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高效液相色谱法测定对乙酰氨基酚片中防腐剂含量摘要目的：建立对乙酰氨基酚片中防腐剂（羟苯甲酯、羟苯乙酯和羟苯丙酯）的含量测定方法并检测防腐剂含量。
方法：采用高效液相色谱法同时测定对乙酰氨基酚片成品中三种防腐剂的含量，色谱柱为Venusil，MP C18（4.6mm×250mm，5μm），以甲醇-1%冰醋酸（60:40）为流动相，流速为 1.0ml/min，柱温：30℃，检测波长：254nm。
结果：HPLC法可同时测定对乙酰氨基酚片中羟苯甲酯、羟苯乙酯和羟苯丙酯的含量。
对乙酰氨基酚片中羟苯甲酯、羟苯乙酯和羟苯丙酯的进样体积为20μl时，羟苯甲酯在27.2250μg/ml~81.6750μg/ml的浓度范围内线性关系好（相关系数r=0.9999），线性方程为y=115793.4993x+61202.9655；羟苯乙酯在5.2448μg/ml~15.7343μg/ml的浓度范围内线性关系好（相关系数r=0.9998），线性方程为y =105821.2400x-304.0966；羟苯丙酯在2.6070μg/ml~7.8411μg/ml的浓度范围内线性关系好（相关系数r=0.9999），线性方程为y=96999.2343x+893.1724。
羟苯甲酯、羟苯乙酯和羟苯丙酯平均加样回收率分别为99.8%、100.2%和102.2%，RSD分别为0.47%，2.16%和1.82%。
结论：本法采用一个高效液相色谱条件同时检测三种防腐剂成份，方法专属性强、准确度高，重复性好，节约检测时间，可作为对乙酰氨基酚片中防腐剂质量控制方法。
关键词对乙酰氨基酚片；高效液相色谱分析法；羟苯甲酯、羟苯乙酯和羟苯丙酯；含量对乙酰氨基酚片主要用于普通感冒或流行性感冒引起的发热，也用于缓解轻至中度疼痛如头痛、关节痛、偏头痛、牙痛、肌肉痛、神经痛、痛经。
属于要求一致评价的品种，我公司在该品的一致性评价过程中，对该品原研处方进行了剖析，该品种加入3种防腐剂，其目的是为了产品在生产线上能连续生产，防止生产环境微生物超标，而节约清场时间。
学生姓名：学号：专业：应用化学年级班级：12级C班课程名称：现代仪器分析实验实验时间：2015年4月24日0.02mo l/L KH2PO4溶液的配制：磷酸二氢钾（KH2PO4，M=136）将磷酸二氢钾溶液用蒸馏水稀释到1000ml的容量瓶中，是其浓度变为0.02mol／L，PH=2.75(用盐酸调节至PH为2.75)的 KH2PO4溶液。
计算：有公式m=cv*M=(0.02mol／L*1000ml/1000)*136需要磷酸二氢钾的质量m=2.72g苹果酸样品的配制：将果实样品破碎除籽后研磨成粉状，之后准确称取1.000g样品，加入含0.008mol／L磷酸的蒸馏水25ml,在25摄氏度的水浴中震荡浸泡10min，然后在800r／min、4摄氏度的条件下离心20min，取上清液，用0.45pm的水系滤膜过滤后用与HPLC分析。
纯甲醇CH3OH(M=34)2实验所得高效液相谱图：高效液相图特殊实验条件泵B浓度95.0%（KH2PO4低浓度的缓冲盐）泵A浓度5.0%（纯甲醇）标准谱图山西谱图山东谱图甘肃谱图浓度泵B浓度90.0%（KH2PO4低浓度的缓冲盐），泵A浓度10.0%（纯甲醇）高效液相图特殊实验条件标准图谱山西谱图山东图谱甘肃图谱3苹果酸含量计算实验1：实验2：苹果产地：山西样品称取量：1.0903g容量瓶体积：25ml苹果产地：山西样品称取量：1.0903g容量瓶体积：25ml实验条件：流速为1ml/min，温度为 25℃, 用全波分析, 采用0.02mol／L,PH=2.75(用盐酸调节至PH为2.75)的 KH2PO4低浓度缓冲盐，并加以适量的纯甲醇，限制最大压力17.0MPa最小压力0.0MPa。
LC停止时间10min，PDA停止时间10min，模式为二元高压梯度。
实验条件：流速为1ml/min，温度为 25℃, 用全波分析, 采用0.02mol／L,PH=2.75(用盐酸调节至PH为2.75)的 KH2PO4低浓度缓冲盐，并加以适量的纯甲醇，限制最大压力17.0MPa最小压力0.0MPa。
0721维生素A测定法本法是用紫外-可见分光光度法（通则0401）或高效液相色谱法（通则0512）测定维生素A 及其制剂中维生素A的含量，以单位表示,每单位相当于全反式维生素A醋酸酯0.344μg或全反式维生素A醇0.300μgo测定应在半暗室中尽快进行。
第一法（紫外-可见分光光度法）由于维生素A制剂中含有稀释用油和维生素A原料药中混有其他杂质，采用紫外-可见分光光度法测得的吸光度不是维生素A独有的吸收。
在以下规定的条件下，非维生素A物质的无关吸收所引人的误差可以用校正公式校正，以便得到正确结果。
校正公式采用三点法，除其中一点是在吸收峰波长处测得外，其他两点分别在吸收峰两侧的波长处测定，因此仪器波长应准确，在测定前，应对仪器波长进行校正。
测定法取供试品适量，精密称定，加环己烷溶解并定量稀释制成每ImI中含9〜15单位的溶液，照紫外-可见分光光度法（通则0401）,测定其吸收峰的波长，并在下表所列各波长处测定吸光度，计算各吸光度与波长328nm处吸光度的比值和波长328nm处的（E陵）值。
如果吸收峰波长在326〜329nm之间，且所测得各波长吸光度比值不超过表中规定的±0.02,可用下式计算含量：每Ig供试品中含有的维生素A的单位=（E怂）（328nm）×1900如果吸收波长在326〜329nm之间，但所测得的各波长吸光度比值超过表中规定值的±0.02,应按下式求出校正后的吸光度，然后再计算含量：4328（校正）=3.52（2A321-A3K-A340）如果在328nm处的校正吸光度与未校正吸光度相差不超过±3.0%,则不用校正，仍以未经校正的吸光度计算含量。
如果校正吸光度与未校正吸光度相差在一15%至一3%之间，则以校正吸光度计算含量。
如果校正吸光度超出未校正吸光度的一15%至一3%的范围，或者吸收峰波长不在326〜329nm 之间，则供试品须按下述方法测定。
标准操作规程1目的：建立高效液相色谱测定法操作规程，以使检验操作规化。
2适用围：适用于高效液相色谱测定法检验操作全过程。
3责任：QC人员对本SOP实施负责。
4容高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带入色谱柱，各组分在柱被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
4.1.对仪器的一般要求和色谱条件高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。
色谱柱径一般为3.9~4.6mm，填充剂粒径为3~10μm。
超高效液相色谱仪是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。
4.1.1.色谱柱反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。
常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。
正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。
常用的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。
氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反相色谱。
离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。
有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。
手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。
色谱柱的径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。
温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。
为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。
残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相pH值一般应在 2〜8之间。
残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH 值小于2或大于8 的流动相。
高效液相色谱法测定对乙酰氨基酚片的含量作者：孙鑫磊张灵文来源：《科学与财富》2015年第35期摘要：本文采用高校液相测定了对乙酰氨基酚片中对乙酰氨基酚的含量，固定相为：安捷伦Cl8（4.6mm×250mm，5um），磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钠二水合物15.04g、磷酸氢二钠0.0627g，加水溶解并稀释至1000ml，调节pH值至4.5）一甲醇（80：20）为流动相，检测波长为254nm，流速1.0mL·min-1，柱温：30℃。
对乙酰氨基酚在50～350μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
对乙酰氨基酚的平均回收率为99.5%，RSD为0.73%（n=6）；此方法简便、准确、重现性好，可用于对乙酰氨基酚片中对乙酰氨基酚的含量测定。
关键词：对乙酰氨基酚片；对乙酰氨基酚；含量对乙酰氨基酚片是目前临床中常用的一种解热镇痛药。
对乙酰氨基酚片适应症为用于普通感冒或流行性感冒引起的发热，也用于缓解轻至中度疼痛如头痛、关节痛、牙痛、肌肉痛、痛经等。
对乙酰氨基酚片每片含主要成份为对乙酰氨基酚0.5克。
本文采用高校液相测定了对乙酰氨基酚片中对乙酰氨基酚的含量。
1 仪器与试药HH-601超级恒温水浴（江苏金坛市亿通电子有限公司）；LC600B液相色谱仪（北京朝阳华洋分析仪器有限公司）；屹谱仪器U-1810准双光束紫外可见分光光度计（屹谱仪器制造（上海）有限公司）；中扬EDI高纯水系统一体机（北京中扬永康环保科技有限公司）；FA1004万分之一分析天平（上海书培实验设备有限公司）；PHB-3型笔式pH计（上海三信仪表厂）；博翔兴旺80KHZ高频超声波清洗机（北京博宇宝威实验设备有限公司）。
对乙酰氨基酚对照品由中国药品生物制品检定所提供。
乙腈（天津市康科德科技有限公司）、冰醋酸（天津威赛诺科技发展有限公司）、磷酸（淄博丰仓化工有限公司）、甲醇（天津威赛诺科技发展有限公司）、磷酸氢二钠（淄博丰仓化工有限公司）、三乙胺（济南金恒大化工有限公司）、磷酸二氢铵（济南金恒大化工有限公司）。
激素的测定方法参考王学奎（2015）《植物生理生化实验原理与技术》一书中的高效液相色谱法，以2016年采自尚志市水稻田的野慈姑球茎为材料，6-12月每个月测定一次野慈姑球茎内CA3和ABA的含量。
试验材料的处理称取1-2g样品，在冰浴下研磨匀浆，加入80%的预冷甲醇20ml，保鲜膜密封，在4℃冰箱里冷浸过夜。
浸提液抽滤，10ml甲醇润洗研钵2次，过滤后与浸提液合并，40℃下减压蒸发至没有甲醇残余。
剩余水相完全转移到三角瓶中，用30ml石油醚萃取脱色2次，弃去醚相。
加0.01gPVPP（交联聚乙烯吡咯烷酮，crosslinked polyvinylpyrrolidone），超声30mim，抽滤用30ml，乙酸乙酯萃取3次，合并酯相，40℃下减压蒸干。
用甲醇（色谱纯）溶解残留物并定容至2ml，经0.45μm微孔滤膜过滤得待测液，保存于4℃冰箱中。
测定（1）标准曲线的绘制取一定量GA3和ABA标准品，用甲醇（色谱纯）溶解，配制成不同浓度的溶液，点击“运行控制”菜单，再选择“运行方法”，手动或自动进样器进样10-30μL，进行液相检测分析。
在一定浓度范围内，4种激素峰面积与浓度呈良好线性关系时，即可绘制标准曲线。
（2）取同样体积的待测样品，进样。
待样品峰全部出完，冲洗30min待基线平直后，即可分析下一个样品。
（3）定性根据标准品的保留时间判断样品中的对应激素峰。
选择与已知标样具有相同保留时间的样品的峰面积，并根据对应的标准曲线查出对应激素的浓度ρ（μg/mL），然后根据下式计算鲜样（FW）中各激素的含量：样品中激素含量（μg/kg FW）=ρ·V Tm·V S式中：ρ为根据样品峰面积从标准曲线查得的对应激素浓度（μg/mL）；V T为待测样总体积（mL）；V S为进样量（μL）；m为样品鲜质量（g）。
2015年版药典高效液相色谱法、质谱法(DOC)D正相色谱系统的流动相常用两种或两种以上的有机溶剂，如二氯甲烷和正己烷等。
品种正文项下规定的条件除填充剂种类、流动相组分、检测器类型不得改变外，其余如色谱柱内径与长度、填充剂粒径、流动相流速、流动相组分比例、柱温、进样量、检测器灵敏度等，均可适当改变，以达到系统适用性试验的要求。
调整流动相组分比例时，当小比例组分的百分比例X小于等于33%时，允许改变范围为0.7X～1.3X；当X大于33%时，允许改变范围为X-10%～X+10%。
若需使用小粒径（约2μm）填充剂，输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配；如有必要，色谱条件也应作适当的调整。
当对其测定结果产生争议时，应以品种项下规定的色谱条件的测定结果为准。
当必须使用特定牌号的色谱柱方能满足分离要求时，可在该品种正文项下注明。
2.系统适用性试验色谱系统的适用性试验通常包括理论板数、分离度、灵敏度、拖尾因子和重复性等五个参数。
按各品种正文项下要求对色谱系统进行适用性试验，即用规定的对照品溶液或系统适用性试验溶液在规定的色谱系统进行试验，必要时，可对色谱系统进行适当调整，以符合要求。
（1）色谱柱的理论板数（n）用于评价色谱柱的分离效能。
由于不同物质在同一色谱柱上的色谱行为不同，采用理论板数作为衡量色谱柱效能的指标时，应指明测定物质，一般为待测物质或内标物质的理论板数。
在规定的色谱条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分色谱峰或内标物质色谱峰的保留时间t R和峰宽（W）或半高峰宽（W h/2），按n=16（t R/W）2或 n=5.54（t R/W h/2）2计算色谱柱的理论板数。
t R、W、W h/2可用时间或长度计（下同），但应取相同单位。
（2）分离度（R）用于评价待测物质与被分离物质之间的分离程度，是衡量色谱系统分离效能的关键指标。
可以通过测定待测物质与已知杂质的分离度，也可以通过测定待测物质与某一指标性成分（内标物质或其他难分离物质）的分离度，或将供试品或对照品用适当的方法降解，通过测定待测物质与某一降解产物的分离度，对色谱系统分离效能进行评价与调整。
2351 黄曲霉毒素测定法第一法1 本法系用高效液相色谱法(通则 0512)测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒素(以黄曲霉 毒素 B1、黄曲霉毒素 B2、黄曲霉毒素 G1 和黄曲霉毒素 G2 总量计)，除另有规定外，按下 列方法测定。
当测定结果不符合规定时，以第二法测定结果为准。
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇 - 乙腈 - 水(40∶18∶42)为流动相；采用柱后衍生法检测， （1）碘衍生法：衍生溶液为 0.05％的碘溶液 (取碘 0.5g， 加入甲醇 100ml 使溶解， 用水稀释至 1000ml 制成)， 衍生化泵流速每分钟 0.3ml， 衍生化温度 70℃； （2）光化学衍生法：光化学衍生器（254nm） ；以荧光检测器检测，激发 波长 λex=360nm(或 365nm)，发射波长 λem=450nm。
两个相邻色谱峰的分离度应大于 1.5。
混合对照品溶液的制备 精密量取黄曲霉毒素混合标准品(黄曲霉毒素 B1、 黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素 G1、黄曲霉毒素 G2 标示浓度分别为 1.0μg／ml、0.3μg／ml、1.0μg／ml、 0.3μg／m1)0.5ml，置 10ml 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为储备液。
精密量取储备液 1ml， 置 25ml 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。
供试品溶液的制备 取供试品粉末约 15g(过二号筛)，精密称定，加入氯化钠 3g，置于均质瓶中，精密加入 70％甲醇溶液 75ml，高速搅拌 2 分钟(搅拌速度大于 11000 转／分钟)， 离心 5 分钟(离心速度 2500 转／分钟)，精密量取上清液 15ml，置 50ml 量瓶中，用水稀释至 刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，量取续滤液 20.0ml，通过免疫亲合柱，流速每分钟 3ml，用水 20ml 洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱， 收集洗脱液，置 2ml 量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
高效液相色谱法测定市售自制饮料中多种色素、防腐剂及甜味剂陈洁（宁德市食品药品检验检测中心，宁德 352100）摘要：建立同时测定市售自制饮料中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸、柠檬黄、日落黄、胭脂红及苋菜红8种添加剂的高效液相色谱法。
8种添加剂在1.0～50.0μg/mL的浓度范围内呈现良好的线性关系，r2≥0.99996，回收率为90.2%～105.0%，RSD为0.87%～1.6%，方法的检出限为0.005g/kg，定量限为0.015g/kg。
该方法简单、准确、重复性好，可适用于自制饮料中8种添加剂的检测。
关键词：高效液相色谱法；自制饮料；防腐剂；甜味剂；色素中图分类号：TS202.3/O657.7+2 文献标识码：A 文章编号：1006-2513（2021）01-0092-04 doi：10.19804/j.issn1006-2513.2021.01.015Simultaneous determination of various pigments，preservatives and sweeteners in vendor-made beverages by HPLCCHEN Jie（Ningde Center for Food and Drug Control，Ningde 352100）Abstract：A method was established for simultaneous determination of benzoic acid，sorbic acid，saccharin sodium，dehydroacetic acid，tartrazine，sunset yellow，carmine and amaranth in vendor self-made beverages by High-performance liquid chromatography（HPLC）. Eight kinds of additives showed good linear relationship over the concentration range of 1.0 ～ 50.0 μg/mL with r2 not less than 0.99996. The recoveries varied from 90.2% to 105.0%，and the relative standard deviations（RSDs）varied from 0.87% to 1.6%. The limit of determination（LOD）was 0.005 g/kg，and the limit of quantitative（LOP）analysis was 0.015 g/kg. The method is simple，accurate and reproducible，and can be applied to the determination of eight additives in vendor self-made beverages.Key words：high-performance liquid chromatography；self-made beverage；preservatives；sweeteners；pigments食品添加剂是指为改善食品色、香、味等品质，以及为防腐和加工工艺需要而加入食品中的人工合成或者天然物质，包括酸度调节剂、抗结剂、消泡剂、抗氧化剂、漂白剂、膨松剂、着色剂、护色剂、酶制剂、增味剂、营养强化剂、防腐剂、甜味剂、增稠剂、香料等23个类别，2000多个品种［1-3］。
