植物脱毒快繁技术

甘薯脱毒与快繁技术孙光泽1杨春玲2孙克威2(1.营口农科所,辽宁营口115000; 2.辽宁农业职业技术学院,辽宁营口115214) =摘要>本文介绍了甘薯脱毒与种薯快繁技术,从而为甘薯脱毒快繁技术的推广应用提供参考。

=关键词>甘薯;脱毒技术;种薯快繁中图分类号:S531文献标识码:C甘薯(Ipomoea batatas L1La m)为旋花科1年生植物,是我国四大粮食作物之一,长期营养繁殖病毒病蔓延,在世界上已发现10种以上,我国发现5种,目前比较普遍的有甘薯羽状斑驳病毒和潜隐病毒两种。

受病毒侵染的甘薯主要表现为:叶片皱缩,花叶,卷叶,叶片黄化,叶片有羽状斑驳或环驳,茎蔓生长势弱,结薯小,结薯少,薯皮色淡、粗糙有龟裂,严重影响甘薯的产量和品质导致产量锐减,影响农民的经济收入。

甘薯脱毒快繁技术就是通过育种选种,选出当地最适用的品种,用种薯催芽、消毒,无菌条件解剖镜下切取1~2个叶原基的茎尖分生组织进行脱毒培养;通过病毒检测证实是无毒苗,再通过生产鉴定是优良品种的无毒苗,用无毒苗工厂化切段快繁;通过炼苗和室外防传毒快繁原原种和原种生产,进而扩繁出一级生产种,其繁殖速度快,并脱去苗中的甘薯病毒,避免病毒再侵染,继代繁殖成活率高且不受季节、气候和空间限制,可以进行工厂化生产。

脱毒甘薯种植后表现生理代谢旺盛,缓苗快、长势旺、可充分发挥品种原有的增产潜力,块根膨大早、膨大快,脱毒甘薯单株块根数增多,茎节上产生不定根少,且易膨大形成100克以上的薯块,须根、柴根很少,成薯率提高,薯块分布集中,增重明显,薯块两端纤维明显减少,表皮光滑平整,颜色鲜艳,无黑斑和龟裂,出干率增加,加工品质提高,比未脱毒甘薯增产20%~50%,有的甚至成倍增产。

1品种选择甘薯优良品种很多,而且经过脱毒后都能不同程度地提高产量、改善品质。

但甘薯品种都有一定的区域适应性和生产实用性,在进行甘薯脱毒时一定要根据本地区气候、土壤和栽培条件,选用适合本地区大面积栽培的高产优质品种或具有特殊用途的品种。

石榴脱毒苗木繁育技术规程Pomegranate virus - free seedling propagation techniques oforder1 范围本文件规定了石榴种苗组培生产过程的环境要求、组培技术和管理。

本文件适用于石榴种苗组培繁育。

2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。

其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T 8321（所有部分）农药合理使用准则LY/T 1893 石榴苗木培育技术规程NY/T 357-2007 香蕉组培苗DB34/T 3410 石榴生产技术规程3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。

石榴组培苗plantlets of pomegranates根据植物细胞具有全能性的理论，利用石榴茎尖作为外植体，在无菌条件下通过人工培育出完整石榴植株。

脱毒苗 virus-free seedlings脱毒苗是指不含有该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物体内的存在表现为阴性反应的苗木，植物体内除去病毒常用方法有热处理法和茎尖脱毒法，其中茎尖脱毒法更适用于石榴组培苗的生产。

茎尖脱毒 virus-free technology of plant shoot tip病毒在植物体内分布是不均一的，越接近生长点约（0.1-1mm区域），病毒浓度越稀，因此采用茎尖接种的离体培养方式，可以达到脱除植物病毒的目的，该方式也是木本植物组织培养最常用的脱毒方式。

褐化 browning由于植物组织中的多酚氧化酶被激活，而使细胞内的酚类化合物聚合成暗黑色的大分子物质，在后期培养中，这种变色物质会使培养物褐化，影响培养物的生长和分化，甚至造成培养物死亡。

4 环境要求准备室用于组培药品配置、器具洗涤及灭菌等，面积≥15 m2，温度为20-28℃。

缓冲室室外与接种室或组培室的隔离缓冲区间，应具备换衣区、鞋区、风淋区，面积≥2 m2。

作物栽培现代农村科技2021年第2期甘薯脱毒苗快繁技术刘洋陶春来崔绍玉石颖靳国旺曹立娜高君慧张丹杜德玉(廊坊市农林科学院河北廊坊065000)甘薯属于无性繁殖作物，在种植过程中容易受到病毒侵染，造成产量降低、品质变差，近年来发现的甘薯复合病毒病(SPVD)更成为甘薯的毁灭性病害，对产量影响巨大，减产幅度高达50%~90%冋?。

1脱毒培养1.1茎尖剥离。

选取生长健硕、茎尖饱满的甘薯植株，取顶芽2cm,用水冲洗2~3遍备用。

于无菌环境中，将幼芽用75%的酒精浸泡30s后，再用2%的次氯酸溶液消毒5min,浸泡于无菌水中备用。

将茎尖置于解剖镜下，用手术刀将茎段上可见叶片剥离，切取0.1~0.3mm的茎尖分生组织，接种到分化培养基(MS培养基+1.0mg/L6BA+ 0.5mg/LIAA)上。

于27°C±1°C、光强3000lx、每天13h光照处理条件下培养，诱导芽的形成。

1.2成苗。

在分化培养基中培养20d,待茎尖膨大变绿后，将其转入MS培养基上培养成苗，30d后将小苗转入MS培养基中继代培养。

1.3病毒检测。

组培苗扩繁后，长至5~6片叶时进行病毒检测。

采用RT-PCR检测［3］或甘薯病毒芯片快速检测方法，针对甘薯褪绿矮化病毒(SPCSV)、甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)、甘薯潜隐病毒(SPLV)、甘薯曲叶病毒(SPLCV)及甘薯病毒G(SPVG)等甘薯主要病毒进行检测。

1.4组培苗扩繁。

选取脱毒成功长至5~7片叶的脱毒苗，在无菌环境中截取2cm左右茎段，每茎段须有2~3个节，转入MS培养基上，于温度27C 土1C、光强30001x、每天光照13h条件下培养，每30~40d扩繁1次。

2移栽驯化选择地势高燥、通风向阳、土壤肥沃疏松，并且3年以上没有种过甘薯且无根腐病、黑斑病、茎线虫病等土传病害的温室进行脱毒苗移栽驯化。

温室上下通风口及入口须安装60目的防虫网，入口要设2道防虫纱门。

马铃薯组织培养脱毒快繁植物组织培养（Plant tissue culture）是指在无菌的条件下，将离体的植物（根、茎、叶、花、果实、种子等）、组织（形成层、花药组织、胚乳、皮层等）、细胞（体细胞和生殖细胞）以及原生质体，培养在人工配制的培养基上，给予适当的培养条件，使其长成完整的植株。

由于培养物是脱离植物母体，在玻璃瓶中进行培养，所以也叫做离体培养。

在有些情况下，再分化也可不经愈伤组织阶段，而直接发生于脱分化的细胞。

[1]植物组织培养脱毒快繁是人工在无菌条件下利用植物体的一部分，在人工控制的营养和环境条件下繁殖植物，脱除病毒得到无毒苗株，继而在大田快速繁殖的技术。

脱毒及离体快繁，这是目前植物组织培养应用最多、最广泛和是有效的一个方面。

主要是进行茎尖培养脱除病毒。

对于脱毒苗、新育成、新引进、稀缺良种、优良单株、濒危植物和基因工程植株等可通过离体快速繁殖，同时可不受地区和气候的影响，比传统的繁殖方法快数万倍。

植物组织培养已发展成为一门富有生命力的学科。

[2]植物组织技术在农业上的应用有很多方面，其中植物脱毒和离体快速繁殖是目前植物组织培养应用最多、最有效的一个领域。

通过植物生物技术改良作物是以后农业科学领域最重要的发展之一。

首先用茎尖脱毒获得无病毒植株成功的是法国人莫勒尔,他们用大丽花为原料,在1952 年试验产生了无病毒植株。

在1955 年以马铃薯为材料产生了无病毒植株。

农业生产中，许多农作物都带有病毒，无性繁殖方式植物如马铃薯、甘薯、大蒜等尤为严重，但是感病植株并非每个部位都带有病毒。

[3]一、国内外研究动态（一）研究背景栽培种的马铃薯(Solanurn tuberosurn)是双子叶种子植物, 属茄科(Solanceae)茄属(Solanum)的一年生草本植物,生产上绝大多数是利用块茎进行无性繁殖。

[4]马铃薯用块茎繁殖，植株长势逐年削弱、矮化，分枝变小，结薯变小，产量逐年下降，甚至绝产，这种现象叫做种性退化。

目录1 茎尖脱毒技术操作规程 (1)1.1 设备条件 (1)1.1.1 试剂配置室 (1)1.1.2 洗涤及灭菌室 (2)1.1.3 无菌室 (2)1.1.4 培养室 (2)1.2 材料的选择 (2)1.3 类病毒和病毒的检测 (2)1.3. 1 类病毒的检测 (2)1.3.2 病毒检测 (9)1.3.3 脱毒材料热处理 (13)1.4 培养基的制备 (13)1.4.1 培养基母液配制 (13)1.4.2 培养基配制 (15)1.5 外植体灭菌 (17)1.6 茎尖剥离前消毒 (17)1.7 茎尖剥离与接种 (17)1.8 培养 (17)1.9病毒检测筛选脱毒苗 (17)1.10 品种典型性鉴定 (18)2 脱毒苗快繁技术操作规程 (18)2.1 茎切段培养基繁殖 (19)2.1.1 扩繁前的准备工作 (19)2.1.2 茎切段和接种 (19)2.1.3 培养 (19)2.2 扦插苗扩繁 (21)2.2.1 培养基础苗 (21)2.2.2 基础苗移栽 (21)2.2.3 基础苗剪切 (21)2.2.4 基础苗切段后的管理 (22)2.2.5 扦插苗 (22)2.2.6 扦插苗管理 (23)马铃薯茎尖脱毒及脱毒苗快繁技术操作规程1 马铃薯茎尖脱毒技术操作规程马铃薯健康种薯的生产方法主要有利用茎尖脱毒快繁技术生产无病毒种薯、田间系选生产良种和实生种子生产无毒实生薯等，其中植物茎尖分生组织培养脱毒技术（即茎尖脱毒）在实际的农业生产中应用最为广泛并取得了巨大成功。

茎尖脱毒技术是根据病毒在植物体内分布不均和茎尖分生组织带毒少的原理，结合使用钝化病毒的热处理方法，通过剥离茎尖分生组织进行培养获得脱毒植株。

这一技术具有周期短、效率高、能与组织培养快速繁殖相结合等特点。

目前除一些类病毒外，绝大多数植株病毒都可以通过茎尖脱毒技术进行脱除。

经茎尖分生组织培养获得的植株经病毒检测并确认其不带病毒后可进一步利用，对仍带有病毒的株系进行淘汰或再脱毒。

马铃薯脱毒试管苗快繁技术马铃薯脱毒试管苗快繁技术是近年来在马铃薯生产中得到广泛应用的一项先进技术，通过试管苗快速繁殖可以大幅提高马铃薯的繁殖效率和质量，有效地避免了病毒和病菌的传播，提高了马铃薯的产量和品质。

本文将从马铃薯脱毒试管苗原理、技术流程、应用前景等方面进行介绍。

一、马铃薯脱毒试管苗原理马铃薯脱毒试管苗技术是通过将健康的组织培养在无菌的培养基中，通过适宜的营养和生长条件，使其快速生长和分化为幼苗，然后继续培养和繁殖，最终获得大量无病害的苗种。

其原理主要包括以下几点：1. 选择健康组织：选择健康的马铃薯组织，如叶片、茎芽等，进行无菌处理，去除表面的病菌和病毒。

2. 建立培养基：根据马铃薯生长的特点和营养需求，配置适宜的无菌培养基，提供充足的营养和生长因子。

3. 培养和繁殖：将经过无菌处理的马铃薯组织培养在无菌培养基中，控制适宜的温度、光照和湿度，促进组织的生长和分化为幼苗，然后进行继代培养和繁殖。

通过以上原理，可以有效地实现马铃薯的脱毒繁殖，得到大量无病害的试管苗，为马铃薯生产提供了可靠的种苗资源。

马铃薯脱毒试管苗技术的流程主要包括组织培养、无菌处理、培养基配置、培养和繁殖等步骤，下面将对其具体流程进行介绍。

2. 无菌处理：将经过消毒处理的组织放入无菌工作台中，进行进一步的无菌处理，包括盆栽、割取等操作，确保组织的无菌状态。

3. 培养基配置：按照配方将无菌培养基配置好，包括营养盐、植物生长激素、碳源等成分，确保提供足够的营养和生长因子。

马铃薯脱毒试管苗技术在马铃薯生产中具有广阔的应用前景，主要体现在以下几个方面：1. 提高繁殖效率：传统的马铃薯繁殖方式存在生长周期长、繁殖效率低的问题，而通过试管苗快速繁殖技术可以大大提高繁殖效率，节约时间和成本。

2. 避免病毒传播：马铃薯作为病毒携带者，传统繁殖方式易导致病毒的传播，而试管苗繁殖可以避免病毒的传播，有效保证马铃薯的健康和质量。

3. 提高产量和品质：无病害的试管苗具有较高的生长力和抗逆性，可以提高马铃薯的产量和品质，为种植户带来更好的经济效益。

植物脱毒方法
1、茎尖培养脱毒:病毒在植物体内的分布并不均匀,越靠近茎端的病毒的感染深度越低,生长点则几乎不含或含病毒很少。

2、愈伤组织培养脱毒法:通过植物的器官和组织的培养,脱分化诱导产生愈伤组织,然后从愈伤组织再分化产生芽,长成小植株,可以得到无病毒苗。

3、珠心胚培养脱毒:病毒一般不通过种子传播,由珠心细胞发育成的胚再生的植株是无毒的,并具有与母本相同的遗传特性。

4、茎尖微体嫁接:将实生苗砧木在人工培养基上种植培育,再从成年无病树枝上切取0.4—1.0mm茎尖,在砧木上进行试管微体嫁接,以获得无病毒幼苗。

5、花药培养脱毒。

6、热处理脱毒:一些病毒对热不稳定,在高于常温的温度下(35-40°C),即钝化失活。

7、化学处理:抑制或杀死病毒。