抗氧化剂测定方法的分类

抗氧化能力指数测定原理及应用随着人们健康意识的提高，抗氧化能力成为的焦点。

抗氧化能力是指机体在面对氧化应激时，消除和降低氧化压力的能力。

为了更好地了解机体的抗氧化能力，抗氧化能力指数的测定变得越来越重要。

本文将详细介绍抗氧化能力指数测定的原理、方法及应用。

抗氧化能力指数测定主要基于氧化还原反应的原理，通过测定样品对自由基的清除能力来评价其抗氧化能力。

一般情况下，测定的指标包括总抗氧化能力、还原力、氧自由基清除能力等。

总抗氧化能力：总抗氧化能力是指机体对氧化应激的综合防御能力，包括酶类和非酶类抗氧化物质。

测定总抗氧化能力的方法主要是基于比色或荧光法，通过检测样品对自由基的清除率来计算总抗氧化能力。

还原力：还原力是指样品对氧化剂的还原能力，通过测定样品在特定条件下的还原能力，可以评估其抗氧化能力。

常用的测定方法包括邻苯三酚自氧化法和铁离子还原法。

氧自由基清除能力：氧自由基是导致氧化应激的主要因素之一，通过测定样品对氧自由基的清除能力，可以了解其抗氧化能力。

常用的测定方法包括电子自旋共振法和化学发光法。

抗氧化能力指数测定在多个领域均有应用，如生物学、医学、营养学等。

以下是几个具体应用的例子。

生物学：在生物学领域，抗氧化能力指数测定被广泛应用于研究物种演化、生物衰老、药物筛选等方面。

通过测定不同物种或不同组织的抗氧化能力，有助于深入了解生物体的抗氧化机制和衰老过程。

医学：在医学领域，抗氧化能力指数测定可以帮助医生评估患者的抗氧化状态，预测其对疾病的易感性。

例如，某些疾病如癌症、糖尿病等与机体的抗氧化能力密切相关，通过测定患者的抗氧化能力，可以为疾病的预防和治疗提供参考。

营养学：在营养学领域，抗氧化能力指数测定可以评价食品的营养价值。

机体的抗氧化系统需要多种营养素的支持，如维生素C、维生素E、硒等。

通过测定食品中的抗氧化物质含量，可以为膳食营养推荐提供依据。

抗氧化能力指数测定对于评价机体的抗氧化状态具有重要意义，它不仅有助于了解个体的健康状况，还可为疾病的预防和治疗提供指导。

抗氧化剂抗氧化能力测定法English Answer:Antioxidant Capacity Assay Methods.Antioxidant capacity assays are widely used to evaluate the ability of a substance to inhibit oxidation. Various methods have been developed to measure antioxidant capacity, each with its own advantages and limitations. Here are some commonly used methods:(1) DPPH Assay (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl)。

The DPPH assay is a simple and widely used method to measure the radical scavenging capacity of antioxidants. In this assay, DPPH, a stable free radical, is reduced to its non-radical form by antioxidants, leading to a color change from purple to yellow. The reduction rate and extent are proportional to the antioxidant capacity of the sample.(2) FRAP Assay (Ferric Reducing Antioxidant Power)。

The FRAP assay measures the ability of antioxidants to reduce ferric ions (Fe3+) to ferrous ions (Fe2+). Antioxidants reduce Fe3+ to Fe2+ in the presence of a chromogenic substrate, resulting in a color change that can be quantified spectrophotometrically. The FRAP assay is commonly used to assess the reducing power of antioxidants.(3) ABTS Assay (2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid))。

抗氧化剂抗氧化活性的测定方法(二)＊王　会1　郭　立2　谢文磊11(河南工业大学化学化工学院,郑州,450052)　2(河南省粮油机械工程有限公司,郑州,450003)摘　要　综述了抗氧化剂抑制脂质氧化、清除自由基、抑制自由基对底物的氧化降解以及还原能力4类测定抗氧化活性的方法,并讨论了评价或表征测定结果的方法和参数以及对测定方法的要求。

关键词　抗氧化剂,抗氧化活性,测定方法　第一作者:硕士研究生(谢文磊为通讯作者)。

＊此篇文章续本刊2006,32(3):92～96　收稿日期:2005-12-053.3　以抗氧化剂抑制自由基对底物的氧化降解为基础的方法此法与3.1.3.2方法不同之处在于测试体系中既有底物又有自由基,但底物自身不能生成自由基,它与外源自由基反应,形成有荧光或带颜色的特征物质,抗氧化剂的加入使生成的特征产物减少,由此可测得抗氧化活性。

3.3.1　ORAC 法ORAC (oxygen radical absorbance capacity ,氧自由基吸收能力)法是近年来由Cao 等人[31]在Glaz -er [32]研究的基础上发展起来的,原理如下:天然蛋白质β-藻红蛋白(β-phy coerythrin ,β-PE )在540nm 光波激发下可发射565nm 的荧光。

在有自由基或氧化剂时,β-PE 的荧光逐渐减弱;当有抗氧化剂存在时,β-PE 的荧光减弱被抑制。

自由基或氧化剂可用AAPH (产生过氧自由基)、H 2O 2-Cu 2+(主要产生HO ·)和Cu 2+。

使用AAPH 时,可测量所有公认的抗氧化剂,如抗坏血酸、α-生育酚、β-胡萝卜素。

使用Cu 2+-H 2O 2时,可测量甘露醇、葡萄糖、尿酸以及过渡金属螯合剂这类物质,不用于测定抗坏血酸、α-生育酚[33]。

测定结果以Trolox (标准抗氧化剂)当量表示。

此法是一种新的、独特的评价各种物质抗氧化活性的方法。

一DPPH自由基清除能力仪器及药品：酶标仪、紫外-可见分光光度计、甲醇、DPPH等DPPH 即1，1-二苯基-2-苦肼基自由基，是一种稳定的自由基，其甲醇溶液呈紫色，并在517 nm处有强吸收。

参考Braca et al. (2001)的方法进行测量。

取0.1 ml样品，加入3 ml 0.004％DPPH 甲醇溶液（质量分数）。

（0.02g溶于500ml甲醇溶液。

）混合均匀后，静置30 min后在517 nm处测定吸光值。

抑制率采用公式[(A0－A1)/A0] · 100计算，其中A0（加0.1ml甲醇和3mlDPPH甲醇溶液）为加入样品前的吸光值，A1 为加入样品后的吸光值。

（空白样采用甲醇。

用甲醇溶液调零。

）配置各个级分不同浓度的甲醇溶液，浓度范围可以先做预实验，大致在1mg-1000mg/l 之间：测定吸光值计算DPPH自由基清除率，绘制吸收曲线，找出其IC50二FRAP法测定抗氧化能力药品：醋酸纳、醋酸、三吡啶基均三嗪（2,4,6-Tripyridyl-s-triazine，TPTZ）、盐酸、FeCl3·6H2O、维生素C（L-Ascorbic Acid）（1）300mmol/L的醋酸盐缓冲液（pH=3.6）：3.1g C2H3NaO2·3H2O ＋16mL C2H4O2 溶于1L容量瓶中定容。

（或着是1.869g醋酸钠）（2）10mmol/L三吡啶基均三嗪（2,4,6-Tripyridyl-s-triazine，TPTZ，分子量312.33）溶于40mmol/L HCl中：称取0.312g三吡啶基均三嗪溶于50ml小烧杯中，加入0.34ml浓HCl（约11.7mol/l）搅拌均匀，然后定容到100ml容量瓶中。

（3）20mmol/L FeCl3·6H2O溶液，称取2.703gFeCl3·6H2O溶解于200ml蒸馏水中，然后定容到500ml容量瓶中FRAP试剂：25mL 醋酸盐缓冲液＋ 2.5mL TPTZ溶液＋ 2.5mL FeCl3·6H2O溶液（10:1:1）标准样：0.1-1mmol/L的维生素C（L-Ascorbic Acid）溶液FRAP分析步骤：取0.1 ml 样品放入10ml试管中，加入新鲜的FRAP试剂3.0 ml，然后置于25℃恒温水浴中，5 min后用紫外分光光度计在波长为593 nm处测吸光值，（空白样采用去离子水。

抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法抗氧化酶是生物体内重要的防御系统，它们通过清除自由基来保护细胞免受氧化损伤。

其中，超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）和过氧化氢酶（CAT）是三种主要的抗氧化酶。

测定这些酶的活性对于评估生物体的抗氧化能力具有重要意义。

本文将介绍几种常用的抗氧化酶活性测定方法。

1. 超氧化物歧化酶（SOD）活性测定方法SOD是一种能够催化超氧阴离子自由基（O2）歧化为氧气（O2）和过氧化氢（H2O2）的酶。

常用的SOD活性测定方法包括：氮蓝四唑（NBT）法：利用NBT在超氧阴离子自由基存在下被还原成蓝色化合物的特性，通过测定反应液的吸光度变化来计算SOD活性。

羟胺法：利用羟胺与超氧阴离子自由基反应硝酸盐，通过测定硝酸盐的量来计算SOD活性。

2. 过氧化物酶（POD）活性测定方法POD是一种能够催化过氧化氢（H2O2）分解为水和氧气的酶。

常用的POD活性测定方法包括：愈创木酚法：利用愈创木酚在过氧化物酶存在下被氧化红色化合物的特性，通过测定反应液的吸光度变化来计算POD活性。

邻苯三酚法：利用邻苯三酚在过氧化物酶存在下被氧化紫色化合物的特性，通过测定反应液的吸光度变化来计算POD活性。

3. 过氧化氢酶（CAT）活性测定方法CAT是一种能够催化过氧化氢（H2O2）分解为水和氧气的酶。

常用的CAT活性测定方法包括：紫外分光光度法：利用过氧化氢在紫外光下具有吸收的特性，通过测定反应液的吸光度变化来计算CAT活性。

酶偶联法：利用过氧化氢在过氧化物酶存在下被氧化水的特性，通过测定水的量来计算CAT活性。

抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定的实验步骤与注意事项实验步骤1. 样品准备提取酶：根据实验目的，选择合适的组织或细胞提取酶。

常用的提取缓冲液包括磷酸盐缓冲液、TrisHCl缓冲液等。

离心：将提取液离心，分离上清液和沉淀物。

上清液中含有目标酶，沉淀物则含有杂质。

蛋白质定量：使用 Bradford 法或 Lowry 法等蛋白质定量方法测定上清液中的蛋白质浓度。

抗氧化能力分析方法抗氧化能力分析方法是评估物质对氧化损伤的抵抗能力的一种方法。

氧化损伤是指由于自由基和其他氧化物质的作用而导致的细胞和组织的损伤，与许多疾病的发展有关。

抗氧化能力分析方法可以帮助我们了解物质的抗氧化能力，进而在食品、医药和化妆品等领域中的应用。

以下是几种常用的抗氧化能力分析方法：1.自由基清除能力分析法：自由基清除能力是物质对自由基的消除能力，常用的分析方法包括DPPH自由基清除法、ABTS自由基清除法和超氧阴离子自由基清除法等。

这些方法通过测定物质与自由基反应后的颜色变化来评估其抗氧化能力。

2.还原能力分析法：还原能力是物质还原氧化剂的能力，可以通过测定物质与还原剂反应后的颜色变化来评估。

常用的方法有铁还原能力法、铁螯合能力法和硫酸钼蓝法等。

3.抗氧化酶活性分析法：抗氧化酶是一类能够清除自由基和其他氧化物质的酶，包括超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）和谷胱甘肽还原酶（GR）等。

通过测定这些酶的活性，可以评估物质对氧化损伤的抵抗能力。

4.氧化指标分析法：氧化指标是反映物质氧化损伤程度的指标，通常通过测定脂质过氧化产物、蛋白质氧化产物和DNA氧化产物等来评估。

常用的方法有TBARS法、氧化还原电位法和免疫学方法等。

5.细胞实验分析法：细胞实验可以模拟体内环境，通过测定细胞对氧化损伤的抵抗能力来评估物质的抗氧化能力。

常用的方法有细胞存活率测定法、DNA损伤测定法和细胞色素C释放法等。

综上所述，抗氧化能力分析方法有多种不同的方法，可以通过测定自由基清除能力、还原能力、抗氧化酶活性、氧化指标和细胞实验等来评估物质的抗氧化能力。

这些方法在食品、医药和化妆品等领域中的应用，有助于筛选和评估具有抗氧化性能的物质，为开发新的抗氧化剂提供科学依据。

固相萃取-超高效液相色谱法测定菜籽油中的三种抗氧化剂作者：杨眉宋明雄业润泽来源：《粮食科技与经济》2020年第07期摘要：本文建立了固相萃取结合超高效液相色谱测定粮油中的三种抗氧化剂（BHT、BHA、TBHQ）的方法。

样品经乙腈提取和C18固相萃取柱净化，用全自动平行浓缩仪蒸干，用乙腈定容，过滤后进入高效液相色谱测定，外标法定量。

结果表明，三种抗氧化剂线性关系良好（R>0.999），加标回收率为100.4%～100.8%，精密度RSD为1.53%～1.63%。

本方法简便快捷，结果更加准确，并成功应用于实际粮油样品中三种抗氧化剂的测定。

关键词：固相萃取-超高效液相色谱法;菜籽油;固相萃取;三种抗氧化剂中图分类号：TS227作者简介：杨眉，女，硕士，研究方向为粮油监测分析工作。

现如今加工业发展迅速，大部分食品及药品中都含有人工合成抗氧化剂。

其中，丁基羟基茴香醚（butylated hydroxyanisole，BHA）、二丁基羟基甲苯（butylated hydroxytoluene，BHT）和特丁基对苯二酚（tert-butyhydroquinone，TBHQ）是我国允许使用的三种食品中抗氧化剂。

抗氧化剂作为食品添加剂，可以帮助对抗食品变质，防止油脂及制品、饼干、罐头等含油脂食品的酸败。

经调查和统计研究，发现食品中添加抗氧化剂会导致人体患上前列腺癌等一系列相关疾病，因此对这三种抗氧化剂的使用有着一定的限制。

近年来，对食品中抗氧化剂的分析检测有不少研究报道[1-5]，随着现代分析检测技术的发展，目前多为气相色谱法、高效液相色谱法、气相色谱-质谱联用法和液相色谱-质谱法等[6-8]。

这些方法大多数涉及复杂的样品前处理，操作比较复杂，耗费试剂较多，处理过程容易造成待测成分损失而使测定结果产生误差，样品量大时，耗费时间较多，难以满足日常工作需要，因此寻求一个简便而快速的测定这三种物质的分析方法十分有必要。

FRAP法测定抗氧化活性-铁离子还原法- TPTZ实验1 实验原理FRAP, 是Ferric ion reducing antioxidant power的缩写。

大意是指：用铁离子(Fe3+)还原的方法，测定物质的抗氧化活性，本质上属于一种用氧化还原原来评价抗氧化活性的化学方法。

铁离子(Fe3+)还原后，生成亚铁离子(Fe2+)，亚铁离子与2,4,6-三吡啶基三嗪三吡啶三嗪TPTZ (2,4,6-Tris(2-pyridyl)-s-triazine)结合，生成Fe2+-TPTZ络合物。

反应可简单地表示如下：由于Fe2+-TPTZ络合物在593nm处在很高的吸收峰，且显深蓝色，所以，可能通过测量A593 nm值可以反映出Fe2+浓度。

从而反映出亚铁离子(Fe2+)的生成量，进一步地，反映出物质(抗氧化剂A)的还能能力。

还原性，就是供电子能力。

而供电子能力又是抗氧化活性的重要的一个方面。

所以，FRAP测定法就可以间接地反应某物质的抗氧化活性。

间接地，反映出物质(抗氧化剂A)的抗氧化能力。

这个反应需要在低pH的溶液中进行。

FeCl3要过量[1].2 溶液的配制[1]样品液:用适当的溶剂(如乙醇，水)配制浓度分别为0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0 mg/mL各样品溶液(根据其还原活性进行调整)和对照Trolox溶液和BHA溶液。

盐酸溶液(40 mmol/L):取浓盐酸(12 mol/L) 0.1 mL加水至30 mL，置于避光处，备用。

醋酸钠缓冲溶液(0.3 mol/L):称取醋酸钠5.1 g，加冰醋酸20 mL,用水稀释定容至250 mL，至PH为3.6，置于避光处。

TPTZ溶液(10 mmol/L):称取TPTZ样品31.233 mg，用40 mmol/L的盐酸定容至10 mL, 置于冰箱中冷藏备用。

FeCl3.溶液(20 mmol/L)：称取FeCl3.3(H2O) 27.05mg加入5mL蒸馏水，混匀，备用。