进 行 色谱 分 析
：
外标 法 定 量
m
；
的冰 乙 酸 水 溶 液 和 乙 腈 为 流 动相 进 行
，
原则
避 免高效液相 色谱 淋 洗 液 乙 睛 液 对 人 体 的 损害
仪 器 稳 定性
…
。 ，
丙酮溶
采 用 乙 腈 乙 酸 溶 液 为流 动 相 体 系 时
，
只 要 能溶 解在 流 动相 中 的 物 质 都
。
降 低 了成 本
．
，
提高了
待测 物 谱 峰 纯 度 高
16
．
。
欧盟法
，
流 动相 为
，
可 以 用 高效液 相 色谱 法 分 析 知 的有机化合物 中

苏丹红检测方法一、高效液相色谱法1.高效液相色谱法目前国内已普及应用的高效液相色谱仪就可准确完成4种苏丹红染料的检测。

它采用了简单的正相吸附固相萃取原理，一次性去除了样品中红辣椒和番茄中的干扰成分，制定这项标准时确定了科学的方法流程，这一流程也是实际检测时应遵循的检测流程，即样品制备－称样－分散－提取－离心－分出上清－蒸干－正己烷溶解－固相萃取－洗脱－定容－上机。

据介绍，这种检测易于操作，只要配备了相应的仪器，关键是高效液相色谱仪，我国县级以上技术结构的检测人员均可以依据标准对食品中的苏丹红含量进行有效的检测。

它具有如下特点适用范围宽。

由于本方法具有高提取率、高纯化性能、高浓缩倍数，既可以用于检测含苏丹红量相对较多的食品，也可以检测含苏丹红量极少的食品。

无论何种基质的样品，都可以应用本标准对食品中的苏丹红进行检测。

高提取率。

对于纯油基的样品（像辣椒油）采用正己烷直接溶解，可保证提取率达95%。

对于水基的食品（像番茄沙司），经水和丙酮分散后采用正己烷提取，也可保证提取率在85%以上。

高纯化性能。

标准确定了中性氧化铝粉作固相萃取，利用了氧化铝对苏丹红的强吸附能力，并对油脂进行饱和性吸附。

在前处理时借助极性固相萃取填料一次性将干扰和污染物最大可能除掉，有助于将油性样品中的大量油脂在随后的清洗步骤中脱除。

实验表明，氧化铝可以有效脱除样品中的干扰成分，使液相谱图干净清晰。

高浓缩倍数。

实际检测中可以根据需要，任意地对目标化合物进行浓缩，目标化合物不因为被浓缩而影响其纯净度，可大大降低检出限，即不会对检测结果的准确性产生影响。

2.反相高效液相色谱法3.凝胶柱净化-高效液相色谱法4.固相萃取高效液相色谱法二、液相色谱发1.凝胶渗透——液相色谱法2.液相色谱-质谱/质谱检测方法3.LC-ESI/MS分析食品中4种苏丹红色素的方法。

三、气相色谱法气相色谱-质谱(GC-MS)选择离子检测法(SIM) 四、电化学分析方法极谱法。

【检测步骤】 1.样品处理：取约2g样品（辣椒取1g）于研钵中, 加入一瓶提取剂研 磨约3至5分钟，用滤纸过滤后挤干残渣, 收集滤液5mL于100mL量筒 中，用蒸馏水定容至15mL。 2.过层析柱：将50mL注射器与层析柱（层析柱使用前依次用5ml洗 脱液、5ml水激活）连接，将步骤1中收集到的样液倒入注射筒里， 用注射塞加压，加快流速，建议15mL样本通过柱子的时间为3～ 5min。待样液完全流干后加2mL洗涤剂、2ml水洗涤层析柱。 3.观察结果：观察层析柱中吸附剂颜色变化，若吸附剂逐渐形成红色 环带，可初步判断样本中含有苏丹红；向层析柱中加1mL洗脱液； 将其洗脱下来的液体用5mL离心管收集,看液体颜色来判断。 萃取：取步骤3中的5mL离心管，加入1mL萃取剂，加入0.2ml水， 振荡，离心管上层若有明显的红色则可判断样品中含有苏丹红。 4.检测：用1ml注射器取步骤4中离心管中的上层液(注意不要吸到下 层的液体), 加到白色点滴板的一个孔上，样液渐渐ห้องสมุดไป่ตู้干，若在孔上形 成红色斑环则说明样品中含有待检物质。加0.2ml提取剂溶解，滴加 2~3滴定性试剂,试剂红色加深为苏丹红1、2，试剂变蓝色为苏丹红3、 4。（注意及时观察）
实验原理：
分子印迹聚合物是一类新的分子识别物质, 它将待 测物质作为模板分子, 首先, 使功能单体与模板分 子间相互作用形成单体- 模板分子复合物; 然后, 功 能单体与交联剂交联聚合形成聚合物, 将模板分子 固定; 最后再通过一定的物理或化学方法把模板分 子提取出来。从而在聚合物中留下一个与模板分子 特异性结合的功能基的三维空穴, 对模板分子具有 专一性识别作用。这种分子印迹聚合物具有构效预 定性、特异识别性和广泛实用性。其识别能力可以 和生物分子抗原- 抗体、酶- 底物、受体-激素间的 特异性识别相媲美, 同时还具备对恶劣环境(高温、 高压、强酸、强碱)的耐受性。

商品名称：苏丹红快速检测试剂规格：50批次/盒包装：苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各1瓶，层析纸，毛细管检测项目：鸡蛋、鸭蛋、咸鸭蛋、辣椒粉、辣椒酱等食品产品简介：本产品为苏丹红快速检测试剂，利用层析法来判断食品中是否含有苏丹红，整个检测过程中需要10-15分钟左右。

使用方法1.取1克样品于10mL具塞试管中，加入4mL提取剂，振摇提取1分钟，静置5分钟。

2.取一张层析纸，在端底向上1cm处、平行相隔1cm、用铅笔画出将要点样的五个“+”字线或点五个小点。

3.用四支毛细管（可重复使用）分别沾取苏丹红1、2、3、4号标准对照液少许，分别点在层析纸四个“+”字线上，另取一支毛细管沾取静置后样品溶液，将其点在层析纸第五个+字线上（溶液的颜色较浅时，可在每次点样斑点挥干后重复点样），斑点直径控制在5毫米以内。

4.向薄层层析缸加入约10mL展开剂（可重复使用），将层析纸（样品端朝下）插入展开剂中靠在杯壁上，待展开剂延层析纸向上平行展开至约 7厘米处时取出层析纸，观察结果。

5.结果判断：如果样品提取液为无色或显红色或橙红色以外的其他颜色，可排除被检样品含苏丹红。

如果样品在展开轨迹中出现斑点，其斑点展开（向上跑）的距离与某一对照液展开后的斑点距离相等、形状相同、颜色虽浅却相近时，即可判断样品中加入了这一色素。

注意事项1.本方法能够判定样品中是否加入了目视可见的苏丹红（1、2、3、4号），同时对判断样品中是否加入了其它非食用色素也有一定的参考价值，论据在于国家标准允许使用的辣椒红天然色素以及允许使用的合成色素在本方法展开过程中不会形成斑点，对出现异常斑点的样品，可用高效液相色谱仪进一步确正。

注意：国家允许使用的红曲天然色素在展开后的前沿顶端会形成斑点，需要时可用对照液作对比实验。

2.检测的样品数量较多时，不必每张层析纸上都点对照液，可一次点5个样品，当展开过程中出现斑点后，需要重复实验时再点对照液。

3.如果展开结束后顶端或点样原点出现斑点，可能是干扰物质。

068苏丹红是一种化学染料，具有致癌性，不允许在食品中添加。

但有些不法商贩为了让食品颜色更鲜艳，仍会使用苏丹红，因此加强对食品中苏丹红的检测十分必要。

本实验在参考国内外检测方案的基础上，对检测方案进行了改善，实现了简单、迅速、准确的目的。

一、材料及方案1.仪器。

高效液相色谱仪安捷伦1100（二极管阵列检测器）和一些常用仪器。

2.试剂和标准物。

甲醇（色谱纯度）；乙腈（色谱纯度）；有机酸溶剂（CH 3COOH∶HCL∶H 2O=10∶2∶1）；20%NAOH溶液；乙醚+石油醚（1＋1）（分析纯度）。

量取苏丹红I、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红IV、苏丹红G和苏丹红7B各10.0mg作为标准贮备液（100 μg/mL ），用乙醚将其溶解后，用正己烷配制成100mL 的贮备液，用于标准系列的制备。

3.方法。

（1）样品处理。

在50mL软木管中用20mL有机酸溶液提取约10g样品2-3次，收集并合并低酸溶液，在水浴中蒸发大约2/3的酸。

接下来用20%氢氧化钠溶液调节到微碱性，放入10mL乙醚+石油醚（1+1）在分液漏斗中萃取2-3次，然后将上层醚层收齐，在水浴中蒸发浓缩，甲醇定容至2.0mL，过0.45微米的滤膜，上机。

（2）色谱条件。

色谱柱Phenomenex cl8，250x4.60mm，5μm，流动速度是1.0mL/min。

色谱柱的温度是30℃，流动相内的溶剂是酸性的水溶液（165mL的CH 3COOH溶于1000mL的水）和溶剂B（乙腈）。

它的梯度洗脱见表1。

表1：不同流动相配比在不同时间应用总结果时间（min）溶剂A（%）溶剂B（%）梯度曲线02575线性10.02575线性11.00100线性20.00100线性25.02575线性苏丹橙G是432纳米，苏丹红I是478纳米，苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红IV、苏丹红7B是520纳米；进样量是20微升，标准溶液浓度是5.0μg/mL。

峰值出现的时间分别是高效液相色谱法测定食品中苏丹红的研究苏丹红G（5.704分钟）、苏丹红I（7.227分钟）、苏丹红Ⅲ（15.470分钟）、苏丹红7B（21.510分钟）、苏丹红IV （22.241分钟）。

m 安全与检测2 壬 =SAFETY AND TESTING高效j 夜相色谱法检测食品中的苏丹红郑佳玉:尤继明范明红宝应』摘 要：试验目的是用高效液相色谱法检测食品中的苏丹红。

试验釆用凝胶柱净化-高效液相色谱法同步测定食品内苏丹红I 、II 、III 与IV,用乙醇提取试验样品，Bio-Beads SX3凝胶柱净化处理提取液，经洗脱处理后，Symmetry ShieldRP18柱进行分离，二极管阵列检测器检测苏丹红。

结果表明，苏丹红I 、II 、III 与IV 质量浓度为0.1~10mg/L 时呈现出较好的线性相关性,加标回收率均值为80.6 -96.2%,相对标准偏差是2.4 ~ 5.8%。

关键词：食品；苏丹红检测；凝胶柱_高效液相色谱I. 检测试验仪器和试剂Agilent 1100高效液相色谱仪自带二极管阵列检测器（HPLC-DAD ） o甲醇（色的）、乙酸乙酯、环己烷、无水硫酸钠（分析纯）,苏丹红 1（ 97.51%）、H （90.0%）、皿（97.0%）、IV （91.0% ）标 准品。

层析柱 1.6 cm X 50 cm,填充 Bio-Beads S-X3 凝胶。

配制标准液：准确量取苏丹红I 、II 、III 与IV 标准品，均 为10 mg 。

仅用甲醇溶解苏丹红I, ImL 乙酸乙酯溶解苏丹红II 、 III 与IV 后，再用甲醇将其定容到10 mL,均被配制成l.OOg/ L 标准储备液。

分别量取2.5ml 储备液并将其放置在50mL 容量瓶内，甲醇做定容处理，以上获得的溶液实质上便是4种苏丹 红制备的50mg/L 混合储备液。

而后再使用甲醇配备质量浓度为 0.10、0.5、1.0、5.0、10mg/L 的标准液叫辣酱、香肠样品均采购于农贸市场。

1.2提取与净化样品精确称量4g 均质化的试验样品，兑入8g 无水硫酸钠，充 分震荡摇匀，待观察到样品成疏松样后，加入30 mL 无水乙醇，置于75P 水浴内加热8min,取样后用超声波清洗，静置lOmin,取用上层清液并放置于烧杯内，用35mL 乙醇提取残渣，与提取液混合。

ｉ ． ｅ ａｄｇｔｈ ｄｔ ｔ ｎｌ ｉｏ ０ ０４ ｔ ／ ， ．２ ｇ ｇ ｒ ｅｔｅ ｄ ｅ ｅ ｉ ｉ ｆ ｗ ｓ ｉ ｙ
Ｋｅ ｒ ｓ：ｔ ｉ ａ ｅ ｈ ｏ ｔｇ ａ ｈ ｙ ｗｏ ｄ ｈ ｎ ｌｙ ｒｃ ｒ ｍａｏ ｒｐ ｙ；ｈ ｇ ｒｏ ｍａ ｃ ｉ ｕｄ ｃ ｒｍ ｔｇａ ｈ ｉｈ ｐ ｆｒ ｎ ｅ ｌｑ ｉ ｈ ｏ ｏ ｒ ｐ ｙ；ｓ ｌ ｅ ａ ｅｆ—ｍａ ｅｓｌ ａｇ ｌｐ ａｅ；ｓ ｄ ｅ ｄ ｉｉ ｅ ｌｔ ｃ ｕ ａ ｒｄ ｎ
ｔ ｔ ｎｉ ｔ ． ２ ． ｇ ｍＬｒｎｅ ｔｅ ｅｋａｅ ｓ（ ｒ ｉ ｅ０ １～ ０ ０ ／ ｇ ，ｈ ａ ｒａ Ｙ）ａｄｃｎ ｅｔ ｔ ｎ（ ａｏ ｎ ｈ ａ ｐ ｎ ｏ ｃｎｒ ｉ Ｘ）ｐｅｅｔ ｏｄｌ ｅｒ ｅ ｔ ｎｈ ， ｕ ａｏ ｒｓｎ ｏ ｎ ａ ｌ ｉ ｓｉ Ｓ — ｇ ｉ ｒ ａｏ ｐ
２１ 年 ３ ０１ ９卷第 １ ９期
广州 化 工
薄层层析 一高效液相色谱 法测定食 品中苏丹红 术
李 春 香 ，黄 坚 ，马 慧雪 ，张 祥
（ 中南大学化 学化 工学院 ，湖南 长沙 ４ ０ ８ ） １０ ３
摘 要 ： 建立了薄层层析 一 高效液相色谱联合技术测定食品中违禁添加物苏丹红Ｉ 的新方法。采用硅胶板将 、 Ⅱ
ｗｔ ｉ ｌ ｅ ｈｏ ａｏｒｐ ｙ（ Ｌ ｉ ｔ ｎ ａ ｒ ｒｍ ｔ ａ ｈ Ｔ Ｃ）ａ ｄｈｇ ｅ ｏ ａ ｃ ｑ ｉ ｈｏ ｔ ｒｐ ｙ（ Ｐ Ｃ ｗ ｅｈｄ ｏ ｂｎｄ ｕ ｈ ｈ ｙ ｃ ｇ ｎ ｉ ｐｒ ｒ ｎｅｌ ｕｄｃ ｒｍａ ｇａ ｈ Ｈ Ｌ ）ｔｏｍ ｔｏｓｃｍ ｉｅ ．Ｓ － ｈ ｆｍ ｉ ｏ
法应 用于辣椒粉 、 辣椒油 、 番茄酱等 中的苏丹红ＩⅡ 、的检测 。其检 出限分别为 ００４ｔ／ 、．２ ｇ／ 。 ．２ ｇｇ００７ ￣ ｇ

实验十、食品中苏丹红染料的测定标准依据：GB/T19681-2005食品中苏丹红染料的测定（高效液相色谱法）一、目的要求学习食品中苏丹红染料测定的原理和方法。

二、实验原理苏丹红色素是应用于油彩蜡、地板蜡和香皂等化工产品中的一种非生物合成的着色剂，非食用色素，长期食用具有致癌致畸作用。

苏丹红色素一般不溶于水易溶于有机溶剂，待测样品经有机溶剂提取，经浓缩及氧化铝柱层析萃取净化，用反相高效液相色谱一紫外可见光检测器进行色谱分析，采用外标法定量。

三、仪器与试剂（一）试剂1、乙腈色谱纯2、丙酮色谱纯、分析纯3、甲酸分析纯4、乙醚分析纯5、正己烷分析纯6、无水硫酸钠分析纯7、层析柱管：1cm （内径）5cm （高）的注射器管。

&层析用氧化铝（中性100目~200目）：105C干燥2h，于干燥器中冷至室温，每100g中加入2mL水降活，均匀后密封，放置12h后使用。

9、氧化铝层析柱：在层析柱管底部塞入一薄层脱脂棉，干法装入处理过的氧化铝至3cm高，经敲实后加一薄层脱脂棉，用10mL正己烷预淋洗，洗净柱杂质后，备用。

10、5%丙酮的正己烷溶液：吸取50mL丙酮用正己烷定容至1L。

11、标准物质：苏丹红I、苏丹红U、苏丹红川、苏丹红W;纯度》95%。

12、标准贮备液：分别称取苏丹红I、苏丹红U、苏丹红川及苏丹红W各10. 0mg （按实际含量折算），用乙醚溶解后用正己烷定容至250mL。

（二）仪器1、高效液相色谱仪（配有紫外可见光检测器）2、分析天平：感量O.lmg3、旋转蒸发仪4、均质机或匀浆机5、粉碎机6、离心机7、0.45卩m有机滤膜四、实验步骤（一）样品制备：将液体、浆状样品混合均匀，固体样品需粉碎磨细。

（二）样品处理：1、红辣椒粉等粉状样品称取1g ~ 2 g（准确至0.001 g）样品于三角瓶中，加入10mL ~20mL正己烷，超声处理5min，过滤，用10 mL正己烷洗涤残渣数次，至洗出液无色，合并正己烷液，用旋转蒸发仪浓缩至5mL以下，慢慢加入氧化铝层析柱中，为保证层析效果，在柱中保持正己烷液面为2mm左右时上样，在全程的层析过程中不应使柱干涸，用正己烷少量多次淋洗浓缩瓶，一并注入层析柱。