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胶乳免疫比浊法相关知识很多公司开展了荧光胶乳免疫层析做定量分析及胶乳增强免疫比浊分析项目，关注胶乳标记技术的技术人员越来越多。
本人总结了部分胶乳微球标记技术,并加以分类,以便朋友们查阅：胶乳微球物理吸附：反应微球带磺酸基、羧基、醛基表面的都是疏水微球，都可以用来设计被动吸附蛋白。
磺酸基微球表面含带有负电荷的磺酸基团，pka大约为2,因此在酸性pH保持稳定.醛基微球表面也带有磺酸基团,但能和蛋白行程共价键。
羧基微球表面含带负电荷的羧基基团，在pH5。
0以上时保持稳定。
带有疏水基团的蛋白的吸附和配位结合，是最简单和直接的标记方法.这种方法中，微球溶液和含目标蛋白的溶液混合，反应后，未结合的游离蛋白通过清洗步骤除去，从而获得胶体蛋白复合物。
疏水吸附方法只能用于疏水微球(硫酸盐、羧基、醛基表面修饰的微球)。
醛基表面修饰微球是一个特例,其疏水吸附结果取决于后来的共价结合.虽然物理吸附是不依赖pH的,但反应缓冲液的pH对蛋白的结构有非常大的影响，从而影响蛋白吸附到微球上的反应效率.一般,在被吸附蛋白等电点附近pH时，物理吸附效率会很高。
反应步骤：1.用反应缓冲液系数蛋白到10mg/ml；2.用反应缓冲液系数胶乳微球到1%；3.将蛋白溶液加入到胶乳微球溶液中,10ml胶乳中加入1ml蛋白溶液。
室温搅拌孵育2hr；4.离心或超滤，除去未结合蛋白；5。
将微球蛋白复合物用储存缓冲液溶解。
注意事项：1.最优蛋白标记量影响因素1）有效比表面积：粒径减小时，比表面积/mg微球值得增加；2）胶体稳定性：蛋白对胶乳有稳定和去稳定作用；3）免疫反应:最近标记量由免疫反应需要决定。
2.胶乳微球中加入蛋白后，快速搅拌混合，利于反应均衡.反应体积是1ml时，可用移液器吸取蛋白加入微球中,并吹打数次.如果反应体积较大时，用烧杯，边搅拌边加入蛋白，3.储存缓冲液和反应缓冲液不同时，抗体有脱落的可能；4.表面活性剂能使得抗体从胶乳中脱落,所以应避免加入。
丙烯酸酯乳液胶黏剂配方组成，生产工艺及应用导读：本文详细介绍了丙烯酸酯乳液胶黏剂的分类，组成，配方等等，需要注意的是，本文中所列出配方表数据经过修改，如需要更详细的内容，请与我们的技术工程师联系。
1. 背景丙烯酸乳液型胶粘剂是我国20世纪80年代以来发展最快的一种聚合物乳液胶粘剂，它一般是由丙烯酸酯类和甲基丙烯酸酯类共聚或加入醋酸乙烯酯等其它单体共聚而成。
该胶粘剂耐候性、耐水性、耐老化性能特别好，并目具有优良的抗氧化性和很大的断裂仲长率，广泛用于包装、涂料、建筑、纺织以及皮革等行业。
随着人们对环境保护的愈发重视，环境友好型产品越来越受到普遍的关注，乳液型胶粘剂因具有无毒无害、无环境污染、不易燃易爆、生产成本低、使用方便等优点而逐渐成为未来胶粘剂的发展趋势。
禾川化学是一家专业从事精细化学品以及高分子分析、研发的公司，具有丰富的分析研发经验，经过多年的技术积累，可以运用尖端的科学仪器、完善的标准图谱库、强大原材料库，彻底解决众多化工企业生产研发过程中遇到的难题，利用其八大服务优势，最终实现企业产品性能改进及新产品研发。
样品分析检测流程：样品确认—物理表征前处理—大型仪器分析—工程师解谱—分析结果验证—后续技术服务。
有任何配方技术难题，可即刻联系禾川化学技术团队，我们将为企业提供一站式配方技术解决方案！2. 丙烯酸乳液胶黏剂聚丙烯酸酯是一类具有多种性能的、用途广泛的聚合物，其乳液一般是以丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯或丙烯酸丁酯为主要单体，与甲基丙烯酸酯单体、苯乙烯、丙烯腈等共聚形成乳液。
对聚合物的结构或聚合方法加以改进，可使得改性后的丙烯酸酯胶黏剂性能更加优异。
2.1有机硅改性有机硅树脂具有优异的耐高低温性能和耐水性能，利用有机硅对聚丙烯酸酯类乳液胶粘剂改性成为近年来研究的热点。
有机功能烷氧基硅烷作为粘合促进剂和交联剂，广泛用于胶粘剂、密封胶和涂料等领域。
有专家研究了一种专用于水性体系的有机硅烷Wz-A在水乳型聚丙烯酸密封胶中的应用，这种水性硅烷可以在不改变产品稳定性的情况下显著提高密封胶的力学性能和粘接性能，Wz-A 的添加量在0.8%-1.6%较为合适。
双粒径胶乳免疫比浊法在测定D-二聚体中的应用方清【摘要】目的改进胶乳免疫试剂的分析灵敏度和线性范围,并验证在用胶乳免疫比浊法测定D-二聚体(DD)的方法中,采用双粒径胶乳致敏DD单克隆抗体比用单一粒径胶乳具有更好的灵敏度和线性范围.方法制备2种平均粒径不同的羧基化胶乳微粒(49和150 nm),并采用化学交联法偶联抗DD单克隆抗体,将2种粒径的致敏胶乳按不同比例混合,测定其分析灵敏度和线性范围,并与市售进口试剂进行比对.结果当49和150 nm致敏胶乳按4:1的比例混合时,其测定的校准曲线线性最好,线性范围达到61.88 μg/mL,分析灵敏度达到0.03,与进口试剂检测结果具有良好的相关性.结论双粒径致敏胶乳制备的DD免疫比浊法试剂比市售的传统DD胶乳诊断试剂的性能有了一定的提高,该试剂具有良好的临床应用前景.【期刊名称】《检验医学》【年(卷),期】2016(031)009【总页数】6页(P801-806)【关键词】D-二聚体;免疫比浊法;双粒径胶乳;灵敏度;线性范围;全自动血凝仪【作者】方清【作者单位】上海市医疗器械检测所,上海201318【正文语种】中文【中图分类】R446.1D-二聚体（D-dimer，DD）是交联纤维蛋白特异的降解产物，它的生成或增高反映了凝血或纤溶系统的激活，可作为体内高凝状态和纤溶亢进的分子标志物之一，广泛应用于血栓性疾病有关的临床诊断中［1］。
近年来，随着方法学的不断进步，DD检测的方法也越来越多，但利用的核心原理均是免疫检测，如酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）［2］、胶乳凝集法［3］、胶乳免疫比浊法［4］、胶体金免疫渗透法［5］，其中胶乳免疫比浊法是近年逐渐在全自动血凝仪上开始使用的方法，因其使用方便、操作简单、定量准确、检测快速等优点逐渐在各大中型医院中推广使用。
目前市售的检测DD的胶乳免疫试剂，主要是用单一粒径胶乳和抗体偶联，这往往存在着分析灵敏度低和线性范围窄的缺点。
硅烷偶联剂成分分析、配方开发技术及作用机理导读：本文详细介绍了硅烷偶联剂的研究背景，理论基础，参考配方等，如需更详细资料，可咨询我们的技术工程师。
禾川化学引进国外配方破译技术，专业从事硅烷偶联剂成分分析、配方还原、配方开发，为偶联剂相关企业提供整套技术解决方案一站式服务;一、背景硅烷偶联剂是一种具有特殊结构的有机硅化合物。
通过硅烷偶联剂可使两种性能差异很大的材料界面偶联起来,以提高复合材料的性能和增加粘接强度, 从而获得性能优异、可靠的新型复合材料。
硅烷偶联剂广泛用于橡胶、塑料、填充复合材料、环氧封装材料、弹性体、涂料、粘合剂和密封剂等。
使用硅烷偶联剂可以极大地改进上述材料的机械性能、电气性能、耐候性、耐水性、难燃性、粘接性、分散性、成型性以及工艺操作性等等。
近几十年来, 随着复合材料不断的发展，促进了各种偶联剂的研究与开发。
偶联剂和叠氮基硅烷偶联剂改性氨基硅烷,耐热硅烷、过氧基硅烷、阳离子硅烷、重氮和叠氮硅烷以及α-官能团硅烷等一系列新型硅烷偶联剂相继涌现；硅烷偶联剂独特的性能与显著的改性效果使其应用领域不断扩大。
禾川化学技术团队具有丰富的分析研发经验，经过多年的技术积累，可以运用尖端的科学仪器、完善的标准图谱库、强大原材料库，彻底解决众多化工企业生产研发过程中遇到的难题，利用其八大服务优势，最终实现企业产品性能改进及新产品研发。
样品分析检测流程：样品确认—物理表征前处理—大型仪器分析—工程师解谱—分析结果验证—后续技术服务。
有任何配方技术难题，可即刻联系禾川化学技术团队，我们将为企业提供一站式配方技术解决方案！二、硅烷偶联剂2.1.1硅烷偶联剂作用机理硅烷类偶联剂分子中存在亲有机和亲无机的功能基团，具有连接有机与无机材料两相界面的功能，对聚合物及无机物体系改性具有明显的技术效果。
硅烷类偶联剂结构通式可以写为RSiX3。
其中R为与树脂分子有亲和力或反应能力的活性官能团，如氨基、巯基、乙烯基、环氧基、氰基及甲基丙乙烯酰氧基等基团等；X代表能够水解的基团, 如卤素、烷氧基、酰氧基等;硅烷偶联剂由于在分子中具有这两类化学基团,因此既能与无机物中的羟基反应,又能与有机物中的长分子链相互作用起到偶联的功效,其作用机理大致分以下3 步:1)X基水解为羟基;2)羟基与无机物表面存在的羟基生成氢键或脱水成醚键3)R基与有机物相结合。
方案一 实验方法：一步法共价结合
实验步骤： 1、配制50mM的MES反应缓冲溶液，pH值为6.0；
2、将蛋白质溶解于反应缓冲溶液中，其浓度为10mg/L； 3、用反应缓冲溶液稀释胶乳微球，使其浓度为1%（W/V）； 4、将上述蛋白质溶液与胶乳微球混合，混合后在温室培育20分钟； 5、用去离子水配制EDAC溶液，浓度为10mg/mL（52μmol/mL）； 6、取计算量的EDAC溶液加到蛋白质与胶乳微球混合液中； 7、用0.1M氢氧化钠（NaOH）溶液调整该反应混合液的pH值至6.5±0.2，在摇床温室培育2小时；
8、将未结合的蛋白质除去，贮藏于缓冲溶液中。 方案二 实验方法：简单二步法共价结合
实验步骤： 1、配制50mM的MES反应缓冲溶液，pH值为6.0；
2、将蛋白质溶解于反应缓冲溶液中，其浓度为10mg/L； 3、用反应缓冲溶液稀释胶乳微球，使其浓度为1%（W/V）； 4、1mL胶乳微球悬浮液，加入20mgEDAC，在室温培育40分钟，在20分钟后第二次加入20mg/mL；
5、用相等体积的该缓冲溶液来洗涤胶乳微球，离心，用1倍体积的缓冲溶液重复处理；
6、将蛋白质溶解于50-100mM的MES缓冲溶液中，蛋白质浓度为1mg/mL； 7、再将胶乳微球悬浮于去离子水或结合的缓冲溶液中，迅速加入溶解的蛋白质，37℃搅拌反应3小时；
8、按1mL反应混合液加入2.5μL乙醇胺混合，搅拌反应10分钟； 9、除去未结合的蛋白质，贮藏与贮存的缓冲溶液中 方案三 实验方法：生成NHS-酯的中间体二步法共价结合
实验步骤： 1、每ml反应混合物加入下列各物： a． 去离子水是最后容积为1.0mL； b．0.1mL的10x的贮备缓冲溶液，其pH值为6.0-6.5（一般可用0.5M MES缓冲溶液）；胶乳微球最终浓度为1%（W/V）； c． 0.23mL的50mg/ml的NHS在去离子水中的溶液； d．19.2mg/mL（100mM）的EDAC在去离子水中的溶液
2、在室温将此混合物反应15-30分钟，不断搅拌； 3、用MES缓冲液或纯化水洗涤胶乳微球悬浮物，除去未反应的NHS和EDAC； 4、重新将胶乳微球在去离子水中悬浮，使其浓度为1%（w/v）； 5、将结合的蛋白质溶于50-100mM的MES缓冲溶液中，浓度为1mg/mL； 6、立即加入蛋白质溶液（胶乳微球、蛋白质和缓冲溶液的浓度分别为0.5%（w/v）、0.5mg/mL、25-50mM）；
7、将混合物反应至少2小时，轻轻搅拌； 8、按1mL反应混合液加入2.5μL乙醇胺混合，搅拌反应10分钟； 9、除去未结合的蛋白质和乙醇胺，贮于适宜的贮存缓冲溶液中。 附录 试剂： MES缓冲液 500mM 和 50mM；PH6.1；4°C 储存（如果发黄或者污染，应倒掉） 。
EDAC 盐酸 1－乙基－3－二甲基氨基丙基二酰亚胺 ；52umol/ml：分析天平称取 10mg EDAC，加入 1ml 去离子水。 （EDAC 对潮气非常敏感，在水中快速水解，EDAC 储存于干燥器中，-5 °C 保存。 ）
NHS N－羟基琥珀酰亚胺 ；50mg/ml 水溶液
蛋白质溶液 蛋白质充分稀释溶解，浓度为 1－10mg/ml
技术说明 ： 1．微球总表面积与其粒径成反比，抗体的具体用量需要根据使用微球的大小做相应改变； 单位质量的微球表面积（m2/g） ： A/M = 6/PD 其中 D= 微球粒径（µm） P = 微球密度 (聚苯乙烯 1.05g/ml) 例如：0.8µm的聚苯乙烯微球，A/M = 6/1.05×0.8 = 7.14 m2/g 1.6µm 的聚苯乙烯微球，A/M = 6/1.05×1.6 = 3.57 m2/g 0.8µL ，10mg 聚苯乙烯微球需加入 125－250µL 多克隆抗体 1.6µL ，10mg 聚苯乙烯微球需加入 62.5－125µL 多克隆抗体
2．虽然疏水性吸附与缓冲液 pH值无关，但反应缓冲液的 pH值对被吸附蛋白质的构象有较大影响，进而影响其吸附效率。在等电点 pH值条件下，更多的蛋白质疏水性吸附点暴露出来，利于其与微球作用；
3．高效搅拌下，将微球分散液快速加入蛋白质反应缓冲液，可以获得最高的吸附效率和吸附均匀度；
4．绝大部分的蛋白质很快被吸附，延长蛋白质与微球混合时间有助于蛋白质正确定位。 方案五 Sample Protocol for Two-Step Carbodiimide Coupling of Protein to Carboxylated Microspheres
Microspheres should be protected from prolonged exposure to light throughout this procedure.
1.Resuspend the stock uncoupled microspheres according to the instructions described in the Product Information Sheet provided with your microspheres.
2.Transfer 5.0 x 106 of the stock microspheres to a USA Scientific microcentrifuge tube.
3.Pellet the stock microspheres by microcentrifugation at ≥ 8000 x g for 1-2 minutes.
4.Remove the supernatant and resuspend the pelleted microspheres in 100 μL dH2O by vortex and sonication for approximately 20 seconds. 5.Pellet the microspheres by microcentrifugation at ≥ 8000 x g for 1-2 minutes.
6.Remove the supernatant and resuspend the washed microspheres in 80 μL 100 mM Monobasic Sodium Phosphate, pH 6.2 by vortex and sonication for approximately 20 seconds.
7.Add 10 μL of 50 mg/mL Sulfo-NHS (diluted in dH20) to the microspheres and mix gently by vortex.
8.Add 10 μL of 50 mg/mL EDC (diluted in dH20) to the microspheres and mix gently by vortex.
9.Incubate for 20 minutes at room temperature with gentle mixing by vortex at 10 minute intervals.
10.Pellet the activated microspheres by microcentrifugation at ≥ 8000 x g for 1-2 minutes. 11.Remove the supernatant and resuspend the microspheres in 250 μL of 50 mM MES, pH 5.0 by vortex and sonication for approximately 20 seconds. See Technical Note 1.
12.Pellet the microspheres by microcentrifugation at ≥ 8000 x g for 1-2 minutes.
13.Repeat steps 11. and 12. This is a total of two washes with 50 mM MES, pH 5.0.
14.Remove the supernatant and resuspend the activated and washed microspheres in 100 μL of 50 mM MES, pH 5.0 by vortex and sonication for approximately 20 seconds.
15.Add 125, 25, 5 or 1 μg protein to the resuspended microspheres. (Note: We recommend titration in the 1 to 125 μg range to determine the optimal amount of protein per specific coupling reaction.)
16.Bring total volume to 500 μL with 50 mM MES, pH 5.0. 17.Mix coupling reaction by vortex.
