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产脂肪酶的菌株筛选方法的研究近年来，随着植物油和动物油在食品、医药、农药以及其他行业的广泛使用，脂肪酶的需求量逐渐增加。
脂肪酶是一种具有多种功能的酶，它可以分解脂肪和油脂，用来制造食品添加剂、医药中间体以及其他有用的产品。
发酵技术是获得脂肪酶的重要方法之一，而发酵菌株的筛选是发酵技术的基础和关键步骤，其目的是从微生物资源中筛选出对脂肪酶产生量有明显提高的菌株（颜永涛，2018）。
一般而言，菌株的筛选标准主要有两个，一是筛选的菌株能有效的产出脂肪酶，二是筛选的菌株能兼顾发酵条件的优化。
因此，要求筛选出高产脂肪酶的菌株，必须考虑到发酵条件与产物形成之间的关系。
筛选高产脂肪酶的菌株一般包括多种筛选方法，其中比较常见的是两种：一种是培养基筛选方法，另一种是固定化筛选方法。
培养基筛选方法是在最佳培养基中，根据育种材料的不同（如不同的液体培养基或固体培养基），采用基础发酵条件对菌株进行培养，以获得高产脂肪酶的菌株。
优势在于，培养基筛选方法易于操作，能够及时获得结果，且价格低廉，但这种方法受发酵条件的限制，在某些情况下，成果不太满意。
固定化筛选方法是在发酵过程中，将发酵菌株通过固定化技术（如表面层析法、膜层流法、筛选电泳法）进行筛选，然后再根据筛选出来的菌株的表现和性状，以及细胞高分子量蛋白或细胞酶活性，来识别和分离出高产脂肪酶的菌株。
相比培养基筛选方法，固定化筛选方法更加精确，能够准确识别出高产脂肪酶的菌株，但操作复杂，费时费力，存在技术操作的难度。
另外，结合培养基筛选方法和固定化筛选方法也可以进行脂肪酶菌株的筛选。
例如，采用柔性发酵条件，针对不同的育种材料经过培养基的筛选，从中获得脂肪酶合成量提高明显的发酵菌株，再利用固定化筛选方法进一步筛选出脂肪酶合成量更高的菌株（张静，2019）。
综上所述，要筛选高产脂肪酶的菌株，可以采用培养基筛选方法、固定化筛选方法，也可以结合培养基筛选方法和固定化筛选方法进行操作，以达到所需的目标。
脂肪酶产生细菌的筛选巩素绢（河北农业大学生命科学学院微生物与生化药学，河北保定071001）摘要：从富含油脂的土壤中寻找高产脂肪酶的真菌，以期为扩大脂肪酶的菌源提供材料。
本试验从保定市炼油厂附近土样中，经富集培养、平板筛选得到22株脂肪酶产生菌株，通过复筛得到1株脂肪酶活力较高真菌。
为脂肪酶产生菌以及脂肪酶的工业化生产与应用奠定了基础。
关键词：脂肪酶；筛选；真菌Abstract：The study aimed to seek for the fungi with high yield of lipase from the greasy soil，so as to provide the material for expanding the fungi source of lipase.22strains of fungi producing lipase were isolated by enrichment culture and flat screening methods in soil samples collected from the refinery of Baoding．A stain with higher activity of producing lipase was isolated by re-screening methods.The study laid a foundation for lipase producing bacteria and industrial production and application of lipase to some extent．Key words:Lipase;Screening;fungi前言脂肪酶(Lipase，E.C.3.1.1.3，甘油三酯水解酶)，可在油水界面催化甘油三酯形成甘油二酯、甘油单酯或甘油及游离脂肪酸［1］。
产脂肪酶乳酸菌的筛选及其对奶酪风味的影响产脂肪酶乳酸菌的筛选及其对奶酪风味的影响引言：奶酪作为一种受人们喜爱的乳制品，其独特的风味是由其中的乳酸菌发酵产生的。
然而，乳酸菌中只有少数能产生脂肪酶。
脂肪酶可将乳中的脂肪水解为脂肪酸，这些脂肪酸为奶酪提供了特殊的风味。
本文将探讨产脂肪酶乳酸菌的筛选方法以及其对奶酪风味的影响。
第一部分：产脂肪酶乳酸菌的筛选方法脂肪酶乳酸菌的筛选是探索奶酪风味的关键。
以下是一些常见的筛选方法：1. 纸片法：在培养基上涂布脂肪酶底物，如乳脂肪酸甘油酯，然后在此基础上观察细菌的产酶能力。
产脂肪酶菌株会在纸片上出现透明圈，表示底物被水解。
2. 红雪藻酪蛋白平板法：添加红雪藻酪蛋白的平板培养基，利用产酶细菌使平板发生透明区带来判断。
3. 紫外线灭菌法：在试管中加入产酶菌株和乳脂肪酸甘油酯，利用UV-C紫外线灭菌使菌株破裂释放的酶作用对乳脂肪酸甘油酯进行水解，并观察产酶能力。
第二部分：产脂肪酶乳酸菌对奶酪风味的影响脂肪酶的存在对奶酪的风味影响巨大。
乳脂肪酸通过脂肪酶的作用被水解，产生了多种风味物质，如酸乳、酯类和醛类。
这些物质不仅为奶酪增添了复杂的香味，同时也能够增强奶酪的口感和风味。
此外，酯类化合物还能够产生脂肪感，使奶酪口感更为丰富。
因此，产脂肪酶的乳酸菌对奶酪的风味有着明显的影响。
此外，不同菌株产生的脂肪酶种类和酶活性也有所不同，这将进一步影响奶酪的风味。
因此，在奶酪生产中，选择合适的产脂肪酶乳酸菌菌株是非常重要的。
结论：产脂肪酶的乳酸菌在奶酪生产中起着重要的作用。
通过合理的筛选方法，我们可以获得高效产酶的菌株。
这些乳酸菌通过水解乳脂肪酸产生不同风味物质，丰富了奶酪的风味和口感。
因此，我们应该重视产脂肪酶乳酸菌的筛选与利用，以提高奶酪的质量和口感。
注意：本文为人工智能生成内容，仅供学术参考和个人用途，请勿直接传播和抄袭通过紫外线灭菌法观察产酶能力，可以判断乳酸菌是否具有产脂肪酶的能力。
摘要本文开展了产脂肪酶菌株的筛选鉴定及响应面法优化发酵工艺试验,确定得到的高产脂肪酶菌株为Youzh-1,对其进行16S rRNA 测序分析,确定其为荧光假单胞菌,在单因素试验的基础上采用响应面法对Youzh-1的发酵工艺进行进一步优化设计,得到最佳发酵工艺为葡萄糖添加量18.825g/L 、牛肉膏添加量25.98g/L 、温度41℃、pH 值6。
在此条件下测得脂肪酶活力为79.87U/mL ,较理论值87.19U/mL 减少了8.39%,证明模型可靠。
关键词脂肪酶;菌株;筛选;鉴定;响应面法;发酵工艺;优化中图分类号TQ925.6文献标识码A 文章编号1007-5739(2022)12-0165-06DOI :10.3969/j.issn.1007-5739.2022.12.046开放科学(资源服务)标识码(OSID ):Screening and Identification of Lipase-producing Strain and Optimization of FermentationProcess by Response Surface MethodologyQIN Hao LIU Kai DENG Wenxi LI Shan YU Shuping WANG Mengyuan GUO Donghui *(College of Life Sciences,Shandong First Medical University,Tai ′an Shandong 271016)Abstract In this paper,the screening and identification of lipase -producing strain and the optimization of fermentation process by response surface methodology were researched.The obtained high lipase-producing strain was Youzh-1,which was determined to be Pseudomonas fluorescens by 16S rRNA sequencing analysis.On the basis of the single factor experiment,the response surface methodology was used to further optimize the fermentation process of Youzh-1.The optimum fermentation process was obtained as follows:the addition of glucose was 18.825g/L,the addition of beef extract was 25.98g/L,the temperature was 41℃,and the pH value was 6.Under these conditions,the lipase activity was measured to be 79.87U/mL,which was 8.39%lower than the theoretical value (87.19U/mL),which proved that the model was reliable.Keywords lipase;strain;screening;identification;response surface methodology;fermentation process;optimization产脂肪酶菌株的筛选鉴定及响应面法优化发酵工艺秦昊刘凯邓文玺李珊于淑萍王梦圆郭东会*(山东第一医科大学生命科学学院,山东泰安271016)脂肪酶在人们的生产生活中发挥着重要作用[1]。
[收稿日期] 2011-05-16;2011-08-12修回[基金项目] 贵州省科技攻关项目 生物酶法生产生物柴油 [黔科合NY(2006)3031];贵州省科技创新人才团队建设项目 贵州省特色动植物资源保护与可持续利用科技创新人才团队 [黔科合人才团队(2009)4007][作者简介] 洪 鲲(1973-),男,讲师,硕士,从事生物化学研究。
E -mail:ken _hong2004@yah *通讯作者:乙 引(1967-),男,教授,博士,硕士生导师,从事植物生理与生物化学研究。
E -mail:yiyin@gz [文章编号]1001-3601(2011)09-0561-0103-03产脂肪酶细菌的筛选及发酵培养条件的优化洪鲲,张豪,乙引*,张习敏(贵州师范大学生命科学学院,贵州贵阳550001)[摘 要]为给扩大脂肪酶的生产源提供基础资料,对富含油脂的67份土壤样品进行了产脂肪酶细菌的筛选及目标菌株发酵培养条件的优化试验。
结果表明:筛选分离出15株脂肪酶产生菌,经过对其发酵液脂肪酶活力的比较,菌株D9-1发酵液脂肪酶活力最高。
目标菌株D9-1产脂肪酶最佳培养条件:最适氮源为1%蛋白胨,最适碳源为1%橄榄油,表面活性剂为1%OP -10,最适发酵温度30 ,摇床转速为170r/m in,发酵培养时间为24h 。
[关键词]脂肪酶;细菌;筛选;发酵;培养条件[中图分类号]S182;S154[文献标识码]AScreening for Lipase -produ cin g Bacterial Strains andOptimization of the Fermentation Con ditionsH ONG Kun,ZH A NG H ao,YI Yin *,ZH ANG X-i min(School of Lif e Sciences ,Guizhou Normal U niversity ,Guiy ang,Guizhou 550001,China)Abstract:15lipase -pr oducing bacterial strains w ere isolated fr om 27soil samples rich in oil and D9-1w as selected as the mo st potential lipase -producing strain through comparing the lipase activity in fermentation broths o f these strains.T he results show ed that the o ptimum nitrog en source is peptone,optimum carbon source is 1%o liv e oil,optimum surfactant is 1%OP -10,optimum temperature is 30 ,and w hen the rotating speed w as 170r/min,the lipase activity in ferm entation broth r eached the highest after 24h.Key words:lipase;bacter ium;screening;ferm entation;fermentation conditio ns 脂肪酶广泛存在于动植物、细菌、真菌和霉菌体内[1-2],具有催化三脂酰甘油及其他一些水不溶性脂类的转酯、水解、酯化、醇解及酯类逆向合成的特性。
高产脂肪酶菌株的筛选及酶学性质的研究的开题报告
一、选题背景及意义
脂肪酶作为一种广泛存在于细菌、真菌和动植物中的酶类，在脂肪水解、饮食营养、生物转化等方面具有重要的作用。
因此，筛选高产脂肪酶的菌株具有重要的研究意义。
目前，虽然已有许多脂肪酶菌株被发现，但其产酶能力参差不齐，产酶量较少，对于一些实际应用仍然存在着不足。
因此，筛选高产脂肪酶的菌株并进行酶学性质的研究，对于进一步了解脂肪酶的生产和应用具有重大意义。
二、研究内容
1.从自然界中筛选高产脂肪酶的菌株，利用液体发酵和固体发酵技术进行发酵，并对产酶量进行分析和比较；
2.对高产脂肪酶菌株的生长条件进行研究，包括温度、pH值、培养基成分等因素对其生长和产酶能力的影响；
3.从高产脂肪酶菌株的菌体中提取酶液，进行酶学性质的研究，包括酶的催化性质、热稳定性、抗离子等性质的分析和比较；
4.开展脂肪酶的应用研究，包括对脂肪水解和饮食营养的实际应用研究。
三、研究方法和步骤
1.从自然界中筛选高产脂肪酶的菌株，采用液体和固体发酵技术进行发酵，并对产酶量进行分析和比较；
2.对高产脂肪酶菌株的生长条件进行研究，包括温度、pH值、培养基成分等因素对其生长和产酶能力的影响；
3.从高产脂肪酶菌株的菌体中提取酶液，进行酶学性质的研究，包括酶的催化性质、热稳定性、抗离子等性质的分析和比较；
4.开展脂肪酶的应用研究，包括对脂肪水解和饮食营养的实际应用研究。
四、预期研究结果和意义
通过筛选高产脂肪酶的菌株，并研究其生长条件和酶学性质，有望发现一些具有高产酶量、高催化效率、热稳定性好等优良性状的脂肪酶菌株。
这些研究成果将有助于推进脂肪酶的生产和应用，为提高脂肪水解和饮食营养等方面做出贡献。
产胞外脂肪酶菌株的筛选及底物测定张 鹏1) 孟庆云2) 赵柳青*(1)北京化工大学化学工程学院,北京,100029;2)北京化工大学应用数理系,北京,100029)摘 要:文中采用简便快速的平板检测法,通过观察培养基上生长的菌落直径和其水解圈直径的大小,进行初筛。
再用液体培养,采用滴定法测定酶活性,进行复筛筛选出10株优良菌株。
活性最高为4.45×10-8mo l/s,其中D 6菌株以苏籽油、亚麻油和月见草油为底物,酶活性分别达到14.29×10-8mol/s,10.90×10-8mol/s 和11.35×10-8mol/s 。
关键词:胞外脂肪酶;菌种筛选;脂肪酶分类号:Q 556.1前 言脂肪酶(Lipase ,EC 3.1.1.3,甘油酯水解酶)是一种特殊的水解酶,其催化的反应是:甘油三酸酯+水 甘油二酸酯+游离脂肪酸 甘油酸酯+游离脂肪酸 甘油+游离脂肪酸。
脂肪酶只能在异相系统,即在油-水界面上作用,对水溶性底物无作用,这一点在有机合成中合成手性中间体方面具有很多的优越性。
脂肪酶的应用极其广泛。
例如作为乳化剂的单甘酯以往采用工业法生产,纯度低,成本昂贵,而利用青霉菌产生的“脂酶G ”生产的单甘酯纯度高,成本低[1]。
通常用化学催化剂金属钠或烷基醇钠来加快酰基在甘油酯分子间的迁移,但并无位置特异性,如用1,-3,-专一性脂肪酶催化时,酰基迁移限制在1,-3,-位上,可以生成化学法不能生产的特殊的甘油三酸酯混合物。
另外脂肪酶在皮革、纺织、医药及洗涤剂等行业也有着广泛的应用。
脂肪酶的研究始于胰脂酶,但由于其来源有限,故微生物脂肪酶的研究越来越受到重视。
要进行此类研究首先就要进行产脂肪酶菌株筛选,筛选的方法因应用对象、微生物种类、酶的特性而有所变化,但应着眼于准确、迅速、选择性强,并且易于自动化。
文中从长年与油脂接触的土壤中采样,先用平皿培养,并用Rhodamine B 显色,根据水解圈的情况进行初筛,用液体培养,滴定法测酶活性进行复筛,再利用苏籽油、亚麻油、鱼油和月见草油作为底物对筛选出来的菌株进行酶活性测定。
产脂肪酶菌株的筛选
实验目的:
以橄榄油作为唯一碳源筛选出能产生出脂肪酶的菌株。
橄榄油乳化法是测定脂肪酶活性的常用方法，其测定的原理是天然油脂被水解产生的游离脂肪酸可以被氢氧化钠中和。
橄榄油乳化：聚丙烯醇3:1橄榄油乳化，水包油型，然后装在合适的瓶子里。
实验原理：
脂肪酶是一类特殊酯键水解酶，产脂肪酶的微生物广泛的分布，主要以各类真菌为主；在富含油脂的地方进行采样，利用稀释平板分离法筛选产脂肪酶菌株，再以乳化橄榄油为底物。
脂肪酶作用于橄榄油乳化液，催化酯键水解，生成脂肪酸，用标准氢氧化钠滴定脂肪酸，利用酚酞滴定终点，记录消耗的氢氧化钠体积，根据氢氧化钠的用量来计算脂肪酶的活力。
材料：烧杯、玻璃棒、锥形瓶、试管、平板、接种环、制备乳化状态的针筒等。
土壤采集：在土门菜市场油污重地进行土壤采样。
富集培养基配置：硫酸铵0.1% 磷酸氢二钾0.1% 七水硫酸镁 0.05% 七水硫酸亚铁0.001% 酵母膏0.5% 橄榄油乳化液12% 氯化钠l% PH自然，115℃灭菌30min
选择培养基平板：乳化橄榄油 12% 蛋白胨 1% 硫酸铵0.2% 磷酸氢二钾0.1% 磷酸二氢钾0.3% 七水硫酸亚铁0.1% 维多利亚蓝0.004% 琼脂1.5% PH=8.0灭菌115℃30min 复筛培养基平板：乳化橄榄油12% 蛋白胨1% 硫酸铵0.2% 磷酸氢二钾0.1% 磷酸二氢钾0.3% 七水硫酸亚铁0.1% 琼脂1.5% PH=8 115℃灭菌30min
实验方法：
1、取土样2g悬于20ml无菌水中，震荡，在100ml培养基中加入5ml的悬液，30℃ 180r/m 培养3d。
2、取富集液稀释分别涂布于选择培养基平板上，经培养观察菌落周围的蓝色圈，然后挑取该菌落于富集培养基斜面上。
30℃培养箱3d。
3、将初筛得到的菌株在复筛培养基平板划线，然后放于30℃培养箱中3d。
4、挑取单菌落，镜检并纯化，得到纯菌株保存。
5、活力测定：U=(V-V.)/t×50×n。
6、U=酶活（微摩尔/min）V=样品耗碱量（ml),V.=空白耗碱量（ml),50=1ml0.05mol/l氢氧化钠的微摩尔数，t=反应时间（min),n=稀释倍数
脂肪酶的活力的测定：
1、测定方法很多: 酸碱滴定法，电位滴定法，浊度测定法，甘油测定法，色谱分析法等。
2、常用的检测手段为酸碱滴定，在酸碱滴定的方法中，有直接进行滴定的，也有先用疏水有机溶剂抽提出脂肪酸，再进行滴定的。
活性测定选择时注意：
1、由于反应体系中存在缓冲液的缓冲作用，因此直接滴定法的合理性常令人怀疑，更容易给科研人员造成困惑，而且直接滴定法的稳定性一般都不十分理想。
2、根据脂肪酸和铜离子形成铜皂的原理利用分光光度法(715nm附近)进行脂肪酶活力的检测，但是由于实验中使用大量苯进行铜皂的萃取，容易造成污染和对人体造成伤害，因此使用该方法的人少。
3、三丁酸甘油醋和三油酸甘油酷作为底物的时候，脂肪酶活力检测的结果比较稳定，但是由于三丁酸甘油醋和三油酸甘油酷价格比较昂贵，因此使用的人很少。
4、辛酸对硝基苯酚酷自水解的速度比较快，因此检测脂肪酶活力的时候，误差比较大;而乙酸对硝基苯酚醋水解的速度比较缓慢，因此实验误差相对较小，但是辛酸对硝基苯酚醋和乙酸对硝基苯酚醋都不是脂肪酶的天然底物，一般认为不适合作为脂肪酶活力检测的底物，尤其用乙酸对硝基苯酚酷作为底物，其检测的活力作为醋酶活力似乎更合理一些。
5、本实验筛选得到的野生菌株产胞外脂肪酶活性较小，采用将传统的直接酸碱滴定法加以改进的方法来检测脂肪酶活性。
应用：
1、中国食品质量报脂肪酶是酶制剂中的一员，在酒类酿造、蔬菜加工、面包生产、乳品生产、油脂加工等中应用广泛，是优良的食品改质剂。
2、该酶能分解各种天然油脂，分解油脂的容易程度为：C18：3＞C18：2＞C18：1＝C16：0＞C18：0＞C22：0
实验成员：文利姚遥葛云霞唐荣。
