高效液相色谱法梯度洗脱测定三七中三七皂苷R_1含量

表4 凌霄花喷雾剂对热板法疼痛阈值的影响

组别数量/只用药量痛阈值

x s P值

对照组101ml/20g 2.72 1.6

实验组101ml/20g76.9 7.3

<0.01 2.3.1 灌胃法 取雄性昆明种小鼠30只,体重20 ~22g,随机分为对照组与给药组。对照组给常水0.8m l20g-1,给药组给凌霄花喷雾剂0.8ml20 g-1,45min后放入小鼠活动仪内,记录10m in内各组小鼠活动次数,结果见表5。

表5 凌霄花喷雾剂对小鼠自主活动的影响

实验方法组别n自发活动数抑制率/%P值

灌胃法对照组15133.1 5.9

实验组1568.5 3.2外涂法对照组15130.0 8.8

实验组15110.1 4.848.52<0.01 15.33>0.05

2.3.2 外涂法 取昆明种雄性小鼠30只,体重20 ~22g,随机分为对照组和给药组。各组动物于给药前24h,将背部脊柱两侧去毛,每侧2cm!2cm。对照组给予常水0.6ml/只,给药组给予凌霄花喷雾剂0.6ml/只,均匀涂于脱毛区,45m in后放入小鼠活动仪内,记录各组小鼠10min内活动次数,结果见表5。

3 讨论

本研究结果证明,凌霄花喷雾剂对组织胺所致小鼠皮肤毛细血管通透性增加有显著抑制作用,能使慢性疼痛模型(热板法)痛阈值有显著的提高。外涂给药能明显降低二甲苯致小鼠耳壳炎性肿胀和琼脂所致小鼠足跋庶肿胀程度,口服表现轻度抑制小鼠自主活动的作用。提示凌霄花喷雾剂可能对炎症反应多个环节均有抑制作用,从而缓解炎症反应症状,达到镇痛的目的。结果表明,凌霄花喷雾剂对于临床蚊虫叮咬所致局部痛、痒、肿、胀可以发挥治疗作用。

参考文献:

[1] 李仪奎主编.中药药理实验方法学[M].上海:上海科学技术出

版社,1991.3

[2] 陈奇主编,中药药理研究方法学[M].北京:人民卫生出版社,

1993.9

收稿日期:1999 10 25

高效液相色谱法梯度洗脱测定三七中三七皂苷R1含量

李性天,周密妹,耿立坚,曲春华 (武汉铁路中心医院,湖北武汉430064)

[摘要] 目的:以HPLC梯度洗脱测定三七中三七皂苷R1含量。方法:采用Spherico rb NH2柱,流动相为CH3CN CH3OH H2O,梯度洗脱浓度55∀30∀15#70∀20∀10,波长210nm,外标一点法测定。结果:以峰面积计算,三七皂苷R1在5~40 g ml-1呈线性相关, =0.994,最低检测限为0.6 g ml-1(S/N=3)。平均回收率102.6%,RSD为1.43%.日内误差RSD= 1.7%(n=5),日间误差RSD=3.0%(n=4)。结论:本法专属性强,结果准确,操作简捷。

[关键词] 三七;三七皂苷R1;高效液相色谱法;含量测定

中图分类号:R927.2 文献标识码:A 文章编号:1001 5213(2000)12 0728 03

Quantitative analysis of notoginsenoside R1in Radix Notoginsen g by HPLC gradient elution mode

LI Xing T ian,ZHOU M i Mei,GENG Li Jian,et al(Clinical Pharmacy Institute,Wuhan Central R ailway Hospital,Hubei Wuhan430064)

[ABSTRAC T] OBJECTIVE:T o quant itate analyze no to ginsenoside R1in Radix N otoginseng by H PLC gradient elutio n mode. METHODS:T he chromatographic conditions included column Sphericorb NH2,mobile phase of acetonitrile methanol w ater(g radient concentr at ion55∀30∀15#70∀20∀10),and detector U V210nm.RESULTS:T he linear range and the limit o f detection for notogin senoside R1w ere w ithin5~40 g ml-1(r=0.9994)and above0.6 g ml-1of by measuring the peak ar ea,r espectiv ely.T he method was accurate(mean recov er y=102.6%,RSD=1.43%).CONCLUSIONS:T he method was proved to be simple and r apid. [KEY WORDS] Radix N otoginseng;notoginsenoside R1;H PLC;determination content

三七中已知单体皂苷成分为达玛烷型的20 (S) 原人参二醇型(如人参皂苷R b1)和20(S)原人参三醇型(如三七皂苷R1)四环三萜皂苷,其中以人参皂苷R b1,R g1和三七皂苷R1为主,含量也最高。三七皂苷R1为其独有成分,以HPLC测定其含量方法可靠、结果准确,但其样品预处理需多次液 液

萃取或液 固萃取纯化[1],操作复杂。本实验采用正相H PLC梯度洗脱测定三七皂苷R1,并对其方法学进行讨论。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪(岛津LC 10AT,双泵);SPD 10A紫外可见光检测器;C R7A数据处理机;CTO 10A柱温箱(附20 l定量环管的进样阀);三七皂苷R1对照品(中国药品生物制品检定所,批号745 9203);三七对照药材(中国药品生物制品检定所,批号941 9305);三七(市售品);乙腈(色谱纯);甲醇(分析纯)。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液配制 精密称取三七皂苷R1对照品适量,以甲醇适量溶解并稀释为0.10mg ml-1的溶液。三七对照药材粉末适量,精密称定,加甲醇适量,依照∃样品中三七皂苷R1的测定%项下制备为10mg ml-1溶液三七对照药材提取液。

2.2 色谱条件及方法

2.2.1 检测波长的确定 利用三七皂苷类成分在紫外末端波长具吸收的特性。精密称取三七皂苷R1对照品,以流动相乙腈 甲醇 水(70∀30∀15)配制为20 g m l-1溶液,作吸收光谱扫描,三七皂苷R1在210nm处有明显吸收,且溶剂干扰小,故选取210nm为检测波长。

2.2.2 流动相的选择 Sphericorb NH2分析柱(150mm!4.6mm)加NH2预柱,检测波长210 nm。取三七皂苷R1对照液和三七对照药材提取溶液,真空挥干后,以下述相应的流动相溶解后,分别以&甲醇 水,∋乙腈 水,(乙腈 甲醇 水等3种流动相,各按不同比例作三七皂苷R1分离效果的观察。结果表明,&和∋流动相各种配比或不能有效分离三七皂苷R1,或基线不稳,重现性差且保留时间过长,而(流动相能对三七皂苷R1分离效果好,且各组分出峰迅速。

2.2.3 流动相配比的选择 在上述色谱柱和检测波长条件下,观测乙腈 甲醇 水在不同配比(70∀30∀15~30∀60∀25)和梯度洗脱对三七皂苷R1的分离效能。结果,以CH3CN CH3OH H2O在梯度浓度为55∀30∀15#70∀20∀10的分离效果最好,一次进样30 min内可完成测定(图1)。

2.2.4 色谱条件 色谱柱:Sphericorb NH2(150 mm!4.6mm),NH2预柱;流动相:A相(CH3CN): B相(CH3OH H2O,2∀1);B相浓度梯度:开始

,图1 三七皂苷R

1

())和三七药材(∗)色谱图

R1:三七皂苷R1(5.5min)

30%;0.1min,45%;10.0m in,30%;15.0min, 30%;15.1m in,45%;25.0min,30%;25.1min, stop。检测波长210nm,AUFS=0.08,流速:0.8ml m in-1,柱温40+。

2.2.5 系统适用性试验 精取三七对照药材提取液2ml于10ml量瓶中,75+真空抽干后按∃样品中三七皂苷R1的测定%进行,三七皂苷R1分离度大于

1.5,拖尾因子(T)=1.01,理论塔板数3020。

2.2.6 线性关系及检测限 精密量取三七皂苷R1对照液0.5,1,2,3,4ml,置10ml量瓶中,75+真空挥干,以流动相乙腈 甲醇 水(70∀30∀15)稀释至刻度,进样20 l。在此梯度洗脱条件下,峰面积(A)与浓度(C)间在5~40 g m l-1呈线性相关,r= 0.9994,A=4.22!105C+1.44!103。最低检测限0.6 g ml-1(S/N=3)。

2.2.7 回收率试验 取已知含量的三七对照药材粉末,按照加样回收法,定量加入三七皂苷R1对照品,依∃样品中三七皂苷R1的测定%进行测定,结果见表1。

表1 三七皂苷R1的回收率实验

加入对照品浓度

g ml-1

实测浓度

g ml-1

回收率

%

RS D

%

54.054.556.554.954.1101.9 1.91

81.083.481.783.883.9102.7 1.23

108.0109.7111.3111.4112.8103.1 1.14

x102.6 1.43 2.2.8 精密度试验 取三七对照药材,按∃样品中三七皂苷R1的测定%制备提取液,依法测定。结果日内误差RSD= 1.7%(n=5),日间误差RSD= 3.0%(n=4)。

2.2.9 重现性试验 精密称取同一粉末细度三七样品5份,按∃样品中三七皂苷R1的测定%操作,结果RSD为

3.2%。

2.3 样品中三七皂苷R1的测定 取干燥的三七粉