补肾通脉方对伴胰岛素抵抗的多囊卵巢综合征大鼠IRS_1表达的影响

中药补肾调冲方对卵巢早衰大鼠性激素水平及SCF、Cx-37蛋白表达的影响发表时间：2018-03-14T16:18:29.013Z 来源：《心理医生》2018年4期作者：李欣捧1 高慧2(通讯作者) 徐文君1 崔亚萌1 张[导读] 卵巢早衰指40岁以下的女性持续闭经且性器官出现萎缩，LH、FSH升高，E2降低的综合征。

(1华北理工大学河北唐山 063000)(2承德医学院附属医院中医科河北承德 067000)(3河北省中西医结合肝肾病证重点实验室河北石家庄 050091）【摘要】目的：观察补肾调冲方对大鼠卵巢早衰模型LH、FSH、E2、AMH水平及Cx-37、SCF蛋白表达的影响。

方法：70只SD 雌性大鼠随机分为：对照组,模型组,补肾调冲方低、中、高剂量（以生药计24、12、6g/kg）组,坤泰胶囊组（6g/kg）,结合雌激素片（阳性药）组。

除对照组以外,其他各组均连续应用ig雷公藤多苷片造模14d,在造模结束24h后,分别给予各组相应药物36d。

给药后,应用Elisa法检测血清FSH、LH、E2、AMH水平,免疫组化法检测Cx-37、SCF蛋白的表达。

结果：与对照组比较,模型组FSH、LH水平、SCF蛋白的表达均显著升高,E2、AMH水平、Cx-37蛋白的表达显著降低（P＜0.05）;与模型组比较,各给药组 FSH、LH水平、SCF蛋白表达均显著降低,E2、AMH水平、Cx-37蛋白表达显著升高（P＜0.01）。

结论：补肾调冲方可增强卵巢早衰大鼠的卵巢储备能力,促进卵泡发育,对卵巢早衰可能有治疗作用。

【关键词】中药补肾调冲方;卵巢早衰;卵泡刺激素、促黄体生成素、雌激素、抗缪勒管激素、卵巢干细胞因子SCF、缝隙连接蛋白Cx-37【中图分类号】R28 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2018）04-0036-03 【Abstract】 Objective To observe Bushen Tiaochong Decoction on premature ovarian failure model rats serum FSH and LH, E2, AMH levels and SCF, Cx-37 protein expression influence.Methods 70 female SD rats were divided into 7 groups. Excpt the control group, the other groups were ig tripterygium glycosides tablets 14 d, the mold finished 24h, given the corresponding drug treatment 36d. After administration, Elisa was used to detect FSH, LH, E2 and AMH levels in rats, the expression of SCF and Cx-37 protein was detected by immunohistochemistry.Results Compared with the control group, the expression levels of FSH, LH and SCF protein levels were increased, the expression of E2, AMH, Cx-37 protein level was lower (P < 0.05); compared with the model group, the expression of each group FSH, LH and SCF protein levels were decreased, the expression of E2 and AMH and Cx-37 protein increased(P < 0.01).Conclusion The recipe of Bushen and punching can improve the ovarian reserve capacity, promote development of follicle, and may have therapeutic effect on premature ovarian failure.【Key words】Traditional Chinese medicine Bushen recipe; Premature ovarian failure; follicle stimulating hormone, luteinizing hormone, estrogen, anti Mueller hormone, ovarian stem cell factor SCF, gap junction protein Cx-37 卵巢早衰指40岁以下的女性持续闭经且性器官出现萎缩，LH、FSH升高，E2降低的综合征。

补肾通络方对老龄大鼠肾功能的影响
都占陶;杨丽彩;危北海
【期刊名称】《中国中医基础医学杂志》
【年(卷),期】2004(010)010
【摘要】目的:通过动物实验探讨补肾通络方对老龄大鼠肾功能减退的影响.方法:选用老龄Wistar大鼠作为用药对象,从反映衰老和肾小球滤过、肾小管浓缩和重吸收功能的指标进行观察.结果:补肾通络方组血清尿素氮、尿渗透压、血浆黏度、纤维蛋白原、超氧化物歧化酶、过氧化脂质等指标有明显改善,金匮肾气丸对照组尿渗透压、超氧化物歧化酶、过氧化脂质有改善,提示补肾通络方有防治老龄大鼠肾功能减退的作用,其疗效优于金匮肾气丸对照组.
【总页数】3页(P6-8)
【作者】都占陶;杨丽彩;危北海
【作者单位】中国中医研究院,研究生部,北京,100700;北京市中医医院,北
京,100010;北京市中医医院,北京,100010
【正文语种】中文
【中图分类】R285.5
【相关文献】
1.补肾通络方对大鼠膝骨关节炎膝关节软骨细胞外基质代谢的影响 [J], 杨帆;袁芳;侯秀娟;朱跃兰
2.补肾通络方对肺纤维化大鼠结缔组织生长因子表达的影响 [J], 苏凤哲; 刘晓; 于
文涛
3.补肾解毒通络方对Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠TLR4/IκBα/NF-κB信号通路相关因子的影响 [J], 陈倩雯;何奕坤;沈佳莹;杨光辉
4.补肾通络方对肺纤维化大鼠碱性成纤维细胞生长因子表达的影响 [J], 苏凤哲;刘晓;周光春
5.补肾通络方对肺纤维化大鼠肺组织病理形态的影响 [J], 苏凤哲;周光春;刘晓;于文涛
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ｃｔａபைடு நூலகம்（Ｃ ／ ｕ ｎ ｈ ｒ ｎｃｇ ｎ ｄ ｔｏ ｉ ｈ ） ｅａ ｉｓ ａ ｄ １ ａ ｅ ｔ ｆ ｒｕ ｒ ｖ ｎ ｃ ｉ ｔ Ｃ ）ｈ ｍａ ｃ ｏ ｉ ｉ ｏ ａ ｏｒ ｐｎ（ＣＧ ｔ ｒｐｅ ， ｎ ９ ｐ ｔ ｎ ｓｏ ｏ ｐ Ｂ ｗｅｅｇ ｅ ｃ／ ｒ ｏ ｈ ｉ ｇ ｉ
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ｎ ｕｃ ｎ ｔ ｒ ｐｉ ｓ ｉ ｄ ｔｏ ｈｅ ａ ｅ ．Ｍ ｅ ｈ ｄ ｉ ｔ ｓｘ ＰＣＯＳ ｒ ｌ ｔ ｄ ｉ ｆ ｒｉ ｔ ｐ ｉ ｎ ｓ ｗｅ ｅ ｄｉｉ ｄ ｉ ｔ ｒ ｕｐｓ ａ ｉ ｔ ｏ ｓ Ｔｈ ｒｙ— ｉ ｅ ａ ｅ ｎ ｅ ｔｌ ｙ ａｔ ｔ ｉ ｅ ｒ ｖ ｄｅ ｏ ２ ｇ ｏ ｎ ｔ ｒ ｎｄ ｍ ，ｒ ｃ ｉ ｎ ｆ ｒ ｎｔｏ ｕ ａ ｉ ｎ ｎｄ ｔｏ ｅ ａ ｉ ｓ １ ｔ ｎ ｓ ｏ ｏ ｗ ｅ ｅ ｇ ｖ ｎ ｃ ｏ ｅ ｈ ｎｅ ａ ｏ ｅ ｅｖ ｇ ｄｉ ｅ ｅ ｖ ｌ ｔ ｉ ｏ ｉ ｕｃ ｎ ｔ ｒ ｐ ｅ ． ７ ｐａ ｅ ｔ ｆｇ ｕｐ Ａ ｒ ｉ ｅ ｌ ｍ ｐ ｉ ｉ ｈ ｉ ｒ
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补肾活血化痰汤对多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢血供及形态的影响王瑞杰;李晖;邱方;王自闯【期刊名称】《中国药房》【年(卷),期】2017(028)004【摘要】目的：探讨补肾活血化痰汤对多囊卵巢综合征（PCOS）模型大鼠卵巢血供及形态的影响。

方法：取SD大鼠（♀）50只随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组[罗格列酮，3 mg/（kg·d）]和补肾活血化痰汤低、高剂量组[5.0、7.5 g/（kg·d）]，每组10只。

除正常对照组外，其余各组大鼠均采用Poresky法复制PCOS模型。

成模后，各给药组大鼠ig相应药物，正常对照组和模型组大鼠ig 生理盐水[10 mL/（kg·d）]，每天1次，连续22 d。

给药结束后处死大鼠，记录微血管密度（MVD），检测大鼠卵巢组织血管内皮生长因子（VEGF）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）1型受体（AT1）和2型受体（AT2）以及G蛋白偶联受体MAS mRNA的表达，并观察卵巢形态变化。

结果：与正常对照组比较，模型组和各给药组大鼠MVD均升高，AT1、AT2、MAS mRNA表达均下调（P＜0.05）；模型组大鼠卵巢组织可见囊性窦卵泡、颗粒细胞层减少，卵母细胞消失，黄体组织数量减少等明显病理变化。

与模型组比较，各给药组上述指标均得到显著改善，且补肾活血化痰汤低、高剂量组作用均强于阳性对照组（P＜0.05）；各给药组大鼠的卵巢组织病理变化均得到一定改善。

结论：补肾活血化痰汤可增加PCOS模型大鼠卵巢组织血供，促进血管生成，促排卵，有助于改善卵巢形态。

%OBJECTIVE:To explore the effects of Bushen huoxue huatan decoction on ovarian blood supply and form in model rats with polycysticovarian syndrome(PCOS). METHODS:50 SD female rats were randomized into normal control group,model group,positive control group [rosiglitazone,3 mg/(kg·d)],Bushen huoxue huatan decocti on low-dose and high-dose groups [5.0, 7.5 g/(kg·d)],with 10 rats in each group. Except for normal control group,PCOS model was induced in the other groups by Poresky method. After modeling,treatment groups were given relevant medicine intragastrically. The normal control group and mod-el group were given normal saline [10 mL/(kg·d)] intragastrically,once a day,for 22 days. After the end of administration,the rats were sacrificed. The microvessel density (MVD) was recorded. mRNA expression of vascular endot helial growth factor (VEGF), ovarian angiotensin Ⅱ receptor(Ang Ⅱ)type 1(AT1)and type 2(AT2),G-protein coupled receptor MAS were all detected in ovarian tissue of rats. The ovarian form was observed. RESULTS:Compared with normal control group,MVD of mod-el group and treatment groups were all increased,while mRNA expression of AT1,AT2 and MAS were down-regulated (P<0.05);cystic sinus sollicle,the decrease of granular cell layer,egg mother cells disappearance,the decrease of luteal tissue and other obvious pathological changes could be found in ovarian tissue of rats in model group. Compared with model group,above in-dexes of treatment groups were improved significantly,and the effects of Bushen huoxue huatan decoction low-dose and high-dose groups were better than that of positive control group (P<0.05). The pathological changes of ovarian tissue in treatment groups were all improved to certain extent. CONCLUSIONS:Bushen huoxue huatan decoction can improve ovarianblood supply,angio-genesis and ovulation in PCOS rats. It is beneficial to improve ovarian form.【总页数】4页(P479-482)【作者】王瑞杰;李晖;邱方;王自闯【作者单位】河南中医药大学第二临床医学院，郑州 450002;河南中医药大学第二附属医院生殖医学科，郑州450002;河南中医药大学第二附属医院生殖医学科，郑州 450002;河南中医药大学第二临床医学院，郑州 450002【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.补肾调经汤对多囊卵巢综合征模型大鼠胰岛素及脂联素的影响 [J], 赵莉娜;韩亮;胡晓华2.补肾调经汤联合二甲双胍对多囊卵巢综合征模型大鼠的影响 [J], 赵莉娜;胡晓华3.补肾活血化痰方对多囊卵巢综合征模型大鼠的治疗作用机制研究 [J], 王瑞杰;李晖;王自闯4.补肾促排卵汤对多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢形态及性激素的影响 [J], 郭银华;谈勇;邹奕洁5.补肾活血化痰汤对多囊卵巢综合征患者不孕疗效和内分泌代谢的影响 [J], 孙莺;沈维增;陈云霞;陈兆鑫;张海艇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

实用妇科内分泌杂志Journal Of Practical Gynecologic Endocrinology 2017年7月B第4卷/第20期Jul. B. 2017 V ol.4, No.20102补肾祛瘀汤治疗多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗的临床研究杨亚茹，刘照锋（山西省中医院内分泌科，山西太原 030012）【摘要】目的 研究补肾祛瘀汤联合二甲双胍治疗多囊卵巢综合征的临床疗效。

方法 选取伴有胰岛素抵抗的多囊卵巢综合征的患者共60例，将其半随机分为研究组和对照组，其中研究组患者采用中药联合二甲双胍治疗，对照组单纯采用二甲双胍治疗。

对比两组患者空腹胰岛素的变化（FIN）、空腹血糖（FBS）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、体重指数（BMI）、腰臀比（WHR）及血清性激素变化情况。

结果 两组患者FIN、HOMA-IR、BMI在治疗3个月后均有所下降，且研究组腹胀腹泻等副作用更少，依从性更好，两组比较具有统计学差异下降明显，具有统计学差异（P＜0.05）；两组患者血浆性激素T、LH、LH/FSH在治疗3个月后均有所下降，且研究组下降明显，具有统计学差异（P＜0.05）。

结论 中药联合二甲双胍治疗多囊卵巢综合征可改善FIN及HOMA-IR，改善卵巢功能，减低BMI及WHR，减轻二甲双胍的副作用，效果满意。

【关键词】多囊卵巢综合征；中药；二甲双胍；胰岛素抵抗【中图分类号】R711.75 【文献标识码】B 【文章编号】ISSN.2095-8803.2017.20.102.03Clinical Study on Treatment of Polycystic Ovary Syndrome withInsulin Resistance by Bushen Quyu DecoctionYANG Ya-ru,LIU Zhao-Feng(Department of Endocrinology, Shanxi Provincial Hospital of traditional Chinese medicine,Shanxi Taiyuan 030012,China)【Abstract】Objective To study the clinical effect of Bushen Quyu Decoction combined with metformin in the treatment of polycystic ovary syndrome. Methods Sixty patients with polycystic ovary syndrome with insulin resistance were randomly divided into study group and control group. The patients in the study group were treated with traditional Chinese medicine combined with metformin and the control group was treated with metformin alone. (FBS), insulin resistance index (HOMA-IR), body mass index (BMI), waist-to-hip ratio (WHR) and serum sex hormones were compared between the two groups. Results The levels of FIN, HOMA-IR and BMI in the two groups were decreased after 3 months of treatment, and the side effects of abdominal distension and diarrhea were less and the compliance was better. The difference between the two groups was statistically significant (P＜0.05). The levels of plasma sex hormones T, LH and LH / FSH were decreased in the two groups after 3 months of treatment, and the difference was significant (P＜0.05). Conclusion Chinese medicine combined with metformin treatment of polycystic ovary syndrome can improve FIN and HOMA-IR, improve ovarian function, reduce BMI and WHR, reduce the side effects of metformin, the results are satisfactory.【Key words】Polycystic ovary syndrome;Traditional Chinese medicine;Metformin;Insulin resistance多囊卵巢综合征（PCOS）是现代临床上常见的妇科疾病之一。

补肾化瘀方对PCOS大鼠血清激素水平的影响张翌蕾;潘文;汪永娟;王贵霞;李明明【期刊名称】《西部中医药》【年(卷),期】2016(029)002【摘要】目的：观察补肾化瘀方对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠内分泌水平的影响。

方法：选取120只6周龄雌性SD大鼠，设立空白对照组20只，余100只大鼠采用来曲唑溶液对大鼠灌胃，并喂以高脂高糖饲料建立PCOS大鼠模型，成模大鼠随机分为5组：模型对照组、二甲双胍组、中药低浓度组、中药中浓度组、中药高浓度组，每组20只。

分别给予相应药物进行干预，干预14天后采用酶联免疫（ELISA）法测定大鼠血清雌醇（E1）、双氢睾酮（DHT）、促性腺激素释放激素（GnRH）、胰岛素（INS）水平，HE染色观察各组大鼠卵巢形态学变化。

结果：与空白对照组比较，模型对照组血清E1、DHT、INS水平明显增高(P＜0.05)，卵泡呈囊性扩张，颗粒细胞层数减少，卵泡个数增多，卵母细胞消失；与模型对照组比较，各治疗组大鼠血清E1、DHT、INS水平显著降低(P＜0.05)，卵巢HE染色镜下可见黄体以及不同阶段卵泡、颗粒细胞层数明显增多，卵泡内可见卵母细胞以及放射冠。

结论：补肾化瘀方可有效改善PCOS大鼠血清激素水平，降低INS水平，改善E1过高引起的高雌酮血症，并且能够改善卵巢功能与排卵情况。

【总页数】4页(P5-8)【作者】张翌蕾;潘文;汪永娟;王贵霞;李明明【作者单位】甘肃中医药大学，甘肃兰州 730000;甘肃省中医药研究院;甘肃中医药大学，甘肃兰州 730000;甘肃省中医院;甘肃中医药大学，甘肃兰州 730000【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.补肾化瘀方对PCO大鼠血清性激素水平影响的研究 [J], 徐琼芳2.补肾调经汤对PCOS大鼠血清激素水平影响的实验研究 [J], 胡晓华;赵莉娜3.补肾化瘀方对PCOS血清IKK表达的影响 [J], 雍志强;潘文;张瑞瑞;康开彪;袁仁智4.补肾化瘀方对PCOS大鼠血清激素水平的影响 [J], 张翌蕾;潘文;汪永娟;王贵霞;李明明;5.补肾化瘀方合逍遥散加减治疗青春期PCOS的临床效果及对患者LH/FSH及T 水平的影响分析 [J], 高奇丹因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

益肾祛浊方对PCOS—IR大鼠Ghrelin、SHBG及VF的影响目的探討益肾祛浊方对多囊卵巢综合征胰岛素抵抗（PCOS-IR）模型大鼠胃动素相关肽（Ghrelin）、性激素结合球蛋白（SHBG）及血清内脂素（VF）水平的影响。

方法将84只6周龄SD雌性大鼠完全随机化分组分为7组，每组各12只，具体如下：空白组、模型组、益肾祛浊方高剂量组、益肾祛浊方中剂量组、益肾祛浊方低剂量组、益肾组及二甲双胍组。

造模成功后，灌服不同剂量益肾祛浊方或益肾方（益肾祛浊方高剂量组6460 mg/kg，益肾祛浊方中剂量组3230 mg/kg，益肾祛浊方低剂量组1615 mg/kg，益肾组1400 mg/kg，空白组灌服生理盐水），以二甲双胍作对照，观察用药后各组大鼠Ghrelin、SHBG及VF水平的变化。

结果模型组Ghrelin水平较空白组显著降低（P 0.05）。

见表2。

2.4 Ghrelin、SHBG、VF与T、LH/FSH及FINS的相关性2.4.1 空白组及益肾祛浊方各剂量组Ghrelin与T水平显著相关；模型组、二甲双胍组、益肾组Ghrelin与T水平无显著相关性。

各组SHBG与T水平显著相关。

各组VF与T水平无显著相关性。

见表3。

2.4.3 空白组、益肾祛浊方各剂量组及益肾组Ghrelin与FINS水平显著相关。

各组SHBG与FINS水平无显著相关性。

空白组、益肾祛浊方各剂量组及二甲双胍组VF与FINS水平顯著相关，益肾组VF与FINS水平无显著相关性。

见表5。

3 讨论自1980年Berger首次提出IR参与PCOS发病，研究证实IR是PCOS发病的中心环节和致病基础[9]。

西医治疗PCOS-IR首选二甲双胍，该药通过促进肠道对葡萄糖的吸收，抑制糖原分解，减少肝糖原异生，提高外周组织对葡萄糖的敏感性[10]。

二甲双胍治疗PCOS-IR，可降低胰岛素水平，纠正高雄激素血症，改善排卵功能，但远期效果不够理想，且伴有胃肠道不良反应[11]。

㊃基础研究㊃基金项目:中医药防治糖尿病国际联合研究中心(2015B01022)作者单位:100078　北京中医药大学东方医院内分泌科[陈源(硕士研究生)];北京中医药大学教育部中医养生学重点实验室(吴悠㊁吴丽丽㊁刘铜华),科技处(秦灵灵)作者简介:陈源(1999-),2021级在读硕士研究生㊂研究方向:中医药防治内分泌代谢性疾病的临床与实验研究㊂E⁃mail:1095501378@通信作者:刘铜华(1963-),博士,教授,博士生导师㊂研究方向:中医药防治内分泌代谢性疾病的临床与实验研究㊂E⁃mail:thliu@滋肾丸对KKay 小鼠肝脏胰岛素抵抗以及PI3K⁃Akt⁃FOXO1通路的影响陈源　吴悠　吴丽丽　秦灵灵　刘铜华【摘要】　目的　探究不同剂量滋肾丸水提物对于糖尿病小鼠降糖效果及该药对肝脏胰岛素抵抗的作用机制㊂方法　21只KKay 小鼠随机分为模型组㊁滋肾丸高剂量组和滋肾丸低剂量组,每组7只;7只C57BL /6J 小鼠作为正常组㊂连续灌胃给药6周,滋肾丸高剂量组予2.8g /(kg㊃d),滋肾丸低剂量组予1.4g /(kg㊃d),模型组㊁正常组予等体积蒸馏水㊂观察每周空腹血糖(fasting bloodglucose,FBG),最后一周进行口服葡萄糖耐量试验(oral glucose tolerance test,OGTT),酶联免疫吸附法(enzyme⁃linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组小鼠血清中的空腹胰岛素(fasting insulin,FINS)并计算胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment⁃insulin resistance,HOMA⁃IR),qPCR 法检测胰岛素受体底物(insulin receptor substrate,IRS)㊁磷脂酰肌醇3⁃激酶(phosphoinositide 3⁃kinase,PI3K)㊁蛋白激酶B(protein kinase B,PKB /Akt)㊁叉头框蛋白1(forkhead box O1,FOXO1)㊁磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)㊁葡萄糖⁃6⁃磷酸酶(glucose⁃6⁃phosphatase,G6pase)㊁葡萄糖激酶(glucokinase,GCK)基因表达水平;苏木素⁃伊红(hematoxylin⁃eosin staining,HE)染色和糖原过碘酸雪夫染色(periodic Acid⁃Schiff staining,PAS)观察肝脏病理情况和糖原分布㊂结果　与模型组相比,滋肾丸高剂量组和滋肾丸低剂量组小鼠FBG㊁HOMA⁃IR㊁OGTT 曲线下面积明显下降,肝脏形态学改变部分减少,脂滴减少,糖原分布增加,FOXO1㊁PEPCK㊁G6pase 基因表达均明显下降,滋肾丸高剂量组GCK 基因表达水平显著上升,差异有统计学意义㊂结论　滋肾丸对于KKay 小鼠降糖效果显著,能明显改善肝脏胰岛素抵抗,其机制可能是降低FOXO1㊁PEPCK㊁G6pase 的转录水平,提高GCK 的转录水平,从而抑制糖异生,促进糖原合成有关㊂【关键词】　滋肾丸;　小鼠;　肝胰岛素抵抗;　磷脂酰肌醇3⁃激酶通路;　糖代谢【中图分类号】　R285.5　【文献标识码】　A　doi:10.3969/j.issn.1674⁃1749.2024.03.001Effects of Zishen pill on hepatic insulin resistance and PI3K⁃AKT⁃FOXO1pathway in KKay mice CHEN Yuan ,WU You ,WU Lili ,QIN Lingling ,LIU TonghuaDongfang Hospital of Beijing University of Chinese Medicine ,Beijing 100078,China Corresponding author :LIU Tonghua ,E⁃mail :thliu@【Abstract 】　Objective To evaluate the hypoglycemic effect of the traditional Chinese medicinedecoction Zishen pill on diabetic mice and the mechanism of the drug on hepatic insulin resistance.Methods 21KKay mice were randomly divided into Zishen pill high⁃dosage group and Zishen pill low⁃dosage group,a model group,and 7C57mice as the normal group.After continuous administration for 6weeks,the fasting blood glucose was observed weekly,and the oral glucose tolerance test (OGTT)was performed in the last week of treatment.The enzyme⁃linked immunosorbent assay (ELISA)was used todetect the fasting insulin(FINS)in the serum of the mice in each group and homeostasis model assessment⁃insulin resistance(HOMA⁃IR)was calculated.RT⁃qPCR was applied to detect the mRNA expression of insulin receptor substrate(IRS),phosphoinositide3⁃kinase(PI3K),protein kinase B (PKB/AKT),forkhead box O1(FOXO1),phosphoenolpyruvate carboxykinase(PEPCK),glucose⁃6⁃phosphatase(G6pase),glucokinase(GCK).Hematoxylin⁃eosin staining(HE)and periodic acid Schiff staining(PAS)were used to observe the liver morphology and glycogen distribution.Results　Compared with the C group,the FBG,HOMA⁃IR,and area under curve(AUC)of OGTT in groups H and L decreased significantly,the changes in liver morphology of C group was partially diminished in Zishen pill treated groups,with fewer lipid droplets and more glycogen distribution.The gene expression of FOXO1, PEPCK,and G6pase decreased significantly,and the expression of GCK gene in group H increased significantly.Conclusion　The Zishen pill has obvious hypoglycemic effect on KKay mice,and can significantly improve hepatic insulin resistance.The mechanism may be due to its effect of reducing the transcription of FOXO1,PEPCK,G6pase and increase the transcription of GCK,thereby inhibiting gluco⁃neogenesis and promoting glycogen synthesis.【Key words】　Zishen pill;　mouse;　hepatic insulin resistance;　PI3K pathway;　glucose me⁃tabolism 糖尿病是一类以高血糖和糖脂代谢障碍为特征的代谢性疾病,中医认为其核心病机为 阴虚燥热”[1⁃2]㊂滋肾丸是一首中医经典名方,方中只有知母㊁黄柏㊁肉桂三味药,常用于淋证㊁癃闭等肾系疾病㊂方中知母㊁黄柏滋阴清热,肉桂反佐,基本符合糖尿病病机㊂前期动物实验已经证实滋肾丸具有一定的降糖效果,如郭晓媛[3]用滋肾丸醇提取物对db/db小鼠干预四周后空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)水平开始下降,并能减轻糖尿病肾病肾小管早期肾损害,改善肾功能㊂Tang 等[4]将db/db小鼠分成滋肾丸三个剂量组,发现其显著降低小鼠血糖及糖化血红蛋白水平,并改善其糖耐量,其降糖效果可与罗格列酮不相上下㊂实验室前期研究发现滋肾丸可通过增加Occludin 和ZO⁃1蛋白在肠道中的表达来增强肠道屏障功能和降低全身炎症,改善骨骼肌形态,调节骨骼肌胰岛素信号通路[5]㊂肝脏也是胰岛素的重要靶器官之一,本研究将基于肝脏胰岛素通路,进一步验证其在自发性糖尿病动物模型KKay小鼠中的降糖作用,以及探讨其改善肝脏胰岛素抵抗的机制㊂1　材料与方法1.1　实验动物KKay小鼠21只,5周龄;C57BL/6J小鼠7只,5周龄,由北京华阜康生物科学有限公司提供,饲养于北京中医药大学SPF级动物房,室温(25±2)℃,相对湿度(50±5)%,昼夜循环12小时/12小时人工光照条件下,自由饮水,正常维持饲料喂养㊂普通饲料为小鼠全价营养颗粒饲料,KKay小鼠专用高脂饲料由北京华阜康生物科学公司提供(货号:1042)㊂1.2　伦理审查本研究的动物实验经北京中医药大学动物伦理委员会批准(伦理号:BUCM⁃4⁃2019031003⁃1089)㊂1.3　实验药物知母㊁黄柏㊁肉桂中药饮片购买于北京同仁堂制药公司㊂滋肾丸水提物提取:将中药饮片知母300g㊁黄柏300g㊁肉桂45g混合,浸泡在10倍药重的蒸馏水中1小时,煮沸45分钟后收集药液㊂再次加入相同体积的水煮沸45分钟,将两次的煎剂一起放入旋转蒸发仪中浓缩至645mL,得到1g/mL浸膏㊂将浓缩的浸膏分装收集在50mL的EP管中并保存在-20℃冰箱中,每次灌胃前纯水稀释㊂1.4　实验仪器与试剂便携式血糖仪(GLUCOCARD01-min plus,日本爱科来医疗科技有限公司,型号:GT⁃1970);酶联免疫检测仪(美国,Promega,型号:E9032);凝胶成像系统(美国,Bio⁃RAD公司,型号: ChemiDocTMXRS);研磨仪(上海净信科技有限公司,型号:JXFSTPRP⁃24);实时荧光定量PCR仪(美国,Thermo Fisher Scientific,型号:7500);台式高速冷冻离心机(美国Sigma Aldrich公司,型号:3K15);紫外分光光度计(瑞士梅特勒⁃托利多国际有限公司,型号:UV5Nano)㊂RNA Easy Fast Tissue/cell Kit(北京天根生化科技有限公司,货号:DP451);HiScript®III RT SuperMix for qPCR(+gDNA wiper)(南京诺唯赞生物科技有限公司,货号:R323);GO Taq®RT⁃Qpcr System(美国Promega生物技术有限公司,货号: A6001);小鼠超敏胰岛素ELISA试剂盒(美国ALPCO Diagnostics,货号:80⁃INSMSU⁃E01)㊂1.5　造模㊁分组与给药在适应性喂养3周后,所有小鼠禁食不禁水12小时,尾尖采血法测量FBG㊂据FBG及体重结果按随机区组设计将KKay小鼠分为3组:滋肾丸高剂量组㊁滋肾丸低剂量组㊁模型组;C57BL/6J小鼠为正常组㊂滋肾丸高剂量组根据人剂量10g黄柏㊁10g 知母㊁1.5g肉桂,换算小鼠生药给药量2.8g/kg㊂小鼠每天同一时间段灌胃给药一次,滋肾丸高剂量组予2.8g/kg,滋肾丸低剂量组予1.4g/kg,模型组及正常组予等体积蒸馏水,连续给药6周㊂1.6　标本采集第6周末次给药后,禁食不禁水12小时,摘取眼球取血,置于离心管中,不抗凝,室温下静置30分钟后在4℃,3000r/min条件下离心15分钟,吸取上清液于-20℃保存;取出肝脏,将组织的一小部分固定在多聚甲醛溶液中用于形态学观察,其余部分收集在管中并立即用液氮冷冻㊂1.7　指标检测1.7.1　FBG测定　每周固定时间,将小鼠禁食不禁水12小时,取尾尖血,用葡萄糖氧化酶法测定FBG,采用配套血糖仪及试纸㊂1.7.2　口服葡萄糖耐量试验(oral glucose tolerance test,OGTT)　第6周末次给药后,禁食不禁水12小时,测小鼠FBG作为0分钟血糖,按2g/kg给小鼠灌胃葡萄糖溶液进行OGTT试验,测定30分钟㊁60分钟㊁120分钟血糖,计算曲线下面积(area under curve,AUC)㊂AUC=0.5×(Bg0min+Bg30min)/2+0.5×(Bg30min+Bg60min)/2+1×(Bg60min+Bg120min)/2其中Bg0min为0分钟血糖,以此类推㊂1.7.3　酶联免疫吸附法测定胰岛素水平　将吸取的血清冷冻保存后检测空腹血清胰岛素(fasting insulin,FINS)水平,并计算胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment⁃insulin resistance, HOMA⁃IR)㊂HOMA⁃IR=FBG㊃FINS/22.51.7.4　肝脏组织染色　新鲜肝脏组织经4%多聚甲醛固定24小时后,石蜡包埋,3~5μm切片,根据苏木素⁃伊红(hematoxylin⁃eosin staining,HE)染色试剂盒及糖原过碘酸雪夫染色(periodic Acid⁃Schiff staining,PAS)试剂盒使用说明书步骤进行,常规光学显微镜高倍镜镜检,观察肝脏组织形态及糖原分布情况,拍照保存图片㊂1.7.5　qRT⁃PCR法测定相关基因表达水平　将肝脏组织从-80℃冰箱取出,试剂盒提取总RNA,按照PCR操作要求及Promega试剂盒说明书进行逆转录合成cDNA并扩增,反应条件:50℃2分钟,95℃10分钟,(95℃15秒,60℃1分钟,40循环),95℃15秒,60℃1分钟,95℃30秒,60℃15秒㊂以模型组的基因表达为对照,采用2-△△Ct法计算得到各个样本之间相对的基因表达水平㊂检测基因为胰岛素受体底物(insulin receptor substrate,IRS)㊁磷脂酰肌醇3⁃激酶(phosphoinositide3⁃kinase,PI3K)㊁蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/Akt)㊁叉头框蛋白1 (forkhead box O1,FOXO1)㊁磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)㊁葡萄糖⁃6⁃磷酸酶(glucose⁃6⁃phosphatase,G6pase)㊁葡萄糖激酶(glucokinase,GCK)基因表达水平㊂所测基因引物序列如表1所示㊂1.8　统计学方法实验所得数据均为计量资料,采用SPSS25.0统计软件对数据进行分析,用均数±标准差(x±s)表示㊂空腹血糖㊁糖耐量㊁胰岛素水平及胰岛素抵抗指数指标取每组6只小鼠㊂基因表达量取每组3只小鼠㊂小鼠第2周空腹血糖及OGTT试验中30分钟血糖不满足正态分布,采用非参数检验(Kruskal wallis)分析㊂其他数据采用单因素方差分析,其中小鼠肝组织FOXO1基因表达量及第3㊁4㊁5㊁6周空腹血糖满足正态分布不满足方差齐,组间比较采取Dunnett’st检验;其他数据均符合正态分布及方差齐,组间比较采取LSD检验,P<0.05为差异有统计学意义㊂2　结果2.1　滋肾丸对KKay小鼠空腹血糖的影响与正常组相比,模型组小鼠的血糖显著升高(P<0.05);与模型组相比,滋肾丸低剂量组小鼠在第3㊁5㊁6周血糖显著降低(P<0.05),从第1周开始至用药结束,滋肾丸高剂量组小鼠空腹血糖显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),且下降幅度比滋肾丸低剂量组大㊂见表2㊂2.2　滋肾丸对KKay小鼠糖耐量的影响与正常组相比,模型组小鼠的0分钟㊁30分钟㊁60分钟㊁120分钟血糖及AUC均显著升高(P<0.05);与模型组相比,滋肾丸高㊁低剂量组0分钟㊁30分钟㊁60分钟㊁120分钟血糖及AUC均显著下降(P<0.05)㊂见表3㊂2.3　滋肾丸对KKay小鼠胰岛素水平及胰岛素抵抗指数的影响与正常组相比,模型组FINS水平显著降低(P<0.05),提示早期胰岛调节功能受损;与模型组相比,高㊁低剂量滋肾丸均显著提升FINS水平(P<0.05),考虑滋肾丸可以改善早期胰岛功能㊂与正常组相比,模型组HOMA⁃IR显著升高(P<0.05),提示胰岛素抵抗㊂与模型组相比,高㊁低剂量滋肾丸均显著降低HOMA⁃IR水平(P<0.05),提示滋肾丸可以改善胰岛素抵抗㊂见表4㊂2.4　肝脏组织病理学观察2.4.1　HE染色　光镜下观察小鼠肝脏细胞HE染色情况㊂正常组肝组织肝小叶结构清晰,肝索排列规则整齐,以中央静脉为中心呈放射状分布,未见脂质沉积;模型组肝脏形态紊乱,肝小叶肝索结构消失,肝细胞肿大变性,存在大量脂肪空泡及脂质沉积㊂与模型组相比,滋肾丸高㊁低剂量组肝小叶结构较为清晰完整,肝索排列较正常,肝窦排列较为规则,中央静脉结构较完整,空泡样改变明显减少㊂见图1㊂表1　qRT⁃PCR引物序列基因名称上游引物序列(3’-5’)下游引物序列(3’-5’) GAPDH AAGATGGTGAAGGTCGGTGT GCTTCCCATTCTCAGCCTTGIRS⁃1AGCCAGTCTTCATCCAGTTGC AGATCTCCGAGTCAGTCCCACPI3K⁃ca ATTTGGCTATAAGCGGGAAC TTGCTAGGTAAGCCTTGTAACACAkt2CACCCTTCAAACCTCAGGTCAC GTCCAGGCTGTCATATCGGTC FOXO1CCTAATTCGGTCATGCCAGCGTA CCGTTGACCGAAGCCGTTTGCK CTTATGGCTGCTACTTCGTTC CTTCTAGTGCAGCAAAAGCG PEPCK CCTCAGCTGCATAACGGTCT CTGAGCATTGCCTTCCACGAACG6pase ACCTCGTCTTCAAGTGGAT GACTTCCTGGTCCGGTCTC表2　滋肾丸对KKay小鼠空腹血糖的影响(x±s,mmol/L)组别鼠只第0周第1周第2周第3周第4周第5周第6周正常组6 4.50±0.76 3.80±0.10 3.40±0.51 3.75±0.36 3.80±0.45 3.30±0.47 3.30±0.37模型组69.10±2.74a 6.90±2.12a8.70±1.74a11.73±2.34a9.80±2.37a10.70±3.62a9.60±1.14a 滋肾丸低剂量组69.00±1.87a 6.10±0.88a7.50±1.93a8.92±1.84ab8.10±3.10a 6.80±2.21ab 6.80±1.01ab 滋肾丸高剂量组68.90±0.97a 5.20±1.04b 5.90±1.47b 6.97±1.96ab 5.20±1.41b 5.70±1.85b 6.40±2.03ab 注:与正常组相比,a P<0.05;与模型组相比,b P<0.05㊂表3　滋肾丸对KKay小鼠糖耐量的影响(x±s)组别鼠只0分钟(mmol/L)30分钟(mmol/L)60分钟(mmol/L)120分钟(mmol/L)AUC 正常组6 3.35±0.4112.35±1.487.00±0.40 4.38±0.6714.16±0.79模型组610.80±3.23a32.53±1.21a29.65±1.32a21.85±3.61a51.73±3.57a 滋肾丸低剂量组6 6.20±0.95ab23.33±1.74b17.95±1.26ab9.03±1.93ab32.75±4.04ab 滋肾丸高剂量组6 5.47±1.08b23.19±3.65b16.53±5.81ab9.08±3.83ab31.40±9.70ab 注:与正常组相比,a P<0.05;与模型组相比,b P<0.05㊂表4　滋肾丸对KKay 小鼠胰岛素水平及胰岛素抵抗指数的影响(x ±s )组别鼠只FINS(ng /mL)胰岛素抵抗指数正常组623.86±1.090.70±0.11模型组620.65±1.94a 2.00±0.23a 滋肾丸低剂量组622.58±0.84b 1.36±0.16ab 滋肾丸高剂量组623.92±1.22b1.24±0.41ab注:与正常组相比,a P <0.05;与模型组相比,b P <0.05㊂注:A 正常组;B 模型组;C 滋肾丸低剂量组;D 滋肾丸高剂量组㊂图1　各组小鼠肝脏组织HE 染色(×200)2.4.2　PAS 染色　光镜下观察小鼠肝脏糖原染色,胞质PAS 反应阳性物质即为糖原,显示为紫红色,细胞核为蓝色㊂正常组肝细胞内紫红色糖原颗粒分布均匀,数量适中,提示血糖正常平稳㊂与正常组相比,模型组肝细胞内紫红色颗粒显著减少,提示肝脏糖原合成减弱;与模型组相比,滋肾丸高㊁低剂量组紫红色颗粒数量显著增加,提示糖原显著增多,与PCR 结果相一致,表明滋肾丸剂量依赖性促进糖原合成,抑制肝糖输出从而起到降低血糖的作用㊂见图2㊂2.5　滋肾丸对KKay 小鼠IRS⁃1㊁PI3K㊁AKT2㊁FOXO1㊁PEPCK㊁G6pase㊁GCK 基因表达量的影响与模型组相比,滋肾丸各剂量组FOXO1㊁PEPCK㊁G6pase 的mRNA 表达量均显著降低(P <0.05),且滋肾丸高剂量组下降幅度比低剂量组大㊂与正常组相比,模型组FOXO1的mRNA 表达量显著上升(P <0.05),但PEPCK㊁G6pase 的组间差异不符合预期㊂注:A 正常组;B 模型组;C 滋肾丸低剂量组;D 滋肾丸高剂量组㊂图2　各组小鼠肝脏组织PAS 染色(×200)与正常组相比,模型组GCK mRNA 表达量显著降低(P <0.05);与模型组相比,滋肾丸低剂量组GCKmRNA 表达量有上升趋势,但无统计学意义(P >0.05);高剂量组GCK mRNA 表达量显著上升(P <0.05)㊂与模型组相比,滋肾丸给药后IRS⁃1㊁PI3K 及Akt2的mRNA 有上升趋势,但组间差异无统计学意义(P >0.05)㊂见表5㊂3　讨论中药治疗糖尿病具有多通路㊁多靶点的优势特点,在当前时代背景下运用现代技术探究及阐明其内在作用机制是极其必要的㊂滋肾丸是来源于中医古籍中的经典方剂,组方精妙,量小药少而力专,方中以等量知母㊁黄柏为主,二者皆气寒味苦入肾经,泻火坚阴,在组方配伍中常相须而用㊂‘本草经解“言知母 主消渴热中,除邪气”,‘本草经疏“云黄柏 以至阴之气,补至阴之不足,虚则补之,以类相处”㊂二者相合,少佐温阳化气之肉桂共同起到滋阴化气之效,尤宜于消渴病之下消证㊂本实验参考既有文献研究[4],以10∶10∶1.5的比例制成水提物,探究其降糖机制及量效关系,以冀对临床中方剂应用提供帮助㊂表5　滋肾丸对KKay 小鼠肝组织相关靶基因的影响(x ±s )组别鼠只IRS⁃1PI3K Akt2FOXO1PEPCK G6pase GCK 正常组3 1.66±0.320.47±0.130.73±0.060.19±0.020.92±0.15 2.27±0.34 2.19±0.39模型组3 1.02±0.26a 1.01±0.21 1.01±0.15a 1.01±0.19a 1.01±0.13 1.01±0.19a 1.02±0.26a 滋肾丸低剂量组3 1.09±0.38a 1.71±0.61a 1.19±0.23a 0.41±0.06ab 0.52±0.16ab 0.50±0.19ab 1.62±0.31滋肾丸高剂量组31.47±0.161.53±0.36a1.35±0.53a0.29±0.06b0.35±0.22ab0.32±0.09ab1.99±0.77b注:与正常组相比,a P <0.05;与模型组相比,b P <0.05㊂ 肝胰岛素通路有转录水平以及蛋白磷酸化水平两方面的调节作用,相关研究已证实IRS㊁PI3K㊁Akt是通路上的三个重要节点[6]㊂在生理条件下,胰岛素分泌入血后,沿着IRS⁃1/PI3K/Akt2/FOXO1信号通路发生级联反应,首先与肝细胞膜上的特定INSR结合,通过募集底物IRS⁃1,IRS⁃1多个酪氨酸残基磷酸化,募集PI3K催化二磷酸磷脂酰肌醇生成三磷酸磷脂酰肌醇,后者进一步与下游Akt结合并磷酸化激活Akt㊂目前发现Akt有3种亚型,Akt1表达于大部分组织,Akt2主要表达于胰岛素效应组织,Akt3则高度表达于脑和睾丸组织[7]㊂目前的研究表明Akt2是葡萄糖代谢所必需的[8]㊂肝脏Akt2激活后进一步磷酸化FOXO1使其失活,从而释放下游糖异生基因转录及抑制葡萄糖产物生成㊂胰岛素通过这些受体激活和信号蛋白的招募/磷酸化,在肝细胞质膜上启动近端胰岛素的一系列蛋白磷酸化反应㊂FOXO1是肝脏胰岛素信号级联的关键一步,是代谢信号到细胞核的延续与转接[9]㊂资料显示,在高脂喂养的小鼠中肝脏FOXO1mRNA表达降低40%也足以降低基础的肝脏葡萄糖生成[10]㊂正常生理条件下,FOXO1停留在细胞核内,进食状态时在胰岛素作用下磷酸化失活从细胞核转移到细胞质,从而禁用其转录因子活性;在糖代谢紊乱及炎症状态下,FOXO1会发生细胞核移位从而被激活,激活的FOXO1结合转录辅激活因子过氧化物酶体增殖激活受体γ共激活因子1α[9](peroxisome proliferator⁃activated receptorγcoactivator⁃1α,PGC1⁃α),以协调糖异生转录程序,可以靶向提高PEPCK㊁G6pase两个关键酶的基因表达水平来促进糖异生㊂活性FOXO1还与辅阻遏子SIN3A结合,降低GCK 的表达,进一步促进葡萄糖输出[11]㊂GCK是己糖激酶的一种,仅存在于肝细胞和胰岛β细胞中,具有绝对专一性,其作用是催化葡萄糖生成葡萄糖⁃6⁃磷酸(glucose6⁃phosphate,G6p)㊂后者是糖原合成酶(glycogen synthase,GS)的底物,也是别构激活剂[12⁃13],可以促进糖原合酶的激活,提高糖原合成水平㊂GCK还受血糖浓度影响,在生理条件下,高血糖也可导致葡萄糖激酶从细胞核转移到细胞质[14],从而促成葡萄糖⁃G6p流动㊂GCK 催化G6p的生成同时也是有氧氧化的开始,所以GCK同时控制着肝脏葡萄糖的利用与储存[3]㊂目前GCK已成为潜在的治疗靶点,且已经出现了小分子的激活剂[15]㊂本实验以基因突变的KKay小鼠为2型糖尿病对照,在遗传易感的基础上饲以高脂饲料[16],造成外周组织对胰岛素敏感性降低,与人类2型糖尿病表现极为相似㊂实验结果表明,滋肾丸可显著降低KKay小鼠的FBG㊁OGTT AUC及HOMA⁃IR,PCR显示滋肾丸可以降低小鼠FOXO1㊁PEPCK㊁G6pase基因表达,提高小鼠的GCK基因表达,另外通过PAS 染色也证实给药后肝脏糖原增加㊂这些证据均提示药物可能通过降低FOXO1从而上调GCK基因表达㊁下调糖异生酶基因表达,抑制糖异生及促进肝糖原合成,从而改善肝脏胰岛素抵抗,降低血糖水平,可能跟IRS⁃1⁃PI3K⁃Akt2胰岛素信号通路有关㊂PCR结果提示上游IRS⁃1㊁PI3K㊁Akt2基因表达水平改变无统计学意义㊂考虑到胰岛素在上述位点的作用与转录后蛋白磷酸化有关,仍需完善蛋白免疫印迹实验进一步验证㊂此外,滋肾丸复方成分复杂,本实验只探索了该复方对胰岛素通路上的其中一条进行了研究,有可能还涉及到其他的胰岛素通路,仍有待进一步探索㊂参考文献[1]　赵进喜,王世东,张丽芬.糖尿病相关中医病名考辨[J].辽宁中医杂志,2005,32(9):889⁃890.[2]　张伯礼,薛博瑜.中医内科学[M].2版.北京:人民卫生出版社,2002:292.[3]　郭晓媛.滋肾丸干预糖尿病肾病肾小管上皮细胞焦亡作用及机制研究[D].北京:北京中医药大学,2021.[4]　TANG Y H,SUN Z L,FAN M S,et al.Anti⁃diabetic effects ofTongGuanWan,a Chinese traditional herbal formula,in C57BL/KsJ⁃db/db mice[J].Planta Med,2012,78(1):18⁃23. [5]　吴悠,陈源,胡耀木,等.滋肾丸对db/db糖尿病模型小鼠肠道屏障功能及骨骼肌转录组的影响[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(16):22⁃32.[6]　Taniguchi C M,Emanuelli B,Kahn C R.Critical nodes insignalling pathways:insights into insulin action[J].Nat Rev MolCell Biol,2006,7(2):85⁃96.[7]　常盛.PI3K/Akt信号通路与胰岛素抵抗的研究进展[J].中医药导报,2008,14(7):113⁃116.[8]　Héron⁃Milhavet L,Franckhauser C,Rana V,et al.Only Akt1isrequired for proliferation,while Akt2promotes cell cycle exitthrough p21binding[J].Mol Cell Biol,2006,26(22):8267⁃8280.[9]　丁雷.苦瓜醇提物调节ZDF大鼠肝脏糖脂代谢的机制研究[D].北京:北京中医药大学,2020.[10]　Samuel V T,Choi C S,Phillips T G,et al.Targeting FOXO1inmice using antisense oligonucleotide improves hepatic andperipheral insulin action[J].Diabetes,2006,55(7):2042⁃2050.[11]　Langlet F,Haeusler R A,Lindén D,et al.Selective Inhibitionof FOXO1Activator/Repressor Balance Modulates HepaticGlucose Handling[J].Cell,2017,171(4):824⁃835. 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论著-基础研究滋膵通脉饮对2型糖尿病大鼠糖脂代谢和胰岛素抵抗的影响！吴刚强毛叶温小凤谭军卜献春(湖南省中医药研究院附属医院内分泌老年病科，长沙市410006，电子邮箱:wugq201*********)【摘要】目的探讨滋膵通脉饮对2型糖尿病大鼠糖脂代谢和胰岛素抵抗的影响#方法取45只SD 大鼠，随机抽取10只作为空白对照组，剩余35只采用高脂高糖饲料喂养+腹腔注射链豚佐菌素的方法构建2型糖尿病大鼠模型。

将造模成功的30只2型糖尿病大鼠随机分模型组、滋膵通脉饮组和罗格列酮组，每组10只#于实验第7周开始，滋膵通脉饮组大鼠灌服滋膵通脉饮(生药量为17.6gkg),罗格列酮组大鼠灌服罗格列酮混悬液［0.42mg/(kg-d)］，其他两组大鼠均灌服同等体积的蒸馅水。

4周后检测4组大鼠血清胆固醇、三酰甘油、LDL、空腹血糖、空腹胰岛素水平，计算稳态模型胰岛素抵抗(HOMANR)指数。

结果与空白对照组比较，其余各组空腹血糖、空腹胰岛素和HOMANR指数，总胆固醇、三酰甘油和LDL水平均升高(均P<0-05)#滋膵通脉饮组和罗格列酮组空腹血糖、空腹胰岛素和HOMANR指数均低于模型组(均P<0.05)，但两组间差异无统计学意义(均P>0.05"。

滋膵通脉饮组胆固醇、三酰甘油和LDL水平低于模型组，且三酰甘油水平低于罗格列酮组(均P<0.05)；而罗格列酮组和模型组之间以上血脂指标水平差异无统计学意义(均P>0.05)。

结论滋膵通脉饮能降低2型糖尿病大鼠血糖、改善胰岛素抵抗，效果与罗格列酮相当，同时其还能调节血脂紊乱。

【关键词】2型糖尿病；滋膵通脉饮;血脂；血糖;胰岛素抵抗；大鼠【中图分类号】R587.1【文献标识码】A【文章编号】0253三304(2020)23-3085-04DOI：10.11675/j.issn.0253-4304.2020.23.19Effect of Zicui Tongmai Decoction on glycolipid metabolism andinsulin resistance io rats with type2diabetes mellitusWU Gang-qiang,MA0Ye,WEN Xiao-feng,TAN Jun,BU Xian-cOun(Deparment p Endocrinology and Geriatrios,Afi0ateP Hospital p Hunan Academyop Traditional Chinese MePicino,Changsia410006,China)(Abstract］Objective Tv explore the effect of Zicot Tongmat Decoction on glycolipid metabolism and insulin resistance V rats with type2diabetes mellitus(T2DM)-Methods Among45SD rats,10rats were randomly selected asbeank conieoegeoup,and iheeematntng35eaisweeemodeeed asT2DM eaisb-htgh-eaiand htgh-geucosedteiand intrapeotoneal injection with stoptozotocin.Then the30T2DM rats with successful modeling were randomized to model geoup,Zc.ucTongmac Decociton geoup oeeostgetiazonegeoup,wtih10eaistn each geoup.Aiihe7ih w e k oeiheeypeetmeni, eaistn ihe Zc.ucTongmac Decociton and eostgetiazonegeoupsweeeieeaied wtih Z c.u cTongma c Decoc iton(wtih aceude dog amount of17.6g/kg)and osiglitazone(0.42mg(kg，d))by gavagx,respectively,rats in the other two geoupsweeeadmtntsieeed tsomeietcdtsit e d waieebygaeage.Aeieeeoueweeks,iheeeeeesoeseeum choeesieeoe,TG, LDL,FBGand easitngtnsuetn oeeaisweeedeieemtned tn iheeouegeoups,and homeosiastsmodeea s e s menieoetnsuetn resistance(HOMA-IR)index was calculated.Results By comprOon with the blank control goup,the remaining geoupsyteeded tnceeased eeeeesoeFBG,easitngtnsuetn,HOMA-gRtndey,TC,TG and LDL(a e P<0.05).FBG, easitngtnsuetn and HOMA-gRtndeytn ihe Zc.ucTongmac Decociton and eostgetiazonegeoupsweeeeoweeihan ihosetn the model goup(lt P<0.05),but no stlisWlly significant dVferenco was found between the former two groups(lt P>0.05)-The Zicot Toogmat Decoction goup obtained lower cholesterol,TG and LDL levels as compared with the▲基金项目：湖南省自然科学基金(2016JJ6087)；湖南省中医药科研计划(201659)作者简介:吴刚强(1980-),男，博士，副主任医师,研究方向:糖尿病的中医药防治％通信作者：卜献春(1958〜)，男，硕士，主任医师、教授，研究方向:糖尿病的中医药防治，电子邮箱:**************%model g/up,and also exhibited declined TG level as compared with the rosig/tazone g/up(—1P V0.05);but there was no st—istUaVy significant ddferenco in aforementioned blood lipid indicators tevels between the rosig/tazone g/up and the model g/up(—f P>0.05).ConcUlsion Zicut Tongmat Decoction can not only oot a similar eOect on reducing blood glucose and improving insulin resistance as rosig/tazone$but also rexulate blood lipid disorder in T2DM rats.(Key words)Type2diabetes mellitus,Zicut Tongmet Decoction,Blood lipid,Blood glucose,Insulin resistance, Rai近年来，随着人们生活水平的提高和饮食结构的改变，糖尿病的发病率呈现逐年上升的趋势［1］%目前现代医学对糖尿病的研究取得了较大进展,胰岛素抵抗仍然被认为是2型糖尿病发病的中心环节。

补肾活血方对卵巢功能早衰大鼠卵巢组织外泌体相关膜蛋白的影响 作者：李涵 刘慧萍 肖贾丽珏 杨开锋 辛雨霏 来源：《湖南中医药大学学报》2022年第06期 〔摘要〕 目的 观察补肾活血方对卵巢功能早衰模型大鼠卵巢组织中外泌體相关膜蛋白表达情况及卵巢组织形态和功能的影响。方法 选取30只大鼠，腹腔注射顺铂建立卵巢功能早衰模型，造模成功后随机分为模型组、阳性对照组和中药低、中、高剂量组，每组6只。另取6只大鼠为空白组。空白组和模型组大鼠每天灌胃蒸馏水;中药低、中、高剂量组分别按每天9.72、19.44、38.88 g/kg剂量补肾活血方灌胃;阳性对照组大鼠按每天0.09 mg/kg剂量灌胃给药戊酸雌二醇片，连续21 d。每周称体质量，计算体质量增量，每天观察大鼠动情周期。末次给药后于第2天取血和卵巢、胸腺、脾脏，称脏器质量，计算脏器指数;ELISA检测大鼠血清中雌二醇（estradiol 2， E2）和抗米勒管激素（anti-Müllerian hormone， AMH）水平变化含量;HE染色观察卵巢形态变化;免疫组织化学法检测卵巢组织中外泌体膜蛋白CD63、CD81、CD82的表达水平;透射电镜观察大鼠外周血外泌体形态;Western blot检测大鼠外周血外泌体相关蛋白。结果 与空白组相比，模型组动情周期紊乱、AMH和E2减少（P<0.05，P<0.01），体质量和体质量增量明显减少（P<0.01），卵巢指数、胸腺指数明显减少而脾脏指数明显升高（P<0.01），卵泡数和成熟卵泡明显减少，闭锁卵泡增多，卵巢组织CD63、CD81、CD82蛋白表达明显下降（P<0.01）。与模型组相比，中药中、高剂量组和阳性对照组AMH和E2显著升高（P<0.01），中药高剂量组和阳性对照组动情周期恢复正常，体质量及体质量增量明显升高（P<0.01），卵巢指数、胸腺指数明显升高而脾脏指数降低（P<0.05，P<0.01），给药组卵泡数依次增多，中药高剂量组和阳性对照组蛋白表达明显升高（P<0.01）。透射电镜和Western blot证明大鼠外周血外泌体提取成功。结论 补肾活血方可以明显改善卵巢功能早衰的情况，其改善卵巢形态和功能的机制可能与提高外周血和卵巢中外泌体活性有关。

汀，可取得较好的疗效［⑻。

参考文献［1］Porst H,Mootorsi F,Rosex RC,et al.The prematuro ejacu/tbo prea-alencc and attitubes(PEPA)survey：pmvalence,comorbidities,andpmfessbnal help-seeXina［J］.European urolovy,2097,51(3):316-82.［2］崔腾腾，王宝田，桂士良，等.原发性早泄患者CIPE评分与SW 振动值相关性研究［J］中国性科学，2916,28(3):19-21.［3］田思胜4长东超，高萍，等•沈金鳌医学全书［M］.北京：中国中医药出版社,1693：347.［4］柳长华，徐春波,乔海法，等•陈世铎医学全书［M］.北京：中国中医药出版社,1699：e37-883.［5］冯奕,郑武.四位一体法治疗肝气郁结型早泄69例临床观察J］浙江中医杂志,2717,32(2)：167R63.J］黄攀攀•从“心藏神”探讨《内经》睡眠理论及天王补心丹干预老年失眠大鼠作用机制研究［D］•湖北:湖北中医药大学4916.J］谢天龙•宣肺益肾汤联合小儿推拿治疗小儿遗尿肺肾气虚证的临床观察［D］•长春:长春中医药大学4917.J］胡荣魁•国医大师夏桂成教授“心-肾-子宫轴”理论及临床应用研究［D］.南京:南京中医药大学,2713:1-143.J］金保方，李相如，周翔•徐福松教授辨治阳痿经验J］南京中医药大学学报,2003(5)：272-275.［9］马功朝，赖宇芬，张炎.早泄的行为治疗［J］・医学新知杂志, 2711,28(6)：383-561.［1］孔祥勇.刘完素火热论学术思想探析J］.吉林中医药,2016(12)：1613C916.［2］郭锦晨，王文静，段雷.“气有余便是火”理论探析J］.江西中医学院学报，2914(2)：29K1.［3］田思胜，高巧林,刘建青•朱丹溪医学全书［M］•北京：中国中医药出版社，2996：73［14］柳长华，徐春波,乔海法，等•陈世铎医学全书［M］.北京：中国中医药出版社,1699：23.［6］李国春，俞天印.五行学说并无内在逻辑矛盾——对《五行学说内在逻辑矛盾》一文的商榷［J］辽宁中医杂志，2912,39(3)：1527-1527.［6］郑伟伟.补中益气汤合封髓丹治疗口腔溃疡验案2则J］福建中医药，2017,43(1)：67.［7］罗天益•卫生宝鉴［M］.北京:人民卫生出版社4933：63.［3］罗小瑾，杨念钦，罗良燕，等.盐酸达泊西汀治疗早泄的有效性及其对精液参数的影响J］中国男科学杂志，2719(2):20-28.(收稿日期：2727-77-27)DOI：12.3966/j.issn.16726669.2221.22.239・中医性学-补肾涤痰汤对多囊卵巢综合征合并不孕患者胰岛素抵抗程度、性激素水平及妊娠情况的影响刘霞1云电2A徐比萍31陵水黎族自治县人民医院内一科，海南陵水6794006陵水黎族自治县人民医院重症医学科，海南陵水5724206海南省中医院内分泌科，海口570263［摘要】目的探讨补肾涤痰汤对多囊卵巢综合征(PCOS)合并不孕患者胰岛素抵抗程度、性激素水平及妊娠情况的影响。

七子益肾理冲汤对多囊卵巢综合征胰岛素抵抗大鼠卵巢上皮细胞炎性因子及胰岛素抵抗状态的影响陈海燕;汤玲;肖承悰【摘要】目的分析七子益肾理冲汤对多囊卵巢综合征(PCOS)胰岛素抵抗大鼠卵巢上皮细胞炎性因子及胰岛素抵抗状态的影响.方法选取SPF级Wistar雄性大鼠60只,制备胰岛素抵抗型的PCOS模型大鼠,共计入选大鼠54只,按照随机数字表法将其分成观察组(27只)和对照组(27只).观察组采用剂量为6 mL/kg七子益肾理冲汤灌胃,对照组采用等剂量蒸馏水灌胃,两组均每天灌胃1次,持续20 d.化学免疫发光法检测血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)及睾酮(T)含量,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测卵巢上皮细胞内炎性因子色素上皮衍生因子(PEDF)、内脂素(Visfatin)及白细胞介素-6(IL-6)含量,放射免疫法检测血清空腹胰岛素(FINS)及空腹血糖(FBG)含量,葡萄糖氧化酶法检测胃管给葡萄糖2h后血糖(OGTT-2 h BG)含量,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和胰岛素敏感指数(ISI).结果观察组大鼠血清LH、T含量及LH/FSH均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);观察组大鼠血清FBG、OGTT-2 h BG、FINS含量及HOMA-IR低于对照组,ISI高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);观察组大鼠上皮细胞PEDF、Visfatin及IL-6含量均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论七子益肾理冲汤可降低PCOS胰岛素抵抗大鼠卵巢上皮细胞炎性因子含量,调节LH/FSH比值,改善高胰岛素血症与高雄激素血症,使糖代谢紊乱得以调整.【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2018(015)031【总页数】4页(P12-15)【关键词】多囊卵巢综合征;胰岛素抵抗;炎性因子;七子益肾理冲汤【作者】陈海燕;汤玲;肖承悰【作者单位】北京中医药大学东直门医院妇科,北京 100700;北京中医药大学东直门医院妇科,北京 100700;北京中医药大学东直门医院妇科,北京 100700【正文语种】中文【中图分类】R271.9多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）为临床多见的内分泌失调性疾病，一般是由于代谢、内分泌与神经系统及卵巢局部调控因素不平衡所造成的病理性内分泌紊乱，其主要证候特征为高胰岛素血症、连续无排卵、高雄激素血症和卵巢多囊样变化等，其病理生理所涉及的范围比较广[1-2]。

补肾通脉方对2型糖尿病大鼠血清细胞因子及相关激素水平的影响曾凡鹏;陆付耳;杨明炜;王开富;徐丽君【期刊名称】《中医杂志》【年(卷),期】2003(44)8【摘要】目的:探讨补学通脉方对2型糖尿病(DM)大鼠炎性细胞因子及相关激素水平的影响。

方法:采用小剂量链脲佐菌素(STZ)加高热量饲养方法建立Wistar大鼠2型DM模型,并随机分为模型组、中药组及西药组,另设正常组;以葡萄糖氧化酶法检测空腹血糖(FBG)、采用放射免疫测定法检测各组大鼠血清胰岛素(INS)、白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF一α)、胰高血糖素(Glu)和胰岛素样生长因子1(IGF-1)水平,结果:与模型组比较,中药组大鼠FBG、INS均显著降低(P<0.05,P<0.01),而胰岛素敏感指数(ISI)增加(P<0.05);血清IL 1β、TNF-α显著降低(P均<0.05),Glu也明显降低(P<0.05),而IGF-1水平则显著提高(P<0.01)。

结论:补肾通脉方能降低2型糖尿病大鼠炎性细胞因子TNF-α和IL-1β水平,调整糖代谢激素(Glu和IGF-1的平衡,并可能是其降低空腹血糖和高胰岛素血症、改善胰岛素抵抗的部分作用机制。

【总页数】2页(P617-618)【关键词】补肾通脉方;2型糖尿病;大鼠;血清;细胞因子;激素;中药【作者】曾凡鹏;陆付耳;杨明炜;王开富;徐丽君【作者单位】华中科技大学同济医学院附属同济医院中西医结合研究所【正文语种】中文【中图分类】R259.871【相关文献】1.补肾调肝方对多囊卵巢模型大鼠血清TGF-β1、IGF-1、TNF-a 及激素水平的影响 [J], 陈英;梁辉;王娜2.补肾化瘀方对PCOS大鼠血清激素水平的影响 [J], 张翌蕾;潘文;汪永娟;王贵霞;李明明3.补肾通脉方对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的影响 [J], 陆付耳;杨明炜;邹欣;徐丽君4.补肾固胎膏穴位贴敷对肾虚型早期先兆流产患者血清性激素水平及细胞因子的影响 [J], 郑娜;王婷;杨丽娟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。