血清谷丙转氨酶测定标准操作规程
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目录1. 检测原理2. 标本采集与处理2.1 受检者的准备2.2 静脉采血2.3 抗凝剂2.4 标本处理3. 试剂3.1 试剂3.2 校准血清3.3 试剂、校准血清的稳定性4. 仪器5. 操作6. 计算7. 操作性能7.1 精密度7.2 准确度7.3 灵敏度7.4 可报告范围7.5 特异性7.6 干扰8. 参考值9. 临床意义附录A: 参数1. 检测原理谷丙转氨酶催化L-丙氨酸的氨基转移,生成丙酮酸。
丙酮酸与NADH在LDH的催化下反应生成乳酸和NAD+。
NADH在340nm处有特异吸收峰,其被氧化的速率与血清中ALT的活性成正比,在340nm处测定NADH下降速率,即可测出ALT活性。
ALTL-丙氨酸+ a-酮戊二酸---------- 丙酮酸+ L-谷氨酸LDHNADH + 丙酮酸+ H+---------- L-乳酸+ NAD+2.标本采集与处理2.1 受检者的准备:病人空腹12h,不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外,对于体检者,采血的季节都应做相关记录,因为样本中各项目的含量有季节性变动,为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2 静脉采血:除非是卧床的病人,一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布,会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟,一般从肘静脉取血,使用止血带的时间不超过1分钟,穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂:血浆使用肝素或EDTANa2(1mg/mL)作为抗凝剂。
2.4 标本处理:血标本室温放置30min~45min后离心分离血清或血浆,在两小时内检测完毕;如两小时内不能检测完毕,将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。
3.试剂3.1 试剂:本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司ALT试剂盒,为液体双试剂,各组分如下:3.2:校准血清使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。
血清谷丙转氨酶标准曲线血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)是一种存在于细胞质中的酶,主要存在于肝脏、肾脏和心肌等组织中。
血清谷丙转氨酶的检测可以帮助医生判断肝脏功能是否正常,对于诊断肝脏疾病具有重要的临床意义。
而血清谷丙转氨酶的标准曲线则是进行血清谷丙转氨酶测定的重要参考依据之一。
一、实验原理。
血清谷丙转氨酶标准曲线实验是通过将不同浓度的血清谷丙转氨酶标准品加入到反应系统中,测定其对应的吸光值,然后根据吸光值与血清谷丙转氨酶浓度的关系绘制出标准曲线。
通过标准曲线可以准确地计算出待测样本中血清谷丙转氨酶的浓度,从而判断肝脏功能的健康状况。
二、实验步骤。
1. 准备工作,将实验所需的试剂和仪器准备齐全,并按照实验要求进行预处理。
2. 标准曲线制备,依次取一系列不同浓度的血清谷丙转氨酶标准品,加入到反应系统中,然后测定其吸光值。
3. 数据处理,将实验得到的吸光值与标准品的浓度进行对应,然后绘制标准曲线。
4. 标准曲线验证,使用已知浓度的血清谷丙转氨酶标准品进行实验,验证标准曲线的准确性。
5. 待测样本测定,将待测样本加入到反应系统中,测定其吸光值,并利用标准曲线计算出样本中血清谷丙转氨酶的浓度。
三、实验注意事项。
1. 实验过程中要严格按照操作规程进行,避免操作失误导致实验结果不准确。
2. 实验室操作要注意个人防护,避免接触有害化学品。
3. 实验中使用的试剂和仪器要保持干净整洁,确保实验结果的准确性。
4. 实验结束后要及时清理实验台面和仪器,做好实验室卫生。
四、实验结果分析。
通过血清谷丙转氨酶标准曲线实验,我们可以得到待测样本中血清谷丙转氨酶的浓度,进而判断肝脏功能的健康状况。
标准曲线的制备和验证是保证实验结果准确性的重要步骤,实验中需要严格按照操作规程进行,确保实验结果的可靠性。
总之,血清谷丙转氨酶标准曲线实验对于肝脏功能的评估具有重要的临床意义,正确的实验操作和准确的数据处理是保证实验结果准确性的关键。
丙氨酸氨基转移酶检测方法丙氨酸氨基转移酶(ALT)是一种重要的肝脏酶,也是一种常见的生化指标。
检测方法通常用于判断肝脏功能的健康程度和疾病的演变趋势。
下面,我们将对丙氨酸氨基转移酶检测方法进行详细的阐述。
一、常规检测方法常规检测方法是指采用血清学方法检测ALT水平。
具体步骤如下:1.患者空腹4~8小时。
2.采集3~5ml静脉血标本,禁止吸烟和饮酒。
3.将血样放于离心管中,进行离心处理,得到血清样本。
4.通过检测仪器检测血清ALT酶的含量。
二、生物传感器检测方法生物传感器检测方法可以检测非常低的ALT水平,可以提供更加精确的测试结果。
具体步骤如下:1.准备含有具有高选择性的生物传感器的电极。
2.采集患者的静脉血标本。
3.将血样与生物传感器电极接触并依据特定的工艺条件进行分析。
4.通过仪器获得ALT的浓度明确的结果。
三、免疫学方法免疫学方法采用免疫学技术分析ALT特定抗体的含量。
具体步骤如下:1.准备特定的抗ALT抗体试剂。
2.采集患者的静脉血标本。
3.加入抗ALT抗体图谱,进行特异性反应,每个抗原对应一个抗体。
4.使用适当的试剂盒,对空白对照样品和样品进行ELISA测定。
5.通过光学振荡仪读取ALT特定抗体的含量并获得浓度明确的结果。
综上所述,以上列出的三种方法都是常用的丙氨酸氨基转移酶检测方法。
针对不同的病情和检测需求选择不同的检测方法非常重要。
总之,如果您的ALT测试结果不正常,医生会建议您进一步进行了解。
您可以向医生咨询,了解其他可能涉及的测试方法和预防方法。
r-谷胺酰转肽酶(GGT)测定的标准操作程序【应用范围】体外检测血清、血浆GGT浓度测定。
【适用仪器】Olympus AU-2700全自动生化分析仪。
【程序改变】严格遵循仪器、试剂说明书及校准品使用说明。
【方法学原理】GGT催化谷氨酰基转移给受体的反应。
本法以L-γ-谷氨酰-3-羧基-4-苯基重氮酸为底物,将底物上的谷氨酰基转移至受体双甘肽,生成5-氨基-2-硝基苯甲酸盐。
在405 nm进行吸光度检测,吸光度升高的速率与标本中GGT活力成正比。
GGTL-γ-谷氨酰-3-羧基-4-苯基重氮酸 + 双甘肽5-氨基-2-硝基苯甲酸盐 + L-γ-谷氨酰双甘肽【试剂】1.在测定时各组分和浓度试剂1(R1)双甘氨肽试剂2(R2)L-γ-谷氨酰-3-羧基-4-苯基重氮酸试剂稳定性与贮存试剂避光保存于2-8℃,若无污染,可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
2.校准品:DiaSys TruCal U。
3. 质控品:Randox Assayed Multiseral Level 1 and Level 2。
【标本收集与准备】1.血清或血浆标本根据实验室标准采集程序采集标本,适用标本为血清或肝素抗凝血浆(肝素钠抗凝结果高0.5mmol/l),不可从正在静脉滴注手臂上采血,上机标本不能有凝块,样品采集后2天内离心标本,分离血清,血清或血浆标本室温保存4天,冷藏7天,冷冻保存6个月。
血清或血浆钠结果高于线性不建议稀释。
【操作步骤】1.仪器测定参数设置Test Name:Sample: Volume L LL LLSec. ODMethod: First LLast LReaction Slope:Measuring Last LMeasuring LastLinearity ANo-Lag-Time:Period2.试剂准备:将准备好的试剂置仪器试剂盘中(8℃)。
3.校准校准物的准备:将校准物从冰箱取出,冻干校准物按说明书加入蒸馏水复溶,轻轻颠倒混匀3次,不可用力震摇,室温放置30分钟至完全溶解;液体校准物从冰箱取出,室温放置15分钟以平衡至室温。
授课对象:06级检验1-5班课时:2学时血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定(赖氏法)目标:1.掌握赖氏法测血清ALT的原理及注意事项2.掌握试剂的配制熟练地制作标准曲线3.规范地进行ALT测定4.了解血清ALT测定的临床意义实验用品:配制试剂用的各种器皿(烧杯、容量瓶、电炉、分析天平等)、37℃水浴箱、721型风光光度计、坐标纸等原理:丙氨酸和α-酮戊二酸在血ALT的作用下生成丙酮酸及谷氨酸,在酶反应达到规定时间时,加入2.4-二硝基苯肼-盐酸溶液以终止反应。
生成的丙酮酸与入2.4-二硝基苯肼作用,生成丙酮酸入2.4二硝基苯腙,苯腙在碱性条件下显红棕色。
根据显色之深浅,求得血清中丙氨酸氨基转移酶活力。
试剂:1. 0.1molPH7.4磷酸盐缓冲液称取磷酸氢二钠(Na2HPO4AR)11.928g,磷酸二氢钾(KH2PO4AR)2.176g,加少量蒸馏水溶解并稀释至1000mL。
2. ALP基质液称取DL丙氨酸[CHCH(NH)COOH]1.79g,α-酮戊二酸[COOH (COCOOH)29.2mg于烧杯中,加入0.1mol/L PH7.4磷酸盐缓冲液80mL,煮沸溶解后待冷,用摩尔NaOH溶液调节PH至7.4(约加入0.5ml),再用0.1mol/LPH7.4磷酸盐缓冲液稀释至100mL,混匀,加氯仿数滴,置冰箱保存数周。
3.1mmol/L2.4-二硝基苯肼溶液称取 2.4-二硝基苯肼[(NO)CHNHNH AR]19.8mg,用10mol/L HC110mL溶解,然后加蒸馏水至100mL,置棕色瓶内,冰箱保存。
4.0.4mol/L NaOH溶液。
5.2mmol/L丙酮酸标准液精确称取丙酮酸钠[CHCOCOONa AR]22.0mg于100mL容量瓶中,加0.1mol/L PH7.4磷酸盐缓冲液至刻度。
此液应新鲜配制,不得久放。
操作:血清ALT测定步骤(赖氏法)加入物(mL)R B血清0.1 0.1ALP基质液0.5 —混匀,置37o C水浴30min2.4-二硝基苯肼0.5 0.5ALP基质液—0.5混匀,置37o C水浴20min0.4mol/L NaOH 5.0 5.0将上述两管混匀,10min后,用蒸馏水调零,λ=505nm比色读取各管吸光度值,用测定管A-对照管A,查标准曲线得ALT活力单位。