【CN110007092A】一种胶乳微球蛋白CMPF偶联物及其制备方法以及测定血清中CMPF含量的试

[19]中华人民共和国国家知识产权局[12]发明专利申请公布说明书[11]公开号CN 101069751A [43]公开日2007年11月14日[21]申请号200610035470.7[22]申请日2006.05.10[21]申请号200610035470.7[71]申请人广州康盛生物科技有限公司地址510730广东省广州市科学城神州街8号共同申请人华南理工大学[72]发明人陈校园 汪志刚 李光吉 许春生 张旭锋[74]专利代理机构珠海智专专利商标代理有限公司代理人许淑文[51]Int.CI.A61L 2/16 (2006.01)A61L 101/46 (2006.01)权利要求书 2 页 说明书 9 页[54]发明名称一种蛋白A免疫吸附材料及其制备方法[57]摘要本发明涉及用于血液净化的蛋白A免疫吸附材料及其制备方法。

公开了琼脂糖凝胶与蛋白A偶联的高分子材料，该材料以琼脂糖凝胶为载体基质，与双缩水甘油醚类偶联试剂反应后得到活性载体，再与蛋白A进行偶联反应而得到。

该材料的合成方法简便、工艺路线短、制备安全；产品具有特异性强、对免疫球蛋白及其复合物的吸附效率高、再生性能好的特性，可用于临床上免疫吸附治疗。

200610035470.7权 利 要 求 书第1/2页1、一种蛋白A免疫吸附材料，是琼脂糖凝胶与蛋白A偶联的高分子材料，其具有如下的化学结构：其中：代表琼脂糖凝胶，X代表C2～6的直链烷基，或者代表CH2-CH2-O n，其中n＝1～9，SPA-NH2为蛋白A。

2、权利要求1的蛋白A免疫吸附材料，其特征是X代表-CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-或者-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-。

3、权利要求1或2的蛋白A免疫吸附材料的制备方法，其特征为：以琼脂糖凝胶为载体，将琼脂糖凝胶与偶联试剂双缩水甘油醚类试剂反应形成活化琼脂糖凝胶，然后与蛋白A的氨基偶联，形成琼脂糖凝胶蛋白A免疫吸附材料，具体在于：a、偶联试剂双缩水甘油醚类试剂与琼脂糖凝胶在0.4～1.0mol/L的碱性水溶液中，于20～40℃下反应，琼脂糖凝胶在反应液中所占的体积比为30％～50％；b、步骤a反应结束后，将活性琼脂糖凝胶过滤，用蒸馏水冲洗至中性；c、步骤b所得的活性琼脂糖凝胶溶于PH缓冲液中，控制pH值在8.0～10.0范围内，加入蛋白A，0～40℃反应16～20小时；d、步骤c所得产物进行端基封闭反应。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201911407689.9(22)申请日 2019.12.31(71)申请人 深圳市瀚德标检生物工程有限公司地址 518000 广东省深圳市坪山区坪山街道办事处六联社区浪尾村宝山路16号A栋02区4楼(72)发明人 郑招荣　柳秋月　梁灿丽　蔡佳龙　刘金超　(74)专利代理机构 深圳市精英专利事务所44242代理人 于建(51)Int.Cl.G01N 33/543(2006.01)G01N 33/531(2006.01)(54)发明名称一种羧基乳胶微球与抗体的偶联方法(57)摘要本发明公开了一种羧基乳胶微球与抗体的偶联方法，涉及医学检测技术领域。

该方法通过对羧基化乳胶微球进行预处理、对羧基化乳胶微球进行活化形成活化中间体，最后再与抗体偶联的过程，有效地提高羧基乳胶微球单分散性、乳胶微球活化中间体的浓度以及羧基乳胶微球与抗体的偶联效率，避免乳胶微球发生自凝，维持乳胶微球的活化状态从而提高微球与抗体的有效结合率。

权利要求书2页 说明书6页CN 111077304 A 2020.04.28C N 111077304A1.一种羧基乳胶微球与抗体的偶联方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，将质量分数为4％羧基乳胶微球原液与活化缓冲液按体积比1:15-25充分混合，离心，弃上清，向沉淀中加入4倍所述羧基乳胶微球原液体积的活化缓冲液，再次混合，超声，至溶液中的羧基乳胶微球处于单分散状态，得到微球悬液，将微球悬液于4℃保存备用；S2，将100g/L的EDC水溶液、100g/L的Sulfo-NHS水溶液以及所述微球悬液按体积比0.8-1.2:5.5-6.5:65-75快速充分混合，反应30min，得到第一混合液；S3，对所述第一混合液进行超声，至所述第一混合液中的羧基乳胶微球处于单分散状态后，离心洗涤，得到沉淀液，向沉淀液中加入质量分数为10％的Tween-20混匀，得到活化微球液，将活化微球液于4℃保存备用，所述活化微球液中的Tween-20的质量分数为0.1-0.2％；S4，将0.1～1ug/μL的抗体溶液与所述活化微球液按体积比为3-4:1进行混合，偶联反应2h以上，得到微球-抗体标记物溶液；S5，向所述微球-抗体标记物溶液中加入1mol/L乙醇胺溶液，旋转混合均匀，得到第三混合液，所述第三混合液中乙醇胺的浓度为5～20mmol/L；S6，对所述第三混合液进行超声、离心洗涤，得到微球-抗体标记物沉淀，向所述微球-抗体标记物沉淀中加入保存液重悬，即得到含有质量分数0.5％的羧基乳胶微球-抗体标记物重悬液。

抗体，胶乳基本偶联步骤免疫胶乳偶联试验方案一试剂准备：mes缓冲液500mm，ph5-6，4℃储存；edac配置浓度为52μmol/ml（称取10mgedac，加入1ml去离子水）；nhs酿制浓度为50mg/ml水溶液；蛋白质溶液缓冲液稀释至浓度为1－10mg/ml。

二步偶联法：1.将包好的溶液按以下顺序几滴重新加入离心管①100μl500mmmes缓冲液；②搅拌吸收至1ml；③200μl5％微球；④230ulnhs溶液⑤edac水溶液（排序量）2.放置在恒温摇床上，37℃，120rpm，30min；3.13000rpmVergt30min，下陷后，弃上清，搜集Vergt结晶；用50mmmes缓冲液冲洗2次；Vergt下陷后，弃上清。

4.将包好的溶液按以下顺序重新加入离心管中，搅匀①100ul500mmmes缓冲液；②搅拌吸收至1ml；③蛋白质溶液。

5.放置在恒温摇床上，37℃，120rpm，2h；1ml6.13000rpmVergt20min下陷后，弃上清，搜集Vergt结晶；用1ml50mmmes缓冲液（或者调节ph至8.0左右），同时重新加入bsa溶液至其终浓度为1%，冲洗3次；Vergt 下陷后，弃上清。

7.加入0.97mlmes缓冲液（或者调节ph至8.0左右），将微球浓度调为1％，并重新悬浮，然后搅拌，接着温和的超声分散；8.重新悬浮后加入一定量的bsa溶液（比如终浓度为1%），保存。

9．福林酚法测定偶联蛋白质含量（可选）。

（如要测蛋白质含量，则前面的方法中不可加入bsa。

）免疫系统胶乳偶联试验方法二1.每ml反应混合物加入以下成分：加入diw，定容最终体积为1ml；0.1ml10x的mesbuffer，ph6.0~6.5（10x的buffer通常用0.5m）；0.1ml10%的微球(终浓度为1%)；0.23mlnhs水溶液（50mg/ml）;11.5mg一定体积的19.2mg/ml(100mm)的edac水溶液；2.室温下烘烤反应15~30min；（note7）3.清洗：mesbuffer或diw清洗两次；（note3）；4.用mesbuffe或者diw悬浮微球到浓度为1%；5.同时，用mesbuffer熔化吸收抗体。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910368886.8(22)申请日 2019.05.05(71)申请人 江南大学地址 214122 江苏省无锡市蠡湖大道1800号(72)发明人 殷允杰　张鹏飞　梁家宁　庞书宇　李嘉懿　王潮霞　(74)专利代理机构 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204代理人 丁静静(51)Int.Cl.B01J 13/02(2006.01)D06M 11/46(2006.01)(54)发明名称一种反应型超疏水TiO 2微球及其制备方法与应用(57)摘要本发明公开一种反应型超疏水TiO 2微球及其制备方法与应用，属于纳米高分子材料领域。

其首先是通过溶胶-凝胶法合成TiO 2溶胶，利用盐酸调节pH值，使钛酸四正丁酯水解以制备钛溶胶。

再使用具有环氧基的硅烷偶联剂对TiO 2进行改性，在赋予TiO 2超疏水效果的同时，其还可以与织物更好的结合，具有优良的耐久性。

该具有超疏水性的TiO 2微球的制备方法工艺简单，在制备疏水织物、导汗排汗等领域具有潜在应用价值。

权利要求书1页 说明书4页 附图3页CN 110170284 A 2019.08.27C N 110170284A权　利　要　求　书1/1页CN 110170284 A1.一种反应型超疏水TiO2微球的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将钛酸四正丁酯加入无水乙醇中，混合均匀；(2)在搅拌条件下，将步骤(1)得到的钛酸四正丁酯混合物与盐酸溶液同时滴加到乙醇水溶液中，用氨水调节pH为2～4，得到二氧化钛溶胶；(3)在搅拌条件下，向二氧化钛溶胶中加入疏水型硅烷偶联剂，再加入含氧基型硅烷偶联剂，得到改性二氧化钛溶胶，所述疏水性的硅烷偶联剂为甲基三乙氧基硅烷、γ-氯丙基三乙氧基硅烷、辛基三乙氧基硅烷、十二烷基三乙氧基硅烷中的一种或几种的混合物，所述含环氧基型的硅烷偶联剂为γ-缩水甘油醚氧丙基三甲氧基硅烷；(4)离心改性二氧化钛溶胶，洗涤，烘干，得到改性二氧化钛块状固体，研磨处理，得到反应型超疏水TiO2微球。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010644645.4(22)申请日 2020.07.07(71)申请人 武汉生之源生物科技股份有限公司地址 430000 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新大道818号高科医疗器械园B11号1楼、2楼、3楼(72)发明人 伍卫姣　赵愿安　赵畅　黄爱　陈婷　刘道锦　张雪娇　舒芹　(74)专利代理机构 武汉智嘉联合知识产权代理事务所(普通合伙) 42231代理人 丁倩(51)Int.Cl.G01N 33/543(2006.01)G01N 33/68(2006.01)(54)发明名称提高胶乳免疫比浊法稳定性的胶乳微球、制备方法及应用(57)摘要本发明涉及高分子微球材料技术领域，具体公开了一种提高胶乳免疫比浊法稳定性的胶乳微球的制备方法，包括将含有氯氧基的对4‑氯甲氧基苯乙烯作为原料混合，通入氮气搅拌预乳化后，加入过硫酸钾，升温，继续搅拌反应，得到所述胶乳微球的悬浮液；滴加氯化锂水溶液破乳，减压抽滤，洗涤，离心得到胶乳微球。

在聚合原料选择中添加带有氯甲氧基的苯乙烯衍生物能够提高其聚合转化率，降低胶乳微球的水化直径和表明负电荷，从而提高微球的稳定性。

本发明提供的胶乳微球制备的胶乳试剂，在免疫比浊检测时的效果更佳，稳定性更优。

权利要求书1页 说明书8页 附图2页CN 111929435 A 2020.11.13C N 111929435A1.一种提高胶乳免疫比浊法稳定性的胶乳微球的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：将十二烷基苯磺酸钠、氢氧化钠、对4-氯甲氧基苯乙烯、苯乙烯和水混合得到料液A，按重量分数计，所述各成份在原材料中的配比为，苯乙烯:对4-氯甲氧基苯乙烯:十二烷基苯磺酸钠:氢氧化钠:水＝(15～20):(10～15):(10～15):(55～65)；S2：通入氮气搅拌预乳化30min后，加入过硫酸钾，升温60℃，继续通氮气搅拌反应6～8h，得到所述胶乳微球的悬浮液；S3：向所述悬浮液中滴加10％的氯化锂水溶液破乳，破乳后的悬浮液减压抽滤，得到的胶乳微球颗粒用蒸馏水和乙醇交替洗涤，离心后得到最终产品的所述胶乳微球。

一种彩色乳胶微球的制备方法、彩色乳胶微球及其用途与流程一种彩色乳胶微球的制备方法如下：材料准备：1. 乳胶2. 颜料3. 发泡剂4. 表面活性剂5. 可溶性胶原蛋白制备步骤：1. 准备一个容器，加入适量的乳胶。

根据需要制备的微球的数量，确定乳胶的量。

2. 添加颜料，并充分搅拌均匀。

颜料可以根据需要选择不同的颜色，以制备彩色乳胶微球。

3. 添加适量的发泡剂，并搅拌均匀。

发泡剂可以使乳胶产生细小的气泡，从而形成微球的泡沫结构。

4. 加入表面活性剂，并充分搅拌均匀。

表面活性剂可以使乳胶形成稳定的乳状液体，从而便于后续的处理和操作。

5. 最后加入可溶性胶原蛋白，并搅拌均匀。

可溶性胶原蛋白可以增强乳胶的弹性和柔软性，使得制备的微球具有更好的质地和性能。

彩色乳胶微球的用途：1. 彩色乳胶微球可以用于化妆品领域，作为粉底、腮红、眼影等彩妆产品的原材料，可以根据需要制备不同颜色和尺寸的微球，打造丰富多样的妆容效果。

2. 彩色乳胶微球可以用于药物传输系统，通过调控微球的尺寸和表面特性，实现对药物的定向释放和控制释放，提高药物的疗效和减少副作用。

3. 彩色乳胶微球可以用于印刷和涂料行业，作为颜料粒子的替代品，可以提供更均匀和饱满的颜色效果。

4. 彩色乳胶微球可以用于仿真模拟材料，制备精细的仿生结构，如人造皮肤、人造毛发等。

彩色乳胶微球的制备流程总结如下：1. 准备乳胶和其他添加剂。

2. 加入颜料、发泡剂、表面活性剂和可溶性胶原蛋白。

3. 搅拌均匀，使各组分充分混合。

4. 调整乳胶的质地和性能，如调节颜色和微球的尺寸。

5. 获得彩色乳胶微球。

6. 根据需要进行后续加工和应用。

实验方法：一步法共价结合实验步骤：1、配制50mM的MES反应缓冲溶液，pH值为6.0；2、将蛋白质溶解于反应缓冲溶液中，其浓度为10mg/L；3、用反应缓冲溶液稀释胶乳微球，使其浓度为1%（W/V）；4、将上述蛋白质溶液与胶乳微球混合，混合后在温室培育20分钟；5、用去离子水配制EDAC溶液，浓度为10mg/mL（52μmol/mL）；6、取计算量的EDAC溶液加到蛋白质与胶乳微球混合液中；7、用0.1M氢氧化钠（NaOH）溶液调整该反应混合液的pH值至6.5±0.2，在摇床温室培育2小时；8、将未结合的蛋白质除去，贮藏于缓冲溶液中。

实验方法：简单二步法共价结合实验步骤：1、配制50mM的MES反应缓冲溶液，pH值为6.0；2、将蛋白质溶解于反应缓冲溶液中，其浓度为10mg/L；3、用反应缓冲溶液稀释胶乳微球，使其浓度为1%（W/V）；4、1mL胶乳微球悬浮液，加入20mgEDAC，在室温培育40分钟，在20分钟后第二次加入20mg/mL；5、用相等体积的该缓冲溶液来洗涤胶乳微球，离心，用1倍体积的缓冲溶液重复处理；6、将蛋白质溶解于50-100mM的MES缓冲溶液中，蛋白质浓度为1mg/mL；7、再将胶乳微球悬浮于去离子水或结合的缓冲溶液中，迅速加入溶解的蛋白质，37℃搅拌反应3小时；8、按1mL反应混合液加入2.5μL乙醇胺混合，搅拌反应10分钟；9、除去未结合的蛋白质，贮藏与贮存的缓冲溶液中实验方法：生成NHS-酯的中间体二步法共价结合实验步骤：1、每ml反应混合物加入下列各物：a．去离子水是最后容积为1.0mL；b．0.1mL的10x的贮备缓冲溶液，其pH值为6.0-6.5（一般可用0.5M MES缓冲溶液）；胶乳微球最终浓度为1%（W/V）；c．0.23mL的50mg/ml的NHS在去离子水中的溶液；d．19.2mg/mL（100mM）的EDAC在去离子水中的溶液2、在室温将此混合物反应15-30分钟，不断搅拌；3、用MES缓冲液或纯化水洗涤胶乳微球悬浮物，除去未反应的NHS和EDAC；4、重新将胶乳微球在去离子水中悬浮，使其浓度为1%（w/v）；5、将结合的蛋白质溶于50-100mM的MES缓冲溶液中，浓度为1mg/mL；6、立即加入蛋白质溶液（胶乳微球、蛋白质和缓冲溶液的浓度分别为0.5%（w/v）、0.5mg/mL、25-50mM）；7、将混合物反应至少2小时，轻轻搅拌；8、按1mL反应混合液加入2.5μL乙醇胺混合，搅拌反应10分钟；9、除去未结合的蛋白质和乙醇胺，贮于适宜的贮存缓冲溶液中。

矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。

如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。

㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。

(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。

如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。

对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。

二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。

2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。

㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。

2、矿产品价格稳定性及变化趋势。

三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。

2、矿区矿产资源概况。

3、该设计与矿区总体开发的关系。

㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。

2、矿床开采技术条件及水文地质条件。

矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。

如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。

㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。

(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。

如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。

对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。

二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。

2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。

㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。

2、矿产品价格稳定性及变化趋势。

三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。

2、矿区矿产资源概况。

3、该设计与矿区总体开发的关系。

㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。

2、矿床开采技术条件及水文地质条件。

矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。

如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。

㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。

(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。

如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。

对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。

二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。

2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。

㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。

2、矿产品价格稳定性及变化趋势。

三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。

2、矿区矿产资源概况。

3、该设计与矿区总体开发的关系。

㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。

2、矿床开采技术条件及水文地质条件。

矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。

如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。

㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。

(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。

如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。

对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。

二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。

2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。

㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。

2、矿产品价格稳定性及变化趋势。

三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。

2、矿区矿产资源概况。

3、该设计与矿区总体开发的关系。

㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。

2、矿床开采技术条件及水文地质条件。