Light Sheet光片层显微镜原理
- 格式:docx
- 大小:65.59 KB
- 文档页数:5
光学显微镜工作原理 1.1.?引言2.2.?显微镜基本原理3.3.?显微镜图像质量4.4.?显微技术的类型5.5.?荧光显微技术6.6.?光学显微镜的组成部件7.7.?了解更多信息 8. 8.?阅读所有物理学类文章自十六世纪末发明以来,光学显微镜加深了我们对基础生物学、生物医学研究、医疗诊断和材料科学的认识。
光学显微镜最多可将物体放大1000倍,以展现其微观细节。
如今,这项技术已远远超出罗伯特·虎克和列文虎克(Antoni van Leeuwenhoek )所发明的第一台显微镜的水平。
人类研发的特殊技术和光学设备可以揭示出活细胞的结构和生化机能。
显微镜甚至已进入数字时代,利用电荷耦合器件(CCD )和数码相机来捕捉图像。
然而,这些高级显微镜的基本原理却与您生平第一节生物课上用过的学生显微镜非常相似。
普通学生光学显微镜的示意图,显示各个部件和光路与望远镜相反,显微镜必须从距离很近、范围极小、厚度极薄且明亮清晰的样本上采集光线。
因此显微镜不需要巨大的物镜。
相反,显微镜的物镜很小,而且呈球形,这就意味着显微镜两侧的焦距都要短得多。
物镜将物体的图像对焦在显微镜镜筒内的不远处。
随后图像由第二个透镜放大,这个透镜称为接目镜或目镜,使物体如同在您眼前一般。
望远镜和显微镜之间另一个主要区别在于,显微镜带有光源和聚光器。
聚光器是一种透镜系统,用于将光源的光线聚焦到样本上的一个微小而明亮的点,即物镜检查的同一区域。
显微镜与望远镜之间还有一个不同之处:后者配有固定物镜和可换目镜,而前者配有可换物镜和固定目镜。
通过更换物镜(从相对扁平、低放大倍数的物镜到较圆、高放大倍数的物镜),显微镜可以观察越来越微小的区域——采光不是显微镜物镜的主要任务,但却是望远镜的。
本文后半部分将详细讨论显微镜的组成部件。
亮度——图像有多明亮?亮度与照明系统相关,因而可以通过改变灯的电压(可变电阻器)以及调节聚光器和光圈/针孔孔径进行更改。
基恩士vhx显微镜工作原理引言基恩士vhx显微镜是一种高性能显微镜,广泛应用于生物学、医学、材料科学等领域。
本文将介绍基恩士vhx显微镜的工作原理,以及它在不同领域的应用。
一、基恩士vhx显微镜的构造基恩士vhx显微镜由光学系统、机械系统和电子系统组成。
光学系统包括物镜、目镜、光源和滤光片等部分。
物镜是显微镜的核心部件,它能够放大样本并产生清晰的图像。
目镜用于观察和眼睛对焦。
光源提供光线照明样品,滤光片用于调节光线的颜色和强度。
机械系统包括台架、焦距调节装置和样本台等部分,它们用于支撑和定位样本。
电子系统包括图像采集器、显示器和电脑等设备,用于捕捉、处理和显示显微镜图像。
二、基恩士vhx显微镜的工作原理基恩士vhx显微镜采用了透射光学原理。
当光线通过样本时,会发生折射和散射现象。
物镜收集经过样本的光线,并将其聚焦在目镜上。
通过目镜观察,我们可以看到被放大的样本图像。
基恩士vhx显微镜的物镜具有高放大倍数和高分辨率。
它采用了多个透镜组合而成,其中包括凸透镜和凹透镜。
这些透镜通过折射和散射光线,使得样本的细节能够被放大和清晰地显示出来。
基恩士vhx显微镜还采用了干涉技术。
干涉是一种波动现象,利用光的干涉可以增强图像的对比度和清晰度。
显微镜中的干涉技术可以帮助我们观察样本的细微结构和纹理。
三、基恩士vhx显微镜的应用1. 生物学领域:基恩士vhx显微镜在生物学中的应用非常广泛。
它可以用于观察细胞结构、细胞分裂和细胞器的功能等。
通过基恩士vhx显微镜,科学家们可以研究生物体的生理过程和病理变化,从而为疾病的诊断和治疗提供依据。
2. 医学领域:基恩士vhx显微镜在医学中的应用也非常重要。
它可以用于观察组织、细胞和病变的变化。
医生们可以通过基恩士vhx 显微镜来诊断疾病,指导手术操作,并评估治疗效果。
3. 材料科学领域:基恩士vhx显微镜在材料科学中的应用主要用于观察材料的微观结构和形貌。
科学家们可以通过基恩士vhx显微镜来研究材料的性能和制备工艺,从而改进材料的性能和开发新的材料。
光片照明显微成像技术简介成像原理及应用简介生物的活体神经动态成像是神经学研究的重要手段,而该成像过程要求成像系统具有细胞水平的分辨率以及足够高的成像速率。
光片照明显微成像技术使用一层光束薄片从样品侧面激发荧光,在垂直于光片的方向上通过显微物镜与CCD 或sCOMS来获取照明层面的荧光图像,从而实现了荧光样品的三维层析成像。
其原理示意图与实物照片分别如图1(a)与图1(b)所示。
与共聚焦及双光子显微成像技术相比,光片照明显微成像采用了线状照明取代传统的点扫描成像方式,因此它具有更高的成像速率,更高的信噪比以及更低的光漂白光毒性效应,适用于数小时甚至数天的活体生物成像。
图1光片照明显微成像技术原理示意图及光片照明显微镜实物图光片照明显微镜主要由以下五个模块构成,如图1(a)所示:1.光片照明系统:用于将激光器发出的光束整形为3‐10微米厚度的光束薄片,用以激发样品的荧光;2.样品台:用于固定样品并使样品三维移动以及平面内的转动,调整样品的姿态,并在成像时对样品进行纵向的扫描,以获得三维的荧光图像;3.探测物镜:与光片所在平面垂直,用于收集样品的荧光信号;4.滤光片转轮:用于快速切换滤光片以高速地获得样品的多色荧光信号,反映样品不同组成部分的结构及其变化5.荧光探测器:用于探测荧光信号并得到最终的成像结果,可以使用商业化的制冷CCD或sCMOS以获得最佳的成像效果以及最快的成像速度。
光片照明显微镜自从2004年[1]至今,发展非常迅速,已经在胚胎发育研究以及神经研究方面取得了突出成果[2‐4],已经逐渐成为了一种科学成像的重要手段。
由于采用了面探测的成像方式,光片照明系统能够快速获得高分辨的三维层析结构成像。
光片照明显微成像技术被 Nature methods 期刊评选为“Method of the Year 2011。
德国的Ulrich小组2007年实现了小鼠脑神经的三维成像[5],Kelle小组2012年实现了果蝇胚胎发育的全程高速三维记录[6]对活体生物接受刺激后的脑神经活动记录是研究脑功能的重要手段。
荧光显微镜的工作原理荧光显微镜是利用特定波长的光照射被检物体产生荧光进行镜检的显微光学观测技术,主要用于研究有机物和无机物等样品,一般使用荧光和磷光来检查样品的结构组织和空间分布,较适用于研究复杂且无法在传统透射光显微镜下检查的样品。
荧光显微镜与传统显微镜的区别主要有两个方面,一种是光源类型不同,另一种是使用的滤光片元件不同。
荧光的原理是某些物质会在高强度的短波长光线照射下,会发出波长稍长的发射光(荧光)。
而我们一般都是观察被激发荧光基团所发射出来的波长稍长的发射光(荧光),但是激发的光会很强,所以我们就需要把激发的光全部滤去,这样才可以看到荧光基团的发射光(荧光)。
荧光显微镜一般都用高强度的汞灯做激发光源,使用滤色片把不需要的光滤去,只留下激发荧光集团的高强度很纯的光线。
这个单色的光线通过物镜照射到样本上之后,样本会被激发出发射光(荧光),荧光和激发光都会沿着物镜光路返回,这样就需要用一个二相色镜把激发光滤去,只让我们需要看到的荧光透过。
这个荧光沿着显微镜的光路最后到达目镜下,然后进入我们的眼睛,我们就可以看到荧光基团所发出来的荧光了。
荧光显微镜可用于生物学、生物医学和材料科学,荧光显微镜有助于准确和详细地识别细胞和亚微观细胞成分。
荧光显微镜也被广泛用于组织化学领域,以检测常规显微镜无法看到的颗粒,例如神经递质胺。
它在食品化学中用于评估产品中特定食品成分的存在、结构组织和空间分布。
还有一种荧光散斑显微镜,它是一种使用荧光标记的大分子组装体(例如细胞骨架蛋白)来研究运动和周转率的技术。
荧光显微镜染色也会在矿物学领域使用,它通常用于研究煤炭、氧化石墨烯等矿物。
它还广泛用于纺织工业来分析纤维尺寸,落射荧光显微镜有助于研究基于纤维的材料(包括纸张和纺织品),不仅如此荧光显微镜的使用还可以用于荧光染料研究陶瓷孔隙率以及半导体研究领域。
光学显微镜各部分名称及作用光学显微镜是一种常用的实验仪器,它通过利用光学原理来观察微小的物体。
光学显微镜主要由以下几个部分组成,每个部分都有其特定的作用。
1. 物镜(Objective Lens):物镜是光学显微镜中最重要的部分之一,它负责收集和聚焦光线。
物镜通常由多个透镜组成,不同的物镜具有不同的倍率,例如10倍、40倍、100倍等。
通过切换不同的物镜,可以获得不同的放大倍率,以便观察不同尺寸的物体。
2. 目镜(Eyepiece):目镜是位于光学显微镜顶部的镜片,用于放大物镜所形成的像。
通常,目镜的放大倍率为10倍。
通过目镜,我们可以看到被观察物体的放大图像,同时也可以调节目镜的焦距,以便获得清晰的视野。
3. 反射镜(Mirror):反射镜是位于物镜和目镜之间的镜片。
它的作用是将从被观察物体反射回来的光线反射到物镜上,进而形成物体的放大图像。
反射镜通常是一个倾斜的平面镜,它不仅可以反射光线,还可以调整光路的角度,以便观察不同角度的样本。
4. 灯光源(Light Source):光学显微镜需要一种光源来照亮被观察的物体。
通常,灯光源是一个位于显微镜底部的白炽灯或LED灯。
通过调节灯光的亮度和方向,可以改变物体的照明条件,以获得更清晰的图像。
5. 焦距调节装置(Focusing Mechanism):焦距调节装置是用来调节物镜和样本之间的距离,以便获得清晰的图像。
通常,焦距调节装置由一个粗调节旋钮和一个细调节旋钮组成。
通过旋转这些旋钮,可以使物镜向上或向下移动,从而改变物镜和样本之间的距离,以获得最佳焦点。
6. 载物台(Stage):载物台是光学显微镜上用来放置样本的平台。
它通常是一个可移动的平台,可以在不同的方向上移动样本,以便观察样本的不同区域。
载物台通常还配有夹持装置,以确保样本的稳定性。
7. 光学系统(Optical System):光学系统是光学显微镜中所有光学元件的总称。
它包括物镜、目镜、反射镜等。
菲林晒版原理
菲林晒版的原理是:将感光材料的一面置于一块晒版上,然后再涂上感光材料,然后放在日光下,使其经过太阳光而曝光。
菲林的原理是:一种较薄的玻璃薄片,由四个光致抗蚀剂组成。
中间部分为一层涂有感光胶的玻璃。
曝光时,把一张菲林片贴在涂有感光胶的玻璃上,曝光后用滤色片或滤色膜将其颜色除去。
这样便可得到需要的影像。
菲林晒版时,要先将晒版放在无尘、无光的地方,然后再进行晒版。
菲林晒版的方法有两种:一种是平版晒法;一种是凸版晒法。
平版晒法就是把感光材料置于晒版上,曝光后再用滤色片或滤色膜将其颜色除去,这种方法比较简单。
而凸版晒法则要复杂一些。
菲林是由四个不同的感光材料组成的(分别为:银、金、镍、铜)。
—— 1 —1 —。
偏光显微镜原理方法偏光显微镜(Polarizing Microscope)是一种用于观察具有双折射性质的物质的显微镜。
它利用偏振光原理和双折射现象,在透射和反射条件下观察样品的结构和性质。
以下是偏光显微镜的原理和方法的详细介绍。
1.偏振光原理:正常光是沿所有方向传播的不偏振光,而偏振光是只沿一个方向振动的光。
偏振光通过偏振片(或称偏光镜)过滤器的作用,只允许同一方向的振动通过,在偏光显微镜中常用偏光片作为偏振片。
2.双折射现象:一些晶体材料具有双折射性质,即当光线通过晶体时,光线会分为普通光和振动方向与普通光不同的振动光两部分。
这是由于晶体内部结构对光的偏振方向的影响。
在偏光显微镜中,用偏振片控制光的振动方向,再通过各种光接收器件分离光的不同振动方向,可以观察到样品结构的细节和特性。
1.透射观察:透射观察是指将光源通过偏光片和透射物镜照射到样品上,并使用偏振片作为检测光的光源。
在透射光经过样品后,通过分光板和偏振片控制光的偏振角度,再由目镜观察样品。
透射观察可以用于分析晶体的各种光学性质,如晶体的双折射性质和晶体内部的晶格结构等。
2.反射观察:反射观察是指用反射光来观察样品。
可以选择直接照射样品或使用偏振镜来控制光的偏振角度。
反射观察可以用于分析非透明样品的表面形貌和结构特征,如金属和金属合金的晶体结构、树脂和纤维材料的内部结构等。
3.旋光度测定:通过偏光显微镜观察样品旋光度的方法称为旋光度测定。
通过旋光板将样品的旋光角度转换为光的偏振角度,然后通过偏振片和目镜观察样品的旋光程度。
这种方法常用于对具有旋光性质的物质进行定性和定量分析,如蔗糖、酒精和氨基酸等。
在进行偏光显微镜观察时,还需要进行样品的处理和样品盖玻璃的选择:1.样品处理:样品为非透明或有封闭的样品时,需要将样品加工成薄片或薄片,并使用微小切割工具和研磨机进行处理,以便光线可以透过样品并在显微镜中观察到。
2.样品盖玻璃:样品盖玻璃通常是指用于封装样品并保护样品的透明玻璃片。
偏光显微镜的主要部件及用途偏光显微镜,这玩意儿可真是显微镜界的明星。
说白了,它就是让我们能在微观世界里,看到那些用普通显微镜看不到的细节。
别看它名字这么高大上,其实它的工作原理简单到让人惊叹。
今天,就跟我一起瞅瞅这小家伙的主要部件和用途,咱们要用最轻松的方式聊聊这位“微观探险家”的秘密武器。
1. 偏光显微镜的主要部件1.1 光源首先,咱得从光源说起。
你别小看这个光源,它可是偏光显微镜的“灵魂”所在。
就像一台高性能的汽车需要一台好发动机一样,光源的质量直接影响显微镜的效果。
一般来说,偏光显微镜用的光源多是卤素灯或LED灯。
它们能发出稳定而明亮的光,保证你能看清楚那些微小的样本。
1.2 偏光片接下来就是偏光片了。
这个部件就像是显微镜的“眼镜”,帮我们过滤掉不需要的光线。
它把光线分成两种偏振状态,只有特定方向的光能通过。
没这个东西,你就只能看到一团糟的影像,看不出啥有趣的细节。
说白了,偏光片就是显微镜的“滤镜”,让你看到清晰、真实的样子。
1.3 样品台然后,我们来聊聊样品台。
这玩意儿是显微镜的“工作台”,也是它的“支架”。
样品台上面,你可以放置各种样本。
它通常有两个方向的移动功能,让你能精确地调整样品的位置,确保你能对准那些关键部位。
这就像你在厨房做菜时要调节锅的位置一样,样品台也得精确无误。
1.4 物镜再说说物镜。
物镜是显微镜的“眼睛”,它负责把样品的图像放大。
物镜通常有多个不同的放大倍数,方便你在不同的层次上观察。
你可以从低倍数到高倍数逐渐放大,就像你在用放大镜看一张复杂的地图一样,逐步揭开样本的神秘面纱。
1.5 目镜最后,目镜就是你观察样品的地方。
它是你“睁眼”看世界的部件,能把物镜放大的图像再放大一遍,让你看得更清楚。
目镜的质量直接决定了你观察到的图像的清晰度和亮度。
好的目镜,就像好酒,喝了让人心情舒畅。
2. 偏光显微镜的用途2.1 矿物学研究首先,偏光显微镜在矿物学研究中可是不可或缺的好帮手。
德国Lavision Bio tec
光片照明显微镜(light-sheet microscopy)
特点:
☆采用光片照明技术,无需对样品切片
-左右双光片多角度扫描,可在5°内自由偏转
☆适合生物大样品的最大成像深度
-成像深度可达1 cm,可观察超厚样品
☆超大工作距离,超大样品尺寸
-成像尺寸1.2 cm X 1.2 cm X 1 cm
☆在亚细胞水平观察动植物活体动态
-具有极低的光漂白与光毒性
工作原理:
LaVision BioTec的选择性光片照明(light-sheet microscopy, Selcetive plane illumination microscope, SPIM)显微镜--Ultramicroscope显微镜使用一层光束从样品侧面激发荧光样品即sheet illumination,通过CCD来检测成像,而入射照明光路和CCD来检测成像,而入射照明光路和CCD接收荧光光路互相垂直。
通过移动样品使入射光面激发不同的平面,且激发光束从左右两个方向入射到样品上,光束的角度可以改变,这样我们就可以很容易的得到整个组织的3D图像,同时保证细胞水平的分辨率。
由于样品受激发的平面就是成像平面,所以可以将光漂白和光学损伤降低到最低。
整个系统配置可以达到大视野的快速摄像和3D成像。
这也是Lavision特有的设计和配置,
是全球唯一一款可以实现超大样品块、快速扫描、深度成像、高分辨率、3D动态图像输出的荧光显微镜。
应用领域:
生物表型学、发育生物学、结构生物学、肿瘤研究、干细胞再生研究等
适用对象:
动植物组织、动植物器官、或者整个动物胚胎等
应用优势:
不管你是想研究动植物结构、发育动态还是生物表型学,Ultramicroscope显微镜都是一个很好的工具, Ultramicroscope显微镜可以很快而且方便地研究表型学、动植物组织、整个动植物器官或者动植物发育阶段(动物方面如淋巴结、小鼠大脑甚至整个小鼠胚胎或者整个果蝇)。
为了分析幼年小鼠的大脑,显微镜的左右两个方向光束的多角度移动可以扫描整个大组织样品的全部结构而不会受到颗粒或者高密度成分的阻挡。
并且我们有一套特有的清洁样品的程序,最后将样品放置于清洁缓冲液中成像,大大提高了分辨率。
光学改进:
清洁后的样品仍然含有一些较高光学密度的颗粒。
如果使用静态光扫描的话,这些颗粒会导致线性阴影为了避免这种干扰,Ultramicroscope显微镜整合了一个可移动的激发光平面。
激发光通过不同的角度透射样品,从而提供更加均质的照明。
这项新技术
提供给我们很高的图像质量。
(上图)为一般荧光显微镜的成像,会由于组织块之中的高密度颗粒而导致图像之中有很多阴影,而使用Ultramicroscope显微镜,左右两个方向的光束的多角度移动可以得到全方位的成像,避免了颗粒的干扰而形成高分辨率的3D 图像。
激光光源:
☆激光模块最多可达5个激光二极管
☆白光超连续谱激光获得最大范围的激发谱
应用举例:
Ultramicroscope是一个非常好的分析组织结构和形态学的工具。
光束显微镜可以很快而且方便地研究表型学、小鼠大脑、淋巴结、发育阶段或者整个动物器官。
举个例子,使用Ultramicroscope 可以再几分钟之类完成啮齿动物皮肤肿瘤的血管形成成像。
LaVision BioTec GmbH介绍:
LaVision公司的主要产品是面向工业与科研的激光成像测量系统。
公司成立于1989年,是由德国马普研究所和德国哥廷根激光实验室专门从事激光成像研究的专家和学者创立的。
自成立以来,公司一直致力于开发与研究像探测器、光谱仪器、激光器、测试方法与相关软件开发。
在这一过程中,Lavision一直与全球顶尖科学家、研究团体和相关公司紧密合作,主要合作者包括哥廷根激光实验室、亚琛大学、德国航天局、密西根大学等。
LaVision BioTec GmbH作为其生命科学应用产品(Microarray Reader, FLIM, Multiphoton Microscopy)部门于2000在德国成立,作为专业的双光子显微镜和OPO 振荡器、双光子分光器等设备生产商,LaVision BioTec在短短的几年内已经成功地为美国哈佛大学、耶鲁大学、德国马普所等欧美国家诸多顶尖大学和研究机构提供了超过110套双光子显微镜与数10套光片照明显微镜设备,成为该领域质量最好的供应商。