[医学]非酒精性脂肪性肝病的发病机制和动物模型

类肝素酶在非酒精性脂肪肝模型大鼠肝脏组织中的表达及意义【摘要】目的: 研究类肝素酶在非酒精脂肪肝大鼠模型肝脏组织中的表达，以探讨类肝素酶在非酒精性脂肪肝发生中的作用，为脂肪肝的临床监测与治疗提供新思路。

方法: 建立正常大鼠模型（30只），非酒精性脂肪肝模型大鼠（30只），采用免疫组化sabc 法测定两组模型肝脏组织中类肝素酶的表达。

实验数据的统计方法：计量资料采用单因素方差分析和t检验；计数资料采用χ2检验。

结果: 在非酒精性脂肪肝大鼠模型肝脏组织中类肝素酶的阳性率高于正常模型肝脏组织，差异有统计学意义（p<0.01）。

结论: 非酒精性脂肪肝模型大鼠肝脏组织中类肝素酶的表达增加，提示类肝素酶与非酒精性脂肪肝的发生有关。

【关键词】类肝素酶；非酒精性脂肪肝【中图分类号】r335【文献标识码】b【文章编号】1005-0515(2011)04-0181-01非酒精性脂肪肝病（nonalcoholic fatty liver disease,nafld）是一种无过量饮酒史、以肝实质细胞脂肪变性和脂肪贮积为特征的临床病理综合征。

随着人们生活方式及饮食习惯的改变，其发病率正在逐年升高，在世界范围内成为慢性肝病的最常见病因之一。

nafld 的发病机制还不十分清楚, 目前被广泛接受的理论是day和james在1998 年提出的二次打击学说。

nafld各种病因引发脂质代谢异常，ffa和甘油三酯在肝内沉积，通过线粒体和过氧化物酶体β氧化及微粒体ω氧化等途径触发氧应激反应，脂质过氧化反应通过上述机制损伤线粒体，激发机体释放炎症介质和细胞因子，导致肝细胞发生变性、凋亡、坏死和纤维化的发生。

因此，炎症介质和细胞因子的产生在非酒精性肝病的发生、发展中居于重要地位。

研究表明, 在nafld 的发生和发展过程中有大量细胞因子产生并参与了疾病的演变过程,目前的研究认为类肝素酶在nafld的发病过程中，由脂代谢异常引起机体释放大量的活性氧和氧自由基，脂质过氧化的终产物和蛋白质结合成复合物，激活机体产生免疫反应而参与肝损害，诱导细胞死亡、炎症和纤维化[9]。

小鼠nafld模型诊断标准
小鼠非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是一种常见的肝脏疾病，其
特征是肝脏脂肪积累，不伴有酒精摄入。

NAFLD模型的诊断标准主
要包括以下几个方面：
1. 肝脏脂肪含量：NAFLD的主要特征是肝脏内脂肪的积累。

通
常使用组织学染色或化学分析来评估肝脏脂肪含量。

组织学染色一
般使用油红O染色或Sirius红染色来观察脂肪滴的形态和分布情况。

化学分析一般使用甘油三酯测定法或游离脂肪酸测定法来定量测量
肝脏中的脂肪含量。

2. 肝脏炎症和坏死：NAFLD常伴有肝脏炎症和坏死。

组织学染
色一般使用炎症标记物如CD68、CD163和F4/80来评估肝脏炎症程度。

坏死的评估一般使用组织学染色中的坏死标记物如TUNEL来观
察肝脏细胞的凋亡情况。

3. 肝脏纤维化：NAFLD的进展会导致肝脏纤维化。

通常使用组
织学染色中的胶原染色如Sirius红染色或Masson染色来评估肝脏
纤维化程度。

此外，还可以使用免疫组织化学染色来检测纤维化标
记物如α-SMA和Collagen I。

4. 肝脏功能指标：NAFLD模型的诊断还需要评估肝脏的功能指标。

常用的指标包括血清转氨酶（ALT和AST）水平、血清总胆固醇
和三酰甘油水平等。

这些指标可以通过血液生化分析来测定。

综上所述，小鼠NAFLD模型的诊断标准主要包括肝脏脂肪含量、肝脏炎症和坏死、肝脏纤维化以及肝脏功能指标的评估。

这些标准
可以通过组织学染色、化学分析和血液生化分析等方法来进行精确
的诊断。

非酒精性脂肪性肝病（NAFLD ）是与脂代谢异常有关的世界范围内最常见的慢性肝病［1］。

据估计全球NAFLD 患病率约为25%，近几十年来其患病率日益增长［2,3］。

NAFLD 疾病谱广泛，从轻度脂肪变性（即肝细胞内的脂滴沉积）到以脂肪变性、炎症和肝细胞气球样变性为特征的非酒精性脂肪性肝炎（NASH ）［4］。

单纯性肝脂肪变性是良性和可逆的；然而，NASH 是一种潜在的严重疾病，可进一步发展为肝硬化和肝细胞癌（HCC ）［5,6］。

目前该病的发病机制还未完全阐明，多种理论的提出如：二次打击学说、多次打击学说、脂质异位沉积、肠道菌群失调等都只是冰山一角［7］。

尽管其发病机制复杂，但NAFLD/NASH 的一个不变特征是它总是在肝脂肪变性的背景下发展，即肝细胞中异常脂滴的积累。

当各种细胞内和细胞外应激事件与脂肪变性相结合时，肝细胞会经历应激/损伤反应，最终导致细胞损伤和死亡，这是NAFLD 的关键特征［8］。

因此，探索脂质代谢的相关机制对于了解NAFLD 的病理生理学至关重要。

四跨膜蛋白8（TSPAN8）是一种具有四次跨膜结构的小相对分子质量的膜蛋白，其通过与自身和其他各种细胞信号分子相互作用形成TSPAN8介导的蛋白质复合物。

这些蛋白质复合物有助于构建富含四跨膜蛋白TSPAN8is involved in lipid metabolism in non-alcoholic fatty liver disease in miceZHANG Jia,XUE Wei,ZHANG Shujun,ZHU Yali,YANG Cheng,GAO Yue,SHI Lingfeng,HUANG WenxiangDepartment of Infectious Diseases,First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University,Chongqing 400016,China摘要：目的探讨四跨膜蛋白8（TSPAN8）在非酒精性脂肪性肝病（NAFLD ）发生发展中的变化及其在脂质代谢中的作用。

限时进食在小鼠和细胞模型中通过溶酶体生物发生缓解非酒精性脂肪性肝炎*蒋秋艳，吕岳，要睿昕，许凯星，宋维芳△（山西医科大学汾阳学院，山西汾阳 032200）［摘要］目的：探讨AMP活化蛋白激酶（AMPK）/转录因子EB（TFEB）介导的溶酶体生物发生在限时进食（TRF）对非酒精性脂肪性肝炎（NASH）小鼠肝脏及油酸（OA）诱导的人肝母细胞瘤HepG2细胞损伤的缓解作用及其分子机制。

方法：（1）用高脂高胆固醇饮食构建小鼠NASH模型，将18只C57BL/6J小鼠分为正常对照（NC）组、模型（model）组和TRF组，每组6只。

饲养10周后麻醉小鼠，摘眼球取血，分离血清，检测小鼠血清中的总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）的水平；收集小鼠肝脏，计算肝脏系数，检测肝脏TC和TG的水平。

苏木精-伊红（HE）和Masson马松染色观察肝脏形态学变化；Western blot法检测肝脏溶酶体关联膜蛋白1（LAMP1）、AMPK、p-AMPK和核TFEB、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素1β（IL-1β）蛋白表达水平。

（2）用OA干预HepG2细胞建立肝损伤模型，用血清剥夺模拟禁食条件。

将HepG2细胞分为对照（control）组、血清剥夺（FBS-）组、OA组和OA+FBS-组；用siRNA敲低TFEB探讨TFEB介导的溶酶体生物发生与肝细胞脂质积累和肝损伤的关系；用AMPK抑制剂化合物C（CC）抑制AMPK活性研究AMPK与TFEB介导的溶酶体生物发生的关系。

油红O染色检测肝细胞脂质积累；试剂盒检测肝细胞TG、TC、ALT和AST水平；Western blot法检测肝细胞LAMP1、AMPK、p-AMPK和核TFEB蛋白表达水平。

结果：（1）TRF干预显著降低了NASH小鼠的血清TC、TG、ALT和AST水平及肝脏中IL-1β、TNF-α、TG和TC的表达，缓解了肝组织中的脂肪变性和炎症浸润（P<0.05）；（2）血清剥夺干预减少了OA诱导的HepG2细胞中的脂滴数量以及TG、ALT和AST水平（P<0.01）；（3）Western blot结果显示，TRF干预后NASH小鼠肝脏中TFEB核易位水平、LAMP1蛋白水平和AMPK磷酸化水平显著升高（P<0.01）；血清剥夺干预后，OA诱导的HepG2细胞中TFEB核易位水平、LAMP1蛋白水平和AMPK磷酸化水平显著增加（P<0.01）；（4）siRNA干预后，TFEB和LAMP1蛋白水平降低，血清剥夺对OA组脂肪积累和肝损伤的改善作用被显著削弱（P<0.05）；（5）CC干预后，AMPK磷酸化水平、LAMP1蛋白水平和TFEB核易位水平显著降低（P<0.01）。

非酒精性脂肪性肝病诊疗指南（完整版）非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是指除外酒精和其他明确的损肝因素所致的，以弥漫性肝细胞大泡性脂肪变为主要特征的I 陆床病理综合征，包括单纯性脂肪肝以及由其演变的脂肪性肝炎（NASH）和肝硬化，胰岛素抵抗和遗传易感性与其发病关系密切。

随着肥胖和糖尿病的发病率增加，NAFLD 现已成为我国常见的慢性肝病之一，严重危害人民健康。

为进一步规范NAFLD 的诊断、治疗和疗效评估，中华医学会肝病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组组织国内有关专家，在参考国内外最新研究成果的基础仁，按照循证医学的原则，制定了《非酒精性脂肪性肝病诊疗指南》（以下简称《指南》）。

其中推荐的意见所依据的证据共分为3 个级别5 个等次，文中以括号内斜体罗马数字表示[1] ，推荐意见的证据分级，参见《酒精性肝病诊疗指南》。

本《指南》只是帮助医师对NAFLD 的诊断和治疗作出正确决策，不是强制性标准，也不可能包括或解决NAFLD 诊疗中的所有问题。

因此，临床医师在针对某一具体患者时，应充分了解本病的最佳临床证据和现有医疗资源，并在全面考虑患者的具休病情及其意愿的基础上，根据自己的知识和经验，制定合理的诊疗方案。

由于NAFLD 的研究进展迅速，本《指南》将根据需要不断更新和完善。

一、临床诊断标准[2，3]凡具备下列第1 一5 项和第6 或第7 项中任何一项者即可诊断为NAFLD。

1. 无饮酒史或饮酒折合乙醇量男性每周<140 g，女性每周<70 g。

2. 除外病毒性肝炎、药物性肝病、全胃肠外营养、肝豆状核变性等可导致脂肪肝的特定疾病。

3. 除原发疾病临床表现外，可有乏力、消化不良、肝区隐痛、月干脾肿大等非特异性症状及体征。

4. 可有体重超重和（或）内脏性肥胖、空腹血糖增高、血脂紊乱、高血压等代谢综合征相关组分。

5. 血清转氨酶和Y 一谷氨酞转肤酶水平可有轻至中度增高（小于5 倍正常值上限），通常以丙氨酸氨基转移酶（ALT）增高为主。

!J&!非酒精性脂肪性肝病体外模型的研究进展卢晓臣，韩红梅延边大学附属医院消化内科，吉林延吉１３３０００摘要：非酒精性脂肪性肝病发病率逐年上升，其治疗手段有限，对其发病机制的研究是当前热点。

为了更好地阐明其发病机制，迫切需要开发先进、安全、有效的体外模型或体内模型，以了解并制订针对该疾病的治疗策略。

本文回顾了目前常用于非酒精性脂肪性肝病临床前研究的体外模型，并讨论了其各自的优缺点，为研究非酒精性脂肪性肝病发病机制及治疗提供理论依据。

关键词：非酒精性脂肪性肝病；模型，理论；病理过程；治疗学基金项目：国家自然科学基金（８１８６０１１０）ＲｅｓｅａｒｃｈａｄｖａｎｃｅｓｉｎｉｎｖｉｔｒｏｍｏｄｅｌｓｆｏｒｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃｆａｔｔｙｌｉｖｅｒｄｉｓｅａｓｅＬＵＸｉａｏｃｈｅｎ，ＨＡＮＨｏｎｇｍｅｉ．（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，ＴｈｅＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＹａｎｂｉａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｊｉ，Ｊｉｌｉｎ１３３０００，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｉｎｃｉｄｅｎｃｅｒａｔｅｏｆｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃｆａｔｔｙｌｉｖｅｒｄｉｓｅａｓｅ（ＮＡＦＬＤ）ｉｓｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｙｅａｒｂｙｙｅａｒ，ｗｉｔｈｌｉｍｉｔｅｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｍｅｔｈｏｄｓ，ａｎｄｉｔｓｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓｉｓａｒｅｓｅａｒｃｈｈｏｔｓｐｏｔａｔｐｒｅｓｅｎｔ．Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｂｅｔｔｅｒｃｌａｒｉｆｙｉｔｓｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ，ｉｔｉｓｕｒｇｅｎｔｔｏｄｅｖｅｌｏｐａｄｖａｎｃｅｄ，ｓａｆｅ，ａｎｄｅｆｆｅｃｔｉｖｅｉｎｖｉｔｒｏｏｒｉｎｖｉｖｏｍｏｄｅｌｓｔｏｕｎｄｅｒｓｔａｎｄａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｔｒｅａｔｍｅｎｔｓｔｒａｔｅｇｉｅｓｆｏｒｔｈｉｓｄｉｓｅａｓｅ．ＴｈｉｓａｒｔｉｃｌｅｒｅｖｉｅｗｓｔｈｅｉｎｖｉｔｒｏｍｏｄｅｌｓｃｏｍｍｏｎｌｙｕｓｅｄｉｎｔｈｅｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌｓｔｕｄｙｏｆＮＡＦＬＤａｎｄｄｉｓｃｕｓｓｅｓｔｈｅｉｒａｄｖａｎｔａｇｅｓａｎｄｄｉｓａｄｖａｎｔａｇｅｓ，ｓｏａｓｔｏｐｒｏｖｉｄｅａｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｂａｓｉｓｆｏｒｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＮＡＦＬＤ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｎｏｎ－ａｌｃｏｈｏｌｉｃＦａｔｔｙＬｉｖｅｒＤｉｓｅａｓｅ；Ｍｏｄｅｌｓ，Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ；ＰａｔｈｏｌｏｇｉｃＰｒｏｃｅｓｓｅｓ；ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓＲｅｓｅａｒｃｈｆｕｎｄｉｎｇ：ＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａ（８１８６０１１０）ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－５２５６．２０２２．０１．０３５收稿日期：２０２１－０５－１９；修回日期：２０２１－０６－０３通信作者：韩红梅，ｈａｎｈｍ７９＠１２６．ｃｏｍ 非酒精性脂肪性肝病（ＮＡＦＬＤ）是在无过量饮酒的情况下出现肝脂肪堆积，并且至少５％的肝细胞存在脂肪变性［１－２］，其疾病谱包括非酒精性脂肪肝（ＮＡＦＬ）、非酒精性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝硬化以及肝细胞癌［３］。

肝纤维化动物模型的建立方法主要包括：化学药物或毒物所致肝纤维化实验动物模型，如:四氯化碳；胆管阻塞性肝纤维化模型(BCM)、慢性酒精中毒性,肝纤维化动物模型、实验性免疫法建立肝纤维化模型、致癌物致肝纤维化动物模型等。

高脂造HF模型：●高糖高脂诱导新西兰兔肝纤维化模型的建立：原理：本模型采用高糖、高饱和脂肪饲料喂养新西兰兔5个月，形成高糖血症、高甘油三酯血症肝纤维化模型。

）方法：体重2 kg左右的雄性新西兰兔20只，按体重水平随机分为2组，10只饲以基础饲料作为对照组；10只饲以高糖高脂饲料(37％蔗糖、10％猪油混合53％基础饲料)作为模型组。

单笼饲养，每只动物每天约喂食100g颗粒饲料，自由饮水，室温18℃～25℃。

实验期为5个月。

文献：罗洁，许辉，刘毅。

高糖高脂诱导新西兰兔肝纤维化的实验研究。

实用预防医学2007年4月第14卷第2期●大鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)模型：原理：NHSH发病机制目前大多学者认为是“二次打击”引起的脂质过氧化，而脂质过氧化程度与脂肪肝的严重程度密切相关，脂质过氧化的增强，可产生更多的反应性和细胞毒性介质，并诱导肝脏发生炎症。

本实验采用高脂饮食喂养大鼠12周后，大鼠体重、肝湿重明显升高，病理形态上形成脂肪性肝炎，成功复制了实验性大鼠NHSH模型。

方法：24只雄性SD大鼠随机分为正常饮食对照组(8只)、高脂饮食模型组(16只)，实验时间16周。

健康雄性sD大鼠24只，体重200±20 g。

高脂饮食组16只，予88％普通饮食+10％猪油+2％胆固醇喂养，对照组8只，普通饮食喂养。

连续16周文献：王旭霞，闻勤生，王景杰，赵曙光，秦明，雷巧玲。

高脂饮食实验性大鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)进展过程TIMP表达与肝纤维化的关系。

肝胆外科杂志2007年10月第15卷第5期。

●非酒精性脂肪性肝炎(NASH)动物模型建立：原理：同上方法：健康雄性SD大鼠20只，体重190±lOg，SPF级。

·脂肪性肝病·DOI：10.12449/JCH240411金雀异黄素在去卵巢非酒精性脂肪性肝病小鼠模型中的保护作用及机制朱项羽1，金涌21 苏州大学附属苏州九院药学部，江苏苏州 2152002 安徽医科大学药学院，合肥 230032通信作者：金涌，****************.cn（ORCID：0000-0003-3133-7952）摘要：目的　探讨金雀异黄素（Genistein）在去卵巢（OVX）小鼠非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）中的保护作用及机制。

方法　取40只6周龄雌性C57BL/6小鼠建立OVX小鼠模型，随机分为5组，每组8只，分别为对照组、模型4周组、模型6周组、模型8周组、模型10周组。

相同环境下，采用高脂饮食对5组OVX小鼠进行饮食造模，病理学检查显示，经10周高脂饮食诱导NAFLD成功。

另取40只6周龄雌性C57BL/6小鼠随机分为5组：空白组、假手术（Sham）组、OVX组、OVX+L-Genistein（4 mg/kg 体质量）组、OVX+H-Genistein（8 mg/kg体质量）组。

Sham组进行相同的OVX手术过程，但不结扎卵巢动脉和切除卵巢。

空白组小鼠正常饮食喂养，其余各组供给高脂饮食。

将Genistein溶解在DMSO中，Sham组和OVX组的动物仅用溶媒溶液处理，所有小鼠每天灌胃给药1次，持续10周。

记录小鼠体质量及脏器指数，处死小鼠并收集血清及肝组织。

试剂盒检测血清ALT、AST活性及TG、TC水平。

HE和油红O染色观察肝组织病理。

通过Western Blot分析肝组织中脂质代谢相关的固醇调节元件结合蛋白1（SREBP-1c）、过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）的蛋白表达。

计量资料多组间比较采用单因素方差分析，进一步两组间比较采用Dunnett-t检验。

结果　高脂饮食10周后，Genistein低、高剂量组的体质量、肝指数和肝质量均低于OVX组（P值均<0.05）。

非酒精性脂肪性肝病的流行病学与自然史【摘要】非洒精性脂肪性肝病(NAFLD)发病率不断攀高且起病渐趋低龄化，现已成为发达国家和地区第一大肝病，在我国亦有望成为慢性肝病的首要病因。

【关键词】非酒精性脂肪性肝病；流行病学；自然史引言：非酒精性脂肪肝病（nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD）是指以弥漫性肝细胞大泡性脂肪改变为特征的临床病理综合征，不包括酒精和其他明确的肝损害因素，包括单纯性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎（nonalcoholic steatohepatitis,NASH)和肝硬化。

单纯性脂肪肝指肝细胞脂肪变性，无组织学损伤；Nash是指伴有炎症和肝细胞损伤的肝脂肪变性。

肝纤维化不是NASH的必要条件。

根据发病机制，FLD可分为原发性和继发性FLD。

原发性NAFLD最常见。

基本的病理生理变化是代谢综合征相关的胰岛素抵抗和氧化应激。

因此，常伴有肥胖、2型糖尿病、血脂异常等代谢性疾病。

继发性NAFLD和原发性NAFLD的治疗方案和预后完全不同。

本文主要讨论原发性NAFLD。

一、NAFLD的发病率和患病率NFLD（Incidence）的发病率仍不清楚，因为没有进行前瞻性研究。

此外，实际发病率（prevalence）是多少，其阶段是什么还不清楚。

按人群进行的研究可以更准确地确定NAFLD在一般人群中的发病率，而仅仅对肥胖问题进行尸检、住院或研究无法准确地估计NAFLD的发病率。

根据可获得的信息和特定人群的选择标准，NAFLD的发病率报告各不相同。

虽然可以从人群研究中获得更准确的数据，但迄今为止还没有这样的研究。

达拉斯心脏病研究（基于一项针对美国一个不同种族群体的社区的人群调查）利用质子磁共振光谱仪发现，三分之一的美国成年人患有NAFLD，超过7000万人。

在这项研究中，79%的纳福患者的转氨酶水平正常.因此，将肝发酵异常作为NAFLD研究中使用的指标，可能导致NAFLD水平的发病率过低。

·脂肪性肝病·DOI：10.12449/JCH240412下瘀血汤对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病小鼠模型的治疗作用及机制侯林圻a，王知意a，赵鑫a，张洁b，马文婷b，刘旭凌b，张玮a，陶乐b，刘成a，吴柳b上海中医药大学附属普陀医院 a.实验中心实验室， b.感染科，上海 200062通信作者：吴柳，*****************（ORCID：0000-0003-0720-819X）摘要：目的　探讨下瘀血汤调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体含pyrin结构域蛋白6（NLRP6）抑制高脂饮食（HFD）诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的作用机制。

方法　15只雄性C57BL/6小鼠随机分为低脂饮食（LFD）组、HFD组和下瘀血汤-HFD（XYXD）组，每组各5只。

测量肝功能指标ALT和AST、血脂代谢指标TG、TC水平；肝组织经过HE染色、油红O染色，观察小鼠组织形态、脂滴沉积；实时荧光定量PCR检测肝组织中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6及NLRP6表达水平；Western Blot检测NLRP6、NF-κB和NF-κB p65蛋白水平；免疫组化检测NLRP6和CD68表达。

棕榈酸（PA）、脂多糖（LPS）和下瘀血汤含药血清处理鼠Raw264.7细胞，检测炎症情况。

计量资料多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。

结果　与LFD组比较，HFD组血清ALT、AST和TC、TG水平显著升高（P值均<0.05）。

肝组织病理学显示，HFD组肝脂肪变性明显，NAS评分显著升高（P<0.05）；实时荧光定量PCR结果显示，IL-1β、IL-18等炎症相关因子显著升高，NLRP6表达显著下调（P值均<0.05）。

免疫组化显示NLRP6表达与巨噬细胞标志物CD68重合。

Western Blot显示，NLRP6表达下调后，磷酸化的NF-κB p65（p-NF-κB p65）显著上调（P<0.05）。

CYP2E1与非酒精性脂肪肝王悦之;张玉【摘要】非酒精性脂肪性肝病( nonalcoholie fatty liver disease,NAFLD)是一种最常见的肝脏疾病,它的高发病率越来越受到广泛重视.细胞色素氧化酶P450-2E1亚型(CYP2E1)是参与氧化应激和脂质过氧化过程中的关键酶.“二次打击”学说为医学界普遍接受的非酒精性脂肪肝的发病机制.在非酒精性脂肪肝的“二次打击学说”中,CYP2E1介导的脂质过氧化亦发挥重要的作用.通过对CYP2E1介导的脂质过氧化在脂肪性肝病发病机制中作用的进一步深入研究,有可能探索出有效治疗脂肪性肝病的新途径.%Nonalcoholie fatty liver disease is one of the most common liver diseases. More and more importance has been attached to the high incidence of NAFLD. A key hepatic enzyme producing oxidative stress and lipid peroxidation is cytochrome P-450 2E1 (CYP2E1). The mechanism of nonalcoholic fatty liver remains most investigators accept to the second-hit theory. Lipid peroxidation induced by CYP2E1 also plays a vital role refered to the second-hit theory of nonalcoholic fatty liver. With advanced investigation of the impact of lipid peroxidation induced by CYP2E1 on the mechanism of fatty liver disease, it is likely to explore novel method to treat fatty liver disease effectively.【期刊名称】《胃肠病学和肝病学杂志》【年(卷),期】2012(021)004【总页数】3页(P384-386)【关键词】非酒精性脂肪肝;CYP2E1;氧化应激;“二次打击”学说;发病机制【作者】王悦之;张玉【作者单位】复旦大学附属华山医院老年科,上海200040;复旦大学附属华山医院老年科,上海200040【正文语种】中文【中图分类】R575.5非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholie fatty liver disease，NAFLD)是一种最常见的肝脏疾病。