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植物的快繁与脱毒培养

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植物生物技术7 植物脱毒和快繁

植物生物技术7 植物脱毒和快繁

护环境。
二、植物脱毒的原理
（一）热处理脱毒原理 当植物组织处于高于正常温度的环境（35-
40℃）时，组织内部的病毒部分或全部钝化，
但寄主植物的组织很少或不会受到伤害。
思考：热处理的作用是什么？
1．高温短时处理法 是利用病毒与植物耐热能力的不同，将苗木、 接穗或种子等繁殖材料在一定的高温下处理一段
由于珠心胚是由母本体细胞发育而来，未 经减数分裂，因此除个别体细胞突变外，珠心 胚长出的实生苗遗传上与母株完全相同。因此 由珠心胚获得的珠心苗大多数病毒被脱除而遗 传特征与母株完全相同。选择这种类型的珠心 苗，可应用标记花粉控制授粉，然后选出典型 的实生苗。
例如，枳的花粉可用作标记花粉，因为所有 枳的杂种实生苗都具有三叶特征，很容易辨认和 排除。培育珠心系以获得无病毒苗有以下优点： ①可以肯定植株不带毒； ②花时间少； ③成本低： ④方法便于掌握； ⑤珠心苗长势强。但珠心系童期长，且易出现一 些返祖性状。
（二）热处理方法
1.温汤（浸渍）处理
适用于离体材料（如接穗） 和休眠器官的处理。在50℃左右 的温水中浸渍10min至数小时，使 病毒失活。
2.热风（热空气）处理 (1)恒温处理：
将生长的盆栽植物移入
温热疗室内，一般在35-
40℃。对活跃生长的茎尖效
果较好。 处理时间因植物而异。
(2)变温处理：
对于一些果树要获得与亲本一致的无性系 无病材料，可以从胚囊败育的子房中在胚囊败 育之前获取胚珠或珠心组织进行培养。
花药或花粉培养也可作为一种脱毒方法， 这种方法可结合单倍体育种进行，用花药培养 进行草莓脱毒，脱毒率可达100％。花药培养获 得的无毒材料多为高产优质的类型。
（四）其他脱毒方法

常见植物的脱毒与快速繁殖技术

常见植物的脱毒与快速繁殖技术

《常见植物的脱毒与快速繁殖技术》一、常见植物培养方式：1、草莓脱毒苗的培养方式主要有微茎尖培养和花粉培养两种。

2、马铃薯病毒鉴定的方法主要有指示植物法、症状鉴定法。

3、通过组织培养获得微型薯的技术关键有两个：单茎节扩大繁殖；微型薯诱导。

4、在葡萄栽培架式，棚架是应用最广泛的类型。

5、草莓脱毒苗的培养方式主要有微茎尖培养和花粉培养两种。

6、菊花生根能力比较强，有两种方法：嫩茎试管生根；无根嫩茎的扦插。

7、菊花的继代增殖有多种技术，多数是诱导愈伤组织产生丛生芽而获得大量的试管苗。

8、百合经茎尖培养脱毒、鉴定合格后，可通过两种继代增殖方式：①经愈伤组织增殖；②诱导分化不定芽。

二、提问：对马铃薯脱毒苗的培养大致分几个阶段？各阶段是怎样操作的？马铃薯茎尖培养脱毒程序：①取材；②消毒；③接种；④培养基；⑤病毒鉴定。

影响脱毒效果的因素：外植体大小；茎尖所处部位；病毒种类及复合感染。

简述苹果花粉培养的过程。

①选取适期花蕾；②花蕾预处理和消毒；③诱导胚状体形成；④诱导生根；⑤移栽。

苹果的栽培管理过程中应注意哪几个问题？①育苗技术；②土壤改良；③施肥方法；④灌溉时期；⑤整形和修剪技术。

草莓无毒苗的繁殖程序分哪几步？草莓无毒苗的繁殖程序可以发为五步，即鉴定出无毒苗、原种种苗培养、原种种苗繁殖、良种种苗繁殖和生产用苗繁殖。

蝴蝶兰怎样用花梗组织培养方法繁殖?蝴蝶兰脱毒：花梗侧芽的消毒与培养——茎尖培养——原球茎诱导——继代培养——原球茎增殖——生根炼苗。

通过原球茎增殖的方法，可大大提高繁殖速度，实现蝴蝶兰生产的工厂化育苗。

香石竹的茎尖脱毒培养操作技术。

香石竹的茎尖脱毒培养操作技术：一般结合热处理：将带毒植株进行盆栽，放入人工控制箱内，采用38-40℃高温处理6-8周，再切1mm 大小的茎尖培养。

说明甘薯脱毒快繁技术的工艺流程。

（1）脱毒：优良品种母株选择；材料消毒；茎尖剥离；茎尖培养；茎尖苗的初级快繁；脱毒鉴定。

（2）快繁：脱毒苗的快繁；原原种的繁育；原种的繁育；种薯的繁育三、甘薯脱毒试管苗栽培管理注意哪些问题？培育壮苗；适当炼苗；精心移栽；控制湿、温、光等条件；适时定植；严防病虫害。

第五章 植物离体快速繁殖和脱毒培养

第五章 植物离体快速繁殖和脱毒培养

4、试管苗驯化移栽——Transplanting
• 炼苗（驯化）：移栽 前将培养物不开口， 移到自然光照下锻炼 2-3d，让试管苗接受 强光的照射，使其长 得壮实起来，然后再 开口炼苗1-2d，经受 较低湿度的处理，以 适应将来自然湿度的 条件 。
驯化:试管苗在移栽之前所进行的逐步锻炼和适应自然生长环境的过程
第五章 植物离体快速繁殖和脱毒培养
第一节 离体快速繁殖技术
• 离体繁殖：利用离体培养技术，将植物的
外植体在人工培养基和合适的条件下进行
培养，以在短期内获得大量遗传性一致个
体的方法。
一、植物快速繁殖的主要步骤
• • • • 1、建立无菌培养体系 2、无菌培养体系的快速增殖 3、诱导生根 4、试管苗的驯化与移植。
通常幼龄部位产生褐化较轻，随着组织的老 龄化含醌类物质增多而褐化加重。 一般在春夏季，尤其是春季采取生长旺盛的 外植体产生褐化较轻，已木栓化或木质化的枝 条和处于休眠状态的芽作为外植体时褐化严重。
外植体褐变原因
3）与培养基成分有关
高的无机盐浓度
不适宜的植物生长调节物质（如BA过高）
会受到影响。植物种类不同，对矿物质的
量、离子形态、离子间的比例要求不同。
如果培养基中离子种类及其比例不适宜该
种植物，玻璃化苗的比例就会增加。
玻璃化及预防
4.环境条件-温度
适宜的温度可以使试管苗生长良好，
当温度低时，容易形成玻璃化苗，温度越
低玻璃化苗的比例越高。温度高时玻璃化
苗减少，且发生的时间较晚。
2、培养物的增殖
• 1）腋芽增殖： • 离体条件下腋芽 在细胞分裂素作 用下形成丛生芽 • 激素调节：细胞 分裂素（BA）、 低浓度的生长素 • 优点：保持物种 的遗传稳定性。

植物组织培养中的快繁与脱毒技术及其应用

植物组织培养中的快繁与脱毒技术及其应用

植物组织培养是一种重要的生物技术，它能够实现植物的快速繁殖、脱毒和基因转化。

在植物学研究和植物育种领域，植物组织培养技术的应用非常广泛。

本文将深入探讨植物组织培养中的快繁与脱毒技术及其应用，以帮助读者更深入地理解这一重要领域。

1. 快繁技术在植物组织培养中，快繁技术是指利用植物体的一小部分组织或细胞，通过体外条件培养，实现植物的快速繁殖。

这种技术可以大大提高繁殖速度，缩短繁殖周期，是进行新种质创制、遗传改良和疫病防治的重要手段。

快繁技术的主要方法包括离体培养、愈伤组织培养和微繁殖等。

1.1 离体培养离体培养是将植物体表层（如幼叶、幼茎）或内部组织（如胚乳、子叶）分离出来，移入含有适当营养盐和植物生长调节物的培养基中培养。

通过控制培养条件和添加合适的植物生长激素，可以诱导组织分化和再生形成新植株。

1.2 愈伤组织培养愈伤组织是植物在受到外界刺激或损伤后，经过细胞分裂和组织再生形成的一种未分化的组织。

愈伤组织培养是利用这种特殊组织进行快速繁殖的一种方法，通过控制培养条件和添加植物生长调节物，可以诱导愈伤组织再生形成新植株。

1.3 微繁殖微繁殖是利用植物的微小芽或胚珠进行快速繁殖的方法。

通过培养条件的控制和植物激素的添加，可以诱导微小芽或胚珠快速生长并形成新植株。

2. 脱毒技术在植物组织培养中，由于植物体内可能携带病毒、细菌等病原体，因此会影响到组织培养的效果。

脱毒技术是为了解决这一问题而出现的一种重要技术。

脱毒技术能够有效地清除植物体内的病原体，提高组织培养的成功率和繁殖效率。

2.1 生物脱毒生物脱毒是利用生物制剂对植物体内的病原体进行清除的方法。

通过培养环境中添加含有特定菌株或真菌的生物剂，可以促进植物体内病原体的清除和组织的健康再生。

2.2 生理脱毒生理脱毒是利用植物自身的生理代谢特性进行脱毒的方法。

通过调节培养条件和添加特定的营养物质，可以激活植物的生理代谢活性，加速病原体的清除和组织的再生。

第7章 茎尖培养和脱毒、快繁技术

第7章 茎尖培养和脱毒、快繁技术

7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 快速繁殖技术（
3. 快繁的一般步骤：
③ 试管苗的壮苗与生根：
• 一般要分成单苗 ， 转移到盐浓度较低 、 不含细 一般要分成单苗， 转移到盐浓度较低、 胞分裂素， 含低浓度生长素的生根壮苗培养基， 胞分裂素 ， 含低浓度生长素的生根壮苗培养基 ， 至根、茎长到合适的长度，即可锻炼出瓶。 至根、茎长到合适的长度，即可锻炼出瓶。 • 问题：不易生根 （ 延长时间、 继代 ） ；易生根： 问题：不易生根（ 延长时间 、 继代） 壮苗阶段不加生长素， 壮苗阶段不加生长素 ， 试管外生根可减少费用； • 特殊方法：如马铃薯的小球茎法。 特殊方法：如马铃薯的小球茎法。
7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 快速繁殖技术（
4. 提高试管苗繁殖速度的措施：
① 选择合适的繁殖途径 ② 改良培养基： 激素 （腋芽 、 不定芽 、 胚状体 ） 等； 激素（ 腋芽、 不定芽、 胚状体） ③ 改良培养条件 ： 温 、光 、 湿度、 气体（有利气体、 湿度 、 气体 （ 有利气体、
7.1 茎尖培养
3. 茎尖培养技术： • 培养方法：固体培养、液体纸 桥培养（易愈伤化时）
7.1 茎尖培养
3. 茎尖培养技术： • 对培养基和培养条件的要求： • 一般可用MS培养基，加少量的生长素（不 用2,4-D）和细胞分裂素；GA3有时对抑制 愈伤等有一定的效果。
7.2 脱毒技术： 脱毒技术：
3. 茎尖培养技术： • 材料消毒：在温室种植或田间种植的健康植 株上取枝条，必要时母株可用杀菌剂处理； 在实验室切取2-3cm长的芽，去掉较大的叶 片，进行常规的表面灭菌；
7.1 茎尖培养
3. 茎尖培养技术： • 茎尖分离：将灭菌的芽置放有湿滤纸的无菌 培养皿中，置体视显微镜下，依次用镊子或 解剖刀剥去叶片直至露出生长点，用锋利的 解剖刀片把带或不带叶原基的分生组织切下 来，直接接种到培养基上；

植物的快繁与脱毒培养PPT课件

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16
第2节 植物快速繁殖的应用
• 1.大量繁殖珍稀或名 贵植物
• 如:佛肚兰,卡特丽亚 兰等工厂化育苗
• 2.茎尖培养脱毒及脱 毒苗的培养
• 无菌苗 • 有毒苗 • 脱毒苗
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二，（茎尖培养）脱毒及其应用
• 1.病毒病及其危害 • 2.茎尖培养脱毒的原理 • 3.茎尖培养脱毒的过程 • 4.脱毒苗的鉴定和保存
– ②坏死，在叶片上常呈现坏死斑、坏死环和脉坏 死，在茎、果实和根的表面常出现坏死条等。
– ③畸形，器官变形，如茎间缩短，植株矮化，生
长点异常分化形成丛枝或丛簇，叶片的局部细胞
变形出现疱斑、卷曲、蕨叶及带化等。201.来自毒病的危害及症状 正常的番茄果
番茄厥叶，卷叶病毒
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番茄病毒病（植株）
俗称虾蕉、葱蕉或蕉公)，病株一般 不抽花蕾，因近顶部叶片成束而得名。 是由病毒侵染植株而引起的, 是香蕉 致命病害,
蕉农称之为" 不治之症"。局部地区 蕉园发病率为2%～10%, 产量损失 30%～60%。
香蕉束顶病
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1.病毒病及其危害（续）
• （1）症状:花而不实 • 花叶型马铃薯病毒：退化，叶片卷缩，产量逐年下降，
到PVS，PVA，PVM，PVX
• 卷叶型马铃薯病毒：PLRV • 香蕉束顶病：叶片越来越短小，植株矮缩，叶硬
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1.病毒病及其危害
• 脱毒（virus elimination)培养： • 利用植物组织培养技术，脱除植物细胞中的
病毒，生产健康的无毒繁殖材料的过程。
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1.2.植物病毒病及其危害
• 定义：由植物病毒寄生引起的病害。
• 症状：
– ①变色，叶片的叶绿素形成受阻或积聚，从而产 生花叶、斑点、环斑、脉带和黄化等。花朵的花 青素也可因而改变,使花色变成绿色或杂色等,常 见的症状为深绿与浅绿相间的花叶症如烟草花叶 病。

植物组织培养的应用

植物组织培养的应用

植物组织培养的应用
1、良种快繁
将植物组织培养技术用于新育成的、新引进的、一些短期内大量急需生产的良种快繁，可在最短时间内获得最多的植株，较普通营养生殖快成千上万倍，对新优良品种的推广应用尤为便利。

2、大批量营养繁殖
一些生产用苗量大的、需进行无性系繁殖的品种，尤其对一些繁殖系数低，特别是不能用种子进行繁殖或经种子繁殖后常丧失其优良特性的植物，如杂种番茄、无籽西瓜、佛手瓜、金花花、福禄考、西洋参、石榴等，可通过该技术进行快速繁殖，并能获得良好的种苗，使其成为快速发展的经济作物。

3、脱毒繁育
植物组织培养技术可应用于少量脱毒良种苗的快繁和无病毒苗大量繁殖。

4、特殊育种材料快繁
植物组织培养技术可应用于制种材料快繁、基因工程植株快繁、自然和人工诱导有用突变体（芽变）快繁、离体保存种质快繁。

5、新发现的、稀缺的珍贵或稀有植物材料以及濒危植物离体快繁
遗传资源日趋枯竭，造成有益基因的丧失；常规田间保存耗资巨大，且往往达不到万无一失的目的。

植物组织培养给保存和抢救稀有植物材料以及濒危植物带来了希望。

植物组织培养在现代农业中的具体应用

植物组织培养在现代农业中的具体应用
从而培育新品种。
三、植物新品种培育
3、细胞融合 通过原生质的融合可部分客服有性杂交不亲和，从而获得体细
胞杂种，创造新物种或优良品种。
三、植物新品种培育
4、选择细胞突变体 离体培养过程中会发生变异，从中可以筛选出对人们有用的突
变体，进而育成新品种。
四、生产植物次生代谢物
利用植物组培技术生产一些价格高、产量低、需求量大的次 生代谢产物，其具有一些特定的功能，对人类有重要的影响和作用。
五、植物种质资源离体保存
1、常规的植物种植资源保存方法耗资巨大，种 质资源流失的情况时有发生。
2、通过抑制生长或超低温贮存的方法离体保存 植物种质资源，可节约大量的人力、物力和财 力，还可挽救那些濒危物种。
3、离体保存还可避免病虫害侵染和外界不利气 候及栽培因素的影响，可长期保存，有利于种 质资源材料的远距离交换。
江西野生金线莲
六、人工种子
1、人工种子是利用人工种皮包被植物组织培养中得到的体细胞胚。 2、人工种子可为某些珍稀物种的繁殖、转基因植物、自交不亲和植物、远缘 杂种的繁殖提供有效的手段。
任务二 植物组织培养在农业 生产中应用
目录
01
植物离体快速繁殖
02
植物种苗脱毒
03
植物新品种培育
04
植物次生代谢物生产
05
Hale Waihona Puke 植物种植资源保存06人工种子
一、植物离体快速繁殖
1、植物快繁是植物组织培养在生 产中应用最广泛，产生较大经济效 益的一项技术。
2、植物快繁具有不受季节和气候 等条件限制、可周年生产、生长周 期短、繁殖速度快、种苗整齐一致 等优点。
4、植物组培种苗脱毒广泛应用于花卉、果树、 蔬菜、苗木等植物。

园艺植物快繁与脱毒技术

园艺植物快繁与脱毒技术

园艺植物快繁与脱毒技术引言园艺植物快繁与脱毒技术是当前园艺产业中的重要技术之一。

通过快速繁殖和脱毒，可以大幅提高植物的产量和品质，缩短育种周期，并且降低病虫害的传播风险。

本文将介绍园艺植物快繁与脱毒技术的基本原理、方法和应用。

园艺植物快繁技术快繁技术的原理园艺植物快繁技术是指利用植物的无性繁殖方式，通过切割组织的特殊处理来快速繁殖植物。

其原理是将植物的一部分切割成小段，并在适当的条件下，使其再生成一个完整的植株。

快繁技术的方法园艺植物快繁技术通常有以下几种常见的方法：1.分株繁殖：将一个成熟的植株分割成若干个部分，并重新种植。

2.压条繁殖：将植物的枝条剪切成适当长度，然后通过合适的处理方式促使其发根，最后再种植。

3.叶片繁殖：将植物的叶片片段进行处理，利用其离体再生能力，使其再生为新的植株。

4.根状茎繁殖：将植物的根状茎进行分割，并重新种植。

5.触须繁殖：将植物的触须剪切成适当长度，然后通过适当的处理方式使其发根，最后再种植。

快繁技术的应用园艺植物快繁技术在园艺产业中有着广泛的应用。

其主要应用包括以下几个方面：1.育种：通过快繁技术，可以快速繁殖出大量的植株，并进行大规模的育种工作，加速优良品种的选育过程。

2.生产：快繁技术可以高效地进行植物的繁殖工作，提高植物的产量，满足市场需求。

3.绿化：快繁技术可以大幅提高绿化苗木的繁殖速度，为城市绿化提供更多的植物资源。

4.病虫害防控：通过快繁技术，可以扩大病虫害抗性植物的规模，降低病虫害传播风险。

园艺植物脱毒技术脱毒技术的原理园艺植物脱毒技术是指将病毒感染的植物从病毒中解除，并繁殖出无病毒的植株。

其原理是通过适当的处理方式，将植物体内的病毒去除或抑制，使其再生为无病毒的新植株。

脱毒技术的方法园艺植物脱毒技术主要有以下几种常见的方法：1.离体培养：将植物的组织培养于无菌培养基中，在适当的温度和光照条件下，通过组织再生的方式繁殖出无病毒的新植株。

2.接穗繁殖：将无病毒的植物的枝条接入受病毒感染的植物体内，让感染的植物通过枝条繁殖出无病毒的新植株。

葡萄的脱毒与快繁植物组织培养常用文档

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5、试管苗的驯化与移栽
• 试管苗长出5~7片新叶时，把瓶子移入温室 中，即时可打开培养瓶，历时7d。把苗从 培养瓶中取出，洗净培养基，栽于经过干 热灭菌处理的蛭石内，盘上塑料薄膜罩严 ，置于阳光下，20 ℃，自然条件下锻炼 15d。移入土中。
小结：
形态特征和生物学习性
葡
选材接种
萄 的
葡萄的组织培养
培养基 苗分化
脱
根分化
毒 与
热处理脱毒
快
脱毒 茎尖培养脱毒
繁
无病毒苗的鉴定
脱毒与快繁
材料与消毒
培养条件
快繁 生长与分化
生根培养
试管苗的驯化与移栽
08生物教育 张磊蕾
3mm茎尖进行立体培养，即可获得脱毒苗。
MS+IAA 0.4mg/L+NAA 0.05mg/L
培养基中进行生根。
三、脱毒与快繁
（一）脱毒
葡萄受到26种病毒的危害,主要有卷叶 病毒、栓皮病毒、扇叶病毒、黄脉病毒和 斑点病毒等。由于病毒的危害，葡萄的长 势减弱，产量降低，果实的糖分含量减少， 风味变劣。
• 1、材料与消毒 • 取经过脱毒的枝条稍1~2cm，用5%的次
氯酸钠aq消毒2~3min，用无菌水冲洗3次， 再在0.1%升汞aq中浸泡2min，用无菌水冲 洗4次。把芽放在解剖镜下，无菌条件下， 去除幼叶和叶原基，使生长点暴露。用刀 切下含有1~2个叶原基，大小为0.2~0.3mm 的生长点接种于培养基上。
2、培养基：MS培养基，再添加6-BA 葡萄属落叶木质藤本植物，葡萄地上部分的茎细。
光照：1000lx，16小时
1～2mg/L
节6%上，具而有B卷5培须养，基可，愈向伤上N组攀织援A化。严A重，0茎.0尖生1长m不好g。 /L，LH100mg/L，蔗糖2%，琼

脱毒与快繁

脱毒与快繁

玻璃化
植物组织培养过程中特有的一种生理失调或生理病变，多数发生在植 物茎尖培养和离体快繁中。和正常苗相比，玻璃苗矮小肿胀，节间很短或 几乎没有，叶片水渍化，半透明，厚而狭长，皱缩或纵向卷曲，脆弱易碎， 叶表缺少角质层，没有功能性气孔器，不具栅栏组织，仅有海绵组织。玻 璃苗生长繁殖速度下降，最后直至死亡。目前对玻璃化现象的发生规律和 机理还缺少真正的了解。
2、茎尖微芽嫁接脱毒 茎尖微芽嫁接脱毒是组织培养与嫁接相结合，
用以获得无病毒苗木的一种新技术。他将 0.1~0.3mm的茎尖作为接穗，嫁接到由试管中培养 出来的无毒实生砧木上，继而进行试管培养,愈合成 为完整植株的脱毒方法。它可消除用热处理不能除 去的一些病毒，如衰退病毒、不质陷孔病毒。黄脉 病毒等。茎尖微芽嫁接脱毒可以解决一些果树茎尖 培养成苗难，特别是生根困难的问题。有些果种种 类或品种，如格瑞弗斯苹果通过茎尖组织培养，可 以获得无病毒新梢，但不能生根，只有通过茎尖微 芽嫁接脱毒才能获得完整植株。
植物脱毒技术可使植物恢复原来优良特性，使 长势增强，明显提高产量、改善品质，产量的提高 幅度最高可达300%。
植物脱毒技术不仅脱除了病毒，还可以去除多 种真菌、细菌及线虫病害，使种性得以恢复，植株 生长健壮，减少肥料和农药施用的施用量，降低生 产成本，保护环境。
植物离体繁殖
在人工控制条件的无菌条件下，使植物在人工培养 基上繁殖的技术。可以在短期内获得大量遗传性状 一致的个体，目前已有近400种植物的离体繁殖获 得成功，取得了巨大的经济效益和社会效益。许多 其他的技术都建立在离体繁殖技术的基础之上。
2、低热长时处理法 低热长时处理一般不能使整株植株脱毒 ,而只能
使个别器官脱毒,大多是使在热处理过程中长出的 茎尖无病毒。因此,处理的最后步骤是要取新产生的

7.3植物组培快繁和脱毒技术

7.3植物组培快繁和脱毒技术

鉴定方法
1、直观测定法 2、指示植物法
利用病毒在其他植物上 出现症状的特征，作为 鉴别病毒种类的标准， 这种专门用以生产症状 的寄主植物即为指示植 物，又称鉴别寄主。
3、抗血清鉴定法
4、酶联免疫吸附法（ELISA） 5、电子显微镜检查法
6、免疫吸附电镜法
• 另一种是起源于苗基部切口处愈伤组织的上部，直接起源于中柱 鞘细胞，由于发生与茎的中柱相连，故利于移栽成活。
胚状体形成
• 概念： 离体培养下起源 于非合子细胞，经历 了胚胎发生和胚胎发 育过程所形成的类胚 结构。
原球茎形成
3、试管苗的增殖与继代培养
• 1）、试管繁殖速率及计算
• 理论计算：
接种一个芽或一块增殖的培养物，经一段时间的培养后看能 得到多少个芽或苗，从而推算理论上一年能繁殖出多少苗。
第一节 植物的离体快繁
植物离体快繁（Micropropagation） 又叫微型繁殖或试管繁殖，它是把植物 材料放在试管内，给予人工培养基和合 适培养条件，达到高速增殖，属离体无 性繁殖。
其特点是快速，每年能以千百万倍
一 .离体快繁的应用
良种快繁 脱毒良种苗快繁和无病毒苗大量快繁； 特殊育种材料快繁； 制种材料快速繁殖； 自然和人工诱变有用突变体的快繁； 基因工程植株的快繁；
四、离体快繁中的有关问题
• 培养物的增殖方式 • 外源生长调节物质对品种典 型性的影响 • 继代次数与变异

第二节 术
• 怎样脱毒？
植物的组培脱毒技
• 为什么要脱毒？
• 怎样鉴定无病毒植株？
病毒不仅使人患病，同样也侵害植物，使植物出现皱叶、黄 叶、落叶，以致品质变劣、花色变淡、花数减少、产量降低。 多数农作物，特别是无性繁殖作物，都易受到一种或多种病原 菌的周身浸染。病原菌的浸染不一定都会造成植物的死亡，很多病 毒甚至可能不表现任何可见症状。但在植物中病毒的存在会减少作 物的产量和降低作物的品质。

实验 植物脱毒与快繁

实验 植物脱毒与快繁
微嫁接要求的剥离技术高，嫁接成活率与接 穗大小呈正相关，而脱毒率与接穗大小呈负相关
三、实验材料、药品与仪器
实验材料：选取已经脱毒的百脉根无毒
苗组织 药品：（预先配置的培养基） MS+1mg/L 6-BA+3%蔗糖+0.8%琼脂 pH 5.7
仪器：紫外超净工作台
四、操作步骤
1. 培养基的制备与高压灭菌 2. 接种 3. 观察记录实验现象与结果
3、珠心组织培养脱毒法 病毒是通过维管组织传播，而珠心组 织和维管束系统无直接联系，故可以通过 珠心组织离体培养获得无病毒植株。 缺点： 会有20%~30%左右的变异率，同时无毒 苗苗期较长。
（三）微体嫁接离体培养脱毒法
把极小的茎尖作为接穗嫁接到实生砧木上， 然后将嫁接后的砧木接种到新的培养基上培养。 接穗在砧木的饲喂下很容易成活。
（2）热空气处理脱毒法
试验母株在高温生长室中生长一段时 间，其顶端分生组织比次生分生组织生长 迅速，后切取其茎尖分生组织进行离体培 养。 生长室温度35—40℃ 光照3000—10000 lx
3、热处理的局限性
（1）并非所有病毒对热处理都敏感。一般热 处理只对等径、线状病毒和类菌质体起作用。 （2）延长热处理时间，病毒钝化效果好，同 时也可能会钝化植物组织中的抗性因子而降低 处理效果。
优缺点：
茎尖越小，去病毒机会越大，脱毒效果 就越好，但同时因为其含营养及水量太低， 故培养时对培养基的要求就越高，对剥离技 术要求也越高。
2、愈伤组织培养脱毒法 （1）原理及依据 a、病毒在植物体内分布不均匀 b、病毒复制的能力衰退或丢失 c、继代培养的愈伤组织产生抗性变异
（2）技术关键 诱导再生植株的愈伤组织 （3）操作程序 植物各种器官或组织诱导产生出愈伤组织， 愈伤组织多次继代，然后从愈伤组织再诱导分 化芽，长成植株。 愈伤组织培养脱毒法脱毒效果不定，常出 现一些变异。

植物的快繁与脱毒培养

植物的快繁与脱毒培养

• 有性生殖退化、仅用无性繁殖方法繁殖的 植物，极易受病毒病的侵染。
• 大多植物病毒不经种子传播（专化性强的 病毒除外）。
• 病毒在生长旺盛的部位繁殖速度慢.
三、传统的植物脱毒技术简介
• 物理方法：X射线、紫外线、超短波、高温 热处理等
– 原理：钝化病毒，从而达到抑制病毒蔓延的目 的。
• 化学方法：采用化学抑制剂，干扰病毒在 植物体内的复制。
第一节 植物脱毒（virus elimination)培养
一、概念 • 利用植物组织培养技术，脱除植物细胞
中的病毒，生产健康的繁殖材料。
二、植物病毒病简介
• 定义：由植物病毒寄生引起的病害。
• 症状：
– ①变色，叶片的叶绿素形成受阻或积聚，从而产 生花叶、斑点、环斑、脉带和黄化等。花朵的花 青素也可因而改变,使花色变成绿色或杂色等,常 见的症状为深绿与浅绿相间的花叶症如烟草花叶 病。
ISEM
• 脱毒苗的保存与快速繁殖
• 脱毒苗的离体保存与繁殖，建立脱毒种苗 生产繁殖网络体系，木本植物建立隔离的 脱毒苗母本园。
Proliferation medium
Rooting medium
六、植物脱毒培养的意义
• 能够有效地保持优良品种的特性； • 生产无病毒种苗，防止品种退化； • 快速繁殖新品种，使优良品种迅速应用； • 节约耕地，提高农产品的商品率；
五、脱毒植物的鉴定方法
指示植物 (test plants)鉴定——利用病毒在其他植 物上出现症状的特征，作为鉴别种类的标准。这种 专用以产生症状的（寄主）植物就是指示植物。寄 主植物能够辨别某种病毒的专化性症状。 方法：将待测植物的汁液接种到指示植物，如果 待测植株带毒，则指示植物上会出现特定症状。 由于病毒的寄生范围不同，所以应根据不同的病 毒选择适合的指示植物。
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衰退现象（续）
• • • • （3）继代培养次数： 影响因培养材料而异。 有些植物长期继代培养仍保持再生能力和繁殖力。 有些植物继代增加，变异频率增加，如香蕉不定芽， 继代5次为2.14%；10次为4.2%；20次为100%变异。 故香蕉继代培养不能超过一年。蝴蝶兰连续培养4年后， 植株退化不开花。 • （4）季节：有些植物材料能否继代培养与季节有关。 如水仙鳞茎，六七月份休眠，生长变慢，8月休眠后， 生长加快。 • 百合鳞片分化能力：春季>秋>季夏季>冬季
• 1952，Morel（法）和martin，首先利用茎 尖分生组织脱毒了无病毒苗，建立茎尖脱 毒组培体系
2、茎尖脱毒的原理
• 基本原理：利用病毒在植物组织中分布的不 均匀性（分生组织无病毒）
• 而茎尖培养脱毒的可能原因（1-5）： • 1，旺盛分裂的分生组织中，代谢活动很高， 使病毒无法进行复制
清具有高度的专化性，因而可用于鉴定受感染而没有 症状的带毒植物。
试管沉淀反应；免 疫双扩散；酶联免疫吸附测定
(ELISA)。
• 衰退现象发生的影响因素： • （1）植物材料：不同植物，不同品种，不同器官 或不同部位的继代繁殖能力都不相同。 • 通常：草本植物>木本植物，被子植物>裸子植物， 年幼材料> 老年材料；胚> 营养组织，胚> 胚状体 > 愈伤组织 • （2）培养基和培养条件：培养基和培养条件适当 与否对继代培养影响颇大,所以常用改变培养基和 培养条件来保持继代培养。 • 石斛兰茎尖或掖芽培养，固体培养基培养形成原 球茎后，继代培养要用液体培养基进行振荡培养。
菊花 康乃馨 水仙 唐菖蒲 风信子 月季 天竺葵
19 11 4 5 3 10 5
矮牵牛 马铃薯 大蒜 豌豆 百合 柑橘 苹果
5 17 24 15 6 23 36
葡萄 樱桃 无花果 桃 梨 草莓
26 44 5 23 11 24
1.4 有关病毒病的研究历史
• 1934,white（美） 观察烟草根系， • 发现：病毒在根，茎的分布不均匀。离根 尖和茎尖越近，病毒的密度越低，反之， 越高。 • 分生组织一般无病毒，病毒在生长旺盛的 部位繁殖速度慢.
• 目前受病毒危害严重影响生产的有： – 大田作物：马铃薯、甘薯、甘蔗、烟草。 – 蔬 菜：白菜、大蒜、葱、番茄、黄瓜、 辣椒。 – 果 树：柑橘、苹果、草莓、香蕉。 – 花 卉：香石竹、各种菊花、天竹葵、 紫罗兰等
• 危害园艺植物的病毒数目
植物种类 染病毒种 类 植物种类 染病毒种 类 植物种类 染病毒种 类
1.病毒病及其危害
• 脱毒（virus elimination)培养： • 利用植物组织培养技术，脱除植物细胞中的 病毒，生产健康的无毒繁殖材料的过程。
1.2.植物病毒病及其危害
• 定义：由植物病毒寄生引起的病害。 • 症状：
–①变色，叶片的叶绿素形成受阻或积聚，从而产 生花叶、斑点、环斑、脉带和黄化等。花朵的花 青素也可因而改变,使花色变成绿色或杂色等,常 见的症状为深绿与浅绿相间的花叶症如烟草花叶 病。 –②坏死，在叶片上常呈现坏死斑、坏死环和脉坏 死，在茎、果实和根的表面常出现坏死条等。 –③畸形，器官变形，如茎间缩短，植株矮化，生 长点异常分化形成丛枝或丛簇，叶片的局部细胞 变形出现疱斑、卷曲、蕨叶及带化等。
常用的指示植物有:千日红(Gomphrena globosa);苋色藜(Chenopodium amaranticolor)和各种烟草.
由于病毒的寄生范围不同，所以应根据不同的病毒选 择适合的指示植物。
四、脱毒植物的鉴定方法（续）
血清鉴定(serological test)(抗原抗体反应)：病毒抗血
1.病毒病的危害及症状
正常的番茄果
番茄厥叶，卷叶病毒
番茄病毒病（植株）
香蕉束顶病
俗称虾蕉、葱蕉或蕉公)，病株一般 不抽花蕾，因近顶部叶片成束而得 名。是由病毒侵染植株而引起的, 是 香蕉致命病害, 蕉农称之为" 不治之症"。局部地区 蕉园发病率为2%～10%, 产量损失 30%～60%。
1.病毒病及其危害（续）
• 脱毒时，最好找出茎
原基所带叶原基的数 目与生长点（茎尖）
大小的相关性，这样剥离技术 要求越高，成功率越 低
表2 离体茎尖长度对马铃薯脱毒的影响 • 茎尖长度
/cm
叶原基数
0.12 0.27 0.60
1 2 4
发育成小植株 无病毒 数 再生植 株 50 24 42 18 64 0
表3.带病毒植株脱除病毒时宜采用的茎尖大小
植物种类
病毒种类
茎尖长度 /mm
1.0-3.0 0.2-0.5 1.0-3.0 0.2-0.3 <0.2 1.0-2.0 1.0-2.0 0.3-1.0
品种数
马铃薯
马铃薯Y病毒 马铃薯X病毒 马铃薯卷叶病毒 马铃薯G病毒 马铃薯S病毒
1 7 3 1 5 6 1 2
四、脱毒植物的鉴定方法（续）
指示植物 (test plants)鉴定——利用病毒在其他植物 上出现症状的特征，作为鉴别种类的标准。这种专用 以产生症状的（寄主）植物就是指示植物。寄主植物
能够辨别某种病毒的专化性症状。
方法：将待测植物的汁液接种到指示植物，如果待测 植株带毒，则指示植物上会出现特定症状。
酶缺乏，1969年，Stace-Smith提出，可能病毒的合成 需要的酶系统在分生组织中缺乏或还没建立，因而病毒 无法在分生组织中复制。
抑制因子，1976年，Martin-Tanguy等提出了抑制因子 假说，认为在分生组织中存在有某种抑制因子
3.茎尖培养脱毒的过程
• 一，脱毒前的准备工作： • 1.被脱毒植物携带病毒的诊断 • 根据植物病毒病的症状特征和表现程度判断病 毒类型及感染程度。 • 2.母体植株的选择和预处理 • 母体的选择：欲脱毒材料的品种典型性；外植 体健康程度选择;无损伤。
2。传导抑制： （1）病毒在植物体内的传播主要是通过维管束实现的 ，但在分生组织中，维管组织还不健全，从而抑制了病 毒向分生组织的传导。（2）通过胞间联丝（但茎尖无胞 间联丝）。
3. 激素抑制，在分生组织中，生长素和细胞分裂素水 平均很高，可以抑制病毒增殖，因而阻滞了病毒的侵入 或者抑制病毒的合成。
2.外植体（毛地黄叶片）--愈伤组织—再生植株
愈伤组织
愈伤组织再生的不定芽
5.外植体（叶片等）--原球茎---再生植株（兰科植物）
大花蕙兰原球茎增殖与植株再生
6.外植体（叶片）-（或愈伤）-体胚---再生植株
体细胞胚胎发生
8.外植体—孢子—小植株（蕨类植物）
二，培养方式
固体培养：
液体培养
温室移 栽炼苗
一，植物快速繁殖的途径和方法
类型
器官型 器官发生型 胚状体发生型
方式
直接以芽增殖 脱分化,愈伤再分化
从愈伤或外植体直接 产生
特点
繁殖系数高,遗传性 稳定 繁殖系数高低,用于 细胞分化研究 繁殖系数高,
事例
甘蔗,香蕉,香石竹等 烟草,油菜等 胡萝卜,石刁柏等
原球茎型
球茎芽型
外植体产生原球茎
叶柄-圆球形小突起球 茎芽
5. 脱毒效果检测 一般来说，再生植株后，在18个月以内进行病毒 鉴定，因为病毒在植物体内的潜伏期为6-12个月以 上。
茎尖脱毒培养注意事项（要考）:
• 1，茎尖越小,带有病毒的可能性就越小,但 太小又不易成活. 2，茎尖培养的成活率与所取的茎尖大小成 正比；茎尖培养的脱毒效果与所取的茎尖 大小成反比. • 3.培养基中尽量不用2,4-D(变异) • 4.茎尖培养还可除去其它病原体,如细菌,真 菌等.
甘薯 甘蔗 大丽花
斑叶花叶病毒 缩叶花叶病毒 羽毛状花叶病毒
花叶病毒 花叶病毒
0.7-0.8 0.6-1.0
1 1
3.茎尖培养脱毒的过程（续）
• • • • 3.茎尖培养: MS 培养基; 怀特培养基等（高盐培养基）, .添加5-1-%椰乳;0.1-1.0 毫克/升IAA,NAA 或 者说-BA,活性碳等. • 4.提高脱毒效果的方法:高温处理,低温处理, 化学处理(加入嘧定,或嫖呤的类似物,氨基酸, 抗生素处理,三氮唑核苷) • 5.脱毒苗的鉴定:
4.脱毒苗的鉴定和保存
• 并非所获得的无菌苗均为无毒苗,如生长点培养的 无毒苗成苗率和脱毒率都非常低,所获品种在用作 无毒苗原种之前均需进行病毒鉴定,方法如下: • (1).直接测定法 • (2)指示植物法: • 3. ELISA • 4.分子生物学方法等。
4、脱毒植物的鉴定和保存
指示植物鉴定
抗血清反应鉴定 直观鉴定 ISEM
• （1）症状:花而不实 • 花叶型马铃薯病毒：退化，叶片卷缩，产量逐年下降，
到PVS，PVA，PVM，PVX
• 卷叶型马铃薯病毒：PLRV • 香蕉束顶病：叶片越来越短小，植株矮缩，叶硬 直成束（毁灭性病害）.不结果或果特心,异常 • 柑桔黄龙病:苹果花叶病毒，番茄病毒病，葱类黄 矮病，菊花斑萎病，兰花叶病，白合丛生病。
继代培养
• 蝴蝶兰，蕙兰等也如此。 • 驯化发生的原因：可能是继代培养中细胞 积累了较多的生长物质，因此逐渐减少对 外源生长物质的需要。 • 驯化的不足：长期继代，卡德利亚兰只长 芽不长根，芽多而细弱。
3 衰退现象：长期继代培养的组培材料也会逐渐衰退
（recession），丧失形态发生能力（生长不良，再生能力和增殖 力下降等）
第2节 植物快速繁殖的应用
• 1.大量繁殖珍稀或名 贵植物 • 如:佛肚兰,卡特丽亚 兰等工厂化育苗 • 2.茎尖培养脱毒及脱 毒苗的培养 • 无菌苗 • 有毒苗 • 脱毒苗
二，（茎尖培养）脱毒及其应用
• 1.病毒病及其危害 • 2.茎尖培养脱毒的原理 • 3.茎尖培养脱毒的过程 • 4.脱毒苗的鉴定和保存