高效液相色谱法测定盐酸普鲁卡因

芳酰胺类药物杂质间检查
1.盐酸普鲁卡因中对氨基苯甲酸的检查
Байду номын сангаас水解
-CO2
H2N
COOCH2CH2N(C2H5)2 ·HCl H2N
COOH
H2N
O
O
O
盐酸普鲁卡因原料检查中对氨基苯甲酸的量不得过 0.5%，注射液和原料均采用HPLC法来检查对氨基 苯甲酸的限度。
2.对乙酰氨基酚的杂质检查
(1)乙醇溶液的澄清度与颜色
中间体对氨基酚的有色氧化产物在乙醇中显橙红 色或棕色。（比浊，比色）
(2)对氨基酚及有关物质：
中间体、副产物及分解产物（例：对氨基酚、对 氯乙酰苯胺、O-乙酰基对乙酰氨基酚、偶氮苯、 氧化偶氮苯、苯醌和醌亚胺等），2010版药典采 用高效液相色谱法。
药典规定：含对氨基酚不得过0. 005 % ；其他杂质 峰面积均不得大于对照品溶液中对乙酰氨基酚的 峰面积（0.1%);杂质总量不得过0.5%。

15
药典系统适应性要求
分离度
分离度大 于1.5
理论 塔板数
理论塔板 数均大于 2000
拖尾 因子
拖尾因子 应在0.9 5-1.05 之间
精密度
峰面积的 相对标准 偏差不大 于2.0%
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精密度试验
• 取10μl样品溶液，按所选的色谱条件 进样，记录色谱图，如分离度、理论 板数、拖尾因子符合要求，则进行精 密度试验以进一步考察方法。
HPLC assays for the determination of prilocaine and proc aine drug combinations. Journal of Pharmaceutical and B iomedical Analysis.2002，30：49-58. • Mugunthu R. Dhananjeyan. Crystal Bykowski，et. Simult aneous determination of procaine and para-aminobenzoic acid by LC–MS/MS method.Journal of chromatography B.2007，847:224-230
反应进行不充分，
NO2酯ຫໍສະໝຸດ NO2生成各种杂质
化 O2N
CO2CH2CH2N（C2H5）2 Fe + HCl
法
H2N
HCl CO2CH2CH2N（C2H5）2
procaine水解 产生PABA
O
H2N
C OCH2CH2N（C2H5）2 HCl
3
主要杂质——对氨基苯甲酸
O
+ HN
H2N
+ H2N
OH

筛）３份，每份约１ ０ｇ，精密称定，对银线莲样品中的芦丁和水仙苷进行含量测定，结果（见表４）。

表４　银线莲样品的测定结果名称浓度（μｇ·ｇ－１）ＲＳＤ（％）芦丁２０ ４９１ ７８水仙苷５ ５７２ ４６４　结论在进行供试品溶液的制备时，本实验考察了不同梯度浓度的乙醇提取供试品，分别采用，依次以５０％、６０％、７０％、８０％、９０％的乙醇进行提取进行提取供试品，其中，采用６０％乙醇提取得到的目标物峰面积最多，故采用６０％乙醇作为提取的最佳溶剂。

采用高效液相色谱法测定加热回流提取与超声提取这两种提取方式所得到的目标物含量，通过比较，发现超声提取法所得到的目标物含量更多，故本实验选择超声提取法。

本实验首次采用高效液相色谱法对银线莲中的芦丁和水仙苷进行含量测定。

此方法的线性范围在１２５～８０μｇ·ｍＬ－１之间，测得银线莲中芦丁和水仙苷的含量分别为２０ ４９μｇ·ｇ－１和５ ５７μｇ·ｇ－１，该方法简单快速，并且具有较高的灵敏度，重现性和准确性，能够为银线莲的有效成分的研究和深入的药理实验提供参考。

参考文献〔１〕黄丽萍 ＬＣ ＭＳ联用技术分析金线莲中黄酮类和银线莲中核苷类活性成分及银线莲指纹图谱的研究〔Ｄ〕 福建医科大学，２０１４ 〔２〕马赞留，蔡红海，崔成华，等 金线莲与银线莲活性成分的分析〔Ｊ〕 南方农业，２０１６，１０（３）：１６６ １６６〔３〕金越，吕勇，韩国柱，等 槲皮素及异槲皮素、芦丁抗自由基活性的比较研究〔Ｊ〕 中草药，２００７，３８（３）：４０８ ４１２〔４〕潘英明，梁英，朱志仁，等 槐花米抗氧化成分的提取及其活性研究〔Ｊ〕 林产化学与工业，２００７，２７（２）：４１ ４４〔５〕李兴泰，姜波，王艳颖 槐米芦丁清除超氧阴离子及保护线离体作用的研究〔Ｊ〕 中医药信息，２００７，２４（６）：６６ ６８〔６〕吴涛，杨建雄，李宝茹，等 芦丁抗疲劳作用的实验研究〔Ｊ〕 临床医学，２０１３，（３）：９０ ９２〔７〕付俊录 芦丁对运动条件下小鼠肝糖原和肌糖原含量的影响〔Ｊ〕 医学信息，２００９，２２（６）：９５８ ９６０〔８〕田洁，宋小刚，陈志武，等 芸香苷对实验性急性胰腺炎的保护作用与抗氧化的关系〔Ｊ〕 中国临床药理学与治疗学，２００４，９（４）：４５５ ４５８〔９〕程青云 布渣叶总黄酮调血脂谱效关系研究〔Ｄ〕 广州中医药大学，２０１４ＨＰＬＣ ＤＡＤ法快速筛查未知药膏中的３种局部麻醉药汪嘉丽１，２，范婷婷２ （１ 南京中医药大学，江苏南京２１００４６；２ 常州市食品药品监督检验中心，江苏常州２１３０２２）摘要：目的　建立用于快速筛查未知药膏中是否含有利多卡因、盐酸普鲁卡因、盐酸丁卡因３种常用局部麻醉药品的ＨＰＬＣ ＤＡＤ方法。

H2N
C O O C H2C H2N
C2H5 C2H5
.
HCl
盐酸普鲁卡因（procaine hydrochloride)
C H3( C H2)3N H
C O O C H2C H2N
C H3 C H3
.
HCl
盐酸丁卡因（tetracaine hydrochloride)
H2N
C O O C2H5
苯佐卡因(benzocaine)
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非水溶液滴定法
利用本类药物分子结构中的芳香第一胺或 侧链烃胺基的弱碱性，以冰醋酸为溶剂， 用结晶紫指示液指示终点。为消除滴定误 差，滴定结果用空白试验校正。
如供试品碱性较弱，终点突跃不明显，可 加入醋酐，提高其碱性，使终点突跃明显。
有机碱的硫酸盐，因硫酸在滴定液中酸性 很强，只能滴定至HSO4-。
药物分析
Pharmaceutical Analysis
第六章第二节 胺类药物的分析
1
胺类药物的分类
芳胺类 对氨基苯甲酸酯类 酰胺类 芳烃胺类 苯乙胺类 脂肪胺类 丙胺类 磺酰胺类
2
一 对氨基苯甲酸酯类药物的分析
3
对氨基苯甲酸酯类药物结构
基本结构
H R1 N
0 C OR2
4
典型药物
低温时反应太慢，经试验，可在室温（10～ 30℃）条件下进行。 3、滴定的速度：重氮化反应为分子反应，反应 速度较慢，所以滴定速度不宜过快。 4、加入适量溴化钾加速反应
26
指示终点的方法 1、外指示剂法：碘化钾-淀粉糊剂或试纸 2、永停滴定法：自动永停滴定仪
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非水溶液滴定法
盐酸丁卡因侧链烃胺的叔胺氮具有碱性， 可采用非水溶液滴定法测定含量。将供试 品溶解在冰醋酸中，以结晶紫为指示剂， 用高氯酸液（0.1mol/L）滴定至终点，溶 液显绿色。