猪细小病毒的分子生物学研究

猪细小病毒病的诊断与防治摘要：猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)是引起母猪繁殖障碍的主要病原体之一。

主要特征是导致母猪发生流产、死胎、胎儿木乃伊化及新生仔猪的死亡。

PPV最早是从培养猪瘟的细胞中发现的一种小DNA污染病毒。

随后才陆续发现它为引起胚胎和胎儿死亡的主要原因,并且呈世界性分布。

本文从ppv的病原学、流行病学、临床症状、病理变化、诊断和防制方面作一综述。

关键词：猪细小病毒；诊断；防治猪细小病毒（porcine parvovirus,PPV）是引起猪繁殖障碍的重要病原体之一，是Mary和Mahnel于1966年进行猪瘟病毒组织培养时发现的,随后被鉴定为DNA型病毒。

Cartwright等(1967)首次证实了它的致病性。

主要表现为母猪流产、不孕、产死胎、木乃伊胎及弱仔等特征，不表现其他临床症状，其他猪感染后也无明显的临床症状[1]。

从20世纪60年代中期，相继从欧洲、美洲、亚洲的许多国家分离到病毒或检出抗体，我国已先后在北京、上海、吉林、黑龙江、四川和浙江等地分离到了PPV，该病在世界各地猪场广泛存在[2]。

PPV通过病猪和带毒猪，可水平传染又可垂直传染，消化道、交配和胎盘感染是最常发生的传染途径。

会在短期内感染全群,加之病毒抵抗力强,使本病难以控制和根除[3]。

PPV常呈潜伏状态存在，尤其是低剂量持续感染的现象经常发生，该病毒不仅能够引起母猪的繁殖障碍，而且往往与其他病原体协同作用引起多种疾病，给养猪业造成很大的经济损失。

1病原学猪细小病毒（PPV）属于细小病毒科（parvoviridae）细小病毒（parvovirus），只有一个血清型，与其他动物的细小病毒的血清学关系尚不十分清楚[4]。

成熟病毒粒子为无囊膜等轴二十面对称体，直径18～20 nm，病毒衣壳由直径2～4 nm的32个壳粒组成，在病毒内未发现脂质、碳水化合物和酶，完全病毒分子质量为5.3×10 u；基因为单链DNA，沉降系数为105 S。

猪病毒性传染病：猪细小病毒病病原本病是由猪细小病毒感染所致。

其病毒粒子直径为20nm左右。

能凝集猴、豚鼠、小鼠、鸡、狗、猫、猪等动物和人O型红细胞，但不能凝集牛和绵羊红细胞。

猪细小病毒通常在扁桃体、颌下淋巴结、肾、肝、脊髓和肠系膜淋巴结内增殖。

用免疫荧光技术可以查出组织细胞浆和胞核内的病毒包涵体。

猪感染后3-7天开始通过粪便排出病毒，以后呈不规则排毒。

感染猪的脏器、分泌物、排泄物以及种公种的精液中都含有病毒，猪感染后6-10天，即可产生高滴度的抗体，经感染前后抗体水平监测比较即可发现猪群的感染状况。

猪细小病毒对各种不良环境因素具有较强的抵抗力。

70℃2h、胰酶及pH3-9时都不能破坏其感染力。

2%NaOH热溶液能杀灭该病毒。

流行特点1.猪是已知的惟一的易感动物。

不同年龄、性别的家猪和野猪都可感染，尤以初产母猪为典型。

2.传染源主要是感染本病毒的种公猪和母猪。

带毒猪经粪、尿、鼻涕、唾液、精液以及死胎、弱胎、胎衣、胎水向环境排毒，污染水源、饲料、土壤、猪舍等。

病毒一般可在猪舍存活数月。

阴性猪场一旦引入带毒猪，通常于3个月内全场所有的猪只都会被感染，后呈地主流行或散发，并持续多年。

3.本病既可水平传播，又可垂直传播。

一般经口鼻为主传播。

带毒种公猪也可通过交配传染母猪，怀孕母猪也可通过胎盘感染胎猪。

鼠类也可机械性带毒散毒。

4.本病可见于一年四季(尤其是规模化猪场)，但农村散养为主的地区，仍为春、秋两季产仔时多见。

临床症状仔猪和母猪感染后通常表现为亚临床感染。

主要症状为病猪母源性繁殖障碍。

妊娠初期(10-30天)的母猪感染后，可能重新发情而屡配不孕，或窝产仔数明显减少。

妊娠中前期(30-50天)感染，分娩时大部分胎儿为木乃伊。

回顾性分析可知，怀孕过程中怀孕母猪腹围逐渐缩小。

妊娠中期(50-60天)感染时，大部分胎儿为死胎。

妊娠70天时感染，母猪主要表现为流产。

妊娠70天后感染，此时的胎儿已具备产分免疫应答能力，能产生抗体，因此不宜送检以分离病毒。

新发现的细小病毒——猪博卡病毒研究概况作者：黄宝慧刘金孟宪荣栗绍文何启盖辛崇兴来源：《农家致富顾问·下半月》2016年第10期摘要本文从猪博卡病毒的基因组、流行病学、检测方法和致病性分析等方面阐述了国内外关于猪博卡病毒的研究进展，以期对该病毒的研究提供新思路。

关键词猪博卡病毒流行病学探究近年来，各种猪病的暴发给养猪业的发展造成严重影响，尤其是2011年国内部分地区的规模化猪场陆续暴发的腹泻性疾病，通过检测腹泻仔猪的粪便，发现了一种新的病毒——猪博卡病毒（张坤 2011）。

目前，国内学者对该病毒的研究处于刚起步的阶段，笔者对此进行了探讨，希望对猪博卡病毒的研究有促进作用。

1 猪博卡病毒的基因组猪博卡病毒是博卡病毒属的最新成员，属于细小病毒科，细小病毒亚科。

猪博卡病毒无囊膜，病毒粒子呈二十面体对称，直径25-30nm。

基因组序列为单链线性基因，长度只有大约5kb，在序列的两端存在由回文序列构成的发夹结构。

病毒编码基因含有三个开放阅读框，编码NS1、NP1、VP1和VP2四种病毒蛋白（Zhou et al 2014），非结构蛋白NS1具有解旋酶和ATP酶活性，与病毒的滚环复制有关；病毒的两个重叠的衣壳蛋白VP1和VP2的区别在于VP1蛋白比VP2蛋白在N端多出一个VP1独有区，其上有两个具有磷脂酶A2活性的保守基序“HDXXY”和“YXGXF”，对细小病毒的感染具有重要作用（Zádori et al 2001；Girod et al 2002；Lupescu et al 2006；Qu et al 2008）；博卡病毒的特征性蛋白NP1的功能目前尚无明确的表述。

2 猪博卡病毒的流行病学研究自2009年以来，在中国、韩国、喀麦隆、乌干达、英国、克罗地亚、罗马尼亚、匈牙利、美国等多个国家和地区都检测到了猪博卡病毒的存在，以中国和美国分离到的猪博卡病毒最多。

猪博卡病毒不仅在患病猪群中普遍存在，还能在健康猪群中检出。

猪细小病毒病的流行病学临床症状诊断与防控猪细小病毒病是一种由猪细小病毒引起的传染病，猪细小病毒是一种RNA病毒，主要影响幼年猪和生长肥大的猪。

这种病毒对猪的生长发育和免疫功能造成影响，严重影响了猪的健康和养殖业的发展。

本文将介绍猪细小病毒病的流行病学、临床症状、诊断与防控措施。

一、流行病学猪细小病毒病主要通过接触感染、空气传播和食物传播进行传播。

幼猪和生长肥大的猪是感染猪细小病毒的高发人群。

猪细小病毒会在病毒感染的猪体内大量复制，分泌到排泄物中，通过环境传播给其他健康的猪。

猪场环境的清洁卫生和养殖管理对预防猪细小病毒病至关重要。

二、临床症状1. 肺炎症状：猪细小病毒病毒感染后，病猪会出现肺炎症状，包括呼吸急促、咳嗽、流鼻涕等症状。

2. 腹泻：感染猪细小病毒后，病猪会出现腹泻症状，粪便呈水样或黏液样，严重影响猪的健康状况。

3. 发热：病猪会出现不同程度的发热症状，体温可达40℃以上。

4. 生长缓慢：感染猪细小病毒后，病猪的生长速度明显减慢，体重增长受到影响。

三、诊断对猪细小病毒病的诊断主要依靠临床症状和实验室检测。

临床上，猪细小病毒病的症状与一般肺炎和腹泻的症状相似，因此需要结合实验室检测来作出准确的诊断。

实验室检测主要包括病毒分离、抗体检测和分子生物学检测等。

四、防控措施1. 加强环境卫生管理：定期清洁猪场环境，保持猪场通风、干燥和清洁，减少猪细小病毒在环境中的存活和传播。

2. 严格管控动物流通：避免不合理的猪只流通，防止病毒通过猪只流通进行传播。

3. 防范外来病原输入：加强猪场的检疫工作，防止外来病原的输入。

4. 加强饲养管理：避免过度密度饲养和交叉感染，保持猪场的生物安全。

5. 接种疫苗：猪细小病毒病疫苗的使用可以有效预防疾病的发生，减轻病原压力。

猪细小病毒病对猪的生产和养殖业造成了严重的危害，因此加强猪场的管理和预防工作至关重要。

只有采取科学合理的防控措施，才能有效预防和控制猪细小病毒病的传播，保障猪的健康和养殖业的发展。

猪细小病毒6型全基因组克隆及遗传进化分析赵靓; 白彩霞; 王小朋; 杨侃侃; 张达; 李永东; 孙裴; 王勇【期刊名称】《《江苏农业学报》》【年(卷),期】2019(035)005【总页数】7页(P1154-1160)【关键词】猪细小病毒6型; 全基因组; 同源性分析; 遗传进化分析【作者】赵靓; 白彩霞; 王小朋; 杨侃侃; 张达; 李永东; 孙裴; 王勇【作者单位】安徽农业大学动物科技学院安徽合肥 230036; 宁波市疾病预防控制中心浙江宁波 315010【正文语种】中文【中图分类】S852.65细小病毒是属于细小病毒科的单链非囊膜线性DNA病毒，其基因组大小为4.0～6.3 kb，由5′端UTR、非结构蛋白(NS1)、结构蛋白(Cap)和3′端UTR组成。

细小病毒科宿主范围广，可根据感染宿主的不同分为感染脊椎动物的Parvovirinae亚科和感染节肢动物的Densovirinae亚科。

Parvovirinae亚科由9个属组成，包括Dependoparvovirus、Copiparvovirus、Bocaparvovirus、Amdoparvovirus、Aveparvovirus、Protoparvovirus、Tetraparvovirus、Erythroparvovirus和Marinoparvovirus[1]。

猪细小病毒1型(PPV1)属于Protoparvovirus属，于1965年首次从德国的细胞培养污染物中分离得到[2-3]。

PPV1被认为是导致发生猪繁殖障碍的主要原因之一[1,4]，主要表现为怀孕母猪出现流产、产死胎、畸形胎或木乃伊胎等症状，造成了全球养猪业巨大的经济损失[4]。

在过去的二十年中，在猪的身上检测发现一些新型的猪细小病毒，分别被命名为PPV2～PPV7。

PPV2是2001年在缅甸的一次戊型肝炎病毒血清调查中发现的[5]。

PPV3又称PARV4或Hokovirus，与人类细小病毒4型(PARV4)密切相关，于2008年在中国香港被发现[6]。

猪细小病毒病的诊断与防制吕建强陈焕春猪细小病毒病是由猪细小病毒（PPV）引起的猪繁殖障碍性疾病，该病原属于细胞病毒属，呈典型的二十面立体对称结构，无囊膜，直径约为20~30nm，基因组为单链线状NDA，衣壳由32个壳粒组成，一般含有三种结构蛋白（VP1，VP2，VP3）。

PPV对外界理化因素具有很强的抵抗力，56℃4h处理，几乎不降低其感染性，37℃ 7日，56℃ 2日也不能完全使其丧失感染性，但是80℃ 5分钟可使其灭活。

对酸碱、脂溶剂及许多蛋白酶有抵抗力。

PPV适合在生长旺盛并处于有丝分裂过程中的细胞内增殖，体外培养时，它可在细胞生长的晚期或早期大量增殖。

妊娠初期（怀孕第1-70天）是病毒增殖的最佳时期，一般认为，PPV主要侵袭增殖快速的组织器官，故病理变化主要局限于血管上皮，小脑外胚层，胎儿组织和肿瘤等。

自1967年，英国学者Cartwright首次报道后，世界各地先后有关于此病的报导，并有大规模爆发，我国学者1980年初陆续分离到PPV。

各品系和年龄的猪对PPV均敏感，可水平或垂直传播。

在猪群中，主要通过配种，接触分泌物排泄物和污染的器物传播；受感染的妊娠母猪在病毒学期间，可通过胎盘感染胎儿，并可在子宫内传播，这对生产危害尤为突出。

据血清学调查，该病已在世界范围内流行，猪场阳性率极高，很难找到阴性猪场。

猪的阳性率，英国为19-56%，德国屠宰猪为54%，澳大利亚为52%，美国为57%，我国的阳性率极高。

据报道，英国用本病造成的经济损失估计约为1500万英镑，日本由PPV造成的经济损失为6000万日元，而PPV给我国造成的经济损失为几十亿元人民币。

由此可见，PPV感染导致的繁殖障碍给养猪业造成了严重的经济损失。

本病引起的繁殖障碍主要发生于7-9月份，且主要是春夏配种的初妊娠母猪，一般呈地方性或散发性流行。

在新建猪场和初次污染的猪场往往呈流行性的，发病猪场持续几年甚至十几年不断发生，孕猪早期感染时，胎猪的死亡率高达80-100%，PPV感染后1-6天，可产生病毒血症，1-2周后开始排毒，血清中H2抗体高达1：1024以上，而且下降缓慢，可持续数年。

与畜业技术|疫病防治猪细小病毒病诊断及防控措施王卫1顾元科2贾睿3（1,山东省平度市动物卫生监督所266700；2,山东省平度市明村动物卫生与产品质量监督站266700；3,山东省平度市李园动物卫生与产品质量监督站266700）摘要：猪细小病毒病是由病毒引起的母猪一种以繁殖障碍为主要特征的传染性疾病。

猪细小病毒是猪细小病毒病的病原,主要侵害怀孕母猪，造成母猪多次流产或屡配不怀，即使产出胎儿也为死胎和木乃伊胎。

本文对猪细小病毒病的病原、流行病学、发病机理、临床症状、病理变化、防控措施进行阐述，希望对相关工作者带来帮助，降低此病的发生，促进养猪业健康发展。

关键词：猪；猪细小病毒病；病原；临床症状；病理变化；防控猪细小病毒病（Porcine parvovirus infection冤是猪感染猪细小病毒（Porcine parvovirus,PPV）后发生的以母畜流产为主要症状的传染性疾病。

各年龄段的猪均可发生感染，但以妊娠母猪临床症状最为明显。

猪细小病毒病首次于1976年在英国岀现，随后在世界范围内爆发流行。

因此，各国对猪细小病毒病十分重视，投入了很多人力、物力和财力，猪流行性腹泻在一定程度上得到相对较好的控制。

但对猪细小病毒病的变异毒株目前没有很好的治疗措施。

因此，对猪细小病毒病病毒引起的猪细小病毒病的预防控制工作是生猪养殖企业不可忽视的主要工作之一。

降低猪细小病毒病毒感染概率是促进世界范围内养猪业健康茁壮发展的必要措施。

1病原猪细小病毒为DNA病毒，在分类上为细小病毒科细小病毒属。

猪细小病毒的外观具有多形性，一般呈对称的20面体结构，6角形或圆球形。

病毒粒子直径约为20nm,病毒粒子表面没有囊膜，相对分子量为1.4x106遥猪细小病毒有2个ORF,其主要编码3个结构蛋白，主要参与病毒基因组的复制、转录等。

猪细小病毒在原代和传代细胞中均可以很好地增殖，并可使细胞产生细胞病变。

猪细小病毒只有1种血清型，不具有很强的变异能力。

猪细小病毒病是一种传染病，是由于感染猪细小病毒而导致，主要特征是导致繁殖障碍。

是由猪细小病毒引起的一种猪的繁殖障碍病。

该病具有很高的发病率和感染率，并能够通过污染的饮水、饲料等进行传播。

该病的发生没有明显的季节性，通常在夏、春、秋季节都比较容易浮现发病。

我国不同地区的猪群中都广泛存在该病，对养猪业造成严重影响。

下面我们就一起来看看猪细小病毒病的临床症状猪细小病毒病的防控措施。

1、流行病学病原。

猪细小病毒是引起该病的病原，病毒粒子外观呈圆形或者六角形，衣壳由 32 个壳粒构成，核心存在单股负链 DNA，大约在整个病毒粒子中占到 26.5%。

该病毒能够在猪细胞中无限繁殖，通常原代猪肾细胞比较常见。

只要细胞发生感染就会浮现病变，如裂变、固缩或者变圆等。

该病毒具有非常强的反抗热及消毒药的能力，如其在56℃温度下经过 30 min 热处理依旧无法对其红细胞的凝结能力以及传染性造成明显影响，在70℃温度下也需要经过 2 h 才干够使其感染力降低，在80℃温度下加热 5 min 才干够使其死亡，且其还具有较轻的反抗氯仿和乙醚等溶剂的能力。

流行特点。

目前，已知猪细小病毒的惟一宿主是猪，且任何阶段的家猪和野猪都能够感染该病，其中初产母猪最容易感染。

普通母猪在交配后容易感染病毒，并对胚胎以及新生仔猪造成较大的伤害。

该病通常呈散发或者地方性流行。

同时，由于该病毒具有较强反抗外界环境的能力，从而在被污染环境中能够长期存活，因此猪场只要发生该病，就很难彻底清除病原，从而导致多年连续浮现发病。

2、临床症状在临床上，主要是初产母猪表现出繁殖障碍，而经产母猪、育肥猪、公猪则不会表现出症状。

患病母猪在精神、食欲等方面表现正常，且能够正常发情，但部份尽管能够浮现发情但较难受孕。

在妊娠中期发生感染，有些病猪会表现出腹围缩小，部份发生彻底流产或者足月后产出体型较小的仔猪；部份在产出活仔的同时还会产出不同数量的木乃伊胎；妊娠后期感染该病，部份病猪会产出畸形胎、死胎，往往导致其发生难产而造成死亡或者被淘汰。

一株猪细小病毒7群的鉴定和分离张 志1，王树双1（1. 266019）摘 要：猪细小病毒7群（群中是否存在PPV-7，本文用10份猪流产胎儿和10份保育仔猪病料分别进行检测，结果发现其中1份保育仔猪样品的常规PCR 和实时荧光定量PCR 检测结果均为阳性，常规PCR 扩增出的246 bp 特异性条带测序和分子遗传演化时发现，该序列与PPV-7参考毒株KU5637332和KY996757的同源性分别为99.6%和98.0%，表明该样品中含有PPV-7，进一步用PK-15细胞分离病毒，连续传代5次后PK-15细胞都没有出现典型的细胞病变，但其上清液用实时荧光定量PCR 方法都可以检测到该病毒。

本研究结果证实我国猪群中存在PPV-7的感染，且检测到的PPV-7毒株能在PK15细胞中增殖。

关键词：猪细小病毒7群；实时荧光定量PCR ；常规PCR ；鉴定；分离 中图分类号：S852.659.2文献标志码：A文章编号：1674-6422（2019）04-0063-06ISOLATION AND IDENTIFICATION OF A NOVEL PORCINEPARVOVIRUS 7ZHANG Zhi 1, ZHANG Li-li 1,2, LIU Shuang 1, WU Fa-xing 1, LI Xiao-cheng 1, W ANG Shu-shuang 1(1. China Animal Health and Epidemiology Center, Qingdao 266032, China; 2. Qingdao Agricultural University, Qingdao 266109, China)收稿日期：2018-05-07基金项目：科技基础性工作专项（2012FY111000）作者简介：张志，男，博士，副研究员，主要从事动物分子流行病学研究通信作者：李晓成，E-mail：lxch20062006@ Abstract: Porcine parvovirus 7 (PPV-7) was first found in American pigs. The real status of PPV-7 is still unknown so far on pig farms in China. Twenty samples of nursery pigs and aborted fetuses were screened for PPV-7 by classical PCR and real-time fluorescence quantative PCR assay. As a result, one sample of nursery pig was positive by two PCR assays. A special band of 246 bp in classical PCR assay was amplified, sequenced and analyzed with the reference strains, obtaining nucleotide sequence homology of 99.6% and 98.0% with the reference strains KU5637332 and KY996757. This result confirmed the existence of a novel virus of PPV-7. The cytopathic effect was not observed in PK-15 cells after 5 passages. However, the PPV-7 virus DNA was detected in the culture supernatant. These results further verified the infection of PPV-7 on Chinese pig farm.Key words: Porcine parvovirus 7; real-time fluorescence quantative PCR; classical PCR; identification; isolation细小病毒科，是一种单股非囊膜线性DNA病毒，基因组大小为4~6.3 kb，由5'端非翻译区、非结构蛋白、结构蛋白和3'端UTR组成[1]。