蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐含量的测定

ICS67．050B 04N Y 中华人民共禾口国农业行业标准NY／T 1 375—2007植物产品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定离子色谱法Determination of N i tr i te an d N i tr a te in Pl ant Pro duc tsIo n Chromatography Method2007-06一{4发布2007-09—01实施中华人民共和国农业部发布NY／T 1375—2007刚旨本标准的附录A为资料性附录。

本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。

本标准起草单位：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、浙江大地农作物产品质量安全检测中心。

本标准的主要起草人：徐霞、陈能、王敏、朱智伟、段彬伍、郑床木、闵捷、于永红。

NY／T 1375—2007植物产品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定离子色谱法1范围本标准规定了采用离子色谱测定粮食、蔬菜、水果等植物产品中亚硝酸盐与硝酸盐的方法。

本标准适用于粮食、蔬菜、水果等植物产品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定。

本方法的线性范围：亚硝酸盐为0．05 mg／L--20rag／L(以N02-计)、硝酸盐为0．05 rag／L--50 rn g／L(以N03计)。

本方法的检出限：亚硝酸盐为0．1m g／k g(以N a N02计)、硝酸盐为0．2m g／k g(以N o N03计)。

2原理在弱碱性条件下，用热水提取样品中亚硝酸根离子(N02)和硝酸根离子(N03-)，经净化后，用离子交换色谱一电导检测器(或紫外检测器于波长210 rim处)测定，外标法定量。

3试剂除另有说明外，所用试剂均为分析纯，所用的水为电导率小于1”S／em的去离子水。

3．1亚硝酸钠(NaN02)，基准试剂。

3．2硝酸钾(KNOs)，基准试剂。

3．3氢氧化钾溶液[C(K OH)=1m ol／L]：称取6 g氢氧化钾，加入新煮沸过的冷水溶解，并稀释至100 mL，混匀。

3 4亚硝酸根离子标准贮备液(1 000 mg／L)：称取1．500 0 g于115"C±5"C烘至恒重的亚硝酸钠(3．1)，溶于水，置于1 000mL容量瓶中，加水至刻度，混匀。

（一）亚硝酸盐的测定
原理：试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐 与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色 染料，与标准比较定量。 试剂 1 亚铁氰化钾溶液：称取106.0g亚铁氰化钾，用水溶解，并稀 释至1000mL。 2 乙酸锌溶液：称取220.0g乙酸锌，加30mL冰乙酸溶于水， 并稀释至1000mL。 3 饱和硼砂溶液：称取5.0g硼酸钠，溶于100mL热水中，冷 却后备用。
（二）硝酸盐测定—镉柱法
原理
• 试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，溶液通过镉柱，使其
中的硝酸根离子还原成亚硝酸根离子，在弱酸性条件下 ，亚硝酸根与对氨苯基磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二 胺偶合形成红色染料，测得亚硝酸盐总量，由总量减去 亚硝酸盐含量即得硝酸盐含量。
（二）硝酸盐测定—镉柱法
1 氨缓冲溶液(pH9.6～9.7)：量取20 mL盐酸.加50 mL水，混 匀后加50 mL氨水，再加水稀释至1 000 mL，混匀。
• 井水中含有亚硝酸盐，据报道广东一村庄受井水中亚硝酸盐危
害几十年，男人寿命不足40岁，经化验结果表明亚硝酸盐含 量大大超过国家标准。
• 亚硝酸盐在食品生产中作为食品添加剂使用，用作发色剂和防
腐剂，允许用于肉及肉制品的生产加工中，其作用是使得肉与 肉制品呈现良好的色泽。
1.农产品中硝酸盐来源
• 化肥：硝酸铵、硝酸钙、硝酸钾、硝酸钠和尿素等； • 生活污水、生活垃圾与人畜粪便：1公斤垃圾粪便堆肥在自然
够容纳 2 倍试样体积的带盖容器中，通过反复摇晃和颠倒容器使样品充 分混匀直到使试样均一化。
• 发酵乳、乳、炼乳及其他液体乳制品：通过搅拌或反复摇晃和颠倒容器使
试样充分混匀。
• 干酪：取适量的样品研磨成均匀的泥浆状。为避免水分损失，研磨过程中

+本科毕业论文题目：几种蔬菜中亚硝酸盐含量的动态分析学院：食品科学与工程学院姓名：XXX学号：xxxxxxx专业：食品质量与安全班级：食安091班指导教师：xxx 职称：讲师二〇一三年四月目录摘要 (I)ABSTRACT (II)1 引言 (1)1.1概述 (1)1.2测定方法及研究的意义 (1)2 实验材料与方法 (2)2.1实验材料 (2)2.1.1 原材料 (2)2.1.2 主要仪器 (2)2.2实验方法 (3)2.2.1 亚硝酸盐的测定 (3)2.2.2 菌落总数的测定 (4)2.3蔬菜在家庭贮藏与加工条件下的亚硝酸盐含量的测定 (6)2.3.1 不同贮藏温度对蔬菜中亚硝酸盐含量的影响 (6)2.4煮熟菠菜在常温条件下，亚硝酸盐含量与菌落总数的关系 (6)3 实验结果与分析 (7)3.1标准曲线的绘制 (7)3.2消除抗坏血酸对实验的影响 (7)3.3家庭加工及加工后贮藏对亚硝酸盐含量的影响 (8)3.3.1 不同贮藏温度对蔬菜中亚硝酸盐含量的影响 (8)3.3.2 不同煮沸时间对蔬菜中亚硝酸盐含量的影响 (9)3.3.3 煮熟菠菜在常温条件下，亚硝酸盐含量与菌落总数的关系 (10)4 结论 (11)参考文献 (12)致谢 (13)摘要新鲜蔬菜中的亚硝酸盐含量会随着贮藏和加工条件的改变而变化，本文以分光光度法测定蔬菜中亚硝酸盐含量，分别研究了芹菜、番茄、白菜、白萝卜、菠菜和四季豆在不同贮藏温度、不同煮沸时间条件下，亚硝酸盐含量的变化；蔬菜煮熟后室温放置一定时间，亚硝酸盐含量与菌落总数之间的关系。

根据《食品中污染物限量》(GB 2762－2005)规定，蔬菜中亚硝酸盐限量卫生标准≤4 mg/kg。

试验结果表明：室温存放叶类、茎类、鲜豆类蔬菜分别不超过三天、四天和四天；根类和茄果类蔬菜中的亚硝酸盐含量在检测周期内（一周）没有超过限量标准；冰箱存放叶类蔬菜不超过四天；茎类、鲜豆类、根类和茄果类蔬菜中的亚硝酸盐含量在检测周期内（一周）没有超过限量标准。

蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐的测定及含量分析
硝酸盐和亚硝酸盐在一些地区的日常食物中存在，如蔬菜和肉类。

它们也被添
加到食品中，如香肠和酱油，以改善口感和保鲜时间，可以减少有害微生物的生长。

硝酸盐和亚硝酸盐在高浓度下有毒，所以监管机构和食品安全官员必须密切监测它们在食品中的含量，以确保食物安全。

为了确定蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐的含量，原理是用水解和酸解的方法，然后
用标准的分光光度法进行测定分析。

首先解冻样品，采用乙醇或其他适当的溶剂消化；消化液可以用酸浓度调节器进行调节，如HCl或NaOH；然后将消化液向容易
对比度测量物体中添加适量氧化铌，水解时加热蒸发；最后添加分光光度滴定液，如凯氏滴定液，测量出总硝酸盐摩尔浓度，并建立比例。

以上是硝酸盐和亚硝酸盐在蔬菜样品中的分析测定方法。

硝酸盐和亚硝酸盐的含量可以通过上述方法利用标准的分光光度法确定。

这一
测定方法简单容易，重点是精确度较高，可以准确检测出不同样品中硝酸盐和亚硝酸盐的含量，从而提高食物的安全性。

蔬菜中硝酸盐亚硝酸盐含量评价标准蔬菜中的硝酸盐和亚硝酸盐是食品中主要存在的两种争议性化学物质。

硝酸盐和亚硝酸盐的摄入与一些癌症的发生有关，因此对其含量进行评价并制定相应的标准非常重要。

硝酸盐是一种常见的氮源，它在植物体内通过硝酸还原酶系列反应被还原为亚硝酸盐。

硝酸盐主要存在于土壤中，在植物生长过程中会被吸收和积累。

硝酸盐在人体内可以转化为亚硝酸盐，进一步转化为亚硝酸和亚硝胺。

亚硝酸盐是一种有害物质，它可导致亚硝酸盐中毒、致癌等健康问题。

目前，蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐含量的评价标准主要有以下几种：1.GB2762-2024《食品安全国家标准蔬菜中亚硝酸盐的限量》根据《食品安全国家标准蔬菜中亚硝酸盐的限量》，蔬菜中亚硝酸盐的最大限量分别为：生菜0.10mg/kg，黄瓜0.20mg/kg，番茄0.20mg/kg，胡萝卜0.30mg/kg，茄子0.30mg/kg，辣椒0.50mg/kg，大蒜0.50mg/kg，韭菜0.50mg/kg，葱0.50mg/kg，芹菜0.50mg/kg，菠菜0.50mg/kg。

2.WHO和FAO联合国际食品标准委员会3.欧洲食品标准局（EFSA）欧洲食品标准局（EFSA）通过各类科学研究和实验证据，建议将蔬菜中硝酸盐的日摄入量限制在每公斤体重体积为3.7毫克，并对食品加工业提出了相应的建议和标准。

不同国家或地区制定的评价标准会有所不同，但都致力于保护人们的健康，防止硝酸盐和亚硝酸盐造成的健康问题。

为了降低蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐的含量，可以采取以下措施：1.合理施肥：合理使用有机肥料和化学肥料，尽量减少硝酸盐的累积。

2.控制生长环境：合理调控温度和湿度，避免植物在高温和潮湿条件下生长，以减少硝酸盐的积累。

3.适时采摘：及时采摘新鲜蔬菜，减少硝酸盐的转化。

4.加工和烹饪：在加工和烹饪过程中，可采用烹饪、脱水和浸泡等方法，适当降低蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐的含量。

总之，评价蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐含量的标准主要是为了确保食品安全，保护人们的健康。

蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐含量的测定摘要：蔬菜中的硝酸盐和亚硝酸盐是一种对人体有害的化学物质,其含量比其它植物都高,人体摄入它会引起多种疾病.本实验采用分光光度发分别对拜城县恰玛古，柯坪县恰玛古，伊宁市恰玛古，大白菜，黄萝卜，黄瓜中亚硝酸盐及硝酸盐含量进行测定。

结果表明：（1）亚硝酸盐：六种蔬菜中亚硝酸盐含量有明显的差异，测定结果是：大白菜0.7919mg/g，黄萝卜0.6930mg/g，黄瓜0.5763mg/g，拜城恰玛古0.5528mg/g，伊宁恰玛古1.1294 mg/g，柯坪恰玛古0.5174mg/g。

（2）硝酸盐：大白菜1.6098mg/g，黄萝卜0.0598mg/g，黄瓜0.7421mg/g，拜城恰玛古0.2608mg/g，伊宁恰玛古2.5308mg/g，柯坪恰玛古0.0317mg/g，蔬菜中亚硝酸盐含量的回收率88.80%。

关键词：硝酸盐；亚硝酸盐；蔬菜；测定方法；前言：蔬菜尤其是叶菜类蔬菜,是一种易于富集硝酸盐的植物。

人体摄入的硝酸盐81.2％来自蔬菜[1]。

硝酸盐本身毒性不大,对人畜无直接的危害,但含量过高对人体可能造成危害,因为在微生物的作用下极易还原为亚硝酸盐。

亚硝酸盐是一种有毒物质,可直接使动物中毒!造成亚铁血红蛋白症,严重可致死亡[2]。

亚硝酸盐，一类无机化合物的总称。

主要指亚硝酸钠.亚硝酸钠为白色至淡黄色粉末或颗粒状，味微咸，易溶于水。

外观及滋味都与食盐相似，并在工业、建筑业中广为使用，肉类制品中也允许作为发色剂限量使用。

由亚硝酸盐引起食物中毒的机率较高。

食入0.3～0.5克的亚硝酸盐即可引起中毒甚至死亡[3]。

硝酸盐,亚硝酸盐广泛存在于人类环境中,其对人类健康和生态环境的危害,日益受到人们的普遍关注。

硝酸盐在细菌的作用下可还原成亚硝酸盐,使血液的载氧能力下降,从而导致高铁血红蛋白症。

联合国世界卫生组织和粮农组织[4]早在1973 年就制定了食品中硝酸盐的限量标准,以ADI值为基础,提出蔬菜可食部分中硝酸盐含量的卫生标准为432mg/kg (鲜样),亚硝酸盐成人每人每日容许量为7.8mg。

《专业技能实践2——14食品质量安全》报告专业食品质量与安全姓名成绩班级学号日期项目二泡菜发酵过程中亚硝酸盐含量变化及安全控制一、目的1、学习泡菜制作工艺，了解泡菜制作原理；2、了解泡菜品质的影响因素的作用效果（0.25%D-异抗坏血酸）；3、了解泡菜质量评价指标；4、掌握泡菜中总酸、亚硝酸盐、硝酸盐含量的测定方法及变化规律。

二、原理与方案1、乳酸发酵是乳酸菌将糖类物质转化成主要产物乳酸的生物化学过程。

乳酸发酵的好坏与泡菜的品质密切相关。

在蔬菜盐渍过程中，应尽量满足乳酸菌生长繁殖的条件，尽可能抑制有害微生物的繁殖，并尽可能减少营养成分的损失。

影响乳酸菌发酵的因素主要是食盐浓度（最适盐度为3-5%）、温度（最适温度为25～35℃）、酸度（乳酸菌抗酸性强）、空气（乳酸菌为厌气性细菌）以及香辛调味料（一定的防腐作用）。

2、总酸测定原理（直接滴定法）：根据酸碱中和原理,用碱液滴定试液中的酸,根据电位的“突跃”判断滴定终点。

用NaOH标准溶液滴定试液中的酸,以酚酞为指示剂确定滴定终点,按NaOH标准溶液的消耗量计算食品中的总酸含量。

3、亚硝酸盐测定原理：样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化，产生重氮盐，此重氮盐再与显色物质(盐酸萘乙二胺)偶合形成紫红色染料，测定其吸光度后，可与亚硝酸盐含量标准曲线比较得到亚硝酸盐浓度。

4、硝酸盐测定原理：利用活性炭的吸附作用除去样品中的色素干扰。

通过硝酸根离子在220nm波长处的吸收值与硝酸盐含量标准曲线比较定量，从而计算得到硝酸盐浓度。

三、步骤（1）、小组分工：（小组长：罗旭红）（各项负责人按主次排列）总酸泡菜黎家宾蔡伟贤发酵液蔡伟贤罗旭红亚硝酸盐莫卓妍黎家宾硝酸盐罗旭红蔡伟贤配试剂蔡伟贤莫卓妍（2）、制作泡菜：原料：白菜1kg、水2.5L、100克，精盐157.5g（盐度4.5%），D-异抗坏血酸6.25g （0.25%）、白酒适量、香辛调味料适量（辣椒、花椒、八角）。

• 亚硝酸盐就成了关键，因为它既可以转化为一氧化氮（失去一个氧原子）（好的， 信号分子），也能转化为亚硝胺（坏的，致癌物）
1 硝酸盐（nitrate）和亚硝酸盐（nitrite）简介
特点(features ) ：
• 食品中硝酸盐和亚硝酸盐主要来源有人工化肥、生活污水、雨水、食品防腐和保鲜添加、 转化过程；下面分别分析：
量过多或者过少，都会影响还原效率，一般为灰黑色。它能使 还原的历程作一些细微的变动，如加速反应，防止过渡还原等
3 分光光度法检测食品中硝酸盐和亚硝酸盐
镉柱制备(Cadmium column) ：
• 镉柱装填：用水装满镉柱，并在柱子底部装入高2cm高的玻璃棉，加入海绵状镉10-20cm， 再覆上玻璃棉。
3 分光光度法检测食品中硝酸盐和亚硝酸盐
标液试剂(reagents) ：
• 氨缓冲溶液（ammonia buffer）：盐酸30mL,氨水（25％）65mL稀释至100mL，pH9.6~9.7。 （作用：1、控制溶液pH值在稳定的范围内；2、做络合剂，防止反应生成的镉表面形成
的沉淀阻止反应进一步进行（锌与强碱生成锌酸盐。和氢氧化铝不同，能溶于氨水中生成 锌氨络离子：Zn(OH)2+4NH3=〔Zn(NH3)4〕2++20H-），所以沉淀剂要少用）
1 硝酸盐（nitrate）和亚硝酸盐（nitrite）简介
分子结构及特点（molecular structure & features）：
• 硝酸根：1个氮原子、3个氧原子，化学式：NO₃• 亚硝酸根：1个氮原子、2个氧原子，化学式：NO₂
• 硝酸盐相对更稳定，直到它被口腔中的细菌或体内的酶转化为亚硝酸盐。
参考文献： • GB 8538-2016 食品安全国家标准-饮用水天然矿泉水检验方法 • GB/T5750.5-2006 生活饮用水标准检验方法-无机非金属指标 • GB 5009.33-2016 食品安全国家标准 食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定 • GB/T 13085-2005 饲料中亚硝酸盐的测定 比色法

图1 样品中氯离子、亚硝酸根离子色谱图2.2 检测范围为了验证色谱测定法的极限测定范围，使用不同浓度的硝酸根离子（0～100 mg/L）和亚硝酸根离子（0～200 mg/L）—），女，广东信宜人，本科，助理工程师。

研究方向：食品的理化检验工。

图2 样品硝酸根离子与亚硝酸根离子色谱图2.4 对照实验分别采用离子色谱法（IC）与比色法测定大白菜鲜样中硝酸根离子和亚硝酸根离子的含量，进行对照实验，测定结果详见表3，从数据上看，两次方法的检测结果数据基本接近，无明显差异，表明检测方法结果数据可靠，稳定性好，对实际蔬菜监控中具有指导意义，在实际应用中，根据卫生部门的指导标准进行监控，能够快速将不合格的蔬菜查出，部分蔬菜实际测试图谱如图3所示。

表3 对照实验结果阴离子亚硝酸根离子/（mg/kg）硝酸根离子/（mg/kg）测定方法比色法IC比色法IC测定值12.612.5138.8125.813.913.5524.4834.514.815.8350.2325.5 30.527.3159.7178.6 7.97.4341.8357.5 16.915.8161.9180.8t值－ 1.354－ 2.098图3 部分样品色谱图2.5 样品测定通过前述的方法，证明离子色谱分析测定法的结果数据可靠性高，为了应用于实践总，按上述条件对上海地区7种蔬菜进行测定，结果详见表4，从数据上看，每种蔬菜的亚硝酸根离子与硝酸根离子浓度都能定量分析，如韭菜、空心菜等显示亚硝酸根离子浓度很低，使监控人员对蔬菜的质量能有直观的判断。

表4 上海地区蔬菜测试结果蔬菜亚硝酸根离子平均值/（mg/kg）RSD/%硝酸根离子平均值/（mg/kg）RSD/%韭菜＜0.03—257.37 3.2香椿475.26 2.2455.48 2.6空心菜＜0.04—586.33 4.2蒜苗 1.08185.25 2.7葱＜0.04—225.04 1.7茴香0.89 1.5469.26 2.8油菜 4.77 2.72886.36 4.53 结论对于新鲜蔬菜中的硝酸根离子和亚硝酸根离子，离子色谱分析测定其含量，样品需要经过前期的处理，如柱处理等。

食物中亚硝酸盐含量的测定
亚硝酸盐是一类无机化合物的总称，主要指亚硝酸钠，为白色至淡黄色粉末或颗粒状，味微咸，易溶于水。

硝酸盐和亚硝酸盐广泛存在于人类环境中，是自然界中最普遍的含氮化合物。

以下是一些测定食物中亚硝酸盐含量的方法：
1. 分光光度法：这是一种常用的分析方法，基于亚硝酸盐在特定波长下的吸光度来定量。

将食物样品与化学试剂反应，形成一种有色化合物，然后通过分光光度计测量其吸光度，并与标准曲线进行比较，从而确定亚硝酸盐的含量。

2. 离子色谱法：这是一种分离和分析离子的技术，可用于测定亚硝酸盐。

食物样品经过前处理后，通过离子色谱仪进行分离和检测，根据保留时间和峰面积来定量亚硝酸盐的含量。

3. 气相色谱法：该方法适用于分析挥发性化合物，如亚硝酸盐。

食物样品经过衍生化处理，将亚硝酸盐转化为易挥发的衍生物，然后通过气相色谱仪进行分离和检测。

4. 酶联免疫吸附法：这是一种基于抗体-抗原相互作用的分析方法。

使用特异性的亚硝酸盐抗体与食物样品中的亚硝酸盐结合，然后通过酶标抗体或显色底物进行检测。

无论选择哪种方法，都需要根据具体的实验条件和要求进行适当的样品前处理，以去除干扰物质并提取出亚硝酸盐。

同时，应该使用标准物质进行校准和质量控制，确保测量结果的准确性和可靠性。

这些方法通常需要专业的实验室设备和技术，因此如果你需要测定食物中亚硝酸盐的含量，建议咨询专业实验室或相关机构。

仪器 ： ７ ２ １ 型 紫外一 可 见分光 光度计 。
２实验过 程
２ ． １亚硝 酸钠 系列标 准 溶液 配制 吸取０ ． ０ ０ ｍＬ 、 ０ ． ２ ０ ｍＬ 、 ０ ． ４ ０ ｍＬ 、 ０ ． ６ ０ ｍＬ、 ０ ． ８ Ｏ ｍＬ 、
１． ０ ０ ｍＬ、 １． ５ Ｑ ｍＬ、 ２． ０ ０ ｍＬ、 ２． ５ Ｏ ｍＬ、 ３． ０ ０ ｍＬ、 ３． ５ ０ ｍＬ、
４ ． ０ ｍＬ ５ ｕ ｇ ／ ｍＬ 亚硝 酸钠标准使 用液（ 相当于０ ． ０ ｕ ｇ 、
１ ． ０ ｕ ｇ、 ２． ０ ｕ ｇ 、 ３ ． ０ ｕ ｇ、 ４． ０ ｕ ｇ、 ５． ０ ｕ ｇ、 ７． ５ ｕ ｇ、 ｌ ０ ． ０ ｕ ｇ、
１ ２ ． ５ ｕ ｇ 、 １ ５ ． ０ ｕ ｇ 、 １ ７ ． ５ ｕ ｇ 、 ２ ０ ． ０ ｕ ｇ ） ， 分别置于５ ０ ｍＬ比色 管 中。 分别加入２ ｍＬ ４ ｇ ／ Ｌ 对氨基苯磺酸 溶液 ， 混匀 ， 静 置３ ａｉ ｒ ｎ ～５ ｍｉ ｎ 后， 各加入 ｌ ｍＬ ２ ｇ ／ Ｌ 盐酸萘 乙二 胺溶 液， 加水至刻度 ， 混匀 ， 静置 １ ５ ａｉ ｒ ｎ。
吸光度 为纵 坐 标 ， 标准 溶液 浓度 为横 坐标 ， 绘制 标准 曲线 。 （ 如 图１ ） ２ ． ４蔬 菜 中亚硝 酸 盐含 量 的测 定 将菠菜、 茄子 用 去 离子 水洗 净 ， 用 去离 子 水 煮 沸 １ ５ ａｉ ｒ ｎ， 用研 钵制 成匀浆 ， 分成 两份 ， 一份 处于 常温条 件下 ， 一份 处于 冰箱 冷藏 中。 分别 放置 Ｏ ｈ、 ４ ｈ、 １ Ｏ ｈ、 ２ ４ ｈ 、 ２ ８ ｈ 后测定其吸光度 。 称４ ｇ （ 精确至０ ． ０ ０ ０ １ ｇ ） 制成 匀 浆 的试样 ， 置于 ５ ０ ｍＬ的烧 杯 中 ， 加１ ０ ｍＬ饱和硼 砂溶 液， 搅拌均 匀 ， 以７ ０ 。 Ｃ左右 的水约５ ０ ｍＬ， 将试样洗 人 １ ０ ０ ｍＬ 容量瓶 ， 于７ ０ 。 Ｃ中加 热３ ０ ａｉ ｒ ｎ， 取出至冷水 浴 中 冷却 ， 并放 置至 室温 。 在震 荡上述提 取液时 ， 加人５ ｍＬ 亚铁 氰化钾溶 液 ， 摇匀 ， 再加入 ５ ｍＬ乙酸锌溶 液 ， 沉 淀蛋 白质 ， 再 加入 １ ｇ 活性 炭 ， 除去 抗坏 血酸 。 加水 定容 至 刻度 ， 摇匀 ， 放 置 ３ ０ ａｉ ｒ ｎ， 除去上层 脂肪 ， 上层 清液 用滤纸 过滤 ， 并 弃去 ３ ０ ｍＬ 初滤液 ， 滤液备 用 。 吸取 ４ ０ ｍＬ 上述滤 液于５ ０ ｍＬ 带塞 比色管 中 ， 试样 管 中分 别 加入 ２ ｍＬ对 氨基 苯 磺 酸溶 液 ， 混匀 ， 放 置３— ５ ａｍ， ｒ 加入 ｌ ｍＬ 盐酸萘 乙二胺溶液 ， 加水至刻度 ， 混匀 ， 静置 １ ５ ｍｉ ｎ ｔ ， 用２ ｃ ｍ比色 皿 ， 以零管 调节零 点 ， 于波 长 ５ ３ ８ ￣ ｔ ， 】 处 测吸光度 。 若 吸光度 过大 ， 用稀释 方法 ， 直 至

用 ｌＯ ￣ｍ 的硝酸钠和亚硝酸钠标准使用液配制标准 系 Ｏｕ ｌ
列 浓度 。在 ０５～ ０ ｇｍ 范 围内成 线 性关 系 ， ． ５ ｕ／ ｌ 相关 系数 大 于 ０ ．
２ ４ 氯化 钠 对检 测结 果的 影 响 ．
９９ ． 据 ＩＰ Ｃ的规 定 倍 噪 音 为 样 品 检 出 限 ， 酸钠 的 检 出 ９２ 根 ＵＡ 硝
健康 天地
２１ ００年
第 ４卷

第 ２期
综 述
高效液 相色谱法 同时测定 蔬菜 中的硝酸盐 和亚硝酸盐
尹 华
蔬菜中富含硝酸盐 ， 亚硝酸盐在新 鲜蔬菜 中含量很低 ， 但
是在 运 输 、 存 、 工 过 程 中 由 于 硝 酸 盐 还 原 酶 和 微 生 物 的 作 储 加 用， 硝酸 盐 可被 还 原 为 亚 硝 酸 盐 。众 所 周 知 ， 期 食 入 过 量 含 长
速 ：．ｍ／ ｉ １０ ｌｍ ｎ
两者不仅可以完全分离 ， 而且色谱峰型漂亮 ｊ 。见图 １
柱 温 ： ℃ 检 测波 长 ：１ ｎ ３ ０ ２０ ｍ进 样 量 ２ｕ 保 留时 间定性 ， ０ｌ 峰
面积 定 量
１ ２ 样 品 预 处 理 ．
称取 １ｇ 右 绞碎 均 匀 的样 品 ， ８ ｍ 水洗 人 １０ ｌ 量 ０左 用 ０ｌ ０ｍ容
瓶中， 超声 提取 ３ ｍｎ 每 隔 ５ ｉ ０ ｉ， ｍ ｎ振摇一次 ， 保持 固相 完全分
散 。于 ７ ℃水 浴 中放 置 ５ ｉ。 后 用水 定 容 至刻 度 。溶 液经 滤 ５ ｍｎ然
纸过 滤后 再 取上猜 液 过 ０ ４ ｕ 的膜 ， ．５ ｍ 待测 。
１ ３ 标 准 曲线 制备 ．
限为 ０ ２ ｇ亚硝 酸钠 的检 出限 为 ２ ｇ ．ｎ ， ｎ。

蔬菜中的硝酸盐、亚硝酸盐的气相色谱法测定我们都知道，蔬菜中含有一定量的有毒物质，其中硝酸盐和亚硝酸盐就是其中重要的有毒物质。

它们的存在会对人体健康产生不利的影响，因此必须采取测量的方法，以便在食用前及时准确地测量出其中的硝酸盐和亚硝酸盐的含量，以确保食物的安全。

硝酸盐和亚硝酸盐的测量方法多种多样，但以其测定准确、灵敏等特点而被广泛采用的是气相色谱法。

它通过将硝酸盐和亚硝酸盐放入气相色谱仪中，以及利用其特定的色谱特征，分离出硝酸盐和亚硝酸盐，最后用浓度检测器对分离出的两种物质的浓度进行准确的测定。

气相色谱法测定的实验步骤较多，但每一步都是重要的，否则将会影响实验结果的准确性。

首先，实验者需要准备一定量的样品，并用容器容器把它们放在一起，然后用电离室把样品离心，这样才能保证实验结果的准确性。

接着，实验者需要准备相关的仪器、玻璃器皿，并用于吸收塔将离心的样品加入，之后将其载入气相色谱仪中，利用其特定的色谱特征，将硝酸盐和亚硝酸盐分离出来，并用浓度检测器对分离出的两种物质的浓度进行准确的测定，完成整个实验。

在气相色谱法测定硝酸盐、亚硝酸盐时，实验者必须特别注意准备工作，例如正确选择、精确调整样品、搭配适当的色谱仪器等，以保证实验结果的准确性。

此外，实验者也要留意实验中出现的异常情况，确保将异常情况及时处理，以减少影响实验结果的不利因素。

经过正确的气相色谱法测定，我们可以准确测量出蔬菜中的硝酸盐和亚硝酸盐的含量，从而确保食物的安全。

此外，实验者也可以利用上述方法，测量植物中其他含有毒物质的含量，来保证人们在食用时不受其影响。

因此，气相色谱法测定硝酸盐、亚硝酸盐在食品安全检测方面有着非常重要的意义。

综上所述，本文以《蔬菜中的硝酸盐、亚硝酸盐的气相色谱法测定》为标题，就气相色谱法测定硝酸盐和亚硝酸盐的实验步骤及重要性进行了详细的阐述，以便更好地保障食物的安全。

分析实验自主开放性实验木耳中钙、镁含量的测定学院：化学学院专业：高分子材料与工程学号：33120703学生姓名：许柏赫前言辣白菜的制作材料主要是大白菜，是我国的特产，在北方地区大白菜占据了非常重要的位置。

用它制作成的这道辣白菜有许多的营养价值。

1、大白菜富含有种维生素。

现在大白菜在我们的餐桌上是一道很普遍的美食，不只是它口感好而且好吃，还具有很高的营养价值。

它带着多种维生素和矿物质，特别是维生素C和钙、膳食纤维。

吃大白菜，可以护肤养颜，对于防止女性乳腺癌、润肠排毒和促进人体对动物蛋白的吸收有极大的作用。

而且在中医看来，大白菜可以养胃生津，除烦解渴，利尿通便和清热解毒。

所以，食用大白菜不只是享受，还可以给身体带来许多好处，预防和治疗便秘等问题。

2、红辣椒可以增强抵抗力。

烹调辣白菜时，红辣椒是不可以少的。

它口味独特，可以增加体力，还可以改善怕冷、冻伤和血管性头痛等症状。

吃辣椒可以加速新城代谢，保养皮肤。

特别是里面富含的维生素C可以降低胆固醇，控制心脏病和冠状动脉硬化。

其中的抗氧化物质可以预防癌症，治疗感冒咳嗽等问题。

所以，当白菜和辣椒结合起来的时候，功效是非常大的。

3、辣白菜有许多功效。

除了白菜和辣椒的作用，吃辣白菜还可以健脾开胃，利尿降血压，对便秘有显著作用，还可以养颜,女性怀孕的时候也可以吃，也是减肥瘦身的食谱之一，功效十分多。

腌制蔬菜中亚硝酸盐含量的测定1实验目的1.1测定腌制蔬菜（辣白菜）中的亚硝酸盐含量1.2进一步掌握分光光度法的操作2 实验部分2．1 实验原理在弱酸性溶液中亚硝酸与对氨基苯磺酸发生重氮反应，生成的重氮化合物，重氮化合物再与盐酸萘乙二胺偶联成紫红色的偶氮染料，可用分光光度法测定。

有关反应如下：2．2 仪器与试剂仪器：721型分光光度计；研钵等。

试剂及试样：Na2B4O7·10H2O、亚铁氰化钾、乙酸锌、对氨基苯磺酸、盐酸萘乙二氨、盐酸、NaNO2、活性炭粉。

腌菜（辣白菜）来自莘子园食堂。

4、电化学法
电化学法是一种利用电化学反应原理来检测硝酸盐和亚硝酸盐的方法。该方 法具有操作简单、灵敏度高、响应时间短等优点。近年来，一些研究采用电化学 法来检测蔬菜中的硝酸盐和亚硝酸盐，并研发了便携式电化学传感器，可实现现 场快速检测。但该方法可能会受到其他物质的干扰，影响检测结果的准确性。
5、生中硝酸盐和亚硝酸盐的检测方法也在不断改 进和完善。目前，高效液相色谱法、气相色谱-质谱联用法、电化学法和生物传 感器法等新型检测方法已广泛应用于蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐的检测。这些方法 具有高灵敏度、高分辨率和高特异性等优点，且操作简便、快速、准确。
然而，这些方法仍存在一些不足之处，如可能受到其他物质的干扰、需要衍 生化处理等。因此，未来的研究将致力于开发更加准确、快速、简便的蔬菜中硝 酸盐和亚硝酸盐的检测方法，以满足现代实验室的需求。加强公众对蔬菜中硝酸 盐和亚硝酸盐的认知教育，提高公众的健康意识也是至关重要的。
二、硝酸盐和亚硝酸盐的基本特 性
硝酸盐和亚硝酸盐是两种无机化合物，它们在自然界中广泛存在。硝酸盐在 植物中含量较高，而亚硝酸盐则主要来源于食物中的硝酸盐还原菌的作用。虽然 硝酸盐和亚硝酸盐在一定浓度下对人体是有益的，但过量摄入可能对人体造成负 面影响，如引发癌症、胎儿畸形等。因此，准确检测蔬菜中的硝酸盐和亚硝酸盐 含量，对保障公众健康至关重要。
研究方法
本次演示将重点介绍一种基于液相色谱的蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐检测方法。 该方法采用乙酸乙酯萃取蔬菜样品中的硝酸盐和亚硝酸盐，然后通过液相色谱仪 分离和测定。具体实验流程如下：
1、样品处理：称取一定量蔬菜样品，加入乙酸乙酯溶液，震荡混匀后静置 萃取。萃取液经滤纸过滤后，用氮吹仪吹干，用甲醇定容至一定体积。
谢谢观看

酸锌沉淀蛋白 过滤 分取两整份溶液 一份直接加磺胺和萘乙二胺盐酸盐 在波长 ５３８ｎｍ 处测量吸光度 计算样品中原有亚硝酸离子含量 另一份用金属镉还原硝酸离子为亚硝酸离 子 然后同上显色，测量样品中亚硝酸离子的总量 由二者之差计算硝酸离子含量 ３ ． 主要仪器和试剂 ３．１ 主要试剂 ３．１．１ 饱和硼砂溶液 称取 ５０ｇ 硼酸钠 溶于 １０００ｍＬ 温水中 ３．１．２ 亚铁氰化钾溶液 ０．２５ｍｏＬ／Ｌ，称取 １０６ｇ 亚铁氰化钾 溶于水，定容至 １０００ｍＬ ３．１．３ 乙酸锌溶液 １ｍｏＬ／Ｌ 称取 ２２０ｇ 乙酸锌 溶于 ３０ｍＬ 冰乙酸和水的混合液中 再定容 至 １０００ｍＬ ３．１．４ 显色溶液 称取 ０．４ｇ 磺胺 放入盛有 １６０ｍＬ 水的 ２００ｍＬ 容量瓶中 水浴加热溶解 冷却后加入 ２０ｍＬ 盐酸（ ２０ １．１９ ｇ／ｍＬ ） 定容 避光保存 ３．１．５ 显色溶液 称取 ０．１ｇ 萘乙二胺盐酸盐（９８．５ 以上） 放入 １００ｍＬ 容量瓶中 定容 ３．１．６ 显色溶液 量取 ４４５ｍＬ 盐酸（ ２０ １．１９ｇ／ｍＬ） 放入 １０００ｍＬ 容量瓶中 定容 ３．１．７ 锌棒 长约 １５０ ｍｍ 直径 ５ ７ ｍｍ ３．１．８ 硫酸镉溶液 ２００ ｇ／Ｌ 称取 ４０ｇ 硫酸镉于 ２００ｍＬ 容量瓶中 定容 ３．１．９ 镉粒 置锌棒于盛有 ２００ｍＬ 硫酸镉溶液的高型烧杯中 及时将生成的镉刮下来 打碎 再用 ０．１ｍｏｌ／Ｌ 盐酸处理镉粒，冲洗数次 保存于蒸馏水中备用 ３．１．１０ 氨缓冲液 称取 ３７．４ｇ 氯化铵 溶于约 ９００ｍＬ 水中 用浓氨水调节 ｐＨ 至 ９．６ 稀释至 １０００ｍＬ ３．１．１１ 亚硝酸钠标准储备溶液 称取在 １１５ ５ 下烘过的亚硝酸钠 ０．１５００ｇ 于 ５０ｍＬ 容量 瓶中 溶解定容 取亚硝酸钠标准储备溶液 ５ｍＬ 于 １０００ｍＬ 容量瓶中 定容 ３．１．１２ 活性炭 粉末状 ３．２ 仪器 ３．２．１ 折成槽纹的滤纸 无亚硝酸离子 ３．２．２ 电热恒温水浴锅 温度可调 ３．２．３ 刮勺 末端用聚四氟乙烯包裹 ３．２．４ 高速组织捣碎机 １００００ １２０００ｒ／ｍｉｎ ３．２．５ 振荡机 ２７５ 次／ｍｉｎ ３．２．６ 分光光度计 ３．２．７ 分析天平 感量 ０．００１ ０．０００１ｇ ４ ． 过程简述 ４．１ 样品的制备 ４．１．１ 新鲜果蔬 先将样品去表面水分 用四分法取可食部分 切碎 按比例加水 制成匀 浆 ４．１．２ 冷冻罐头及酱制品 将样品制成匀浆备用 ４．２ 测定 ４．２．１ 试样中亚硝酸盐 硝酸盐的提取

食品安全国家标准食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定1范围本标准规定了食品中亚硝酸盐和硝酸盐的测定方法㊂本标准适用于食品中亚硝酸盐和硝酸盐的测定㊂第一法离子色谱法2原理试样经沉淀蛋白质㊁除去脂肪后,采用相应的方法提取和净化,以氢氧化钾溶液为淋洗液,阴离子交换柱分离,电导检测器或紫外检测器检测㊂以保留时间定性,外标法定量㊂3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T6682规定的一级水㊂3.1试剂3.1.1乙酸(C H3C O O H)㊂3.1.2氢氧化钾(K O H)㊂3.2试剂配制3.2.1乙酸溶液(3%):量取乙酸3m L于100m L容量瓶中,以水稀释至刻度,混匀㊂3.2.2氢氧化钾溶液(1m o l/L):称取6g氢氧化钾,加入新煮沸过的冷水溶解,并稀释至100m L,混匀㊂3.3标准品3.3.1亚硝酸钠(N a N O2,C A S号:7632-00-0):基准试剂,或采用具有标准物质证书的亚硝酸盐标准溶液㊂3.3.2硝酸钠(N a N O3,C A S号:7631-99-4):基准试剂,或采用具有标准物质证书的硝酸盐标准溶液㊂3.4标准溶液的制备3.4.1亚硝酸盐标准储备液(100m g/L,以N O2-计,下同):准确称取0.1500g于110ħ~120ħ干燥至恒重的亚硝酸钠,用水溶解并转移至1000m L容量瓶中,加水稀释至刻度,混匀㊂3.4.2硝酸盐标准储备液(1000m g/L,以N O3-计,下同):准确称取1.3710g于110ħ~120ħ干燥至恒重的硝酸钠,用水溶解并转移至1000m L容量瓶中,加水稀释至刻度,混匀㊂3.4.3亚硝酸盐和硝酸盐混合标准中间液:准确移取亚硝酸根离子(N O2-)和硝酸根离子(N O3-)的标准储备液各1.0m L于100m L容量瓶中,用水稀释至刻度,此溶液每升含亚硝酸根离子1.0m g和硝酸根离子10.0m g㊂3.4.4亚硝酸盐和硝酸盐混合标准使用液:移取亚硝酸盐和硝酸盐混合标准中间液,加水逐级稀释,制成系列混合标准使用液,亚硝酸根离子浓度分别为0.02m g/L㊁0.04m g/L㊁0.06m g/L㊁0.08m g/L㊁0.10m g/L㊁0.15m g/L㊁0.20m g/L;硝酸根离子浓度分别为0.2m g/L㊁0.4m g/L㊁0.6m g/L㊁0.8m g/L㊁1.0m g/L㊁1.5m g/L㊁2.0m g/L㊂4仪器和设备4.1离子色谱仪:配电导检测器及抑制器或紫外检测器,高容量阴离子交换柱,50μL定量环㊂4.2食物粉碎机㊂4.3超声波清洗器㊂4.4分析天平:感量为0.1m g和1m g㊂4.5离心机:转速ȡ10000r/m i n,配50m L离心管㊂4.60.22μm水性滤膜针头滤器㊂4.7净化柱:包括C18柱㊁A g柱和N a柱或等效柱㊂4.8注射器:1.0m L和2.5m L㊂注:所有玻璃器皿使用前均需依次用2m o l/L氢氧化钾和水分别浸泡4h,然后用水冲洗3次~5次,晾干备用㊂5分析步骤5.1试样预处理5.1.1蔬菜㊁水果:将新鲜蔬菜㊁水果试样用自来水洗净后,用水冲洗,晾干后,取可食部切碎混匀㊂将切碎的样品用四分法取适量,用食物粉碎机制成匀浆,备用㊂如需加水应记录加水量㊂5.1.2粮食及其他植物样品:除去可见杂质后,取有代表性试样50g~100g,粉碎后,过0.30mm孔筛,混匀,备用㊂5.1.3肉类㊁蛋㊁水产及其制品:用四分法取适量或取全部,用食物粉碎机制成匀浆,备用㊂5.1.4乳粉㊁豆奶粉㊁婴儿配方粉等固态乳制品(不包括干酪):将试样装入能够容纳2倍试样体积的带盖容器中,通过反复摇晃和颠倒容器使样品充分混匀直到使试样均一化㊂5.1.5发酵乳㊁乳㊁炼乳及其他液体乳制品:通过搅拌或反复摇晃和颠倒容器使试样充分混匀㊂5.1.6干酪:取适量的样品研磨成均匀的泥浆状㊂为避免水分损失,研磨过程中应避免产生过多的热量㊂5.2提取5.2.1蔬菜㊁水果等植物性试样:称取试样5g(精确至0.001g,可适当调整试样的取样量,以下相同),置于150m L具塞锥形瓶中,加入80m L水,1m L1m o l/L氢氧化钾溶液,超声提取30m i n,每隔5m i n 振摇1次,保持固相完全分散㊂于75ħ水浴中放置5m i n,取出放置至室温,定量转移至100m L容量瓶中,加水稀释至刻度,混匀㊂溶液经滤纸过滤后,取部分溶液于10000r/m i n离心15m i n,上清液备用㊂5.2.2肉类㊁蛋类㊁鱼类㊁及其制品等:称取试样匀浆5g(精确至0.001g),置于150m L具塞锥形瓶中,加入80m L水,超声提取30m i n,每隔5m i n振摇1次,保持固相完全分散㊂于75ħ水浴中放置5m i n,取出放置至室温,定量转移至100m L容量瓶中,加水稀释至刻度,混匀㊂溶液经滤纸过滤后,取部分溶液于10000r/m i n离心15m i n,上清液备用㊂5.2.3腌鱼类㊁腌肉类及其他腌制品:称取试样匀浆2g(精确至0.001g),置于150m L具塞锥形瓶中,加入80m L水,超声提取30m i n,每隔5m i n振摇1次,保持固相完全分散㊂于75ħ水浴中放置5m i n,取出放置至室温,定量转移至100m L容量瓶中,加水稀释至刻度,混匀㊂溶液经滤纸过滤后,取部分溶液于10000r/m i n离心15m i n,上清液备用㊂5.2.4乳:称取试样10g(精确至0.01g),置于100m L具塞锥形瓶中,加水80m L,摇匀,超声30m i n,加入3%乙酸溶液2m L,于4ħ放置20m i n,取出放置至室温,加水稀释至刻度㊂溶液经滤纸过滤,滤液备用㊂5.2.5乳粉及干酪:称取试样2.5g(精确至0.01g),置于100m L具塞锥形瓶中,加水80m L,摇匀,超声30m i n,取出放置至室温,定量转移至100m L容量瓶中,加入3%乙酸溶液2m L,加水稀释至刻度,混匀㊂于4ħ放置20m i n,取出放置至室温,溶液经滤纸过滤,滤液备用㊂5.2.6取上述备用溶液约15m L,通过0.22μm水性滤膜针头滤器㊁C18柱,弃去前面3m L(如果氯离子大于100m g/L,则需要依次通过针头滤器㊁C18柱㊁A g柱和N a柱,弃去前面7m L),收集后面洗脱液待测㊂固相萃取柱使用前需进行活化,C18柱(1.0m L)㊁A g柱(1.0m L)和N a柱(1.0m L),其活化过程为: C18柱(1.0m L)使用前依次用10m L甲醇㊁15m L水通过,静置活化30m i n㊂A g柱(1.0m L)和N a柱(1.0m L)用10m L水通过,静置活化30m i n㊂5.3仪器参考条件5.3.1色谱柱:氢氧化物选择性,可兼容梯度洗脱的二乙烯基苯-乙基苯乙烯共聚物基质,烷醇基季铵盐功能团的高容量阴离子交换柱,4mmˑ250mm(带保护柱4mmˑ50mm),或性能相当的离子色谱柱㊂5.3.2淋洗液5.3.2.1氢氧化钾溶液,浓度为6mm o l/L~70mm o l/L;洗脱梯度为6mm o l/L30m i n,70mm o l/L 5m i n,6mm o l/L5m i n;流速1.0m L/m i n㊂5.3.2.2粉状婴幼儿配方食品:氢氧化钾溶液,浓度为5mm o l/L~50mm o l/L;洗脱梯度为5mm o l/L 33m i n,50mm o l/L5m i n,5mm o l/L5m i n;流速1.3m L/m i n㊂5.3.3抑制器㊂5.3.4检测器:电导检测器,检测池温度为35ħ;或紫外检测器,检测波长为226n m㊂5.3.5进样体积:50μL(可根据试样中被测离子含量进行调整)㊂5.4测定5.4.1标准曲线的制作将标准系列工作液分别注入离子色谱仪中,得到各浓度标准工作液色谱图,测定相应的峰高(μS)或峰面积,以标准工作液的浓度为横坐标,以峰高(μS)或峰面积为纵坐标,绘制标准曲线(亚硝酸盐和硝酸盐标准色谱图见图A.1)㊂5.4.2试样溶液的测定将空白和试样溶液注入离子色谱仪中,得到空白和试样溶液的峰高(μS)或峰面积,根据标准曲线得到待测液中亚硝酸根离子或硝酸根离子的浓度㊂6 分析结果的表述试样中亚硝酸离子或硝酸根离子的含量按式(1)计算:X =(ρ-ρ0)ˑV ˑf ˑ1000m ˑ1000(1)式中:X 试样中亚硝酸根离子或硝酸根离子的含量,单位为毫克每千克(m g /k g);ρ测定用试样溶液中的亚硝酸根离子或硝酸根离子浓度,单位为毫克每升(m g /L );ρ0 试剂空白液中亚硝酸根离子或硝酸根离子的浓度,单位为毫克每升(m g /L );V试样溶液体积,单位为毫升(m L );f试样溶液稀释倍数;1000 换算系数;m 试样取样量,单位为克(g )㊂试样中测得的亚硝酸根离子含量乘以换算系数1.5,即得亚硝酸盐(按亚硝酸钠计)含量;试样中测得的硝酸根离子含量乘以换算系数1.37,即得硝酸盐(按硝酸钠计)含量㊂结果保留2位有效数字㊂7 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%㊂8 其他第一法中亚硝酸盐和硝酸盐检出限分别为0.2m g /k g 和0.4m g /k g㊂第二法 分光光度法9 原理亚硝酸盐采用盐酸萘乙二胺法测定,硝酸盐采用镉柱还原法测定㊂试样经沉淀蛋白质㊁除去脂肪后,在弱酸条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后,再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料,外标法测得亚硝酸盐含量㊂采用镉柱将硝酸盐还原成亚硝酸盐,测得亚硝酸盐总量,由测得的亚硝酸盐总量减去试样中亚硝酸盐含量,即得试样中硝酸盐含量㊂10 试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B /T6682规定的一级水㊂10.1 试剂10.1.1 亚铁氰化钾[K 4F e (C N )6㊃3H 2O ]㊂10.1.2 乙酸锌[Z n (C H 3C O O )2㊃2H 2O ]㊂10.1.3 冰乙酸(C H 3C O O H )㊂10.1.4 硼酸钠(N a 2B 4O 7㊃10H 2O )㊂10.1.5盐酸(H C l,ρ=1.19g/m L)㊂10.1.6氨水(N H3㊃H2O,25%)㊂10.1.7对氨基苯磺酸(C6H7N O3S)㊂10.1.8盐酸萘乙二胺(C12H14N2㊃2H C l)㊂10.1.9锌皮或锌棒㊂10.1.10硫酸镉(C d S O4㊃8H2O)㊂10.1.11硫酸铜(C u S O4㊃5H2O)㊂10.2试剂配制10.2.1亚铁氰化钾溶液(106g/L):称取106.0g亚铁氰化钾,用水溶解,并稀释至1000m L㊂10.2.2乙酸锌溶液(220g/L):称取220.0g乙酸锌,先加30m L冰乙酸溶解,用水稀释至1000m L㊂10.2.3饱和硼砂溶液(50g/L):称取5.0g硼酸钠,溶于100m L热水中,冷却后备用㊂10.2.4氨缓冲溶液(p H9.6~9.7):量取30m L盐酸,加100m L水,混匀后加65m L氨水,再加水稀释至1000m L,混匀㊂调节p H至9.6~9.7㊂10.2.5氨缓冲液的稀释液:量取50m L p H9.6~9.7氨缓冲溶液,加水稀释至500m L,混匀㊂10.2.6盐酸(0.1m o l/L):量取8.3m L盐酸,用水稀释至1000m L㊂10.2.7盐酸(2m o l/L):量取167m L盐酸,用水稀释至1000m L㊂10.2.8盐酸(20%):量取20m L盐酸,用水稀释至100m L㊂10.2.9对氨基苯磺酸溶液(4g/L):称取0.4g对氨基苯磺酸,溶于100m L20%盐酸中,混匀,置棕色瓶中,避光保存㊂10.2.10盐酸萘乙二胺溶液(2g/L):称取0.2g盐酸萘乙二胺,溶于100m L水中,混匀,置棕色瓶中,避光保存㊂10.2.11硫酸铜溶液(20g/L):称取20g硫酸铜,加水溶解,并稀释至1000m L㊂10.2.12硫酸镉溶液(40g/L):称取40g硫酸镉,加水溶解,并稀释至1000m L㊂10.2.13乙酸溶液(3%):量取冰乙酸3m L于100m L容量瓶中,以水稀释至刻度,混匀㊂10.3标准品10.3.1亚硝酸钠(N a N O2,C A S号:7632-00-0):基准试剂,或采用具有标准物质证书的亚硝酸盐标准溶液㊂10.3.2硝酸钠(N a N O3,C A S号:7631-99-4):基准试剂,或采用具有标准物质证书的硝酸盐标准溶液㊂10.4标准溶液配制10.4.1亚硝酸钠标准溶液(200μg/m L,以亚硝酸钠计):准确称取0.1000g于110ħ~120ħ干燥恒重的亚硝酸钠,加水溶解,移入500m L容量瓶中,加水稀释至刻度,混匀㊂10.4.2硝酸钠标准溶液(200μg/m L,以亚硝酸钠计):准确称取0.1232g于110ħ~120ħ干燥恒重的硝酸钠,加水溶解,移入500m L容量瓶中,并稀释至刻度㊂10.4.3亚硝酸钠标准使用液(5.0μg/m L):临用前,吸取2.50m L亚硝酸钠标准溶液,置于100m L容量瓶中,加水稀释至刻度㊂10.4.4硝酸钠标准使用液(5.0μg/m L,以亚硝酸钠计):临用前,吸取2.50m L硝酸钠标准溶液,置于100m L容量瓶中,加水稀释至刻度㊂11仪器和设备11.1天平:感量为0.1m g和1m g㊂11.2组织捣碎机㊂11.3超声波清洗器㊂11.4恒温干燥箱㊂11.5分光光度计㊂11.6镉柱或镀铜镉柱㊂11.6.1海绵状镉的制备:镉粒直径0.3mm~0.8mm㊂将适量的锌棒放入烧杯中,用40g/L硫酸镉溶液浸没锌棒㊂在24h之内,不断将锌棒上的海绵状镉轻轻刮下㊂取出残余锌棒,使镉沉底,倾去上层溶液㊂用水冲洗海绵状镉2次~3次后,将镉转移至搅拌器中,加400m L盐酸(0.1m o l/L),搅拌数秒,以得到所需粒径的镉颗粒㊂将制得的海绵状镉倒回烧杯中,静置3h~4h,期间搅拌数次,以除去气泡㊂倾去海绵状镉中的溶液,并可按下述方法进行镉粒镀铜㊂11.6.2镉粒镀铜:将制得的镉粒置锥形瓶中(所用镉粒的量以达到要求的镉柱高度为准),加足量的盐酸(2m o l/L)浸没镉粒,振荡5m i n,静置分层,倾去上层溶液,用水多次冲洗镉粒㊂在镉粒中加入20g/L硫酸铜溶液(每克镉粒约需2.5m L),振荡1m i n,静置分层,倾去上层溶液后,立即用水冲洗镀铜镉粒(注意镉粒要始终用水浸没),直至冲洗的水中不再有铜沉淀㊂11.6.3镉柱的装填:如图1所示,用水装满镉柱玻璃柱,并装入约2c m高的玻璃棉做垫,将玻璃棉压向柱底时,应将其中所包含的空气全部排出,在轻轻敲击下,加入海绵状镉至8c m~10c m[见图1装置a)]或15c m~ 20c m[见图1装置b)],上面用1c m高的玻璃棉覆盖㊂若使用装置b),则上置一贮液漏斗,末端要穿过橡皮塞与镉柱玻璃管紧密连接㊂如无上述镉柱玻璃管时,可以25m L酸式滴定管代用,但过柱时要注意始终保持液面在镉层之上㊂当镉柱填装好后,先用25m L盐酸(0.1m o l/L)洗涤,再以水洗2次,每次25m L,镉柱不用时用水封盖,随时都要保持水平面在镉层之上,不得使镉层夹有气泡㊂说明:1 贮液漏斗,内径35mm,外径37mm;2 进液毛细管,内径0.4mm,外径6mm;3 橡皮塞;4 镉柱玻璃管,内径12mm,外径16mm;5㊁7 玻璃棉;6 海面状镉;8 出液毛细管,内径2mm,外径8mm㊂图1镉柱示意图11.6.4镉柱每次使用完毕后,应先以25m L盐酸(0.1m o l/L)洗涤,再以水洗2次,每次25m L,最后用水覆盖镉柱㊂11.6.5镉柱还原效率的测定:吸取20m L硝酸钠标准使用液,加入5m L氨缓冲液的稀释液,混匀后注入贮液漏斗,使流经镉柱还原,用一个100m L的容量瓶收集洗提液㊂洗提液的流量不应超过6m L/m i n,在贮液杯将要排空时,用约15m L水冲洗杯壁㊂冲洗水流尽后,再用15m L水重复冲洗,第2次冲洗水也流尽后,将贮液杯灌满水,并使其以最大流量流过柱子㊂当容量瓶中的洗提液接近100m L时,从柱子下取出容量瓶,用水定容至刻度,混匀㊂取10.0m L还原后的溶液(相当10μg亚硝酸钠)于50m L比色管中,以下按12.3自 吸取0.00m L㊁0.20m L㊁0.40m L㊁0.60m L㊁0.80m L㊁1.00m L 起操作,根据标准曲线计算测得结果,与加入量一致,还原效率应大于95%为符合要求㊂11.6.6还原效率计算按式(2)计算:X=m110ˑ100% (2)式中:X 还原效率,%;m1 测得亚硝酸钠的含量,单位为微克(μg);10 测定用溶液相当亚硝酸钠的含量,单位为微克(μg)㊂如果还原率小于95%时,将镉柱中的镉粒倒入锥形瓶中,加入足量的盐酸(2m o L/L)中,振荡数分钟,再用水反复冲洗㊂12分析步骤12.1试样的预处理同5.1㊂12.2提取12.2.1干酪:称取试样2.5g(精确至0.001g),置于150m L具塞锥形瓶中,加水80m L,摇匀,超声30m i n,取出放置至室温,定量转移至100m L容量瓶中,加入3%乙酸溶液2m L,加水稀释至刻度,混匀㊂于4ħ放置20m i n,取出放置至室温,溶液经滤纸过滤,滤液备用㊂12.2.2液体乳样品:称取试样90g(精确至0.001g),置于250m L具塞锥形瓶中,加12.5m L饱和硼砂溶液,加入70ħ左右的水约60m L,混匀,于沸水浴中加热15m i n,取出置冷水浴中冷却,并放置至室温㊂定量转移上述提取液至200m L容量瓶中,加入5m L106g/L亚铁氰化钾溶液,摇匀,再加入5m L220g/L乙酸锌溶液,以沉淀蛋白质㊂加水至刻度,摇匀,放置30m i n,除去上层脂肪,上清液用滤纸过滤,滤液备用㊂12.2.3乳粉:称取试样10g(精确至0.001g),置于150m L具塞锥形瓶中,加12.5m L50g/L饱和硼砂溶液,加入70ħ左右的水约150m L,混匀,于沸水浴中加热15m i n,取出置冷水浴中冷却,并放置至室温㊂定量转移上述提取液至200m L容量瓶中,加入5m L106g/L亚铁氰化钾溶液,摇匀,再加入5m L220g/L乙酸锌溶液,以沉淀蛋白质㊂加水至刻度,摇匀,放置30m i n,除去上层脂肪,上清液用滤纸过滤,弃去初滤液30m L,滤液备用㊂12.2.4其他样品:称取5g(精确至0.001g)匀浆试样(如制备过程中加水,应按加水量折算),置于250m L具塞锥形瓶中,加12.5m L50g/L饱和硼砂溶液,加入70ħ左右的水约150m L,混匀,于沸水浴中加热15m i n,取出置冷水浴中冷却,并放置至室温㊂定量转移上述提取液至200m L容量瓶中,加入5m L106g/L亚铁氰化钾溶液,摇匀,再加入5m L220g/L乙酸锌溶液,以沉淀蛋白质㊂加水至刻度,摇匀,放置30m i n,除去上层脂肪,上清液用滤纸过滤,弃去初滤液30m L,滤液备用㊂12.3亚硝酸盐的测定吸取40.0m L上述滤液于50m L带塞比色管中,另吸取0.00m L㊁0.20m L㊁0.40m L㊁0.60m L㊁0.80m L㊁1.00m L㊁1.50m L㊁2.00m L㊁2.50m L亚硝酸钠标准使用液(相当于0.0μg㊁1.0μg㊁2.0μg㊁3.0μg㊁4.0μg㊁5.0μg㊁7.5μg㊁10.0μg㊁12.5μg亚硝酸钠),分别置于50m L带塞比色管中㊂于标准管与试样管中分别加入2m L4g/L对氨基苯磺酸溶液,混匀,静置3m i n~5m i n后各加入1m L2g/L盐酸萘乙二胺溶液,加水至刻度,混匀,静置15m i n,用1c m比色杯,以零管调节零点,于波长538n m处测吸光度,绘制标准曲线比较㊂同时做试剂空白㊂12.4硝酸盐的测定12.4.1镉柱还原12.4.1.1先以25m L氨缓冲液的稀释液冲洗镉柱,流速控制在3m L/m i n~5m L/m i n(以滴定管代替的可控制在2m L/m i n~3m L/m i n)㊂12.4.1.2吸取20m L滤液于50m L烧杯中,加5m L p H9.6~9.7氨缓冲溶液,混合后注入贮液漏斗,使流经镉柱还原,当贮液杯中的样液流尽后,加15m L水冲洗烧杯,再倒入贮液杯中㊂冲洗水流完后,再用15m L 水重复1次㊂当第2次冲洗水快流尽时,将贮液杯装满水,以最大流速过柱㊂当容量瓶中的洗提液接近100m L 时,取出容量瓶,用水定容刻度,混匀㊂12.4.2 亚硝酸钠总量的测定吸取10m L ~20m L 还原后的样液于50m L 比色管中㊂以下按12.3自 吸取0.00m L ㊁0.20m L ㊁0.40m L ㊁0.60m L ㊁0.80m L ㊁1.00m L 起操作㊂13 分析结果的表述13.1 亚硝酸盐含量计算亚硝酸盐(以亚硝酸钠计)的含量按式(3)计算:X 1=m 2ˑ1000m 3ˑV 1V 0ˑ1000 (3)式中:X 1 试样中亚硝酸钠的含量,单位为毫克每千克(m g /k g);m 2测定用样液中亚硝酸钠的质量,单位为微克(μg );1000 转换系数;m 3 试样质量,单位为克(g);V 1测定用样液体积,单位为毫升(m L );V 0 试样处理液总体积,单位为毫升(m L )㊂结果保留2位有效数字㊂13.2 硝酸盐含量的计算硝酸盐(以硝酸钠计)的含量按式(4)计算:X 2=m 4ˑ1000m 5ˑV 3V 2ˑV 5V 4ˑ1000-X 1æèççöø÷÷ˑ1.232 (4) 式中:X 2 试样中硝酸钠的含量,单位为毫克每千克(m g /k g);m 4经镉粉还原后测得总亚硝酸钠的质量,单位为微克(μg );1000 转换系数;m 5 试样的质量,单位为克(g);V 3 测总亚硝酸钠的测定用样液体积,单位为毫升(m L );V 2 试样处理液总体积,单位为毫升(m L );V 5 经镉柱还原后样液的测定用体积,单位为毫升(m L );V 4经镉柱还原后样液总体积,单位为毫升(m L );X 1由式(3)计算出的试样中亚硝酸钠的含量,单位为毫克每千克(m g /k g);1.232亚硝酸钠换算成硝酸钠的系数㊂结果保留2位有效数字㊂14 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%㊂15其他第二法中亚硝酸盐检出限:液体乳0.06m g/k g,乳粉0.5m g/k g,干酪及其他1m g/k g;硝酸盐检出限:液体乳0.6m g/k g,乳粉5m g/k g,干酪及其他10m g/k g㊂第三法蔬菜㊁水果中硝酸盐的测定紫外分光光度法16原理用p H9.6~9.7的氨缓冲液提取样品中硝酸根离子,同时加活性炭去除色素类,加沉淀剂去除蛋白质及其他干扰物质,利用硝酸根离子和亚硝酸根离子在紫外区219n m处具有等吸收波长的特性,测定提取液的吸光度,其测得结果为硝酸盐和亚硝酸盐吸光度的总和,鉴于新鲜蔬菜㊁水果中亚硝酸盐含量甚微,可忽略不计㊂测定结果为硝酸盐的吸光度,可从工作曲线上查得相应的质量浓度,计算样品中硝酸盐的含量㊂17试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯㊂水为G B/T6682规定的一级水㊂17.1试剂17.1.1盐酸(H C l,ρ=1.19g/m L)㊂17.1.2氨水(N H3㊃H2O,25%)㊂17.1.3亚铁氰化钾[K4F e(C N)6㊃3H2O]㊂17.1.4硫酸锌(Z n S O4㊃7H2O)㊂17.1.5正辛醇(C8H18O)㊂17.1.6活性炭(粉状)㊂17.2试剂配制17.2.1氨缓冲溶液(p H=9.6~9.7):量取20m L盐酸,加入到500m L水中,混合后加入50m L氨水,用水定容至1000m L㊂调p H至9.6~9.7㊂17.2.2亚铁氰化钾溶液(150g/L):称取150g亚铁氰化钾溶于水,定容至1000m L㊂17.2.3硫酸锌溶液(300g/L):称取300g硫酸锌溶于水,定容至1000m L㊂17.3标准品17.3.1硝酸钾(K N O3,C A S号:7757-79-1):基准试剂,或采用具有标准物质证书的硝酸盐标准溶液㊂17.4标准溶液配制17.4.1硝酸盐标准储备液(500m g/L,以硝酸根计):称取0.2039g于110ħ~120ħ干燥至恒重的硝酸钾,用水溶解并转移至250m L容量瓶中,加水稀释至刻度,混匀㊂此溶液硝酸根质量浓度为500m g/L,于冰箱内保存㊂17.4.2硝酸盐标准曲线工作液:分别吸取0m L㊁0.2m L㊁0.4m L㊁0.6m L㊁0.8m L㊁1.0m L和1.2m L 硝酸盐标准储备液于50m L容量瓶中,加水定容至刻度,混匀㊂此标准系列溶液硝酸根质量浓度分别。