厚、薄血膜法查疟原虫
基本原理：疟原虫寄生于红细胞，经制片、染色后，显微镜下可以鉴别疟原
虫的虫种和虫期。
试剂器材：75%酒精棉球、采血针、载玻片、甲醇、pH7.0~7.2 PBS缓冲液、
姬氏染液（或瑞氏染液）、显微镜等。
操作方法：
(1)采血：①采血时间 在普查时，一般无法考虑采血时间。在临床上，对现
症病人一般可随时采血，但为了提高检出率，就应当考虑采血的适当时间。对典
型发作的间日疟及三日疟患者，应选择发作后数小时至10余小时采血为好。此
时疟原虫发育至环状体乃至大滋养体，虫体大，疟色素已形成，受染红细胞也出
现变化，有利于疟原虫的检出。恶性疟原虫大滋养体和裂殖体是在皮下、脂肪和
内脏微血管中发育的，通常在外周血液中不易查到，配子体在环状体出现1周后
方能见于外周血液，故在发作时采血。 ②采血部位 从患者耳垂或指尖（以左
手无名指为宜）取血，婴儿通常从大姆趾第二趾骨腹面针刺采血。③采血方法 用
75%乙醇棉球消毒取血部位皮肤，待干后用左手拇指和食指捏住采血部位，右手
持针迅速刺入皮肤，待血液流出或轻轻挤出血滴，供制作涂片用，采血完毕用干
棉球轻压伤口止血。
(2)制片：①薄血膜的制作 取1滴血于1张洁净的载玻片上，选1张边缘
平整、光滑的载玻片作推片，用左手拇指和中指夹持其两端，将推片的边缘中点
与血滴接触，并与载玻片呈30o~45o夹角，待血滴沿推片边缘向两侧展开后，立
即由右向左迅速推成薄血膜。理想的薄血膜要求红细胞均匀地铺成一层，无裂痕，
其末端凸出呈舌尖形。注意：推片时用力和速度要均匀，不能中途停顿或重复推
片，以免造成血膜断裂或厚薄不匀。如取血量多，夹角宜小；取血量小，则夹角
可大些。②厚血膜的制作 用推片的一角接触刺血点上的血滴，取血2滴，置载
玻片上，并从里向外作旋转涂布，使成直径为0.8cm大小的圆形血膜，厚薄要均
匀，然后平置桌上，待自然干燥。③厚薄血膜同片制作 用目测法将载玻片从右到左等分成6格，厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部，
疟疾血膜制作及染色技术
疟疾是一种由寄生虫引起的传染病，其症状可以包括高热、寒战、头痛、肌肉和关节疼痛，以及贫血等。疟疾的确诊和治疗是非常关键的，而疟疾血膜制作及染色技术是其中重要的一环。
1.血液采集：从患者的指尖或其他合适的部位进行采血，通常使用一次性的血采集器来避免交叉感染。
2.血液滴片制作：将采集的鲜血滴在干净的玻璃片上，然后用另一块玻璃片将其涂抹开来，使血液均匀分布在玻璃片上。
3.干燥：将制作好的血液滴片放在阴凉通风的地方晾干，通常需要几个小时的时间。注意避免阳光暴晒，以免对血液中的寄生虫造成损害。
4.固定：将晾干的滴片放入甲醛或氧化亚铜溶液中进行固定。固定的目的是使血细胞和寄生虫形态固定，防止其在后续染色过程中的破坏。
5.干燥：将固定后的滴片再次干燥，以去除固定液。
6.储存：将制作好的疟疾血膜存放在干燥、阴凉和避光的条件下，以保持其保存时间和质量。
疟疾血膜染色技术是为了更好地观察和确定寄生虫的存在及其数量。疟疾血膜染色主要有吉姆萨染色法、改良的吉姆萨染色法、地高辛染色法和新方法的格拉姆染色法等。
1.吉姆萨染色法：将固定的疟疾血膜滴入偏碱性的吉姆萨液中，静置5-10分钟，然后用蒸馏水洗净。再滴入碘化钾溶液，在显微镜下观察寄生虫的形态和结构。 2.改良的吉姆萨染色法：在吉姆萨染色法的基础上进行了改进，增加了阳性对照，可以更准确的诊断疟疾。
3.地高辛染色法：将固定的疟疾血膜滴入酸性的地高辛溶液中，静置5-10分钟，然后用蒸馏水洗净。通过显微镜观察寄生虫的形态和结构。
4.新方法的格拉姆染色法：将固定的疟疾血膜滴入碘液中，静置1-3分钟，然后将其涂抹到玻璃片上，用结晶紫染色剂染色，再用酒精和乙醚洗净，最后使用显微镜观察。
以上是常用的疟疾血膜制作及染色技术，这些技术的目的都是为了更好地观察和诊断疟疾。随着科学技术的不断进步，未来可能会有更加准确和高效的疟疾诊断技术出现。
疟原虫检验技术
1）薄血膜（thin blood film）制作方法
（1）采血：临床上取病人耳垂或指尖血
（2）操作方法：取病人末梢血1滴，置载玻片的中部，使推片和玻片保持30～40度夹角，将血滴在推片边缘展开后，匀速向前推动，即形成舌状血膜。
2）厚血膜（thick blood film）制作方法
（1）采血同薄血膜法
（2）操作方法：厚血膜可置于薄血膜的另一端。取病人末梢血2-3滴，自里向外顺着一个方向徐成直径约1cm大小，厚薄均匀的血膜。厚、薄血膜间用蜡笔画线分开。充分晾干后，滴加蒸馏水于厚血膜上溶血，将水倾去，晾干后与薄血膜一起染色。
3）固定、染色
（1）瑞氏染色：先用蜡笔在血膜两端划上线，以防染液外溢。瑞氏染液为甲醇溶液，血膜不需预固定、此染色法快速，适于临床检验，但较易褪色，保存时间不长。
滴加瑞氏染液数滴，使之覆盖血膜，约1～2min后血膜被染液中的甲醇固定，再加与染液等量的缓冲液或蒸馏水，轻摇载玻片，使染液与稀释液混匀，3～5min后用缓冲液或自来水从玻片一端冲洗，晾干后镜检。
4）注意事项 (1）玻片要洁净，无油脂。血量适中，推速均匀，以防血膜过厚、过薄或出现条状横纹。血片在干燥过程中，避免灰尘或苍蝇脱吸。
(2）厚薄皿膜制备在一张载玻片时，应注意在厚血膜溶血前必须先用甲醇固定薄血膜，以避免接触水而使薄血膜上的红细胞溶解。厚血膜溶血时间不可太长，不要振荡，以防血膜脱落。
(3）染液是甲醇溶液，切忌混入水滴，否则发生沉淀，妨碍染色，故染液发现有沉淀时不可再用。
(4）滴加染料切忌太多，否则染料残渣粘在血膜上无法洗净，影响检查。加水后必须与染料充分混合，否则发生染色不均。冲洗血膜时应流水直接将染液冲去，避免染料粘着血膜
1 目 录
第一章 疟原虫生活史
一、概述
二、人体内发育
三、蚊体内的发育
第二章 疟原虫镜下形态
一、薄血膜中疟原虫形态
二、厚血膜中疟原虫形态
第三章 显微镜使用及维护
一、显微镜的构造
二、显微镜使用
三、使用注意事项
四、显微镜的维护保养
第四章 血片制作与染色
一、血片制作
二、血膜的染色
第五章 疟原虫镜检技术
一、血液
二、血液中各种正常细胞形态
三、薄血膜镜检
四、厚血膜镜检
五、杂质与疟原虫的鉴别
六、疟原虫计数
附录：疟原虫图谱 2 第一章 疟原虫生活史
一、概述
疟原虫是疟疾的病原体。疟原虫为单细胞真核生物，属原生动物亚界顶端复合物门、孢子纲、真球虫目、疟原虫科、疟原虫属。人体疟原虫有4种：间日疟原虫（Plasmodium vivax）、恶性疟原虫(P.falciparum)、三日疟原虫(P.malariae)和卵形疟原虫(P.ovale)，依次引起间日疟、恶性疟、三日疟和卵形疟。在我国间日疟较常见，恶性疟次之，但对人体危害较间日疟严重，三日疟偶尔发现，卵形疟已无病例报告。4种人体疟原虫的生物学特征见表1-1。
疟原虫的发育和繁殖，必须通过脊椎动物与昆虫媒介两个宿主，人体疟原虫的宿主是人和按蚊。疟原虫在人体分别寄生于肝实质细胞和血液中的红细胞内，在蚊体内则寄生于蚊胃，最后积聚于唾腺。4种人体疟原虫的生活史基本相同，包括在人体内的红细胞外期和红细胞内期以及在蚊体内的配子生殖和孢子增殖两个阶段。
二、人体内发育
疟原虫在人体内的发育分成肝细胞内的发育和红细胞内的发育两个阶段。
（一） 红细胞外期
按蚊吸人血时，按蚊唾腺中的子孢子随唾液进入人体的末梢血液中，在30分钟内，随血流进入肝脏，在肝实质细胞内发育，进行裂体增殖，此时期称红细胞外期（简称红外期）或肝细胞期（简称肝期），此时期的疟原虫称肝期裂殖体。成熟肝期裂殖体直径为45～60m，内含数以万计的肝期裂殖子。肝期裂殖体成熟致使肝细胞破裂，肝期裂殖子释入血液。不同种疟原虫的此期所需时间不同，从6～12天不等。
